全 文 ：. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
]92 2 年 , 关国的 K , l o d湘 n 在 含无机类 、糖 、 琼脂 丫水
的人土培 养从上进 行 片特书 的无菌播种 . 获存成功 ,并
证明在没有共件真菌的作用下 这些播种苗有能力健康
地成 民百至开花 L他提出的由种子无菌播种絮殆生花的
方程` . 为以后数 十年 间兰花杂交种的大 量出现 和兰花的
发展奠定 厂基础 侧本在兰科植物的尤 菌播种培养方面
也做了大量工作 我们 在引进 日本相关技术的基础 卜进
行 r 实际的试验和研究 , 取得 r 一些 成果
. 兰科植物的种子构造
书科植物 丽架中的种子 , 通 常有数百 个到数 卜万
个 种 子极小 , 。. 5一 1 2 毫米 。 与其他植物种子不同 它的
构造简单 无 胚乳和 广叶 等器官 , 未分化的胚 外包被着
种皮 , 有此兰科植物的胚与种皮间甚至存在 一层胚皮
这样 来 ,种 子自然发芽 困难 , 因此 许多兰科植 物 与被
称为兰 菌的内生菌共生 , 以促进发芽 种 子发芽时井不
直接分化芽 , 先形成原球茎 (或根状茎 ) 再分化芽和根 ,
形成 竺花 苗 另外 , 在 自然状态 卜, 兰科梢物的种子与竺
菌柑遇 的机会较少 , 不是所有的种 子都能发芽 , 即使受
到 老大眷顾 , 发 了芽 , 也可 能因为水土流 失等其他原 因
而 ’ }屯途天折 , 能真正成 氏起米的 个体数是少之 义少的
兰科植 物生 长缓慢 , 一般从 发芽到成株再到开 花 需要
4
碑~
6 年的时 间 。 而利用尤 菌播种培养方法 , 人工提供必
需 的养分 , 则 可促进大量发芽 , 降低风险
. 兰科植物种子的发芽过程
使用显微镜可以观察到 一般兰科植物种 子无菌播
浙江徐
刚撰文并摄影
公=科植物的简无菌易播
冬哪臀
薯
鹭
爵鑫黎 :
l
、 末发芽种子 数量
巨大 ,个体极小 , 长约 。万 -
1 2 毫米 , 宽 约 。 2 一。 . 4 毫
米 ,构 造简单
2
、 胚 肥大种 厂 种子
吸水并吸取 必要的养分后 ,
胚开始分 裂 , 直到发芽前这
一时 期的种子 叫胚 肥大种
子
3
、发芽种子 胚肥大种
子的胚反复分裂 , 胚突破种
皮 ,称发芽 。 叶绿体在此 期
间形成 。 从无菌播种培养到
种子发芽的 时间 因品种不
同有很大 的差异 。 自发 、石
科等 的种子 发 芽只 需 1 一 2
周 , 而春兰 等兰花则约需 3
个月 ,虾脊兰发芽所需 时问
从 3 个月到 l 年不 等 通常
气生 竺的发芽率好 , 井 凤发
芽所需时间短 j而 东洋兰 . { ,
的地牛兰 (特别是构 升 )的
发芽所需时间长 . 有 的种 类
甚至 完全不发芽
4
、 原球 茎 凉球茎是兰科植物独特的幼植物体 的
形态 通常原球茎土部分化出芽和 苗 , 「部形成假根 、 顺
序是先分化芽再分化根 一 但是东洋系的 咬属 兰花 , 发芽
前期胚不形成原球茎 , 而分化成发达的根状茎 。 根状茎
与 原球茎不同 , 它既不形 成苗也 不分化出芽 , 只是不断
增殖 但现已 开发出从根状茎 分化大量芽和根 的方 法
了
. 兰科植 物无菌播种培养的简易设 施设 备
1
、无菌培养室 一般的无菌培养室密闭性高 , 安装
有杀菌灯 ,空气 中无杂菌 但是 一般单 位和家庭不可能
改建成密闭 性高的无菌培养室并安装杀菌灯 不管怎么
样 , 要尽璧 制作杂菌棍 人率低的环境室 . 符 合无菌室的
最低条件
2
、无 菌培养操作空 (条件如 卜) :
( 1 )操作 时 ,人员不能频繁出人 ;
(2 )室 内空气流通少 ;
( 3 )灰尘 少 ;
( 4 )温度 比较低 ;
( 5 ) 没有 直射 阳光照射 , 但室内照明较好 ;
(句 温度变 化小 。
3
、简易无菌箱 、简 易无 菌台 无菌培养时 . 制作无
苗空间是非常重要的间题 。 一般使用超净工作合 , 只是
价格较高。 制作简易无菌台及无 菌箱也是可行的 。 无菌
箱内无空气流通 , 利用酒精灯火焰周围的无菌空间 , 可
进行基本的无菌操作 。
4
、简易设备 无菌培养使用的专门器 具 ,若按教材
上列出的购买 , 价格不菲 , 可利用家庭生活用 品来代替 ,
方便实用 口
( 1) 烤面包 炉 无菌操作使用的器具 , 在使用前应
进行干热 灭菌 (约 2 0 0℃ , 20 分钟 ) , 市傅 干热灭 菌器不
但价格高 , 温度 阮升到 20 ℃所需时间也长 ( 3 0 一60 分
钟 ) 。 而烤 面包 炉升温至 2 0 ℃只需要 5 一 10 分钟 ,并且
一般机种都有计时器 , 简单省时 。
(2 )蒸锅 、 压力锅 无 菌培养 用的培荞基 一般使用
高压蒸 汽灭 菌锅灭菌 不过使用蒸锅 、压力锅 也能达到
同样 的效果 。 如用蒸锅 、 1{] 力锅 , 可在温度 卜升后灭菌
20
一
30 分钟 ( 同高 仄蒸汽灭菌锅 ) , 抖 小时再进行第二
次灭菌 〕
(3 )其他
罐头瓶 : 代替三角烧瓶 、培养瓶 ;
烧烤铁义 : 代替接种针 ;
中性洗涤剂 :用于试材组织 、种子等的消毒
. 无菌培养时的灭菌 、 消毒方法
火菌 , 消毒是无 菌培养 操作中最关键的操作 . 无菌操作
时要避免将杂菌 、霉 菌混人培 养基 中 , 器具 、 材料必须仔
细消毒 。 降低杂菌混入 率 ,有 以下 几点注意事项
( l ) 手部的火菌 消毒 无 菌墙养 操作时 多数杂
菌 霉菌等污染是由乎腕带菌引起的 ,所 以必须进行冼
黝
春兰母 本开花 株
净 .火 自 泊 作 介卜手人尤 菌箱之
前 , ’忆介流 水下用 肥皂洗净手腕 ,
还 有 厂指 打了甲等细 微之处 、 将乎
和} , 人 九 菌访 J. f , 在箱内用 7 0 % 的酒
粉」消 J与. 部仁同 卜
( 2) 尤菌箱内的灭菌 ` 消 毒
八 无 的操们 仆 始前 , 用 7 0%酒精给
儿菌箱内表画消毒
( 3 )器具 的灭菌 、消毒 镊 子
药品 , 添加剂等 ;
3
、
H y p 、 ,、 e x 培养基的配 制 11y不〕o l lo x
3克 、 蛋 自陈 2 克加到 l 升的纯水 中进行
热济解一从加 热炉上拿 下 . 当温度冷却到
23
~
25 ℃ 时 调整 P H 为 5 4 卜加 人琼脂 1()
克 , 再次加热 直皂溶解
4
、培养基的分注 、灭菌 培养基 一边
搅拌一边 分注到各种培 养器 皿中峥蒸锅
或高 压锅 灭菌 2 0 30 分钟 ,24 小 时后再
火菌 20 一3 0 分钟 ( 高压火菌锅 12 州 1 . 2
磅气压 , 2() 分钟 )
5
、 无菌操作用的器具进行干热灭 菌
干热灭菌 : 1 2 0一 20 0弋 , 20 分钟 ; 使用家用
烤面包炉进行干热灭菌也可
埋茎繁殖挽救
受冻苏铁
江西 张海波
接种针 、 玻璃器川以 装有 培养基的 下 角烧瓶 除外 )等都 是
无菌操作必要的器具 。 镊子 、培养 ilL 等物品在充分洗净 后
用锡铂纸包好 , 试管用锡恤纸封 口 , 烧杯的上 部也用锡 t1
纸包好干热灭菌 ( 1 2 0一 2 0 ℃ 20 分钟 ) 之后 , 把包裹着锡
铂纸的器具放入无菌箱 内 , 此时锡铂纸 内部无 fL何污染
(4 )材料 的火菌 、消 毒 小同材料 对火 菌 、 消毒 的反
应小同 , 要掌握女r 消毒齐」的浓度 和消毒时间
(5 ) 种子的 灭菌 , 消毒 一 般使少}J饱 和漂 白粉 L清
液 , 火菌 3一 5 分钟 。 但 如果种皮 f{J 常 薄的或者对氯敏感 ,
. 1丁改 川 10 % 的次氯酸钠溶 液或饱 和过权化 氢火 菌 5 一 10
分钟
( 6 )植物组织的灭菌 、 消毒 梢 物组织 灭菌使用的药
品有 7 0 %的酒精 、 次氯酸钠溶液 、饱 和漂 自粉 上清液等
6
、 手部的消毒 用肥皂在流 水 卜洗 }
植 物组 织 在切 割前
使川 7。% 的酒 精灭
菌 ,在切 割后使用饱
和 漂白粉 上清 液或
次氯酸钠溶液火 菌
(7 )培 养基的 灭
消毒 按培养基
春 兰种子 无菌播种 4 个 月后诱
导 出的根 状茎
配制顺 序 , 分注到 _
角烧瓶或 培养瓶后 ,
必须进行灭菌 。 高扭
火 菌锅是 12 2 《 , 1. 2
建兰根 状茎增 殖
磅气压 20 分钟 。 家
)们蒸锅 或高坏 锅需
高 温 火 菌 2 0 一3 0 分
钟 , 24 小时后进行第
几次火菌
. 无茵 培 养简
易程序
l
、 培 养器 jlL 的
准备 将 三角瓶 、试
管 、 结养瓶 、培养 lIJ
等 用 中性 洗涤 剂等
洗 净一 干 热 灭 菌
( 12 0 ~ 2()0 ℃ , 加 分
钟 )
2
、 准备培养基
配制所 必需的器具 、
净 斗用洁洁的毛巾徐 「或甩干
7
, 无菌箱内的消毒 用蘸有 70 % 酒
精的约棉擦拭尤菌箱 内表面 , 用 70 %酒 精
喷雾 气
8
、无菌操作 进行无 菌播种 、 组织 培
养 、继代培养 等无菌操作
9
、 培 养 条 件 光照 强 度 12 0 0 -
Z0 0 lu
大 , 12 论4 小 一J寸光照 , 24笔士 2〔 。 培养
条件依植物的不同而不同 环境无需很严
格 , 一般的房 {口 温室亦 可
10
、 数据 记录 记录无 菌操作 的种
类 、实验条件 、 试材名称 、培 养基种类 、 接
种 口期等等
. 兰花种子无菌播种操作步骤
用 自制的 简易无 菌台进 行井 花种子
无菌播种的操作 :
1
、在无 菌台中间放酒精灯 , 准备培养
的种 子 、 锡铂纸 、镊子 、 打 火机 、 灭菌 水 、
7 0%酒精 、试管 、 试管架 、饱和漂 白粉 上清
掖 、接种针等
2
、无菌 台四周用 70 脸酒精消毒后 , 将
种子放人试管中 . 再倒入饱和漂 白粉 上清
液
3 用大拇指按 住试管 口 , 上 下摇 动 .
灭菌 5一 0] 分钟 , 灭菌时 cItJ 要止确计时
4
、 将二角烧瓶 口放在酒精灯 火焰的
上方烧 一 烧 再用镊子取下锡铂纸
5
、 把接种针在酒精灯 火焰 的 巨方消
毒
6
、川接种针将种 户按种到培养基 中口
7
、 把锡铂纸在有酒精灯火焰的上 方
允分灭菌后 , 将 三角烧瓶 } I包紧
容、 无菌播种完成后 , 放在温 度变 化
少 、有散射光的场所发芽
人冬后 苏铁 如遭受冻害
要立 即停止浇水 , 保持盆 土
干燥 、 待春季气温较高时 ,将
球茎从盆 申取 出 . 抖去泥土 ,
剪去枯叶 用利刀 把烂根腐
茎一点点削 去 , 直 至彻底 削
净腐烂变质部分 。 然后放在
阳光下 晒 2一 3大 , 使伤 口 干
燥 , 再放 人 1%高锰酸 钾济掖
中浸泡消毒加分钟 左右 ,捞
出晾 干。 晾干后将净创 而再
放人 10O p卿 ABT I 号生 根
粉溶液中浸甜叨分钟 , 取出
晾 厂后 即可埋人花 盆中 , 深
度为球茎的 12/ 砚 / 3 埋后浇
一次透水 , 让球茎与盆 十紧
密结合 。 盆上配方为 园土 3
份 细沙 1份 腐熟 的有机月归
份 , 并加 人少量 的硫 酸亚铁
混匀后装盆至容积的 2 / 3 再
在盆十 上填人清洗过 的细沙
至距盆沿 l 厘米左 右处
盆株宜放在稀疏 的树 荫
下 或遮 荫 度 7 0 % 的遮 阳 vJ
下 。 盆沙保持 卜湿润状态 , 切
忌过湿 , 更不能积水 , 否则会
影响生根扎根 , 严重时导致
烂根 。 生根后 , ’气球茎顶端绽
出 萌 叶 征 兆-— 黄 色 绒苔时 , 将盆移 至向阳处 待第
轮3一 4片新叶逐渐 嗓出后 , 根
系也基本 长好 , 可在不伤 根
的情况下 , 去掉花盆 卜层 的
细沙 , 换 上消过毒的培养上 ,
按常规方法管理
埋茎繁殆 的好处 在于 ,
花盆 上层是细沙 , 对生 根有
利 ; 下层是培养土 , 生根后能
很快扎 人 七中吸收营养 , 不
需移栽 ,利 于长叶 。 加入硫酸
亚铁 , 是为防止叶片 因缺铁
而黄化