全 文 ：第 26卷第 3期
2006年 9月
林　产　化　学　与　工　业
Chem istry and Indus try of Fo res t Products
Vo.l 26 No. 3
Sep.t 2006
红景天属植物根中红景天苷及其苷元酪醇
含量的 HPLC分析
　　收稿日期:2005 - 01 - 11
　　基金项目:国家自然科学基金资助项目(39700013)
　　作者简介:王 洋(1971 - ),女,黑龙江哈尔滨人 ,副教授 ,博士 ,研究方向为植物次生代谢生态学 、植物化学
　*通讯作者:阎秀峰 ,教授 ,博士生导师 ,主要从事植物生理生态学研究。
WANG Yang　　
王 洋 , 于 涛 , 阎秀峰*
(东北林业大学生命科学学院 , 黑龙江 哈尔滨 150040)
摘　要:　建立了一种采用 KYA H IQ sil C18柱(250 mm ×4. 6 mm , 5 μm),以乙腈 -水溶液(体
积比 1∶9)为流动相 ,在流速 1. 0 mL /m in、检测波长 280 nm、进样量 10μL的条件下 ,用高效液相
色谱同时测定红景天苷及其苷元酪醇含量的方法。利用均匀试验设计研究了分析样品的制备
方法 ,确定了红景天根粉的最佳提取条件为:以蒸馏水为溶剂在 60℃下超声波提取 50 m in。分
别测定了不同产地的红景天属植物中红景天苷和酪醇的含量 , 西藏产圣地红景天中红景天苷含量最高 , 达到 2. 147%,
其次为藏产大花红景天和西藏红景天 ,分别为 1. 763%和 1. 271%;四川产大花红景天中酪醇含量最高 , 为 0. 298 5%,
其次是藏产西藏红景天和大花红景天 ,分别为 0. 214 3%和 0. 183 6%;长鞭红景天和狭叶红景天中 2种有效成分的含
量均很低 , 红景天苷含量仅为 0. 034%和 0. 003%, 酪醇含量则分别为 0. 016 4%和 0. 004 8%。
关键词:　红景天;红景天苷;酪醇;超声波提取
中图分类号:TQ91;Q946. 83;R284. 1　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:0253 -2417(2006)03 - 0051 - 04
Determ ination of Contents of Salidroside and Tyrosol
in Rhodiola Roots by HPLC
WANG Yang, YU Tao, YAN X iu-feng
(Co llege of L ife Sciences, Northeast Forestry University, H arb in 150040, China)
Abstrac t:A me thod fo r the de te rm ina tion of conten ts o f sa lidroside and ty ro so l in Rhodiola by HPLC w as estab lished. The HPLC
sepa ra tion w as pre fo rm ed on aKYA H IQ sil C18 co lum n(250 mm ×4. 6 mm , 5 μm), a t flow rate 1 mL /m in, w ith mobile phase
o f acetonitrile /w a te r(1∶9) and de tec ted atw ave leng th 280 nm. U sing un iform design, the op tim a l conditions for sa lidroside and
tyroso l ex traction w ere exp lo red to be ultrasonica lly ex trac ted by distilled wa te r a t 60℃ fo r 50 m in. Con tents of sa lidroside and
tyroso l in Rhodiola roo ts w ere de te rm ined. Salidro side con tent wa s 2. 147%, the h ighest in Rh. sacra from T ibe t, then in Rh.
crenula ta and Rh. tibetica from T ibe t, 1. 763% and 1. 271%, re spective ly;ty ro so l con tent w as 0. 298 5%, the h ighest in Rh.
crenula ta from Sichuan, then in Rh. tibetica and Rh. crenula ta from T ibe t, 0. 214 3% and 0. 183 6%, re spec tively;w he reas
both con tents w ere ve ry low in Rh. fastigia ta and Rh. kirilow ii from S ichuan w ith salidro side contents o f only 0. 034% and
0. 003%, and ty roso l con tents of 0. 016 4% and 0. 004 8%, respec tively.
K ey words:Rhodiola;sa lidro side;ty roso l;u ltrasonic ex traction
景天科红景天属 (Rhod iola)植物全球约有 90余种 ,主要分布于北半球高寒地带 ,我国红景天属植
物有 70余种[ 1] 。红景天具有很高的药用价值 ,其免疫作用强于人参和刺五加而无人参的过度兴奋和刺
五加的致便秘作用 ,具有抗疲劳 、抗衰老 、抗缺氧 、抗辐射 、兴奋智力之功效 ,可治疗多种疾病 ,有巨大的
经济价值和广阔的开发前景 [ 2-4] 。红景天的主要药用活性成分是红景天苷 (C14H 20O 7)及其苷元酪醇
(C8H10O2)[ 2] 。其中 ,高山红景天(Rh. sacha linensis)、玫瑰红景天(Rh. rosea)和西藏红景天(Rh. tibetica)
是人们关注较多的红景天属植物。
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超声波是一种弹性波 ,它能产生并传递强大的能量 ,并进而形成空化作用 ,使植物细胞破裂[ 5-6] 。超声
波提取法是将超声波作用于提取液体系以获得待分析样品的技术方法[ 7] ,与常规提取法相比 ,具有提取时
间短 、产率高 、操作简单等优点 [ 8] 。近年来利用高效液相色谱法测定红景天苷含量的方法很多[ 9-11] ,但同
时鉴定样品中 2种主要有效成分红景天苷及酪醇却少有报道[ 12] 。以往研究采用的传统提取方法 ,提取时
间长且不易将红景天苷提取完全。本研究探讨了超声波提取红景天根中红景天苷和酪醇的方法 ,并对结
果进行综合分析 ,以期确定最佳条件 ,使红景天苷及酪醇含量分析更简便 、快速及可靠。
1　材料与方法
1. 1　材料与仪器
原料:高山红景天根 ,采自吉林省长白山;不同产地的红景天根的样品 ,由大兴安岭红景天药材开发
应用研究所提供 。仪器:W aters高效液相色谱仪 (2487型紫外检测器 );B io fuge 22R高速冷冻离心机
(德国 Heraeus sepatech公司);AB104型电子天平 (瑞士 );Mu ltitempⅢ型恒温循环水浴(Pha rmac ia B io-
tech公司);KQ -100DB超声波仪 (江苏昆山超声仪器公司 )。试剂:乙腈为色谱纯 ,水为超纯水 ,其它试
剂均为分析纯 ,红景天苷购于中国生物制品和药品检定所 ,酪醇由香港科技大学提供 。
1. 2　色谱条件
色谱柱 KYA H IQ sil C18柱(4. 6mm ×25 cm , 5μm);检测波长 280 nm;流动相:乙腈 -水 (体积比
1∶9);流速 1mL /m in;进样量 10μL。
1. 3　标准溶液的配制
精密称取红景天苷标准品 5mg,于 10mL容量瓶中以乙腈 -水为溶剂 ,超声波溶解并定容 ,摇匀备
用 。精密称取酪醇标准品 5mg,于 10mL容量瓶中以乙腈 -水为溶剂 ,超声波溶解并定容 ,摇匀备用 。
1. 4　标准曲线的绘制
分别精密吸取红景天苷及酪醇标准溶液 0. 25、0. 50、1. 00、1. 50、2. 00mL于 5mL容量瓶中 ,以乙
腈 -水为溶剂定容 ,摇匀 。按照选定的色谱条件 ,分别对不同浓度的标准溶液进样分析 ,每样重复测定 3
次 。分别以质量浓度 (mg /mL,红景天苷 a1、酪醇 a2)为横坐标 ,峰面积值 (b)为纵坐标进行回归计算 ,得
红景天苷和酪醇的回归方程和相关系数分别为:
b1 =2 019 845. 118 3a1 - 8 409. 791 7,R =0. 999 9;b2 =6 224 874. 602 2a2 -55 790. 708 3,R =0. 999 9
1. 5　样品制备
影响植物中有效成分提取的因素很多 ,本研究选择了乙醇体积分数 、提取温度和提取时间进行 3因
素 11水平的均匀设计试验 (见表 1),以红景天苷和酪醇的提取率为评价指标 ,探讨了超声波提取红景
天根中 2种有效成分的最佳条件 。
图 1　标准品(a)和样品(b)的色谱图
F ig. 1　Chroma tog ram s o f standa rd sam ple (a) and samp le
o fRhodiola (b)
精密称取红景天根粉 2 g于 50mL容量瓶 ,按照
设计的实验条件 ,加入 45mL一定体积分数的乙醇溶
液在不同的时间及温度条件下超声波提取红景天苷
和酪醇后 ,冷却至室温 ,再用相应体积分数的乙醇溶
液定容至刻度 ,摇匀。吸取 1mL上清液至离心管中 ,
离心(12 000 r /m in)5m in ,备用 。
2　结果与分析
2. 1　色谱分析
标准品及样品色谱图见图 1。
2. 2　红景天苷及酪醇超声波提取实验条件的确定
均匀设计试验结果见表 1。分别以乙醇体积分
数 (X 1)、提取温度 (X2)、提取时间 (X3)为自变量 ,以
第 3期 王 洋 ,等:红景天属植物根中红景天苷及其苷元酪醇含量的 HPLC分析 53　
红景天苷得率(Y 1)、酪醇得率 (Y 2)为因变量 ,用均匀设计软件(2. 0版 )对试验结果进行逐步回归分析 ,
得如下回归方程:
Y 1 =0. 667 620 5 - 0. 002 665 0 X 1 +0. 012 063 9X2 +0. 001 768 6X 3 - 0. 000 010 7X21 +
0. 000 011 1X1X3 -0. 000 095 0X
2
2 - 0. 000 019 5X2X3 - 0. 000 008 8X
2
3
Y 2 =0. 051 857 1 - 0. 000 238 1X 1 +0. 000 655 5X2 +0. 000 203 9X 3 - 0. 000 000 1X21 +
0. 000 001 9X 1X2 +0. 000 000 1X1X3 - 0. 000 003 9X22 - 0. 000 002 3X2X 3 - 0. 000 000 4X 23
进行各因素对红景天苷提取率影响的逐步回归模型分析表明 ,随着溶剂中乙醇体积分数的提高 ,红
景天苷的溶出逐渐减少 ,因此 ,不含乙醇的蒸馏水为红景天苷的最佳提取溶剂。红景天苷的提取率随提
取温度的提高而增加 ,但当提取温度高于 40℃以上时 ,随提取温度的提高红景天苷提取率增加的趋势
减弱 ,最佳提取温度为 60℃。红景天苷的提取率随提取时间增加基本呈降低的趋势 ,提取时间为 20 ～
60m in时红景天苷的提取率基本保持稳定 ,根据回归方程计算最佳提取时间为 34. 4m in。
表 1　U*11(113)均匀设计试验条件及分析结果
Tab le 1　Expe rim en t cond ition and re su lt o f unifo rm designU*11(113)
实验号
N o.
乙醇体积分数 /%
con cn. of alcohol
X1
提取温度 /℃
ext raction tem p.
X 2
提取时间 /m in
extract ion tim e
X3
红景天苷得率 /%
salid ros ide yield
Y 1
酪醇得率 /%
tyrosol yield
Y2
1 0 45 40 1. 041 0. 077
2 10 25 180 0. 849 0. 077
3 20 50 160 0. 913 0. 076
4 30 15 80 0. 826 0. 065
5 40 30 220 0. 756 0. 070
6 50 35 60 0. 877 0. 066
7 60 60 120 0. 878 0. 070
8 70 20 100 0. 765 0. 058
9 80 10 140 0. 668 0. 054
10 90 55 20 0. 748 0. 060
11 100 40 200 0. 694 0. 056
进行各因素对酪醇提取率影响的逐步回归模型分析表明 ,乙醇体积分数对酪醇提取率的影响最大 ,
而提取温度及提取时间的影响很小 。根据回归方程计算 ,蒸馏水是最佳提取溶剂 ,最佳提取温度为
53. 96℃,最佳提取时间为 92. 64m in。对各试验条件进行综合分析 ,确定了红景天苷及酪醇的最佳提
取条件为 60℃下 ,蒸馏水超声波提取 50m in。
2. 3　精密度实验
精密称取 5份红景天根粉末于 50mL容量瓶中 ,每份 2 g,以 45mL蒸馏水为提取溶剂 , 60℃下超
声波提取 50m in,冷却后蒸馏水稀释至刻度 ,取 1mL离心后在选定的色谱条件下测定红景天苷及酪醇
含量 ,测得红景天苷和酪醇峰面积的相对标准偏差 (RSD)分别为 2. 47%和 3. 62%。
2. 4　回收率实验
精密称取 3份高山红景天根粉末 ,每份 1 g,分别加入红景天苷标准品 10mg及酪醇标准品 1mg,按
样品制备及测定方法进行定量分析 ,测得红景天苷加样回收率和 RSD分别为 94. 25%和 3. 21%,酪醇
的为 97. 64%和 3. 75%。
2. 5　样品测定
采用以上方法分析了不同产地红景天属植物根中的红景天苷和酪醇含量 (见表 2)。结果表明 ,西
藏产圣地红景天中红景天苷含量最高 ,其次为藏产大花红景天和西藏红景天;四川产大花红景天中酪醇
含量最高 ,其次是藏产西藏红景天和大花红景天;长鞭红景天和狭叶红景天中两种有效成分的含量均很
低 。不同产地的同种红景天中有效成分的含量也存在差异 。高山红景天中 ,长白山产的红景天苷含量
均较高 ,而加格达奇所产的红景天酪醇含量则相对较高。大花红景天中 ,四川产的酪醇含量较高 ,而西
藏产的则红景天苷含量较高。
54　 林　产　化　学　与　工　业 第 26卷
表 2　不同产地红景天属植物根中红景天苷和酪醇含量
Table 2　Sa lidroside and ty roso l con tents in Rhod iola roots from differen t p rovenances
试样
sam p les
产地
p rovenance
含量 con ten t /%
红景天苷
salid roside
酪醇
ty rosol
高山红景天 Rh. sacha linensis 长白山 ChangbaiM oun tain 0. 785 0. 0298
高山红景天 Rh. sacha linensis 加格达奇 Jiagedaqi, H eilong jiang 0. 145 0. 0948
大花红景天 Rh. crenu la ta 西藏 Tibet 1. 763 0. 1836
大花红景天 Rh. crenu la ta 四川 S ichuan 1. 062 0. 2985
圣地红景天 Rh. sacra 西藏 Tibet 2. 147 0. 1142
西藏红景天 Rh. tibetica 西藏 Tibet 1. 271 0. 2143
玫瑰红景天 Rh. rosea 新疆 Xinjiang 0. 912 0. 1089
长鞭红景天 Rh. fa stig ia ta 四川 S ichuan 0. 034 0. 0164
狭叶红景天 Rh. kirilow ii 四川 S ichuan 0. 003 0. 0048
3　结 论
3. 1　建立了一种简便 、快速测定红景天根中红景天苷及其苷元酪醇的高效液相色谱分析方法。
3. 2　运用均匀设计法考查了从红景天根中超声波提取红景天苷和酪醇的试验条件 ,得到同时提取红景
天中 2种有效成分的最佳工艺条件:以蒸馏水为提取溶剂 ,红景天根粉在 60℃下超声波提取 50m in。
3. 3　测定了不同产地的红景天属植物中红景天苷和酪醇的含量 ,西藏产圣地红景天中红景天苷含量最
高 ,达到 2. 147%,其次为藏产大花红景天和西藏红景天 ,分别为 1. 763%和 1. 271%;四川产大花红景
天中酪醇含量最高 , 为 0. 298 5%, 其次是藏产西藏红景天和大花红景天 , 分别为 0. 214 3%和
0. 183 6%;长鞭红景天和狭叶红景天中 2种有效成分的含量均很低 ,红景天苷含量仅为 0. 034%和
0. 003%,酪醇含量分别为 0. 016 4%和 0. 004 8%。
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