全 文 ：广 西 植 物 G u i h a i a 21 ( 1 ) : 6 3一 6 6 . F e b . 1 9 9 1
提高柑桔茎尖微型嫁接成苗率研究
陈如珠 李耿光 张兰英 李开莲
( 中国科学院华南植物研究所 , 广州 5 1 0 6 5。 )
摘要 砧木积壳 、 酸桔 、 福桔 、 酸橙 , 柠檬在不同天龄与接穗 “ 红江橙 ” 进行嫁接试 验 。 结
果表明 , 他们最适于嫁接的时间分别为 1吐、 1 6 、 23 一 25 、 1 6 、 19 天 ; 接穗为三叶原基时 . 相 应 最
高成苗率为75 . 。男 、 76 . 5多 、 50 . 0拓 、 57 . 1多 、 “ . 7万 。 接穗是四叶原基时 , 成苗率可达 10 拓 。
还试验了一些技术措施如嫁接技术 、 方式 , 接穗 、 砧木管理等与嫁接成苗率 的 关 系 。 嫁 接 试 管
苗经自来水浸饱一天 , 10 p p m 蔡 乙酸处 理一小时 , 移植于新土 : 珍珠岩 ( 7 : 3 ) 的混 合 土
中 , 在适宜的温度下 , 成活率达80 、 90 形以上 。
关键词 柑桔 ; 茎尖嫁接 ; 成苗率
柑桔病毒病随着栽培面积的不断扩大和检疫制度不完善 , 流行越来越广 。 黄龙病等危害
极大 , 有的种植区甚至趋于被毁灭 。 因此消除黄龙病等病毒病 , 已是当前急待解决的问题之
一 。 热处理 、 茎尖培养 、 茎尖微型嫁接 、 珠心苗培养等都能获得无病毒植株 , 但有一些技术
不够完善 , 有一些出现童期现象等 。 采用茎尖微型嫁接培养无毒苗的技术研究 始 于 1 9 7 2 年
1“ 3 , 接着 N a v a r r 。 等 〔 “ 〕对无病毒苗的获得和鉴定技术作进一步的完善 。 我国李耿 光 等 〔 ` :
首 先报道了甜橙 、 碰柑 、 蕉柑的茎尖嫁接研究 , 后来蒋元晖等 〔 2 〕获得脱毒脐血橙 植 株 , 赵
学源等 〔名〕还用这一技术鉴定我国栽培品种的裂皮病 。 前人的结果表明 , 茎尖嫁接不但 能 脱
毒 , 而且能克服童期现象 。 现在 , 美国 、 西班牙 、 意大利等国已应用于生产 。 为使这一技术
尽快在我国推广 , 我们在提高嫁接成苗和移植成活率 , 以及适用不同地区的砧木方面 , 做了
一些生产应用性试验 。
材料与方法
1
、 砧木种子的消毒和培养
供试砧木有积壳 ( P o , e i r “ s 才r ` f o l`a t a ) 、 酸桔 ( C “ r u s r e t` c 。 ! a t a B l a n c o · ) 、 福桔
( C
.
r e r i e u l a *
a B l a n c o )
、 酸橙 ( C . a u r a n才i“ 优 L . ) 、 柠檬 ( C . l f m o n ( L . ) B u r m . f . )
等 。 从成熟的果中取出种子并冲洗干净后 , 用小块纱布包住放于 5 5 . 5一 56 ℃温水中热处理 30
分钟 , 旨在保证砧木不带毒 。 在无菌条件下用 0 . 1% H g c1 2浸泡 10 一 15 分钟 , 无菌水冲 洗 干
净 , 剥去种皮接种于不含任何激素的M S培养基上 。 黑暗条件下发芽 , 温度 27 士 1 ℃ 。
2
、 接稼处理
试验以优良品种 “ 红江橙 ” 作接穗 。 选择健壮的刚抽出 2 一 3 o m 长的新梢 , 去除 较 大
的叶片 , 滤纸吸干后用 0 . 1% H g C I : 消毒 5 一 10 分钟 , 备用 。
3
、 微型嫁接及培养
采用李耿光等 〔 ’ 〕方法嫁接 。 接穗大小为 2 一 3 个叶原基 ( 约 o . 18 m m 长 ) , 嫁接后小心
插入用滤纸作支持物的 M S液体培养基中 夕 蔗糖浓度 7 . 5% , p H S . 8 。 在光强 2 0 0 0勒克司 , 光
照12 一 1. 4小时 , 温度 26 士 2 ℃条件下培养 , 一周后及时去除砧才不定芽 。 待嫁接小苗长出 2
6 4 厂` 西 植 物 1 1卷
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刃汉48“拐
一 3片叶后 , 转移于大 一号试管中 ,
这时培养基蔗糖 浓 度 改 为 2 一 3
%
。
4
、 嫁接试管苗移栽
移植前将试管苗置于室内自然
光下锻炼一周 。 取出苗充分洗干净
并在清水中泡一天 , 再用 1 0 p lP n
的蔡乙酸浸根 1 小时 。 栽植于消毒
表 1 不同砧木与红江橙嫁接成苗的关系
砧 木 最佳嫁接苗龄
( 天 ) 嫁接株
数
( 株 ) 成苗株
数
( 株 )
积壳
酸桔
福桔
柠檬
酸橙
1理
2 6
2 3一 2 5
l 9
] 6
4 5
1 7
2 9
1 5
2 6
2 6
1 3
1魂
1 0
1 2
土壤 ( 或新土 ) 与珍珠岩混合土 中 , 种植后用薄膜套罩保湿 , 置于室内散射光下 , 待小苗长
出 1 一 2 片新叶后 , 移入隔虫网室按常规育苗管理 。
结果与讨论
一 、 不同砧木与妹披成苗率的关系
在华南柑桔产区 , 有水田种植 、 坡地 、 丘陵地种植等 , 气候条件亦有干旱 、 多雨等 。 不
同产区要求相应的适于生长的砧木类型 。 茎尖微型嫁接脱毒也应该选择不同的砧木作嫁接材
料 。 为此 , 我们采用了五 种典型的常用砧木 , 试验它们的成苗率和红江橙嫁接的亲和性 , 如
表 1 所列结果 。 从中得出 , 上述五种砧木都表现能与接穗亲和 , 且有生产的 实 用 意 义 。 其
中 , 酸桔、 柠檬作砧木的成苗率要 比积壳 、 酸橙 、 福桔高 。 我们还观察到 , 砧木不定芽的萌
发以酸橙 、 酸桔 、 福桔较早 , 约 9 一10 天 , 柠檬 、 积壳约 12 一 14 天左右 。 砧木不定芽萌发与
嫁接成苗率无明显关系 , 嫁接芽的萌发与砧木强弱有关 , 强壮的砧木荫发早 。 这一结果为茎
尖微型嫁接脱毒苗推广于不同类型产区提供依据 。
二 、 提高奎尖嫁接成苗率
柑桔茎尖嫁接培养无病毒苗这一技术要应用于生产实践 , 提高成苗率是主要的环节 。 而
这一环节除砧木与接穗的亲和性外 , 与砧木的生长时间及生长状况有密切的关系 。 由于不同
种类砧木的发芽 、 生长速度不同 , 从播种到适于嫁接 ( _ L胚轴长 2 . 0 c m 以上 ) 的时间 有 差
异 。 因此 , 对各种砧木进行不同天龄嫁接试验 , 结果列于表 2 。 表中数据是按照我们的培养
条件从三次重复试验所得的结果 。 从 中看出 , 不同砧木有各自最适嫁接时间 : 积 壳14 天 , 酸
桔 26 天 , 福桔 23 一25 天 , 柠檬 19 天 , 酸橙 16 天 , 在它们的最适嫁接时间内 , 成苗率高的如酸
桔可达 76 . 5% 、 积壳为 7 5 . 0% , 较低者为福桔 50 % 。 若不在此期间内 , 成苗率明显降低 , 甚
至为零 。 以上结果与我们以前 ( 李耿光等 ’ ) 的基本一致 , 再次证明掌握砧木的最适 嫁 接
时间进行嫁接是提高嫁接成活率 的关键环节 。
另外 , 我们 以酸桔作砧木 , 试验不同茎尖大小的嫁接 , 结果是 : 只含一个叶原基的全部
接穗不能接活 ; 含有二个叶原基的接穗 , 成活率极低 , 在 12 一 19 . 2 %范围内 ; 而三个叶原基
的 , 成活率则达 7 6 . 5% ; 四个叶原基的 , 达 1 0 % 。 根据 N a v ar or 等 [ “ 」的研究证实 , 只有小
于 0 . 1 8m m 长度 ( 约三叶原基 ) 的茎尖 , 是不带病毒的 。 虽然四个叶原基的成活率高 , 但不
能脱毒 。 因此 , 在寻求提 高成苗率的 同时 , 必须考虑嫁接苗是否完全脱毒 , 此技术才能真正
地应用于生产上 。
要提高嫁接成苗率 , 除上述因素 及我们以 前研究的控制某些实验条件 ( 如蔗糖浓度 , 砧
1期 陈如珠等 :提高柑枯茎尖微型嫁接成苗率研究
表 2不同时间的砧木与红江祖缘接的成苗率
目`自赫…-一俞彰…亩影嗜丁备简 ~亩
{一七红江橙接穗为三个叶原基。
木的光照 , 接穗激素处理和培养条件等 ) 外 , 根据我们实验室多年的工作体会 , 还需具有熟
练的嫁接技术 , 采用 “ 倒 T ” 式嫁接 , 接穗是抽出 2 一 2 . s c m 长的梢 , 及时去除砧木不定芽
等 。
三 、 提 离稼接苗移栽成活率
柑桔嫁接试管苗移植的成活率与移植前处理 , 移植的时间和条件密切相关 , 我们试验了
下面几个因子 。
1
. 移植前处理 : 当嫁接苗在试管内具有 3 一 4 片真叶并长出幼嫩根系 , 生长旺盛时 ,
将试管从恒温培养室中移至常温室内自然光条件下锻炼一周以上 , 然后将小苗从 试 管 中 取
出 , 自来水冲洗后再放于盛有 自来水的烧杯中一天 。 经过这样处理后 , 临植前再用10 0 p p m
蔡乙酸泡 1 小时 , 小苗的成活率 比从试管取出冲洗后立即栽植的提高将近一倍 。 移植后一个
月检查 , 前者平均成活率 8 3 . 3 % , 后者 4 4 . 4% 。 主要原因可能是 : 小苗从高渗透压培养条件
下取出 , 从异养转入自养 , 同时叶片气孔处于开放状态 , 失去正常调节功能 , 极易失水萎 蔫
〔` , , 需要有一个生理适应过程 。 此外观察到 , 后者死亡主要从根颈腐烂开始 。
2
. 土攘及培养条件 : 试验土壤为消毒栽培土或新土与珍珠岩配 比 。 结果是 : 70 % 的土
和 30 %珍珠岩的配 比最佳 , 成活率达 9 3 . 3% ( 30 株统计 ) 。 不经消毒的栽培土 + 珍珠岩 ( 7 :
3 )
, 移栽苗大部分死亡 。 小苗定植后 , 应用渗透法浇水 , 切忌在新 叶 抽 出 前 浇 营 养 液
( H ao g al n d 溶液 ) , 否则会引起小苗大量死亡及霉菌滋生 。 但是 , 当嫁接苗新叶抽出后 ,
用适量的营养液浇洒 , 则能加速小苗生长 。
3
。 温湿度条件 : 刚定植时 , 为了保湿 , 移植盆均应套上塑料薄膜罩 , 经过一周后 , 视
小苗生长良好 , 半揭开薄膜 , 新叶抽出后完全揭开 , 如薄膜覆盖太久 , 会因通气条件不好或
湿度过大而引起小苗死亡 。 在温差不大 ( 2 一 30 ℃ ) , 空气湿度较大 ( 85 % 以上 ) 的季节 ,
试用恒温培养室与室温移植 , 结果无多大差异 。
只要注意以上几点 , 嫁接试管苗成活率一般可达 8 0一 90 % 。
6 广 西 植 物 1卷
_ _ 一 ~ 一一一一 - ~-一一 ~- - ~- ~ 一~ . . , . . . , . . ~一~ 一今 考 文 献
( 1 〕李耿光等 , 1 97 8 : 柑桔茎尖培养的初步研究 。 植物生理学报 , 4 ( 2 ) 门 89 一 1 950
( 2 〕蒋元晖等 , 1 9 8 3 : 利用茎尖嫁接脱毒培养无裂皮病的脐血橙 。 植物保护学报 , 10 ( 3 ) 扮 1 6 .6
〔 3 〕赵学源等 , 1 9 8 6 : 我国柑桔栽培品种的裂皮病鉴定和脱除 . 园艺学报 , 13 ( 2 ) , 91 一 94 。
〔 4 〕李文安 , 1 9 8 8 , 我国利用离体组织培养进行快速繁殖的研究简况 。 植物生理学通讯 , 19 8 ( 1 )
6 9一 7 1。
〔 5 〕 M u r a s h 馆 e , T . , e t a l . , 1 9 7 2 : A t e e h n i q u e o f s h o o t a p e x g ar f t i n g a n d i t 吕 u t i z a -
t i o n t o w a r d s r e e o v e r i lg
v i r u 卜 f r e e e i t r u s e l o n e s . H o r t i sc i e n e e , 7 , 1 2 8一 11 9 .
〔 6 〕 N a v a r r o . L . , e t a l . , 1 9 7 5 : Im p r o v e m e n t o f s h o o t 一 t i P g r a f t i n g i n v i t r o f o r v i r u s -
f r e e e i t r u s
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. u i t a b l e a g e o f r o o t st o e k w a s i魂, 26 , 2 3一2 5 . 1 6 , 1 9 da y s
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f u l g ar f t s w a s 7 5拓 . 7 6 . 5终 , 5 0拓 , 57 . 1另 、 6 6 ` 7万 r e s p e e t计 e l y ( sc io 立 o f t h公吟. 一 lea f -
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b y u s i昭 f o u r l e a f 一 p r imo r d i u m s h o o t 一 t iP · Wh e n t h e g ar f t s w e r e t r a n s p la o t e d 远 t o a
p o t co n t a i n ign a se 时 i c OS i l a dn p ea r l it e (7 , 3 ) , a s u c c e 8S f u l ar t e o f s间。耳 确 . go t -
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