全 文 ：·生物技术· 北方园艺２０１６（１５）：８６～９１
第一作者简介：陈静芳（１９９０－），女，硕士研究生，研究方向为菜薹
分子生物学。Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｉｎｇｆａｎｇ．ｃｈｅｎ＠ｑｑ．ｃｏｍ．
责任作者：郭培国（１９６３－），男，博士，教授，现主要从事作物逆境生
物学和分子育种的教学与科研工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｕｏｐｇ＠ｇｚｈｕ．ｅｄｕ．ｃｎ．
基金项目：广州市属高校科技计划资助项目（１２０１４２０６２１）；广州市
科技计划资助项目（２０１４Ｊ４１００１２３）；广东省自然科学基金资助项
目（２０１５Ａ０３０３１０１３６，２０１５Ａ０３０３１３５００）；广东省普通高校国际暨港
澳台合作创新平台及国际合作重大资助项目（２０１５ＫＧＪＨＺ０１５）；
国家自然科学基金资助项目（３０８７１５２６）。
收稿日期：２０１６－０４－２１
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１６１５０２２
芸薹属ＳＳＲ标记在菜薹中的通用性及其应用
陈 静 芳１，李 荣 华１，王 直 亮１，夏 岩 石１，郭 培 国１，Ｋａｄａｍｂｏｔ　ＳＩＤＤＩＱＵＥ２
（１．广州大学 生命科学学院，作物抗逆国际合作研究中心，广东 广州５１０００６；
２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ａｕｓｔｒａｌｉａ，ＷＡ　６００９，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）
　　摘　要：以４份遗传背景差异较大的菜薹种质为试材，检测１３３对芸薹属ＳＳＲ引物在菜薹中
的ＰＣＲ扩增效果，以期发现适用于菜薹的ＳＳＲ标记。结果表明：有５０对引物在４份菜薹种质中
表现出较好的通用性，其扩增产物多在１００～３５０ｂｐ，多态性数目在１～４，共９１个多态性位点。
在此基础上，利用在“四九－１９号菜心”和“３Ｔ６”中具有多态性的４０对ＳＳＲ引物，对１３０份以“四九－
１９号菜心”和“３Ｔ６”为亲本建立的Ｆ６重组自交系群体进行基因分型，构建了一个具有１０个遗传
群、总长度为６４１．３９ｃＭ的菜薹遗传连锁图。研究结果可为今后菜薹遗传多样性、基因定位和分
子标记辅助育种提供理论参考。
关键词：芸薹属；ＳＳＲ；通用性；菜薹；遗传连锁图
中图分类号：Ｓ　６３４．５０３．６　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１６）１５－００８６－０６
　　菜薹（Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ　Ｌ．ｓｓｐ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ｖａｒ．
ｕｔｉｌｉｓ　Ｔｓｅｎｅｔ　Ｌｅｅ）属十字花科芸薹属重要的园艺作物之
一，是我国华南地区的特色蔬菜。尽管分子标记技术如
ＳＳＲ标记技术应用于多种作物的研究和应用已有多年，
然而分子标记技术应用于菜薹研究工作的起步较晚，且
主要是利用 ＲＡＰＤ、ＩＳＳＲ、ＭＦＬＰ和ＳＲＡＰ等分子标
记［１－３］，鲜见有利用简单重复序列（ｓｉｍｐｌｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｒｅ－
ｐｅａｔ，ＳＳＲ）标记开展相关研究的报道。
ＳＳＲ又称微卫星ＤＮＡ或短串联重复序列，为真核
生物基因组中的核苷酸重复片段，其串联的核心序列一
般为２～６ｂｐ。研究表明ＳＳＲ标记具有特异性强、共显
性、数量丰富、操作简单和基因组覆盖性强等优点［４］，具
有较高的准确性以及稳定的重复性，而且成本较低，明
显优于稳定性和重复性不高的ＲＡＰＤ等显性标记［５］。
开发ＳＳＲ分子标记重要步骤就是分析检测出简单
重复序列及其两侧的核苷酸序列，用以设计ＰＣＲ扩增的
引物。例如在芜菁ＳＳＲ引物的开发研究中，利用已知的
ＤＮＡ序列开发了６８０对ＳＳＲ引物组合，并获得１４１对
有多态性的引物组合［６］。但对既无大量ＥＳＴ信息又无
各染色体基因组序列的菜薹来讲，开发ＳＳＲ标记存在着
较大的挑战。已有研究报道相近属、种或亚种中间ＳＳＲ
标记存在通用性，如王炜勇等［７］探讨了凤梨属、丽穗凤
梨属、铁兰属、艳红凤梨属和帝王凤梨属中的ＳＳＲ标记
引物在近缘属光萼荷属中通用性情况，发现这些近缘属
ＳＳＲ引物在光萼荷属的有效扩增比例高达７２．７％以上。
ＣＡＲＶＡＬＨＯ等［８］探测了辣椒属不同种之间的ＳＳＲ标
记的通用性，发现有６２．７％的牛角椒ＳＳＲ引物可以在
“小米辣”和“黄灯笼”辣椒中扩增出清晰的产物，且具有
多态性的ＳＳＲ引物对在２种辣椒种中分别为１６．３７％和
３１．０３％。龚亚明等［９］发现１６３对豌豆的ＥＳＴ－ＳＳＲ引
物，有３６对引物可应用于蚕豆的基因分型工作。在芸
薹属植物ＳＳＲ标记的通用性研究中，荆赞革等［１０］利用
甘蓝的ＳＳＲ标记发现在近缘种青花菜中存在通用性，刘
海霞等［１１］探讨并发现了芸薹属中来自于白菜、甘蓝型油
菜和黑芥中的ＳＳＲ引物在甘蓝中的通用性等。这些结
果表明根据ＳＳＲ标记的通用性，可在相近物种间开发出
适用的ＳＳＲ标记。
芸薹属植物如油菜和白菜的基因组学研究较深入，
已有一批可应用于遗传分析的ＳＳＲ标记。根据ＳＳＲ标
记在物种间存在的通用性，该研究利用芸薹属植物如油
菜和白菜等种业已开发出的ＳＳＲ标记，探索并获得一批
适用于菜薹的ＳＳＲ标记；利用筛选出的ＳＳＲ标记对１个
菜薹重组自交系进行了基因分型，并构建了菜薹的遗传
连锁图谱。研究结果可为菜薹的ＳＳＲ标记开发和遗传
６８
北方园艺２０１６（１５）：８６～９１ ·生物技术·
分析提供借鉴。
１　材料与方法
１．１　试验材料
选用４份遗传背景差异较大的菜薹种质“四九－１９号
菜心”“３Ｔ６”“柳叶５０”和“油绿５０”作为供试材料，用于分析
ＳＳＲ引物的通用性。另外，利用“四九－１９号菜心”和“３Ｔ６”
建立的１３０份Ｆ６代重组自交系作为遗传群体材料，用于
分析ＳＳＲ引物的适用性并构建遗传连锁图谱。
１．２　试验方法
１．２．１　基因组的ＤＮＡ提取　２０１４年盆栽种植各供试
菜薹材料，采收３叶期幼嫩的叶片，按照李荣华等［１２］改
进的ＣＴＡＢ方法提取各材料的基因组ＤＮＡ，通过１％的
琼脂糖凝胶电泳观察所提取ＤＮＡ的质量，采用紫外分
光光度法检测核酸浓度，并将其稀释到１０ｍｇ·Ｌ－１作为
ＳＳＲ扩增的模板。
１．２．２　芸薹属ＳＳＲ引物组合的筛选　参照ＳＵＷＡＢＥ
等［１３－１４］、ＬＯＷＥ等［１５－１６］、ＰＩＱＵＥＭＡＬ等［１７］、ＣＨＯＩ等［１８］、
于仁波等［１９］发表的论文以及多国芸薹属基因组计划
（Ｍｕｌｔｉｎａｔｉｏｎａｌ　Ｂｒａｓｓｉｃａ　Ｇｅｎｏｍｅ　Ｐｒｏｊｅｃｔ，ＭＢＧＰ）网页中
的ＳＳＲ标记信息（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｒａｓｓｉｃａ．ｉｎｆｏ／ｒｅｓｏｕｒｃｅ／
ｍａｒｋｅｒｓ），筛选出１３３个ＳＳＲ标记。这些ＳＳＲ标记引物
的合成、用于ＰＣＲ反应的Ｔａｑ　ＤＮＡ聚合酶、ｄＮＴＰｓ及
ＤＮＡ　ｓｉｚｅ　Ｍａｒｋｅｒ均购自于生物工程（上海）有限公司。
１．２．３　ＳＳＲ标记的ＰＣＲ扩增及检测　根据ＳＵＷＡＢＥ
等［１３］的方法稍作修改，即在１０μＬ的ＰＣＲ反应总体积
中，含１０ｍｇ·Ｌ－１的ＤＮＡ模板２．０μＬ，１０×ＰＣＲ　Ｂｕｆ－
ｅｒ　１．０μＬ，２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１　ＭｇＣｌ２０．８μＬ，１０μｍｏｌ·Ｌ－１正
向引物０．２５μＬ，１０μｍｏｌ·Ｌ－１反向引物０．２５μＬ，
１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１　ｄＮＴＰｓ　０．２５μＬ，Ｔａｑ　ＤＮＡ聚合酶（５×
１０６　Ｕ·Ｌ－１）０．１５μＬ，ｄｄＨ２Ｏ　５．３μＬ。ＰＣＲ扩增是在
ＡＢＩ　９７００ＰＣＲ仪（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，ＵＳＡ）上进行的，
ＰＣＲ扩增循环反应程序为９４℃预变性２ｍｉｎ，之后９４℃
下变性４５ｓ、适宜退火温度（每个ＳＳＲ扩增的最适退火
温度不一，在５０～６０℃）４５ｓ、７２℃１ｍｉｎ的ＰＣＲ程序
运行３５个循环；最后再在７２℃条件下延伸１０ｍｉｎ。利
用２％琼脂糖凝胶电泳分离ＰＣＲ扩增产物，电泳条件为
１００Ｖ、４０ｍｉｎ。电泳结束后经溴化乙锭染色，在Ｂｉｏ－Ｒａｄ
ＧｅｌＤｏｃ　ＸＲ凝胶成像仪（Ｂｉｏ－Ｒａｄ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　Ｉｎｃ，ＵＳＡ）
成像；观察每个ＳＳＲ引物组合扩增产物在４个菜薹材料
间的扩增效果及其多态性。使用Ｑｕａｎｔｉｔｙ　Ｏｎｅ软件对
电泳图进行判读，读取具有多态性的条带，统计各个样
本的扩增条带情况，建立扩增产物原始数据矩阵（有条
带记为“１”，无条带记为“０”，缺失记为“－”）。
１．２．４　遗传连锁图谱的构建　使用Ｑｕａｎｔｉｔｙ　Ｏｎｅ软件
（Ｂｉｏ－Ｒａｄ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　Ｉｎｃ，ＵＳＡ）统计各个自交系的扩增
条带情况，有条带记为“１”、无条带记为“０”、不清或缺失
记为“－”，建立扩增产物原始数据矩阵。进一步将各自
交系中等位位点与“四九－１９号菜心”相同的记为“Ａ”、与
“３Ｔ６”相同的记为“Ｂ”、不清或缺失记为“－”。运用
ＭａｐＭａｋｅｒ（Ｍａｃｉｎｔｏｓｈ　ｖｅｒｓｉｏｎ　２．０）软件，用Ｋｏｓａｍｂｉ函
数将重组率转化为遗传距离ｃＭ，ＬＯＤ值设定为３．０，构
建出菜薹的遗传连锁图。
２　结果与分析
２．１　芸薹属ＳＳＲ引物在菜薹基因组ＤＮＡ中的扩增
运用芸薹属ＳＳＲ引物对４份菜薹进行ＰＣＲ扩增，
扩增产物再经琼脂糖凝胶电泳检测。从图１可以看出，
芸薹属ＳＳＲ在菜薹中的扩增产物具有３种类型。类型１
为有些ＳＳＲ引物组合扩增产物的主条带，在４份菜薹材
料中清晰易辨且具有多态性，如 Ｒａ１Ｆ０９、Ｒａ１Ｆ０６、
Ｒａ２Ａ０１和Ｒａ２Ｅ０３等。类型２为有些ＳＳＲ引物组合扩
增产物的主条带清晰，但在４份种质材料中不具有多态
性或需进一步确认，如 Ｒａ２Ａ０６、ＢＲＭＳ０４０、Ｒａ２Ｂ０７、
Ｒａ２Ａ０７和ＢＲＭＳ０９６等。类型３为有些ＳＳＲ引物组合
的扩增产物未见明显的主条带，如ＢＲＭＳ００２等；或虽有
主条带但其大小在１００ｂｐ以下，可能属于非特异扩增条
带，如ＢＲＭＳ０４３和Ｒａ１Ｈ０２等。
注：１～４分别为菜薹材料“３Ｔ６”“四九－１９号菜心”“油绿５０”和“柳叶５０”。每４栏为１组，代表１个ＳＳＲ引物组合。Ｍ为分子量大小标样。
Ｎｏｔｅ：１ｔｏ　４ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ‘３Ｔ６’‘Ｓｉｊｉｕ－１９Ｃａｉｘｉｎ’‘Ｙｏｕｌｙｕ　５０’‘Ｌｉｕｙｅ５０’，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｅａｃｈ　ｆｏｕｒ　ｌａｎｅｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ａ　ＳＳＲ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ．Ｍ　ｉｓ　ＤＮＡ　ｓｉｚｅ　Ｍａｒｋｅｒ．
图１　芸薹属１２对ＳＳＲ引物在４份菜薹材料中扩增产物的琼脂糖凝胶电泳检测
Ｆｉｇ．１　Ｉｍａｇｅ　ｏｆ　ａｇａｒｏｓｅ　ｇｅｌ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　ｆｏｒ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｏｆ　１２　ＢｒａｓｓｉｃａＳＳＲｓ　ｉｎ　４ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｃａｂｂａｇｅ　ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ
７８
·生物技术· 北方园艺２０１６（１５）：８６～９１
　　该研究共检测了１３３对芸薹属ＳＳＲ引物，具第１、２
扩增产物类型的引物组合为９８对，占总引物组合数的
７３．７％；其中具第１种扩增产物类型的引物组合为５０
对，占总引物对数的３７．６％；这５０对引物在４份菜薹材
料间共有９１个多态性条带，每对引物多态性位点数在
１～４，扩增产物大多介于１００～３５０ｂｐ；这些引物组合的
信息如表１所示，可以转用到菜薹中。具第２种扩增产
物类型的引物对数为４８对，占总引物组合数的３６％，这
类引物组合可能在具更多菜薹种质材料时呈现出多态
性，这还需要今后的进一步检测与分析。第３类扩增产
物的引物组合数为３５对，占总组合数的２６．３％；该类组
合不适合于菜薹。
　　表１ 在４种菜薹材料中扩增产物具有多态性的芸薹属ＳＳＲ标记的引物组合信息
　　Ｔａｂｌｅ　１ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＢｒａｓｓｉｃａＳＳＲｓ　ｗｈｉｃｈ　ｐｏｓｓｅｓｓｅｄ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ｌｏｃｕｓ／ｌｏｃｉ　ａｍｏｎｇ　ｆｏｕｒ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｃａｂｂａｇｅ　ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ
引物名称
Ｐｒｉｍｅｒ　ｎａｍｅ
序列Ｓｅｑｕｅｎｃｅ（５′→３′）
正向引物Ｆｏｒｗａｒｄ　ｐｒｉｍｅｒ 反向引物序列Ｒｅｖｅｒｓｅ　ｐｒｉｍｅｒ
物种
Ｓｐｅｃｉｅｓ
文献
Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ
ＢＲＡＳ０２９ ＣＡＣＴＣＡＣＡＧＣＣＣＴＣＴＴＣＴＴＣＴ　 ＣＣＴＣＣＡＧＣＴＴＣＣＴＴＴＡＣＣＡ　 Ｂ．ｎａｐｕｓ　Ｌ． １
ＢＲＭＳ００１ ＧＧＴＧＧＣＴＣＴＡＡＴＴＣＣＴＣＴＧＡ　 ＡＴＣＴＴＴＣＴＣＴＣＡＣＣＡＡＣＣＣＣ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ２
ＢＲＭＳ００３ ＡＣＧＡＡＴＴＧＡＡＴＴＧＧＡＣＡＧＡＧ　 ＣＡＧＡＴＧＧＧＡＧＴＣＡＡＧＴＣＡＡＣ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ２
ＢＲＭＳ００６ ＴＧＧＴＧＧＣＴＴＧＡＧＡＴＴＡＧＴＴＣ　 ＡＣＴＣＧＡＡＧＣＣＴＡＡＴＧＡＡＡＡＧ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ２
ＢＲＭＳ０１６ ＴＣＣＣＧＴＡＴＣＡＡＴＧＧＣＧＴＡＡＣＡＧ　 ＣＧＡＴＧＧＴＧＡＣＡＴＴＡＴＴＧＴＧＧＣＧ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ２
ＢＲＭＳ０１９ ＣＣＣＡＡＡＣＧＣＴＴＴＴＧＡＣＡＣＡＴ　 ＧＧＣＡＣＡＡＴＣＣＡＣＴＣＡＧＣＴＴＴ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ２
ＢＲＭＳ０３１ ＴＧＣＣＡＣＣＡＡＴＧＡＣＡＡＴＧＡＣＡＣＴＡＴＣ　 ＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＡＣＣＡＣＴＴＡＣＡＴＴＴＴ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ２
ＢＲＭＳ０３３ ＧＣＧＧＡＡＡＣＧＡＡＣＡＣＴＣＣＴＣＣＣＡＴＧＴ　 ＣＣＴＣＣＴＴＧＴＧＣＴＴＴＣＣＣＴＧＧＡＧＡＣＧ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ２
ＢＲＭＳ０３４ ＧＡＴＣＡＡＡＴＡＡＣＧＡＡＣＧＧＡＧＡＧＡ　 ＧＡＧＣＣＡＡＧＡＡＡＧＧＡＣＣＴＡＡＧＡＴ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ２
ＢＲＭＳ０３７ ＣＴＧＣＴＣＧＣＡＴＴＴＴＴＴＡＴＣＡＴＡＣ　 ＴＡＣＧＣＴＴＧＧＧＡＧＡＧＡＡＡＡＣＴＡＴ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ２
ＢＲＭＳ０４２ ＧＧＡＴＣＡＧＴＴＡＴＣＴＧＣＡＣＣＡＣＡＡ　 ＴＣＧＧＡＡＴＴＧＧＡＴＡＡＧＡＡＴＴＣＡＡ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ２
ＢＲＭＳ０４２－２ ＡＧＣＴＣＣＣＧＡＣＡＧＣＡＡＣＡＡＡＡＧＡ　 ＴＴＣＧＣＴＴＣＣＴＴＴＴＣＴＧＧＧＡＡＴＧ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ２
ＢＲＭＳ０４６ ＴＴＧＧＣＣＴＴＧＣＴＡＴＴＡＣＧＡＧＣＴＧ　 ＡＴＧＣＧＣＡＡＡＣＣＣＴＡＡＴＴＴＴＣＡＣ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ２
ＢＲＭＳ０４９ ＧＡＴＣＴＴＣＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＴＣＴＣＴ　 ＡＡＡＧＴＣＣＡＡＧＣＴＡＡＡＴＴＡＣＡＡＡ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ２
ＢＲＭＳ０５０ ＡＡＣＴＴＴＧＣＴＴＣＣＡＣＴＧＡＴＴＴＴＴ　 ＴＴＧＣＴＴＡＡＣＧＣＴＡＡＡＴＣＣＡＴＡＴ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ２
ＢＲＭＳ０５１ ＧＧＣＣＡＡＧＣＣＡＣＴＡＣＴＧＣＴＣＡＧＡ　 ＧＣＧＧＡＧＡＧＴＧＡＧＧＧＡＧＴＴＡＴＧＧ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ２
ＢＲＭＳ０５６ ＧＡＴＣＡＡＧＧＣＴＡＣＧＧＡＧＡＧＡＧＡＧ　 ＣＧＴＧＡＣＧＣＴＡＧＡＧＴＡＡＴＣＧＡＧＴ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ２
ＢＲＭＳ０８８ ＴＡＴＣＧＧＴＡＣＴＧＡＴＴＣＧＣＴＣＴＴＣＡＡＣ　 ＡＴＣＧＧＴＴＧＴＴＡＴＴＴＧＡＧＡＧＣＡＧＡＴＴ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ３
ＣＢ１０３３０ ＡＧＧＣＧＡＧＴＴＴＡＣＧＡＧＧＡＴ　 ＡＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＴＣＡＴＴＴＧ　 Ｂ．ｎａｐｕｓ　Ｌ． １
ＣＢ１０４１３ ＣＴＴＡＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＣＧＧ　 ＧＧＴＧＡＴＧＡＡＧＡＴＧＡＣＧＡＴＧ　 Ｂ．ｎａｐｕｓ　Ｌ． １
ＣＢ１０５７８ ＴＧＴＣＣＡＣＴＣＡＣＴＣＴＣＴＴＴＧＴＴ　 ＡＧＧＣＴＡＡＧＴＴＧＡＡＧＴＧＣＡＡＧ　 Ｂ．ｎａｐｕｓ　Ｌ． １
ＥＮＡ２ ＧＡＴＧＧＴＧＡＴＧＧＴＧＡＴＡＧＧＴＣ　 ＧＡＡＧＡＧＡＡＧＧＡＧＴＣＡＧＡＧＡＴＧ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ４
ＥＮＡ２３ ＧＣＴＧＴＧＣＣＡＧＴＴＣＣＴＣＴＴＴＣ　 ＴＣＡＴＴＣＣＡＡＡＴＧＧＣＣＴＴＡＣＣ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ４
ＥＮＡ９ ＣＣＴＧＡＧＡＣＣＡＡＣＣＴＡＣＴＣＣＴ　 ＡＴＣＴＴＣＡＡＣＡＣＧＣＡＴＡＣＣＡ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ４
ＫＢＲＨ１３９Ｂ２３ ＡＴＣＴＣＡＴＧＧＴＴＧＧＴＴＣＡＣＣＧ　 ＡＴＴＴＣＣＡＡＡＡＣＡＣＡＣＡＣＧＣＡ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ４
ＫＢＲＨ１４３Ｄ２２ ＧＡＴＧＴＧＡＴＡＣＴＴＴＧＧＣＧＡＣＧＧ　 ＴＧＡＡＧＧＡＴＡＡＴＡＴＧＧＴＣＴＴＧＧＣＣ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ４
ＫＢＲＨ１４３Ｈ１５ ＴＣＴＧＣＡＴＣＡＡＡＡＴＧＣＴＡＡＡＡＴＧＡ　 ＴＧＡＴＣＴＴＴＴＡＧＡＡＡＣＡＡＡＧＡＴＣＧＡＧ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ４
ＭＲ０１４ ＧＧＧＴＴＴＣＴＣＣＴＴＣＴＣＧＴＴＧＴＴ　 ＴＧＡＣＧＧＴＴＧＡＧＴＧＧＴＴＧＴＧＴ　 Ｂ．ｎａｐｕｓ　Ｌ． １
Ｎａ１０Ｆ０６ ＣＴＣＴＴＣＧＧＴＴＣＧＡＴＣＣＴＣＧ　 ＴＴＴＴＴＡＡＣＡＧＧＡＡＣＧＧＴＧＧＣ　 Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ　Ｌ． ５
Ｎａ１０Ｇ０８ ＡＴＴＣＣＡＴＧＧＡＣＴＧＡＴＣＣＴＣＧ　 ＡＧＡＧＧＴＴＡＴＴＧＣＡＧＴＴＧＣＣＧ　 Ｂ．ｎａｐｕｓ　Ｌ． ６
Ｎａ１２Ｃ０６ ＡＡＣＧＧＡＴＧＡＡＧＡＡＣＡＣＡＴＴＧＣ　 ＴＡＧＧＧＣＣＴＧＴＴＡＴＴＣＧＡＴＧＧ　 Ｂ．ｎａｐｕｓ　Ｌ． ６
Ｎａ１２Ｄ０４ ＡＣＧＧＡＧＴＧＡＴＧＡＴＧＧＧＴＣＴＣ　 ＣＣＴＣＡＡＴＧＡＡＡＣＴＧＡＡＡＴＡＴＧＴＧＴＧ　 Ｂ．ｎａｐｕｓ　Ｌ． ６
Ｎａ１４Ｅ０２ ＡＣＴＧＧＣＴＡＣＡＴＧＡＧＴＴＴＣＡＧＴＧ　 ＧＡＧＧＧＡＡＧＡＣＡＡＣＴＧＧＴＣＴＣＡ　 Ｂ．ｎａｐｕｓ　Ｌ． ６
Ｎｉ４Ｄ０９ ＡＡＡＧＧＡＣＡＡＡＧＡＧＧＡＡＧＧＧＣ　 ＴＴＧＡＡＡＴＣＡＡＡＴＧＡＧＡＧＴＧＡＣＧ　 Ｂ．ｎａｐｕｓ　Ｌ． ６
ＯＬ１０Ａ０２ ＡＴＧＡＡＡＡＣＣＡＡＴＣＣＡＧＴＧＣＣ　 ＧＡＴＡＧＣＡＧＡＴＧＧＡＡＧＡＧＣＣＧ　 Ｂ．ｎａｐｕｓ　Ｌ． ６
ＯＬ１０Ｃ０１ ＡＴＧＡＣＴＧＣＴＴＡＡＡＣＡＧＣＧＣＣ　 ＣＴＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＡＧＣＴＣＧＧ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ６
ＯＬ１０Ｄ０８ ＴＣＣＧＡＡＣＡＣＴＣＴＡＡＧＴＴＡＧＣＴＣＣ　 ＧＡＧＣＴＧＴＡＴＧＴＣＴＣＣＣＧＴＧＣ　 Ｂ．ｎａｐｕｓ　Ｌ． ６
Ｒａ１Ｆ０３ ＡＡＣＴＣＧＣＴＴＴＴＡＣＣＧＴＣＧＴＣ　 ＣＡＡＧＡＣＧＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＧＴＧ　 Ｂ．ｎａｐｕｓ　Ｌ． ６
Ｒａ１Ｆ０６ ＡＣＣＡＡＡＡＴＧＴＧＴＧＡＡＧＣＣＡＣ　 ＣＴＴＧＴＧＧＣＣＡＧＡＴＴＣＡＴＣＡＣ　 Ｂ．ｎａｐｕｓ　Ｌ． ６
Ｒａ１Ｆ０９ ＡＡＡＡＣＧＧＡＴＡＡＡＣＧＴＣＡＣＣＧ　 ＧＡＡＣＡＧＴＣＴＴＡＣＡＣＣＣＧＡＴＴＴＡＧ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ６
Ｒａ１Ｈ１１ ＣＧＣＴＡＡＴＧＴＧＴＧＧＴＧＧＡＴＴＧ　 ＡＣＣＧＧＡＧＣＧＧＴＴＴＡＣＡＴＡＡＣ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ６
Ｒａ２Ａ１０ ＣＣＡＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧ　 ＴＴＴＡＡＣＡＧＡＴＡＧＣＧＣＡＧＴＧＧＴＣ　 Ｂ．ｎａｐｕｓ　Ｌ． ６
Ｒａ２Ｂ０１ ＴＧＴＴＧＴＡＧＣＣＴＡＡＣＣＣＧＧＡＧ　 ＴＴＡＴＧＡＣＧＴＡＡＴＡＴＴＡＴＡＴＧＴＡＡＣＴＴＧ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ６
Ｒａ２Ｂ０５ ＡＧＧＣＧＣＧＴＴＴＡＴＡＣＡＴＣＧＧ　 ＧＡＡＧＧＣＡＴＴＴＣＴＴＴＴＣＣＡＣＧ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ６
Ｒａ２Ｅ０３ ＡＧＧＴＡＧＧＣＣＣＡＴＣＴＣＴＣＴＣＣ　 ＣＣＡＡＡＡＣＴＴＧＣＴＣＡＡＡＡＣＣＣ　 Ｂ．ｎａｐｕｓ　Ｌ． ６
Ｒａ２Ｅ１２ ＴＧＴＣＡＧＴＧＴＧＴＣＣＡＣＴＴＣＧＣ　 ＡＡＧＡＧＡＡＡＣＣＣＡＡＴＡＡＡＧＴＡＧＡＡＣＣ　 Ｂ．ｎａｐｕｓ　Ｌ． ６
Ｒａ３Ｄ０２Ｂ ＣＡＣＡＧＧＡＡＡＣＣＧＴＧＧＣＴＡＧＡ　 ＡＡＣＣＣＡＡＣＣＴＣＡＡＣＧＴＣＴＴＧ　 Ｂ．ｎａｐｕｓ　Ｌ． ６
Ｒａ３Ｄ０４ ＡＡＡＡＧＧＡＣＣＴＡＣＣＡＡＴＴＴＣＧＴＧ　 ＣＧＡＣＣＣＡＡＡＣＴＧＡＧＣＣＡＴＡＣ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ６
Ｒａ３Ｅ０５ ＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＡＡＣＣＡＣＡＧ　 ＧＴＴＴＣＴＴＣＣＡＡＧＣＣＡＡＧＣＴＧ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ６
Ｒａ３Ｈ１０ ＴＡＡＴＣＧＣＧＡＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣ　 ＡＴＣＡＧＡＡＣＡＧＣＧＡＣＧＡＧＧＴＣ　 Ｂ．ｒａｐａＬ． ６
　　注：文献为提供ＳＳＲ引物信息的参考文献或网站。１．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｒａｓｓｉｃａ．ｉｎｆｏ／ｒｅｓｏｕｒｃｅ／ｍａｒｋｅｒｓ；２．ＳＵＷＡＢＥ等［１３］；３．ＳＵＷＡＢＥ等［１４］；４．ＣＨＯＩ等［１８］；５．ＬＯＷＥ等［１５］；６．
ＬＯＷＥ等［１６］。
Ｎｏｔｅ：Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ　ｔｈｅ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｗｅｂ　ｓｉｔｅ　ｐｒｏｖｉｄｅｄ　ｔｈｅ　ＳＳＲ　ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ．１．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｒａｓｓｉｃａ．ｉｎｆｏ／ｒｅｓｏｕｒｃｅ／ｍａｒｋｅｒｓ；２．ＳＵＷＡＢＥ　ｅｔ　ａｌ［１３］；３．ＳＵＷＡＢＥ　ｅｔ　ａｌ［１４］；４．
ＣＨＯＩ　ｅｔ　ａｌ［１８］；５．ＬＯＷＥ　ｅｔ　ａｌ［１５］；６．ＬＯＷＥ　ｅｔ　ａｌ［１６］．
８８
北方园艺２０１６（１５）：８６～９１ ·生物技术·
２．２　筛选出的芸薹属ＳＳＲ在菜薹重组自交系中的基因
分型分析
５０对具有多态性的ＳＳＲ引物组合中，能在“四九－１９
号菜心”和“３Ｔ６”２个材料中扩增出清晰易辨的条带１１５
条，其中只有４０个引物对扩增出的７８条条带在２个材
料间具有多态性。具多态性ＳＳＲ引物组合扩增产物多
态性条带数在１～４。
运用这些具有多态性的ＳＳＲ引物组合对利用“四
九－１９号菜心”和“３Ｔ６”构建的１３０份菜薹重组自交系
群体进行基因分型，进一步检测开发出的ＳＳＲ引物组
合的扩增效果。结果表明，筛选出的４０个ＳＳＲ引物组
合扩增产物的条带清晰易辨，重复性好，在重组自交系
群体中亦扩增出７８个具有多态性的条带。所有ＳＳＲ
扩增产物的多态性与在４份菜薹材料扩增产物的多态
性一致。表明筛选出的ＳＳＲ引物适用于菜薹的分子
遗传分析。图２为利用ＳＳＲ引物组合ＢＲＭＳ０４２对４７
份重组自交系进行基因分型分析的琼脂糖凝胶电
泳图。
注：１～４７为“四九－１９号菜心”与“３Ｔ６”作亲本的重组自交系编号，Ｍ为ＤＮＡ分子量标样。
Ｎｏｔｅ：１－４７ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ　ｔｈｅ　Ｎｏ．ｏｆ　ＲＩＬｓ　ｃｒｏｓｓｅｄ　ｗｉｔｈ‘Ｓｉｊｉｕ－１９Ｃａｉｘｉｎ’ａｎｄ‘３Ｔ６’．Ｍ　ｉｎｄｉｃａｔｅｓ　ＤＮＡ　ｓｉｚｅ　Ｍａｒｋｅｒ．
图２　引物ＢＲＭＳ０４２对重组自交系扩增的凝胶电泳检测
Ｆｉｇ．２　Ｉｍａｇｅ　ｏｆ　ａｇａｒｏｓｅ　ｇｅｌ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ａｍｐｌｉｃｏｎｓ　ｏｆ　ＢＲＭＳ０４２ｉｎ　４７ＲＩＬｓ
２．３　遗传连锁图谱的构建
利用４０对ＳＳＲ引物在重组自交系中具有的７８
个多态性标记位点，运用 ＭａｐＭａｋｅｒ　２．０软件，选用
Ｋｏｓａｍｂｉ函数计算图距，构建出１张包含１０个连锁群的
菜薹遗传连锁图谱。７８个多态性标记位点中，有３２个
标记未能进入连锁群的构建。进入连锁群的４６个多态
性标记位点来自于２７个ＳＳＲ引物组合的扩增产物。所
构建的遗传连锁图谱如图３所示，这是第１张以ＳＳＲ作
为分子标记构建的菜薹遗传连锁图。
注：各个连锁图中左边数值表示标记位点间的遗传距离（ｃＭ），右边为ＳＳＲ标记位点。
Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｓｔａｎｃｅ（ｃＭ）ｌｉｓｔｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｌｅｆｔ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ＳＳＲ　ｌｏｃｉ　ｌｉｓｔｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｒｉｇｈｔ　ｉｎ　ｅａｃｈ　ｌｉｎｋａｇｅ　ｇｒｏｕｐ．
图３　基于ＳＳＲ标记构建的菜薹遗传连锁图谱
Ｆｉｇ．３　Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｌｉｎｋａｇｅ　ｍａｐ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ＳＳＲ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｉｎ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｃａｂｂａｇｅ
９８
·生物技术· 北方园艺２０１６（１５）：８６～９１
　　从表２可知，该遗传图谱总遗传距离是６４１．３９ｃＭ。
各个连锁群的标记位点数在３～９，平均４．６个；其中连
锁群ＬＧ２和ＬＧ９上的标记位点数目最少，只有３个，
ＬＧ６上位点最多，有９个。各个连锁群长度为１５．３２～
１９９．７４ｃＭ，平均标记位点密度为１２．７２ｃＭ；其中连锁群
ＬＧ３标记位点密度最小，为３．８３ｃＭ，连锁群ＬＧ６的最
大，为２２．１９ｃＭ。
表２ 构建的菜薹遗传连锁图谱中各
连锁群长度、标记数信息
　　Ｔａｂｌｅ　２ Ｔｈｅ　ｌｅｎｇｔｈ，ｍａｒｋｅｒ　ｎｕｍｂｅｒｓ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ｌｉｎｋａｇｅ
ｇｒｏｕｐ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｌｉｎｋａｇｅ　ｍａｐｓ
连锁群编号
Ｌｉｎｋａｇｅ　ｇｒｏｕｐ　Ｎｏ．
图距
Ｌｅｎｇｔｈ／ｃＭ
标记位点数目
Ｎｏ．ｏｆ　ｍａｒｋｅｒｓ
位点平均图距
Ａｖｅｒａｇｅ　ｄｉｓｔａｎｃｅ／ｃＭ
１　 ３３．５７　 ４　 ８．３９
２　 ３７．３８　 ３　 １２．４６
３　 １５．３２　 ４　 ３．８３
４　 ３０．２０　 ４　 ７．５５
５　 １００．７２　 ６　 １６．７９
６　 １９９．７４　 ９　 ２２．１９
７　 ７７．５４　 ５　 １５．５１
８　 ６０．３６　 ４　 １５．０９
９　 ４５．４０　 ３　 １５．１３
１０　 ４１．１６　 ４　 １０．２９
总计Ｔｏｔａｌ　 ６４１．３９　 ４６　 １２．７２
３　讨论
某一物种的ＳＳＲ引物能在其近缘种和亲缘关系较
远的物种中部分检测到具有多态性的扩增产物，表现出
ＳＳＲ标记具有一定的通用性［８，１０，１５，２０］。芸薹属ＳＳＲ标记
在属间或属内表现出这种特性，如ＳＩＮＧＨ等［２１］利用６６
对芸薹属的ＳＳＲ引物，分析在十字花科植物亚非芥
（Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｔｏｕｒｎｅｆｏｒｔｉ　Ｌ）、白芥（Ｓｉｎａｐｉｓ　ａｌｂａ　Ｌ．）、黑芥
（Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｎｉｇｒａ　Ｌ．）、家独行菜（Ｌｅｐｉｄｉｕｍ　ｓａｔｉｖｕｍＬ．）和
芝麻菜（Ｅｒｕｃａ　ｓａｔｉｖａ　Ｌ．）中通用性，结果表明８４．８％（５６
对）的ＳＳＲ引物可以在这些物种中扩增，其中４８．５％（３２
对）至少在一个物种的种质材料中表现出多态性；忻雅
等［２２］发现白菜的ＥＳＴ－ＳＳＲ标记完全可以应用于甘蓝型
油菜，对亲缘关系更远的玉米等４个物种的引物平均通
用性达８８．３％，表现出很高的通用性比例。但亦有研究
表明芸薹属ＳＳＲ标记的通用性比率较低，如荆赞革
等［１０］开展的甘蓝ＳＳＲ标记在近缘种青花菜的通用性研
究中表明，５０对甘蓝ＳＳＲ引物中，有３８对（７６％）引物在
青花菜上可有效扩增，但其中只有９对（１８％）在２０份种
质材料中具有较好的多态性；刘海霞等［１１］开展芸薹属
ＳＳＲ引物在甘蓝中通用性研究表明，２１对芸薹属甘蓝、
２０对白菜、２７对甘蓝型油菜和１０对黑芥共７８对ＳＳＲ
引物中，仅有１６对（２０．５１％）ＳＳＲ引物能在供试甘蓝材
料中扩增出清晰的条带，具有多态性的引物组合则只有
１１对（１４．１％），其中来自于甘蓝、白菜、甘蓝型油菜和黑
芥的引物对分别为４、５、２和０，表现出通用性较低。
该试验１３３对ＳＳＲ引物中，来源于白菜、甘蓝型油
菜和甘蓝的ＳＳＲ引物分别为７２、５５和６对，共９８对
（７３．６８％）引物能在４份菜薹材料中扩增出清晰条带，其
中来自于白菜、甘蓝型油菜和甘蓝的分别为６２、３４和２
对；仅有５０对（３７．５９％）引物在４份菜薹材料中的扩增
产物具有多态性，其中来自于白菜３１对、甘蓝型油菜１８
对和甘蓝１对。该结果表明白菜、甘蓝型油菜和甘蓝的
ＳＳＲ引物在菜薹中是可通用的，与前人的研究结果一
致；但通用性比例低于ＳＩＮＧＨ等［２１］和忻雅等［２２］所得的
结果，高于刘海霞等［１１］和荆赞革等［１０］的通用性比例。
另外，菜薹属于ＡＡ基因组类型，从具多态性的５０对
ＳＳＲ引物来源来看，来自于具有ＡＡ基因组白菜的ＳＳＲ
引物对通用性比例最高，达４３．０６％，具有ＡＡＣＣ基因组
甘蓝型油菜次之，为３２．７３％，具有ＣＣ基因组的甘蓝最
低，仅为１６．６７％，该结果表明芸薹属ＳＳＲ引物在菜薹中
的通用性比例与引物来源有关，即基因组的特性有关［１１］。
遗传连锁图谱是开展作物性状的遗传分析、基因定
位及分子育种的重要基础，一些芸薹属植物如油菜和白
菜等均已建立了高密度的遗传连锁图谱，确定基因及开
发与性状相关的分子标记用于辅助育种工作［２３－２４］，但由
于菜薹在此领域开展的研究较少，且缺少适宜的分子标
记，因此直到目前为止尚鲜见利用分子标记特别是ＳＳＲ
标记建立菜薹遗传连锁图谱的报道。该研究利用在“四
九－１９号菜心”和“３Ｔ６”具有多态性的芸薹属ＳＳＲ标记，
对以此２个材料为亲本的重组自交系进行基因分型，构
建的一张包含具有１０个连锁群的菜薹遗传连锁图谱。
该图谱含有４６个ＳＳＲ标记位点，总长度为６４１．３９ｃＭ，
图谱中标记位点平均距离为１２．７２ｃＭ。尽管该图谱的
总长度和标记位点数远小于已报道的芸薹属作物大白菜
连锁遗传图谱如于仁波等［１９］的１　０８６．７ｃＭ和４９７个标
记、甘蓝型油菜的遗传连锁图谱如李媛媛等［２５］的
１　９４９．８ｃＭ和３９８个标记，但该图谱是菜薹的首张遗传
连锁图谱，同时该连锁图谱的构建也是芸薹属ＳＳＲ标记
在菜薹中通用性应用的例证。
现通过芸薹属ＳＳＲ标记在菜薹中的通用性研究，发
现了一批适用于菜薹的ＳＳＲ标记，并成功应用于菜薹重
组自交系基因分型和遗传连锁图谱的构建，研究结果将
为今后菜薹的遗传多样性、种质资源的评价与保存、基
因定位以及分子标记辅助育种等提供重要的参考。
参考文献
［１］　许兰桂，夏岩石，李荣华，等．菜薹分子标记利用的研究进展［Ｊ］．园艺
学报，２０１２，３９（９）：１７３９－１７４８．
［２］　郭培国，许兰桂，何嘉仪，等．菜心种质材料的分子身份证构建研究
［Ｊ］．广东农业科学，２０１４，４１（２３）：１１６－１２２．
［３］　郭培国，许兰桂，夏岩石，等．菜薹种质遗传多样性的荧光 ＭＦＬＰ标
记分析［Ｊ］．园艺学报，２０１５，４２（２）：３５０－３６０．
［４］　ＰＯＷＥＬＬ　Ｗ，ＭＡＣＨＲＡＹ　Ｇ　Ｃ，ＰＲＯＶＡＮ　Ｊ．Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ　ｒｅｖｅａｌｅｄ
０９
北方园艺２０１６（１５）：８６～９１ ·生物技术·
ｂｙ　ｓｉｍｐｌｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｒｅｐｅａｔｓ［Ｊ］．Ｔｒｅｎｄｓ　ｉｎ　Ｐｌａｎｔ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９６，１（７）：２１５－２２２．
［５］　ＭＣＧＲＥＧＯＲ　Ｃ　Ｅ，ＬＡＭＢＥＲＴ　Ｃ　Ａ，ＧＲＥＹＬＩＮＧ　Ｍ　Ｍ，ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｃｏｍ－
ｐａｒａｔｉｖｅ　ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　ｏｆ　ＤＮＡ　ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（ＲＡＰＤ，ＩＳＳＲ，ＡＦＬＰ
ａｎｄ　ＳＳＲ）ｉｎ　ｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ　ｐｏｔａｔｏ（Ｓｏｌａｎｕｍ　ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ Ｌ．）ｇｅｒｍｐｌａｓｍ［Ｊ］．Ｅｕ－
ｐｈｙｔｉｃａ，２０００，１１３（２）：１３５－１４４．
［６］　罗丹，吴委林，周波，等．芜菁ＳＳＲ引物的开发及多态性分析［Ｊ］．生
物技术通讯，２０１２，２３（３）：４０２－４０６．
［７］　王炜勇，俞少华，张飞，等．近缘属ＳＳＲ标记引物在光萼荷属植物中
的通用性［Ｊ］．分子植物育种，２０１３，１１（４）：５８３－５８７．
［８］　ＣＡＲＶＡＬＨＯ　Ｓ　Ｉ，ＲＡＧＡＳＳＩ　Ｃ　Ｆ，ＯＬＩＶＥＩＲＡ　Ｉ　Ｂ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｒａｎｓｆｅｒａｂｉｌｉｔｙ
ｏｆ　ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｉｔｅ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｏｆ　Ｃａｐｓｉｃｕｍ　ａｎｎｕｕｍＬ．ｔｏ　Ｃ．ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ　Ｌ．ａｎｄ　Ｃ．
ｃｈｉｎｅｎｓｅ　Ｊａｃｑ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１５，１４（３）：７９３７－７９４６．
［９］　龚亚明，徐盛春，毛伟华，等．豌豆ＥＳＴ－ＳＳＲ标记在蚕豆中的通用性
与应用［Ｊ］．浙江大学学报（农业与生命科学版），２０１１，３７（５）：４７９－４８４．
［１０］荆赞革，唐征，罗天宽，等．甘蓝ＳＳＲ标记在近缘种青花菜的通用性
及其应用［Ｊ］．基因组学与应用生物学，２０１０，２９（４）：６８５－６９０．
［１１］刘海霞，颉建明，康俊根．芸薹属ＳＳＲ引物在甘蓝分子育种中通用性
的研究［Ｊ］．北方园艺，２０１０（３）：１１５－１１８．
［１２］李荣华，夏岩石，刘顺枝，等．改进的ＣＴＡＢ提取植物ＤＮＡ方法［Ｊ］．
实验室研究与探索，２００９，２８（９）：１４－１６．
［１３］ＳＵＷＡＢＥ　Ｋ，ＩＫＥＴＡＮＩ　Ｈ，ＮＵＮＯＭＥ　Ｔ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒ－
ｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｉｔｅｓ　ｉｎ　Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｒａｐａＬ．［Ｊ］．Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｇｅｎｅｔ－
ｉｃｓ，２００２，１０４（６－７）：１０９２－１０９８．
［１４］ＳＵＷＡＢＥ　Ｋ，ＴＳＵＫＡＺＡＫＩ　Ｈ，ＩＫＥＴＡＮＩ　Ｈ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｗｏ
ｌｏｃｉ　ｆｏｒ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｔｏ　ｃｌｕｂｒｏｏｔ（Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ　ｂｒａｓｓｉｃａｅ　Ｗｏｒｏｎｉｎ）ｉｎ
Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｒａｐａＬ．［Ｊ］．Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００３，１０７（６）：９９７－
１００２．　
［１５］ＬＯＷＥ　Ａ　Ｊ，ＪＯＮＥＳ　Ａ　Ｅ，ＲＡＹＢＯＵＬＤ　Ａ　Ｆ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｒａｎｓｆｅｒａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ
ｇｅｎｏｍｅ　ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ａ　ｎｅｗ　ｓｅｔ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｉｔｅ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ａｍｏｎｇ　Ｂｒａｓｓｉｃａ
ｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｕ　ｔｒｉａｎｇｌｅ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｅｃｏｌｏｇｙ　Ｎｏｔｅｓ，２００２，２（２）：７－１１．
［１６］ＬＯＷＥ　Ａ　Ｊ，ＭＯＵＬＥ　Ｃ，ＴＲＩＣＫ　Ｍ，ｅｔ　ａｌ．Ｅｆｉｃｉｅｎｔ　ｌａｒｇｅ－ｓｃａｌｅ　ｄｅｖｅｌｏｐ－
ｍｅｎｔ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｉｔｅｓ　ｆｏｒ　ｍａｒｋｅｒ　ａｎｄ　ｍａｐｐｉｎｇ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　Ｂｒａｓｓｉｃａｃｒｏｐ
ｓｐｅｃｉｅｓ［Ｊ］．Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００４，１０８（６）：１１０３－１１１２．
［１７］ＰＩＱＵＥＭＡＬ　Ｊ，ＣＩＮＱＵＩＮ　Ｅ，ＣＯＵＴＯＮ　Ｆ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎ　ｏｉｌ－
ｓｅｅｄ　ｒａｐｅ（Ｂｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓ　Ｌ．）ｇｅｎｅｔｉｃ　ｍａｐ　ｗｉｔｈ　ＳＳＲ　ｍａｒｋｅｒｓ［Ｊ］．Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ
ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００５，１１１（８）：１５１４－１５２３．
［１８］ＣＨＯＩ　Ｓ　Ｒ，ＴＥＡＫＬＥ　Ｇ　Ｒ，ＰＲＩＫＳＨＩＴ　Ｐ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ
ｌｉｎｋａｇｅ　ｍａｐ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｍｕｌｔｉｎａｔｉｏｎａｌ　Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｒａｐａｇｅｎｏｍｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｐｒｏｊｅｃｔ
［Ｊ］．Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００７，１１５（６）：７７７－７９２．
［１９］于仁波，于拴仓，戚佳妮，等．大白菜ＳＳＲ锚定标记分子遗传图谱构
建［Ｊ］．园艺学报，２００８，３５（１０）：１４４７－１４５４．
［２０］ＳＵＷＡＢＥ　Ｋ，ＩＫＥＴＡＮＩ　Ｈ，ＮＵＮＯＭＥ　Ｔ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ
ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｉｔｅｓ　ｉｎ　Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｒａｐａｇｅｎｏｍｅ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｆｏｒ
ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　ｇｅｎｏｍｉｃｓ　ｉｎ　Ｃｒｕｃｉｆｅｒａｅ［Ｊ］．Ｂｒｅｅｄｉｎｇ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００４，５４（２）：８５－９０．
［２１］ＳＩＮＧＨ　Ｂ　Ｋ，ＴＨＡＫＵＲ　Ａ　Ｋ，ＴＩＷＡＲＩ　Ｓ　Ｋ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｒａｎｓｆｅｒａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ
Ｂｒａｓｓｉｃａ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｉｔｅｓ　ｔｏ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｇｅｎｅｒａ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ
ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ａｃａｄｅｍｙ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，２０１２，３５（１）：３７－
４４．　
［２２］忻雅，崔海瑞，张明龙，等．白菜ＥＳＴ－ＳＳＲ标记的通用性［Ｊ］．细胞生
物学杂志，２００６（２８）：２４８－２５２．
［２３］王嘉，荆凌云，荐红举，等．甘蓝型油菜株高、第一分枝高和分枝数的
ＱＴＬ检测及候选基因筛选［Ｊ］．作物学报，２０１５，４１（７）：１０２７－１０３８．
［２４］高会超，曾强，张志刚，等．与大白菜ＴｕＭＶ 抗病基因ＴｕＲＢＣＳ０１紧
密连锁的分子标记开发［Ｊ］．农业生物技术学报，２０１６，２４（２）：１９６－２０５．
［２５］李媛媛，沈金雄，王同华，等．利用ＳＲＡＰ、ＳＳＲ和ＡＦＬＰ标记构建甘
蓝型油菜遗传连锁图谱［Ｊ］．中国农业科学，２００７，４０（６）：１１１８－１１２６．
Ｔｒａｎｓｆｅｒａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＢｒａｓｓｉｃａＳＳＲ
Ｍａｒｋｅｒｓ　ｉｎ　Ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｃａｂｂａｇｅ
ＣＨＥＮ　Ｊｉｎｇｆａｎｇ１，ＬＩ　Ｒｏｎｇｈｕａ１，ＷＡＮＧ　Ｚｈｉｌｉａｎｇ１，ＸＩＡ　Ｙａｎｓｈｉ　１，ＧＵＯ　Ｐｅｉｇｕｏ１，Ｋａｄａｍｂｏｔ　ＳＩＤＤＩＱＵＥ２
（１．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｒｏｐ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｓｔｒｅｓｓ　Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ／Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　５１０００６；
２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ａｕｓｔｒａｌｉａ，ＷＡ　６００９，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｄｅｖｅｌｏｐ　ＳＳＲ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｃａｂｂａｇｅ，ｆｏｕｒ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｃａｂｂａｇｅ
ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｉｎ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ　ｗｅｒｅ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｅｆｅｃｔｓ　ｏｆ　１３３　ＢｒａｓｓｉｃａＳＳＲ　ｐｒｉｍｅｒｓ．
Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　５０ｏｆ　１３３　Ｂｒａｓｓｉｃａ　ＳＳＲ　ｐｒｉｍｅｒ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ　ｔｏ　ｈａｖｅ　ｔｈｅ　ｐｒｏｐｅｒｔｙ　ｏｆ
ｔｒａｎｓｆｅｒａｂｉｌｉｔｙ　ｉｎ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｃａｂｂａｇｅ．Ｔｈｅ　ａｍｐｌｉｃｏｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅｓｅ　ＳＳＲ　ｍａｉｎｌｙ　ｒａｎｇｅｄ　ｆｒｏｍ　１００ｔｏ　３５０ｂｐ．９１
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ｌｏｃｉ　ａｍｏｎｇ　４ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　１ｔｏ　４ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ｌｏｃｕｓ／ｌｏｃｉ　ｐｅｒ　ＳＳＲ　ｐｒｉｍｅｒ　ｐａｉｒ．Ｔｈｅ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　１３０ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｉｎｂｒｅｄ　ｌｉｎｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｃｒｏｓｓ　ｏｆ‘Ｓｈｉｊｉｕ－１９Ｃａｉｘｉｎ’ａｎｄ‘３Ｔ６’ｗａｓ　ｇｅｎｏｔｙｐｅｄ　ｂｙ
ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ＳＳＲ　ｐｒｉｍｅｒ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ　ｗｈｉｃｈ　ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ｌｏｃｉ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｐａｒｅｎｔｓ，ａｎｄ　ａ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｌｉｎｋａｇｅ　ｍａｐ
ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　１０ｌｉｎｋａｇｅ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｗｉｔｈ　ａ　ｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　６４１．３９ｃＭ．Ｔｈｅｓｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ
ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ａｎａｌｙｓｉｓ，ＱＴＬ　ｍａｐｐｉｎｇ　ａｎｄ　ｍａｒｋｅｒ－ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｂｒｅｅｄｉｎｇ　ｐｒｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｃａｂｂａｇｅ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｂｒａｓｓｉｃａ；ＳＳＲ；ｔｒａｎｓｆｅｒａｂｉｌｉｔｙ；ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｃａｂｂａｇｅ；ｇｅｎｅｔｉｃ　ｌｉｎｋａｇｅ　ｇｒｏｕｐ
１９