全 文 ：西北林学院学报 ２０１２，２７（３）：１０９～１１２
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
　　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－７４６１．２０１２．０３．２３
雷公藤属内生真菌研究（Ⅱ）昆明山海棠内生真菌的
分离鉴定及抗肿瘤活性菌株筛选
　收稿日期：２０１２－０１－０９　修回日期：２０１２－０２－２７
　基金项目：天津科技大学实验室开放基金项目（１００４Ａ３０５）。
　作者简介：王家明，男，博士，主要研究方向：微生物工程及药物化学。Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｊｉａｍｉｎｇ＠ｔｕｓｔ．ｅｄｕ．ｃｎ
王家明１，张喜庆１，田晓敏１，王彩骄１，杜万富１，孙　华１，王永禄２，李敬华３
（１．工业发酵微生物教育部重点实验室，天津科技大学 生物工程学院，天津３００４５７；２．南京工业大学 药学院，江苏 南京２１００００；
３．中国中医科学院 中医药信息研究所，北京１００７００）
摘　要：为从昆明山海棠根及茎中分离鉴定内生真菌，并对其发酵产物乙酸乙酯提取物进行体外抗
肿瘤活性筛选，采用微生物纯化方法，从昆明山海棠植物中分离得到内生真菌，根据菌落形态和显
微特征对菌株进行分类鉴定。选用Ｂｅｌ－７４０２（人肝癌细胞）、Ａ５４９（人肺癌细胞）、ＢＧＣ８２３（人胃癌
细胞）、ＨＣＴ－８（人结肠癌细胞）为指标，采用 ＭＴＴ法对发酵产物进行体外抗肿瘤活性筛选。结果
表明，从昆明山海棠不同器官中分离得到３７株内生真菌，经形态观察鉴定为２目、４科、８属。其中
３株内生真菌发酵产物对不同肿瘤细胞具有显著选择性细胞毒作用。研究结果为国内首次从昆明
山海棠植物中分离得到内生真菌，昆明山海棠内生真菌种类多样，具有潜在的研究和应用价值。
关键词：昆明山海棠；内生真菌；抗肿瘤活性；ＭＴＴ法
中图分类号：Ｓ７１８．８１　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００１－７４６１（２０１２）０３－０１０９－０４
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　Ｆｕｎｇｉ　ｏｆ　Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ（Ⅱ）Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　Ｆｕｎｇｉ　ｆｒｏｍ
Ｔ．ｈｙｐｏｇｌａｕｃｕｍａｎｄ　Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｏｆ　Ｓｔｒａｉｎｓ　Ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ　Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ
ＷＡＮＧ　Ｊｉａ－ｍｉｎｇ１，ＺＨＡＮＧ　Ｘｉ－ｑｉｎｇ１，ＴＩＡＮ　Ｘｉａｏ－ｍｉｎ１，ＷＡＮＧ　Ｃａｉ－ｊｉａｏ１，ＤＵ　Ｗａｎ－ｆｕ１，ＳＵＮ　Ｈｕａ１，
ＷＡＮＧ　Ｙｏｎｇ－ｌｕ２，ＬＩ　Ｊｉｎｇ－ｈｕａ３
（１．Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，
Ｔｉａｎｊｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ３００４５７，Ｃｈｉｎａ；２．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，
Ｎａｎｊｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ，Ｊｉａｎｇｓｕ２１００００，Ｃｈｉｎａ；３．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｎ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ
Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｒｏｏｔｓ　ａｎｄ　ｓｔｅｍｓ　ｏｆ　Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ　ｈｙｐｏｇｌａｕｃｕｍｂｙ　ｍｉ－
ｃｒｏｂｉａｌ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｔｈｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｕｎｇｉ　ｗａｓ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｕｔ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　ｍｉｃｒｏ－
ｓｃｏｐｉｃ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｔｒａｉｎｓ．Ｔｈｅ　ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｕｎｇｉ　ｗｅｒｅ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｂｙ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅｄ，
ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｔｏ　４ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌ　ｌｉｎｅｓ，ｉ．ｅ．，Ｂｅｌ－７４０２，Ａ５４９，ＢＧＣ８２３，
ａｎｄ　ＨＣＴ－８ｗａｓ　ｅｘａｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ＭＴＴ　ａｓｓａｙ．Ｔｈｉｒｔｙ－ｓｅｖｅｎ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｕｎｇｉ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｈｅａｌｔｈｙ
ｒｏｏｔｓ　ａｎｄ　ｓｔｅｍｓ　ｏｆ　Ｔ．ｈｙｐｏｇｌａｕｃｕｍ，ｂｅｌｏｎｇｉｎｇ　ｔｏ　８ｇｅｎｅｒａ，４ｆａｍｉｌｉｅｓ，ａｎｄ　２ｏｒｄｅｒｓ．Ｔｈｒｅｅ　ｏｆ　ｔｈｅｍ　ｅｘｈｉｂ－
ｉｔｅｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｔｏｗａｒｄ　ｔｈｅ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌ　ｌｉｎｅｓ　ｔｅｓｔｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＭＴＴ　ａｓｓａｙ．Ｉｔ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ
ｔｉｍｅ　ｉｎ　Ｃｈｉｎａ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍＴ．ｈｙｐｏｇｌａｕｃｕｍ，ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ　ｉｎ　Ｔ．ｈｙｐｏｇｌａｕｃｕｍ，ａｎｄ　ｓｈｏｗｉｎｇ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ　ｈｙｐｏｇｌａｕｃｕｍ；ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ；ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｙ；ＭＴＴ　ａｓｓａｙ
　　植物体内普遍存在内生真菌［１］，由于其所处环
境特殊，会产生一些独特的成分，这些成分成为寻找
抗肿瘤活性成分的重要来源［２－３］。我国境内的卫矛
科雷公藤属有３种，包括昆明山海棠（Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉ－
ｕｍ　ｈｙｐｏｇｌａｕｃｕｍ）、雷公藤（Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ　ｗｉｌｆｏｒ－
ｄｉｉ）和东北雷公藤（Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ　ｒｅｇｅｌｉｉ）。昆明山
海棠又名火把花根、六方藤、紫金皮、紫荆皮、紫荆藤
等，主要分布于长江以南、西南各省区及台湾［４］，其
药用最早收载于《神农本草经》［５］。含有萜类、生物
碱、甙类等多种成分，研究表明其具有抗肿瘤及免疫
抑制等多种药理活性［６－９］。目前，国内外对其内生真
菌研究较少。对昆明山海棠植物内生菌进行分离、
鉴定，研究其内生真菌的分类和组成，并通过四甲基
偶氮唑盐比色法（Ｍｅｔｈｙｌ　ｔｈｉａｚｏｌｙｌ　ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ）筛
选具有抗肿瘤活性的内生菌菌株，目的为寻找抗肿
瘤天然活性成分提供新资源。
１　材料与方法
１．１　材料
１．１．１　植物来源　掘根铲挖出无可见病斑的野外
３年生昆明山海棠（Ｔ．ｈｙｐｏｇｌａｕｃｕｍ）全株植物１
株（包括根、茎和叶），根部包裹上泥土，硬塑料袋包
好，装入纸箱中，快递运回，２０１０年１２月采自四川
省峨眉山市双福镇附近山体阳坡灌木中（海拔约１
３００～１　４００ｍ）。由南京工业大学王永禄老师代为
采集并鉴定。
１．１．２　肿瘤细胞株　人肝癌细胞Ｂｅｌ－７４０２、人肺癌
细胞 Ａ５４９、人胃癌细胞 ＢＧＣ８２３、人结肠癌细胞
ＨＣＴ－８。肿瘤细胞均为本科室传代培养。
１．１．３　真菌培养基　ＰＤＡ培养基：新鲜马铃薯去皮
２００ｇ·Ｌ－１，葡萄糖２５ｇ·Ｌ－１，蒸馏水１Ｌ，固体培养
基加２％琼脂，双抗培养基加入１５０μｇ·ｍＬ
－１青霉素
钾和１２０μｇ·ｍＬ
－１硫酸链霉素。
１．１．４　试剂与仪器　试剂：小牛血清、微孔检测板、
ＭＴＴ试剂、二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）、乙酸乙酯、甲醇、
９５％乙醇、次氯酸钠溶液（活性氯含量５．２％）。仪
器：超净工作台、恒温震荡培养箱、冻干机、过滤器、
ＣＯ２ 培养箱、超速离心机、酶标仪、ｐＨ计、微量注射
器、９６孔板、硅胶Ｇ板。
１．２　方法
１．２．１　内生真菌的分离与鉴定　内生真菌的分离
纯化具体步骤，参考实验室常用操作方法［１０］。用自
来水将无病害昆明山海棠的根和茎冲洗１ｈ，晾干
后，将根和枝剪成５ｃｍ 长小段。在超净工作台上，
按无菌操作方法进行以下工作：先用７５％ 乙醇浸泡
根和茎材料２ｍｉｎ，再用不同活性氯浓度的次氯酸
钠溶液浸泡２０ｓ～１５ｍｉｎ，用无菌水漂洗４次，无菌
纱布蘸干水分，剪去根和茎两头褐变部分，将其剪成
０．５ｃｍ小段，去除木质部，保留韧皮部。将韧皮部
剪成０．５ｃｍ×０．５ｃｍ小片。把处理过的韧皮部植
入不同浓度马铃薯葡萄糖双抗固体培养基平板中，
每皿植入４～５片，用封口膜将培养皿密封，置于培
养箱中，２８℃倒置培养，４ｈ内完成内生真菌的分离
工作。１２ｈ观察１次，待根和茎切面处长出菌丝
后，挑取其尖端部分移至新的马铃薯葡萄糖培养基
平板上，２８℃培养，经反复几次纯化后，即得到昆明
山海棠内生真菌纯培养物。试验中主要采用漂洗液
检验法来检测表面灭菌效果，即把最后一次漂洗材
料的无菌水涂布于马铃薯葡萄糖培养基平板上，
２８℃培养７ｄ。
１．２．２　分类鉴定　根据内生真菌主要的群体形态
特征点（包括菌落大小、颜色、表面特征、质地）和个
体形态特点（包括菌丝、子实体和孢子形态）［１１－１２］。
１．２．３　液体发酵及产物提取　取菌丝块接种于装
有４００ｍＬ　ＰＤＡ液体培养基的三角瓶中，２８℃、１２０
ｒ·ｍｉｎ－１摇床培养７ｄ，发酵产物经４　０００ｒ·ｍｉｎ－１
离心１５ｍｉｎ后，分别获取真菌发酵液与菌丝体。发
酵液采用乙酸乙酯萃取，然后减压旋转蒸干溶剂，获
得浸膏。分别称取浸膏按浸膏计算，用于 ＭＴＴ测
定用的样品设置为５个浓度（０．０１、０．１０、１．００、
１０．００、１００．００ｇ·ｍＬ－１）。
１．２．４　ＭＴＴ法鉴定内生真菌代谢产物抗肿瘤活
性［１３］　以５－氟尿嘧啶作为阳性对照药，以 ＲＰＭＩ
１６４０培养基稀释至用药浓度２０ｍｇ·Ｌ－１。采用体
外细胞毒 ＭＴＴ（Ｍｅｔｈｙｌ　ｔｈｉａｚｏｌｙｌ　ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ）法测
定发酵液抗肿瘤活性。把培养好的人肝癌细胞Ｂｅｌ－
７４０２、人肺癌细胞 Ａ５４９、人胃癌细胞ＢＧＣ８２３和人
结肠癌细胞 ＨＣＴ－８，用１６４０培养液制成１×１０５
ｍＬ－１的细胞悬浮液接种到９６孔培养板，每孔１００
μＬ。次日加入含不同浓度药物（２．３中的５个浓度）
及相应溶剂对照的新鲜培养基，每孔加１００μＬ
（ＤＭＳＯ及新鲜培养基溶解样品，ＤＭＳＯ终质量分
数＜０．５％），每组设３个平行孔，于３７℃继续培养。
加药物４８ｈ后，弃上清，每孔加入２０μＬ　ＭＴＴ（５ｇ
·Ｌ－１，０．０１ｍｏｌ　ＰＢＳ稀释）溶液，继续孵育４ｈ，吸
出细胞上清液，每孔加入ＤＭＳＯ溶液１００μＬ，振荡
器振荡５ｍｉｎ，用酶标仪在参考波长４５０ｎｍ，检测波
长５７０ｎｍ条件下测定吸收度值，并重复测定３次，
计算平均值。以溶剂对照处理的肿瘤细胞为对照
组，用下面公式计算药物对肿瘤细胞的抑制率，并计
算ＩＣ５０值：抑制率／％＝［（对照组平均吸收度值－给
药组平均吸收度值）／对照组平均吸收度值］×１００。
１．２．５　数据统计与分析　采用ＳＰＳＳ　１０．０软件，
方差分析ｐ＜０．０５为有显著性统计学意义［１４］。
０１１ 西北林学院学报 ２７卷　
２　结果与分析
２．１　内生真菌种群组成及分布
从昆明山海棠植物中共分离到３７株内生真菌，
经微生物学形态观察，初步鉴定为２目，４科，８属（表
１）。在分离获得的３７株内生真菌中，廉孢霉属最多，
为８株，占２１．６２％；其次是丝核菌属，各为７株，占
１８．９２％；青霉属５株，占１３．５１％。这３属为昆明山
海棠的内生真菌优势属，占总数的５４．０５％。
昆明山海棠内生真菌在不同部分分布也是不相
同的，其中根部分布较多为２４株，茎中较少为１３株。
这些寄生于植物器官中的内生真菌，在根中的种类和
数量较多，而在茎中的种类和数目较少（表１）。
表１　昆明山海棠内生真菌种群组成及分布
Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍＴ．ｈｙｐｏｇｌａｕｃｕｍ
目 科 属 ｎ 根 茎
丛梗孢目 丛梗孢科 青霉属 （Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ） ５　 ４　 １
木霉属 （Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ） ４　 ３　 １
轮枝孢属（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ） ４　 ４　 ０
暗梗孢科 弯孢属 （Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ） ２　 １　 １
交链孢霉属 （Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ） ４　 １　 ３
链格孢 （Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ） ３　 ２　 １
瘤座孢科 廉孢霉属 （Ｆｕｓａｒｉｕｍ） ８　 ４　 ４
无孢目 无孢科 丝核菌属 （Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ） ７　 ５　 ２
注：ｎ为根和茎中分离得到的菌株总数。
２．２　乙酸乙酯萃取物细胞毒活性
在３７株供测菌株中，共有１１株内生真菌代谢
产物对４株供测肿瘤细胞具有不同细胞毒作用，占
总供测菌株的２９．７３％，其中３个菌株具有显著细
胞毒作用（表２）。这３个菌株中，８﹟ 和９﹟ 菌株都
是从根中分离得到，３３﹟ 菌株是从嫩茎中分离得到。
其中８﹟ 和３３﹟ 菌株分别针对肿瘤细胞Ａ５４９（０．０２
μｇ·ｍＬ
－１）和ＢＧＣ８２３（０．１９μｇ·ｍＬ
－１）体现出显
著的细胞毒作用。
表２　具显著细胞毒作用的内生真菌
Ｔａｂｌｅ　２　Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ　ｉｓｏｌａｔｅｄ
菌株
ＩＣ５０／（μｇ·ｍＬ－１）
Ｂｅｌ－７４０２ Ａ５４９ ＢＧＣ８２３ ＨＣＴ－８
８﹟ ＞５０　 ０．０２　 ９．４５ ＞５０
９﹟ ＞５０　 ８．９１ ＞５０　 ６．０２
３３﹟ ＞５０　 １０．０２　 ０．１９ ＞５０
３　结论与讨论
从昆明山海棠植物中共分离得到３７株内生真
菌，其普遍存在于植株的根和茎中，但根中含菌株
数量高，茎中低。这可能与根的生长年限较长有关，
本研究中根的生长年限为３年，而所取的嫩茎仅为
当年生长。这与我们前期研究中雷公藤在根和茎中
的菌株分布情况是相同的，根中菌株数量明显多于
茎中。但是雷公藤中菌株数量明显比昆明山海棠中
分离得到的多，这可能与采集的日期及环境不同有
关。本研究昆明山海棠采集的时间为１２月份，天气
偏冷，菌株数量明显减少。昆明山海棠与雷公藤中
分离得到的菌株种属大部分相同，同时结合植物中
化学成分具有一定的相似性［１５－１６］，进一步说明内生
真菌与植物的代谢物质具有一定相关性。
３７株内生真菌萃取物对不同肿瘤细胞 Ｂｅｌ－
７４０２、Ａ５４９、ＢＧＣ８２３、ＨＣＴ－８生长抑制试验结果显
示，其中１１株菌株均具有不同程度的细胞毒活性，
３株菌株具有较强的选择性细胞毒活性。
参考文献：
［１］　郭良栋．内生真菌研究进展［Ｊ］．菌物系统，２００１，２０（１）：
１４８－１５２．
ＧＵＯ　Ｌ　Ｄ．Ａｄｖａｎｃｅｓ　ｏｆ　ｒｅｓｅａｒｃｈｅｓ　ｏｎ　ｅｎｔｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ［Ｊ］．
Ｍｙｃｏｓｙｓｔｅｍａ，２００１，２０（１）：１４８－１５２．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［２］　李桂玲，王健锋，黄耀坚，等．植物内生真菌抗肿瘤活性菌株
的筛选［Ｊ］．菌物系统，２００１，２０（３）：３８７－３９１．
ＬＩ　Ｇ　Ｌ，ＷＡＮＧ　Ｊ　Ｆ，ＨＵＡＮＧ　Ｙ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｏｆ　ｅｎｔｏ－
ｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ　ｗｉｔｈ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ［Ｊ］．Ｍｙｃｏｓｙｓｔｅｍａ，
２００１，２０（３）：３８７－３９１．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［３］　ＧＡＲＹ　Ｓ，ＢＲＹＮ　Ｄ，ＵＶＩＤＥＬＩＯ　Ｃ，ｅｔ　ａｌ．Ｎａｔｕｒａｌ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ
ｆｒｏｍ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ［Ｊ］．Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．，２００４，６７
（２）：２５７－２６８．
［４］　广西植物研究所．广西植物名录（第二册，双子叶植物）［Ｍ］．
广西：广西植物研究所，１９７１：４１０．
［５］　江苏新医学院．中药大辞典（下册）［Ｍ］．上海：上海科学技术
出版社，１９８６：４８８２．
［６］　黄晓春，周燕虹，杨录军，等．昆明山海棠总生物碱体外抗肿
瘤作用的研究［Ｊ］．中国医院药学杂志，２００６，２６（４）：４４２－
４４５．
ＨＵＡＮＧ　Ｘ　Ｃ，ＺＨＯＵ　Ｙ　Ｈ，ＹＡＮＧ　Ｌ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｅｘｐｅｒ－
ｉｍｅｎｔａｌ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ｏｆ
Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ　ｈｙｐｏｇｌａｕｃｕｍ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ
Ｐｈａｒｍａｃｙ，２００６，２６（４）：４４２－４４５．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［７］　刘乐斌，刘胜学，胡孝贞，等．昆明山海棠总生物碱诱导肺腺癌
Ａ５４９细胞凋亡与细胞周期改变［Ｊ］．第三军医大学学报，
１１１第３期 王家明 等：雷公藤属内生真菌研究（Ⅱ）昆明山海棠内生真菌的分离鉴定及抗肿瘤活性菌株筛选
２００７，２９（１）：１８－２０．
ＬＩＵ　Ｌ　Ｂ，ＬＩＵ　Ｓ　Ｘ，ＨＵ　Ｘ　Ｚ，ｅｔ　ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ
Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ　ｈｙｐｏｇｌａｕｃｕｍ　Ｈｕｔｃｈ　ｏｎ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ
ｌｕｎｇ　ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌ　ｌｉｎｅ　Ａ５４９［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ａｃａｄｅｍｉａｅ　Ｍｅ－
ｄｉｃｉｎａｅ　Ｍｉｌｉｔａｒｉｓ　Ｔｅｒｔｉａｅ，２００７，２９（１）：１８－２０．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［８］　张彦文，范云双，王晓东，等．昆明山海棠中具有免疫抑制活性
的二萜化合物［Ｊ］．中草药，２００７，３８（４）：４９３－４９６．
ＺＨＡＮＧ　Ｙ　Ｗ，ＦＡＮ　Ｙ　Ｓ，ＷＡＮＧ　Ｘ　Ｄ，ｅｔ　ａｌ．Ｄｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ
ｐｏｓｓｅｓｓｅｄ　ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｆｒｏｍ　Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ　ｈｙ－
ｐｏｇｌａｕｃｕｍ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　ａｎｄ　Ｈｅｒｂａｌ　Ｄｒｕｇｓ，２００７，
３８（４）：４９３－４９６．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［９］　汤勇，展鸿谋．昆明山海棠的免疫抑制机理研究进展［Ｊ］．云南
医药，２００５，２６（３）：２８９－２９１．
ＴＡＮＧ　Ｙ，ＺＨＡＮ　Ｈ　Ｔ．Ａｄｖａｎｃｅｓ　ｏｆ　ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ　ｈｙｐｏｇｌａｕｃｕｍ［Ｊ］．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ａｎｄ
Ｐｈａｒｍａｃｙ　ｏｆ　Ｙｕｎｎａｎ，２００５，２６（３）：２８９－２９１．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１０］　王家明，宋亚琼，刘宏亮，等．雷公藤内生真菌的分离鉴定
及抗肿瘤活性菌株筛选［Ｊ］．西北林学院学报，２０１０，２０（３）：
３８７－３９１．
ＷＡＮＧ　Ｊ　Ｍ，ＳＯＮＧ　Ｙ　Ｑ，ＬＩＵ　Ｈ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ
ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ　ｆｒｏｍ　Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ　ｗｉｌｆｏｒｄｉｉ　ａｎｄ　ｔｈｅ
ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｏｆ　ｉｔｓ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ
Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ，，２０１０，２０（３）：３８７－３９１．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１１］　魏景超．真菌鉴定手册［Ｍ］．上海：上海科学技术出版社，
１９８２．
［１２］　Ｈ　Ｌ巴尼特，Ｂ　Ｂ亨特．半知菌属图解［Ｍ］沈崇尧，译．北京：
科学出版社，１９７７．
［１３］　陆勇芹，周文明，王琦，等．木蹄层孔菌化学成分及不同提
取物体外抗肿瘤活性研究［Ｊ］．西北林学院学报，２００７，２２
（４）：１３１－１３４．
ＬＵ　Ｙ　Ｑ，ＺＨＯＵ　Ｗ　Ｍ，ＷＡＮＧ　Ｑ，ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ
ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ
Ｆｏｍｅｓ　ｆｏｍｅｎｔａｒｉｕｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ｆｏｒｅｓｔ－
ｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００７，２２（４）：１３１－１３４．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１４］　李洪燕，李燕，刘忠海，等．重组人内抑素的抗肿瘤活性
［Ｊ］．药学学报，２００２，３７（１０）：７６３－７６６．
ＬＩ　Ｈ　Ｙ，ＬＩ　Ｙ，ＬＩＵ　Ｚ　Ｈ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
ｏｆ　ｒｈｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｐｈａｍａｃｅｕｔｉｃａ　Ｓｉｎｉｃａ，２００２，３７
（１０）：７６３－７６６．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１５］　黄耀峰，沈雪松，顾生玖，等．雷公藤和昆明山海棠化学成
分相似性分析［Ｊ］．安徽农业科学，２００９，３７（１３）：５９６１－
５９６３．
ＨＵＡＮＧ　Ｙ　Ｆ，ＳＨＥＮ　Ｘ　Ｓ，ＧＵ　Ｓ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ａａｎｌｙｓｉｓ　ｏｎ　ｓｉｍｉ－
ｌａｒｉｔｙ　ｏｆ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｂｅｔｗｅｅｎ　Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ
ｗｉｌｆｏｒｄｉｉ　Ｈｏｏｋ．Ｆ．ａｎｄ　Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ　ｈｙｐｏｇｌａｕｃｕｍ Ｈｕｔｃｈｉｎｓ
［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｎｈｕｉ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２００９，３７（１３）：
５９６１－５９６３．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１６］　张亮，张正行，盛龙升，等．雷公藤和昆明山海棠植物根中
挥发性化学成分比较［Ｊ］．中国药科大学学报，１９９２，２３（５）：
３０１－３０３．
ＺＨＡＮＧ　Ｌ，ＺＨＡＮＧ　Ｚ　Ｘ，ＳＨＥＮＧ　Ｌ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｔｕｄｙ　ｍ　ｏｎ
ｔｈｅ　ｖｏｌａｔｉｌｅ　ｃｏｍｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ
ｗｉｌｆｏｒｄｉｉ　ａｎｄ　Ｔ．ｈｙｐｏｇｌａｕｃｕｍｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｒｅｇｉｏｎｓ　ｂｙ
ＧＣ－ＭＳ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
１９９２，２３（５）：３０１－３０３．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ
櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲
）
（上接第６７页）
［１９］　范繁荣．濒危植物白桂木种子繁殖苗年生长规律研究［Ｊ］．江
西林业科技，２００９（３）：１３－１５．
ＦＡＮ　Ｆ　Ｒ．Ｇｒｏｗｔｈ　ｒｕｌｅ　ｏｆ　ｏｎｅ－ｙｅａｒ－ｏｌｄ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ　ｏｆ　ｅｎｄａｎ－
ｇｅｒｅｄ　ｐｌａｎｔ　Ａｒｔｏｃａｒｐｕｓ　ｈｙｐａｒｇｙｒｅｕｓ［Ｊ］．Ｊｉａｎｇｘｉ　Ｆｏｒｅｓｔ　Ｓｃｉ－
ｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９（３）：１３－１５（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［２０］　骆文华，毛世忠，丁莉，等．濒危植物广西火桐种子繁殖技术及
幼苗生长节律［Ｊ］．福建林学院学报，２０１１，３１（１）：４８－５１．
ＬＵＯ　Ｗ　Ｈ，ＭＡＯ　Ｓ　Ｚ，ＤＩＮＧ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｅｅｄ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ
ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ａｎｄ　ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｌａｗ　ｏｆ　ｅｎｄａｎｇｅｒｅｄ　ｓｐｅｃｉｅｓ
Ｅｒｙｔｈｒｏｐｓｉｓ　ｋｗａｎｇｓｉｅｎｓｉｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｆｕｊｉａｎ　Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ
Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，２０１１，３１（１）：４８－５１．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
２１１ 西北林学院学报 ２７卷