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伞形科3种维药材蛋白电泳的鉴别



全 文 :13), 180.9 (C-28), 217.8 (C-3),结合文献 [ 3 , 4]波谱数据 , 鉴
定为 3-羰基熊果酸(3-one-ursolicacid)。
化合物 4:白色晶体。 EI-MSm/z:454 [ M] +, 248 (100),
203, 133, 119, 105。1H-NMR(400Hz, CDCl3)δ:5.28 (1H, 12 -H), 2.83 (1H, dd, J=13.6, 4Hz, 18-H), 0.81, 0.90, 0.94,
1.03, 1.05, 1.09, 1.14 (CH3×7)。13C-NMR(100 MHz, CDCl3)δ:15.0 (C-25), 17.0 (C-26), 19.5 (C-6), 21.4 (C-24),
22.8 (C-11), 23.4 (C-30), 23.5 (C-16), 25.8 (C-27),
26.4 (C-23), 27.6(C-15), 30.5(C-20), 32.1 (C-7), 32.1
(C-22), 33.0(C-29), 33.8 (C-21), 34.1 (C-2), 36.8 (C
-10), 39.1(C-8), 39.2 (C-1), 40.9 (C-18), 41.7 (C-
14), 45.8(C-19), 46.6(C-17), 46.8 (C-9), 47.4 (C-4),
55.2 (C-5), 122.3 (C-12), 143.6 (C-13), 181.1(C-28),
217.8(C-3)。以上数据与文献 [ 5]基本一致 , 确定此化合物为
齐墩果酮酸 (oleanonicacid)。
化合物 5:白色粉末。EI-MSm/z:456 [ M] +, 1H-NMR
和 13C-NMR数据与文献 [ 6]基本符合 , 因此确定化合物 5为齐墩
果酸(oleanolicacid)。
化合物 6:白色针晶 , 溶于氯仿。与 β -谷甾醇标准品对照 ,
薄层色谱 Rf值一致 。鉴定为 β -谷甾醇(β -sitosterol)。
参考文献:
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收稿日期:2007-04-20; 修订日期:2007-07-12
基金项目:新疆维吾尔自治区高校科研计划科学研究重点项目(No.
XJEDU2004128)
作者简介:乌莉娅·沙依提 (1955-),女(维吾尔族),新疆乌鲁木齐人 ,现
任新疆医科大学中医学院副教授 ,学士学位 ,主要从事中药维药资源及化
学成分教学研究工作.
伞形科 3种维药材蛋白电泳的鉴别
乌莉娅·沙依提 , 刘宏炳
(新疆医科大学中医学院 ,新疆 乌鲁木齐 830000)
摘要:目的 准确地鉴别伞形科果实类药材。方法 应用聚丙稀酰胺电泳技术 ,对 3种外形相似的果实类药材进行了可溶
性蛋白质的电泳分析。结果 电泳图谱清楚地显示出各样品的特征带 , 从而能准确区别各种药材。结论 该方法操作简
便 , 重复性好 ,各样品间可比性强 ,能起到准确鉴别药材的目的。
关键词:伞形科; 聚丙烯酰胺; 蛋白电泳
中图分类号:R282.5  文献标识码:A  文章编号:1008-0805(2008)02-0342-01
Gel-electrophoresisIdentificationforThreeUmbeeliferousHerbs
WULi-ya·SHAYi-ti,LIUHong-bing
(ChineseTraditionalMedicalShoolofXinjiangMedicalUniversity, Urumqi830000, China)
Abstract:ObjectiveToidentifyUmbelliferousfructificationherbs.MethodsTheGel-electrophoresistechnologywasusedto
analyzetheumbeeliferousherbs.ResultsTherearediferencesongrades, regionsandquantitiesamongpatternsofTrechysper-
mumammiL.CuminvmcyminvmL.andCvminvmvernumL..ConclusionThemethodofGel-electrophoresisiseasyandef-
fectiveforidentificationofumbeliferousfructificationherbs.
Keywords:TrachyspermumammiL.;  CuminvmcyminvmL.; Polypropyleneacylamic; Albumenelectrophoresis.
  伞形科药材的果实是双悬果 ,外形极相似且小 , 肉眼难以识
别 , 组织结构也极相似。 为了鉴别真伪 ,保证临床用药的安全有
效 , 本实验运用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术 , 对伞形科 3种果实类
药材进行可溶性蛋白质的电泳分析。现报道如下。
1 器材
阿育魏实及孜然与野孜然均由维吾尔医医院鉴定并提供
(见表 1)。
表 1 样品来源
编号 名称 植物学名 产地
1 阿育魏实 Trachyspermumammi 新疆
2 孜然 CuminvmcyminvmL. 新疆
3 野孜然 CvminvmvernumL. 印度
1.1 仪器 DYY-6B型稳压稳流电泳仪;真空干燥器;DYCz-
28A型电泳槽;800型离心沉淀器;SBZ200型超声洗脱仪;WD-
9405A型脱色摇床;微量进样器。
1.2 试剂 丙烯酰胺(Acr)、甲叉双丙烯酰胺(Bis)、三羧甲基氨
基甲烷(Tris)、四甲基乙二胺(TEMED)、盐酸 、过硫酸胺 、甘胺
酸 、溴酚蓝 、考马斯亮蓝 R250、甲醇 、醋酸。
1.3 试剂配制 [ 1] 分离胶缓冲液 、分离胶贮液 、过硫酸铵溶液 、
浓缩胶缓冲液 、四甲基乙二胺溶液 、电极缓冲液 、溴酚蓝指示液 、
染色液 、脱色液。
调整分离胶使 T=67.74%, C=2.875%。
2 方法
2.1 样品制备 [ 1 , 2] 称取阿育魏实及孜然与野孜然各 0.5g, 加入
稀释 4倍的浓缩胶缓冲液 , 充分研磨成匀浆 , 超声提取 10 min
(37℃,功率 100%);离心 20 min(3 500 r/min), 取上清液供点
样用。
2.2 电泳操作 安装好胶板 , 于上下电泳槽中注入电极缓冲液;
用微量进样器每孔进样 20 μl;再加 10 μl的溴酚蓝指示跟踪 , 电
泳开始时 ,维持电流 13mA,待样品进入分离胶后 , 电流加大到 25
mA,整个电泳过程维持电流强度不变 , 待指示剂行至末端 1 cm
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 2期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2008VOL.19NO.2 
时 , 即可停止电泳。
2.3 染色与脱色 小心取下胶板 , 放入 0.2%考马斯亮蓝 R250
染色液中 ,在 37℃恒温下染色 1 h, 再用含 20%甲醇和 7%醋酸的
脱色液 , 在 37℃恒温脱色 ,不断更换脱色液直至背景为无色。
3 结果
依照样品谱带的 Rf值 、形态 、着色深浅绘制谱图(见图 1)。
图 1 伞形科 3种维药材蛋白电泳谱带图
根据样品谱带的形状和着色程度将谱带分为 5级 ,按谱带泳
动速度快慢将电泳图谱分为:A区(Rf<0.36)、B区(Rf<0.69)、
C区(Rf≥0.69)。见表 2。
由图谱可见同科植物的果实显示出一些相似的谱带(如 A
1
,
B
2
),同时因为种的不同 , 各种间的谱带区也很明显(如阿育魏实
和野孜然在 B区和 C区都没有特征谱带 , 而孜然在 B区和 C区
都有一条特征谱带), 而且其在谱带的级别 、分布区域及数量上
均有明显的区别 , 总之各种间谱带特征明显 , 可比性强(经 5次
重复实验结果稳定一致 , r≥99.5%),为准确鉴别伞形科植物提
供了可靠的依据。
4 讨论
蛋白电泳法鉴别药材 ,是以由基因控制的蛋白质分子为标
表 2 伞形科 3种维药材蛋白电泳谱带分级
阿育魏实
Rf 级数
孜然
Rf 级数
野孜然
Rf 级数
A1 0.014 5级 A1  0.010 5级 A1 0.046 4级A2 0.058 5级 A2  0.048 5级 A2 0.113 4级A3 0.077 5级 A3 0.113 3级 A3 0.228 1级A4 0.144 3级 A4  0.221 3级 A4 0.293 2级A5 0.231 2级A6 0.325 1级B1 0.397 B1  0.400 4级 B1 0.401B2 0.449 4级 B2  0.498 5级 B3 0.469 4级B3 0.498 5级 B3  0.529 2级 B4 0.495 3级B4 0.567 5级 B4  0.587 5级 B5 0.529 4级B5 0.647 3级 B6 0.591 2级
3级 B7 0.632 2级B
7
 0.632 1级
B
8
 0.688 5级
C1 0.714 C1  0.995 C1 0.731 4级C2 0.750 4级 3级 C2 0.791 5级C3 0.894 5级 C3 0.877 5级C4 0.995 5级 C4 0.995 5级
3级 5级
准 , 从分子水平上去比较和分析 , 专属性强 、分辨率高 、重复性好 ,
尤其为外形相似和亲缘关系相近的药材鉴别 ,提供了一种新的有
效的鉴别手段 ,较传统的鉴别法先进一步。
参考文献:
[ 1 ]  袁晓华 ,杨中汉.植物生理生化实验 [ M] .北京:高等教育出版社 ,
1983:233, 57.
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药杂志 , 2000, 25(1):53.
临床报道
收稿日期:2007-03-29; 修订日期:2007-06-18
作者简介:闫继红(1973-),女(汉族),河南郾城人 ,现任河南省平顶山市
第二人民医院主治医师 ,主要从事针灸临床工作.
阴阳经穴透刺与独取阳明治疗
中风后遗症随机对照观察
闫继红
(河南省平顶山市第二人民医院  467000)
摘要:目的 比较阴阳经穴透刺与独取阳明经穴针刺治疗中风后遗症的临床疗效 ,探讨治疗中风后遗症痉挛性瘫痪的科
学选经取穴方法。方法 按随机对照原则 ,将 183例中风后遗症患者分为阴阳经穴透刺组(治疗组)92例和独取阳明经穴
针刺组(对照组)91例。治疗组采用阴阳经穴体针透穴治疗 , 上肢瘫取患侧经穴 , 曲池透少海 , 外关透内关 ,合谷透后溪;
下肢瘫取患侧经穴 , 阳陵泉透明陵泉 ,绝骨透三阴交 ,昆仑透太溪。对照组取阳明经穴针刺 , 上肢瘫取患侧合谷 、阳溪 、手
三里 、手五里 、曲池 、肩髃;下肢瘫取患侧髀关 、伏兔 、梁丘 、足三里 、丰隆 、解溪 、内庭。 治疗 3个月观察神经功能缺损程度
评分和临床疗效。结果 治疗组神经功能缺损评分为(4.89±2.48)分 ,对照组神经功能缺损评分为(9.46±3.57)分。治
疗组和对照组总有效率分别是 90.91%和 81.61%。差异有统计学意义(P>0.05)。结论 阴阳经穴透刺治疗中风后遗
症是科学的选经取穴方法 ,其疗效优于独取阳明经脉针刺。
关键词:阴阳经穴; 透刺; 中风后遗症; 痉挛性瘫痪; 独取阳明
中图分类号:R245.3  文献标识码:B  文章编号:1008-0805(2008)02-0343-02
  中风(ApoplexyorStroke)又称 “脑卒中” ,包括现代医学的短
暂性脑缺血发作 、脑血栓形成 、脑栓塞 、脑出血 、蛛网膜下腔出血
等 , 其后遗症是指在急性期过后遗留半身不遂 , 肢体麻木 ,口眼㖞
斜 , 言语蹇涩等。中国针灸以其疗效确切 , 操作简单 , 费用低廉 ,
无毒副作用等优点 ,千百年来一直应用于中风后遗症的康复实践
中。目前针灸康复中风后遗症的选经取穴有独取阳明 、独取督
脉 、独取阴经 、阴阳经并取等 ,各种选经取穴和针法的临床疗效不
尽相同 。 2004 ~ 2005年河南平顶山市第二人民医院针灸科室采
用阴阳经穴体针透刺治疗 92例中风后遗症患者 ,并与传统 “独取
阳明”经穴针刺治疗作对照观察。现总结如下。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.2 时珍国医国药 2008年第 19卷第 2期