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RP-HPLC法比较青海不同产地红景天属药材中成分组成的差异性



全 文 :RP-HPLC法比较青海不同产地红景天属药材
中成分组成的差异性
陈海娟*,王慧春,张国燕,李园媛
(青海师范大学 生命与地理科学学院/青藏高原环境与资源教育部 重点实验室,青海 西宁810008)
摘 要:目的:通过研究青海不同产地、不同种的红景天原植物药材中红景天苷和没食子酸的组成成分
差异,为全面评价青海红景天属药材质量提供依据。方法:通过反向高效液相色谱法对青海不同产地或
不同种的14个红景天样品中红景天苷和没食子酸进行了定量分析,并计算分析各成分间的结构比。结
果:不同品种、不同来源的红景天原植物药材中,红景天苷和没食子酸的含量及其组成成分的结构比有
较大差异。结论:由于产地、品种的不同,红景天属原植物药材中成分的组成和结构比存在差异性;成分
间的结构比的差异性可能是红景天药材药效差异的根本原因,红景天属药材的质量应该从成分量和结
构比两方面进行严格控制。
关键词:红景天;红景天苷;没食子酸;反相高效液相色谱法
中图分类号:R284.1   文献标识码:A   文章编号:1673-2197(2012)08-0031-03
收稿日期:2012-05-16
作者简介:陈海娟(1979-),女,硕士,青海师范大学讲师,研究方向为药用植物资源的开发与利用。
Determination of Two Active Ingredients in Qinghai Variety of Medicinal Rhodiola by RP-HPLC
Chen Haijuan,Wang Huichun,Zhang Guoyan,Li Yuanyuan
(School of Life and Geographical Science in Qinghai Normal University,Key Laboratory of Education
Department of Environment and Resources on Qinghai-Tibetan Plateau,Xining 810008,China)
Abstract:Objective:To provide the foundation for reasonable utilization by analysing salidroside and galic acid from five different
kinds of Radix Rhodiola in different areas of Qinghai.Methods:The contents of salidroside and galic acid from five different kinds
of Radix Rhodiola in different areas of Qinghai was determined by RP-HPLC,and proportions between the constituent structure was
analyzed.Results:There were significant differences in salidroside and galic acid content and the proportions between the constitu-
ent structure from different species.Conclusion:The difference of proportions between the constituent structure indicates the differ-
ence of pharmacodynamic action.
Key Words:Radix Rhodiola;Salidroside;Galic Acid;RP-HPLC
  红景天是我国传统藏药,为景天科(Crassulaceae)红景
天属(Rhodiola)多种植物的干燥的根及根茎,具有抗疲劳,
耐缺氧,调节免疫,增强体力等特殊功效[1]。《中国药典》
2010版收载的红景天为大花红景天,其含量测定采用高效
液相色谱法以红景天苷为指标成分[2]。
全世界的红景天属植物有90多种,而我国有73种。中
国是红景天属植物的分布中心,而青海又是中国红景天的
主产区之一,其蕴藏量仅次于西藏、云南和四川。红景天属
植物涉及种类繁多,现有研究也表明它们在所含化学成分
及其在生物活性方面都表现有一定的异同。即使它们在临
床功效上表现出一些相似性,但将其作为同一药物名称下
的基源混用,也不利于保证用药准确和切实控制药材质量,
这也是目前红景天尚无统一的质量标准的重要原因。目前
国内对红景天属植物的有效成分定量分析方法研究较多,
但其研究仅限于少数几种,而且大多采用商品红景天药材
为研究对象,研究证明,红景天苷是红景天中抗疲劳抗缺氧
有效成分之一,而酚类成分为红景天中发挥药理作用的主
要活性成分。文献报道[3]没食子酸及其烷酯对血小板聚集
有对抗作用,对心脑血管梗塞、短暂性局部脑缺血、过敏及
哮喘等有治疗作用。本研究分析测定了不同产地,不同来
源的青海红景天属药材14批,以红景天苷和没食子酸为指
标,通过其组成成分的定量分析和结构比的研究,为进一步
—13—
合理开发利用青海红景天属药用植物资源提供依据。
1 仪器与试药
HITACHIL7100高效液相色谱仪,HITACHIL7420紫
外检测器 ,FL9500色谱工作站。试剂:甲醇(HPLC级);
红景天苷和没食子酸对照品(中国药品生物制品检定所,批
号111637-200701)。红景天属原植物药材均采自青海海
拔3000m以上的地方,经沈阳药科大学孙启时教授鉴定。
2 实验方法
2.1 色谱条件
色谱柱:Diamonsil C18(5μm,4.6mm×250mm);流动相:
甲醇-水-磷酸(体积比19∶81∶0.05),检测波长273nm;柱
温:25℃;流速:1.0mL·min-1。此条件下,红景天苷和没食
子酸与其它组分均能达到基线分离,红景天中其它成分对红
景天苷和没食子酸含量测定无干扰。结果见图1。
2.2 对照品溶液的制备
分别精密称取没食子酸、红景天苷对照品适量,用甲醇
溶解并稀释制成浓度为没食子酸0.5mg·mL-1、红景天苷
1mg·mL-1的对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取干燥的红景天粉末约1.0g,精密称定,精密加入甲醇
10mL,称定重量,超声振荡提取30min,放冷至室温,再称
定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,经0.45μm微孔滤膜
过滤,弃去初滤液,取续滤液作为供试品溶液。
图1 红景天苷和没食子酸色谱
2.4 线性关系考察
精密吸取没食子酸对照品溶液0.5,1,2,4,8mL,置
10mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀。取各对照品溶
液20μL,注入高效液相色谱仪,记录色谱图峰面积。分别以
没食子酸进样量(μg)为横坐标,相应的峰面积积峰值为纵
坐标,绘制标准曲线,得回归方程:Y=5.84×106X-2.66
×106(r=0.9994)。表明没食子酸在0.5~8μg/mL范围内
峰面积与对照品的质量成良好线性关系。
精密吸取红景天苷对照品溶液0.3、0.6、1.2、2.4、
5mL,置10mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀。取各对
照品溶液20μL,注入高效液相色谱仪,记录色谱图峰面积。
以红景天苷进样量(μg)为横坐标,相应的峰面积积峰值为
纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程:Y=5.09×105X-
1.28×104(r=0.9995),表明红景天苷在0.6~10μg/mL范
围内峰面积与对照品的质量成良好线性关系。
2.5 精密度试验
精密吸取没食子酸、红景天苷对照品溶液各20μL,在
上述色谱条件下重复进样5次,记录色谱峰峰面积。结果
没食子酸RSD为1.2%,红景天苷RSD为1.8%。
2.6 重现性试验
取红景天4号样品5份,分别精密称定,按“2.3”项下方
法制备供试品溶液,分别进样20μL,记录色谱峰峰面积。结
果没食子酸的RSD为2.0%,红景天苷的RSD为1.7%。
2.7 稳定性试验
取同一供试品溶液,分别于0、2、4、8、12和24h在上述
色谱条件下进样分析,结果表明供试品溶液在室温下24h
内稳定性良好。结果没食子酸的RSD为1.6%,红景天苷
的RSD为1.3%。
2.8 加样回收率试验
精密称取已知含量的红景天4号样品(果洛州大武滩
四裂红景天)5份,分别精密加入一定量的没食子酸对照品
(0.5mg·mL-1)、红景天苷对照品(1mg·mL-1),按“2.3”项
下方法制备供试品溶液,按“2.1”色谱条件测定进行测定,
分别进样20μL,记录色谱峰峰面积,计算回收率。结果见表
1、表2。
表1 红景天苷加样回收率考察试验结果 (n=5)
Sample
(g)
Content
(mg)
Added
(mg)
Found
(mg)
Recovery
(%)
Average
recovery
(%)
RSD
(%)
1.0007  3.92  2.0  5.840  96.0
0.9331  3.65  2.0  5.602  97.6
1.0224  4.00  2.0  5.984  99.2  97.3  2.0
0.9855  3.86  2.0  5.786  96.3
0.9992  3.91  2.0  5.826  95.8
2.9 样品含量测定
取红景天药材,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,分
别进样20μL,记录色谱峰峰面积。以外标法计算样品中没
食子酸和红景天苷的含量。结果见表3。
—23—
3 讨论
本实验中测定的红景天苷最大吸收波长为223nm和
273nm,没食子酸最大吸收波长为220nm和273nm。由于
223nm和220nm 接近末端吸收,杂质干扰多,所以选择
273nm为测定波长。在流动相的筛选中,曾用甲醇-水(15∶
85)[2],甲醇-水(19∶81),乙腈-水(9∶91)为流动相,分离效
果均不理想,没食子酸出峰时间早,很容易与溶剂峰重叠。
考虑到红景天苷和没食子酸均为酚类化合物,具有一定酸
性,故在流动相中加入一定量的酸以抑制酚羟基离子化,结
果表明分离效果明显提高。在酸的种类的选择上,比较了
冰醋酸、甲酸和磷酸溶液,发现磷酸的分离效果最好。故选
择流动相甲醇∶0.05%磷酸水(19∶81)。
表2 没食子酸加样回收率考察试验结果 (n=5)
Sample
(g)
Content
(mg)
Added
(mg)
Found
(mg)
Recovery
(%)
Average
recovery
(%)
RSD
(%)
0.9151  1.59  1.5  3.054  97.6
0.9277  1.61  1.5  3.042  95.5
0.9238  1.61  1.5  3.128  101.2  98.7  2.3
0.9851  1.71  1.5  3.189  98.6
0.9790  1.70  1.5  3.206  100.4
表3 青海不同产地不同种红景天中没食子酸和红景天苷含量测定结果 (mg·g-1)
No. 样品 来源 没食子酸(mg·g-1) 红景天苷(mg·g-1) 结构比
1 唐古特红景天 吉冈山 3.76  4.51  1∶1.20
2 唐古特红景天 石峡沟 1.65  2.52  1∶1.53
3 唐古特红景天 兴海 0.73  0.75  1∶1
4 四裂红景天 大武滩 1.74  3.92  1∶2.25
5 小丛红景天 大坂山 3.05  1.72  1.77∶1
6 对叶红景天 互助北山 0.61  1.09  1∶1.77
7 狭叶红景天 达日 0.60  1.29  1∶2
8 狭叶红景天 倒淌河 1.92  0.62  3∶1
9 狭叶红景天 贵德 1.77  3.02  1∶1.71
10 狭叶红景天 大通 2.22  4.53  1∶2.04
11 狭叶红景天 兴海 0.58  1.35  1∶2.33
12 狭叶红景天 互助北山 0.65  4.42  1∶6.80
13 大花红景天商品药材 青海西宁九康医药 3.58  1.73  1∶2.07
14 大花红景天商品药材 青海西宁富康医药 3.43  4.92  1∶1.43
  本研究收集的红景天原植物药材均采自海拔3 000m
以上的地方,从收集的红景天样品来看,不同种的红景天原
植物药材,从其药用部位根和根茎上很难区分,除狭叶红景
天呈疙瘩块状外,其余的均为长圆柱状,需结合原植物才能
有效地鉴别。但市售的商品药材大多为根和根茎,很难鉴
别,笔者认为红景天属原植物药材才能科学真实地反应红
景天药材的质量。
本研究采用高效液相色谱法,以红景天苷和没食子酸
为含量测定指标,用甲醇∶0.05%磷酸水(19∶81)作为流
动相,对青海不同产地不同种的红景天中的没食子酸和红
景天苷进行了定量分析。实验结果表明,青海不同产地不
同种的红景天之间没食子酸和红景天苷的含量和结构比存
在显著差异,造成这种差异的原因除了种与种之间自身的
不同外,可能与其生长环境的不同有关。结合不同种红景
天药材的药效分析[4],单纯的某一类或某几类成分的量较
高,并不一定具有更好的疗效,即量的高低与疗效强弱并无
明确的相关性,而成分间的结构比与药效具有密切相关性,
这表明组分结构比的差异可能是造成红景天药材药效差异
的根本原因。
参考文献:
[1] 曲志威.红景天的研究进展[J].中华实用中西医杂志,2005,
18(7):1063-1065.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京:化学工业
出版社,2010:235.
[3] 李肖玲,崔岚,祝德秋.没食子酸生物学作用的研究进展[J].
中国药学,2004,7(10):667-669.
[4] 陈海娟,周晓棉,贾凌云,等.青海产两种不同红景天药材的
药理作用比较研究[J].时珍国医国药,2010,21(2):491-492.
(责任编辑:姜付平)
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