全 文 ：Journal of Kunming Medical University
昆明医科大学学报 2012，（12）：4～ 6
UPLC法同时测定旋覆花属植物中2种倍半萜内酯成分的含量
郭伟琳1,2），冷红琼 １），邓 亮 １），郭亚东 １），沈志强 １）
（1） 昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室，云南昆明 650500；2） 玉溪市人民医院，云
南玉溪 653100）
［摘要］ 目的 建立超高效液相色谱（ultraperformanceliquidchromatography，UPLC） 快速测定旋覆花属植物
中2种倍半萜内酯的含量．方法 仪器为WatersACQUITYUltraPerformanceLCTM超高效液相色谱仪，带有二极管
阵列检测器，检测波长205nm，色谱柱为WatersACQUITYUPLCBEHC18（100mm×2.1mm，1.7μm），以乙腈-
水为流动相，梯度洗脱，流速0.4mL/min，柱温:25℃．结果 2种倍半萜内酯在7min内完成测定．结论 该方
法简单、准确可靠、重复性良好，可用于旋覆花属植物中2种倍半萜内酯含量的快速测定．
［关键词］旋覆花；倍半萜内酯；含量测定；超高效液相色谱
［中图分类号］R96［文献标识码］A［文章编号］1003－4706（2012） 12－0004－04
Determination of the Contents of Two Sesquiterpenes in Inula
Plants with UPLC
GUOWei－lin1，２），LENGHong－qiong１），DENGLiang１），GUOYa－dong１），SHENZhi－qiang１）
（1）School of Pharmaceutical Science & Yunnan Key Laboratory of Pharmacology for Natural Products，
Kunming Medical University，Kunming Yunnan 650500；2）People’s Hospital of Yuxi City，Yuxi Yunnan
653100，China）
［Abstract］ ObjectiveTo determine the contents of two active sesquiterpenes in Inula plants with UPLC．
MethodsThe equipment was Waters ACQUITY Ultra Performance LCTM UPLC. Detection wavelength was 205
nm．The column was Waters ACQUITY UPLC BEH C18（100 mm 2.1 mm，1.7μm）．Mobile phase：A was
acetonitrileandB waswater with gradient elution. Flow speed was0.4 mL/min，and thetemperatureof column was
25℃ ．ResultTwo sesquiterpenes（inulicin and ivangustin） were separated at baseline within 7 min．
ConclusionThemethodwassimpleandaccuratewithgoodreproducibility，canbeusedtodeterminequicklythe
contentsoftwosesquiterpenesinInulaplants.
［Key words］Inulaplant；Sesquiterpenes；Contentdetermination；UPLC
［基金项目］国家自然科学基金资助项目（81160401）
［作者简介］郭伟琳（1980～），女，云南西双版纳州人，在读硕士研究生，主管药师，主要从事医院药剂工作．
［通讯作者］邓亮．E-mail:65113603@qq.com
菊科旋覆花属（InulaL.） 植物全世界约有100
种，分布于欧洲、亚洲及非洲等地，以地中海地区
为主．我国有20余种．本属多种植物常供药用，
如土木香（I.helenium） 可作为健胃、利尿、祛痰
和驱虫药;大花旋覆花（I.britannica） 具有消痰、
下气、软坚、行水等功效[1]．倍半萜类化学成分是
本属植物的特征性成分[2]，有文献报道倍半萜内酯
类化合物对一氧化氮（NO） 的产生有抑制作用[3，4]，
以及抗肿瘤作用[5]．杨茜等[6]用HPLC对旋覆花属植
物中5种倍半萜内酯类化合物含量进行测定，需要
55min．本文采用UPLC法快速测定旋覆花属植物
中2种倍半萜内酯的含量，7min内完成，可以用
于快速检测．
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
WatersACQUITYUltraPerformanceLCTM超高效
CN 53 -1221/ R
液相色谱仪（带有二极管阵列检测器，美国Waters
公司）．T6328B型万分之一电子天平（上海），超
声波清洗器 （上海科导超声仪器有限公司），
MilliporeMilli-Q超纯水器（美国Millipore公司）．
乙腈为色谱纯（TEDIA公司），乙醇为分析纯
（天津市风船化学试剂科技有限公司），水为
Milli-Q超纯水．
1.2 色谱条件
色谱柱 Waters ACQUITY UPLC BEH C18（100
mm×2.1mm，1.7μm），以乙腈－水为流动相，梯
度洗脱 （见表 1），流速 0.4 mL/min，柱温 25℃，
时 间（min） 乙腈（%） 水（%）
0 20 80
5 30 70
10 50 50
12 90 10
18 20 80
表 1 梯度洗脱程序
Tab.1 Gradient elution process
图 1 混合对照品（A），样品（B） 色谱图
Fig.1 Chromatograms of standard and sample
1:旋覆花次内酯；2:ivangustin.
检测波长205nm，进样量5μL．
1.3 实验方法
1.3.1 对照品溶液配制 精密称取旋覆花次内酯
6.7mg，ivangustin5.5mg，分别置于10mL容量瓶
中，用乙醇溶解并稀释至刻度，制成质量浓度为
0.67，0.55mg/mL的单一成分对照品储备液．分别
精密量取1mL对照品储备液于 10 mL容量瓶中，
用乙醇定溶即得每1mL含旋覆花次内酯0.067mg
及ivangustin0.055mg的对照品混合溶液．
1.3.2 供试品溶液配制 取药材粉末约1g，精密
称定，置100mL磨口锥形瓶中，加入60%乙醇25
mL，盖上磨口塞，称定重量，置于超声波清洗器
中超声 45 min，放冷，用 60%乙醇补足重量，摇
匀后经0.22μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液．
2 结果
在选定的色谱条件下，混合对照品及样品色
谱图见图1．
郭伟琳，等．UPLC法同时测定旋覆花属植物中2种倍半萜内酯成分的含量 5第 12期
0.00
0.05
0.10
0.15
0.20
0.25
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5 10.0
2
1
0.00
0.05
0.10
0.15
0.20
0.25
0.0 0.0 0.51.01.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5 10.0
1
2
结果表明旋覆花次内酯及 ivangustin 分别在
0.067～0.670μg和0.055～0.550μg范围内线性关
系良好．
2.2 回收率试验
取 3 份各 1.0 g已知含量的样品，精密称重，
分别在线性范围内低、中、高 3个水平进行回收
率实验，精确加入 0.67 mg/mL 旋覆花次内酯 1.0
mL、1.5 mL、2.0 mL，0.55 mg/mL Ivangustin 1.0
mL、2.0mL、3.0mL．按实验方法1.3.2处理，进
样量5μL，考察方法的回收率，以实测量除以添
加量计算回收率，见表2.
2.3 精密度试验
取对照品溶液按上述色谱条件，重复进样 6
次，每次进样5μL，记录峰面积，结果得出RSD
分别为旋覆花次内酯1.37%、Ivangustin0.98%．
2.4 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液进样5μL，分别在
0、4、8、12、24h进样，测定其峰面积，结果显
示 旋 覆 花 次 内 酯 峰 面 积 的 RSD 为 2.71% ，
Ivangustin 峰面积的 RSD 为 1.34%，表明样品在
24h内稳定性良好．
2.5 重复性试验
取同一样品 6份，制备供试品溶液，每次进
样 5μL，平行测定 6 份样品．旋覆花次内酯及
Ivangustin峰面积的RSD分别为2.56%和1.98%．
2.6 样品含量的测定
取不同产地的药材粉末各约 1 g，精密称定，
按1.3.2处理后，进样5μL测定，见表3.
2.1 工作曲线
精密吸取1.3.1项下的二级对照品溶液1、3、
5、8、10μL，进样，记录色谱图，测定其峰面
积，以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，进
行线性回归，其回归方程和相关系数分别为：
成 分 样品质量（g） 本底值（mg） 添加量（mg） 测得量（mg） 回收率（%） 平均回收率（%） RSD%
旋覆花次内酯 1.0512 1.0312 0.6700 1.6735 98.4
1.0431 1.0232 1.0050 1.9769 97.5 97.1 1.58
1.0985 1.0776 1.3400 2.3057 95.4
Ivangustin 1.0306 1.2670 0.5500 1.7658 97.2
1.0258 1.2546 1.1000 2.3250 98.7 97.8 0.83
1.0475 1.2811 1.6500 2.8543 97.4
表 2 旋覆花次内酯及Ivangustin的回收率试验结果（n=3）
Tab.2 Results of recoveryof the 2 compounds（n=3）
样 品 旋覆花次内酯（mg/g） ivangustin（mg/g）
云南1 1.63 1.31
湖北 2.23 0.80
河南 2.64 1.98
河北 0.98 1.22
广西 - 2.17
安徽1 2.23 1.18
安徽2 1.83 1.52
云南2 1.60 1.60
表 3 不同样品中2种化合物的含量
Tab.3 The results of the contents of 2 compounds in
different samples
3 讨论
3.1 提取条件的选择
选择供试品溶液制备方法时，分别采用 40%
甲醇、60%甲醇、80%甲醇、40%乙醇、60%乙醇、
80%乙醇和水对药材进行超声提取，还比较了不同
的料液比和超声时间对提取率的影响．结果以
60%乙醇提取液，料液比为 1:25，超声时间为 45
min的提取率最大．
3.2 流动相的选择
实验过程中分别以甲醇 -水、乙腈-水、甲
醇-0.4%冰醋酸水溶液、乙腈-0.4%冰醋酸水溶液
进行二元等度和梯度洗脱，结果表明:乙腈-水进
行二元梯度洗脱时，得到的UPLC色谱图具有很好
的分离度，峰形较好且保留时间合适．
3.3 检测波长的选择
分别以200、205、210和220nm4个波长进
行检测，发现205nm波长处有最大吸收；205nm
波长检测效果最佳，色谱峰几乎不受溶剂以及杂
旋覆花次内酯：Y＝5765655.763X＋47278.545
R2＝0.9994
Ivangustin：Y＝4735631.647X＋31743.801
R2＝0.9996
（下转第10页）
第33卷6 昆明医科大学学报
本实验中肝癌组DLK1蛋白阳性表达率与文献
相符合，而且在 AFP 阴性的肝癌组织中仍有
22.73％的DLK1蛋白阳性表达，故AFP联合DLK1
蛋白检测可提高肝癌的检出率，DLK1蛋白可作为
肝癌诊断候选标志物．AFP和DLK1在肝硬化组不
表达而在癌周肝硬化组中有阳性表达，说明癌周肝
硬化不同于不伴癌的肝硬化，更具有癌前病变性
质.
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（2012－09－14收稿）
质的干扰，故选择205nm作为检测波长．
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（2012－09－12收稿）
第33卷10 昆明医科大学学报
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（上接第6页）