全 文 ：productive characteristics of P.heterophylla var.macrophylla , P.heterophylla var.Foliolum , and P.heterophylla var.arvense were signifi-
cantly different(P<0.01).There were also differences in ecological adaptability , plant characteristics , pollen granule , chromosomes , and
isoenzyme of the three cultivars.Conclusion:The strain types of P.heterophylla was denominated for the first time.The characteristics and
productivity index system of P.heterophylla varieties were determined.
[ Key words] 　Pseudostellaria heterophylla ;strain resource;characteristics
[ 责任编辑　张宁宁]
缬草属药用植物极性成分的HPLC指纹图谱研究
石晋丽1＊ , 刘　勇1 , 肖培根2
(1.北京中医药大学 中药学院 ,北京 100102;
2.中国医学科学院 中国协和医科大学 药用植物研究所 ,北京 100094)
[ 摘要] 　目的:研究缬草属药用植物中极性成分 HPLC 指纹图谱及测定方法 。方法:采用 HPLC/ UV 测定缬草
属药用植物甲醇提取液的指纹图谱。结果:建立了缬草属药用植物极性成分的 HPLC 指纹图谱 , 发现了 12 个色谱
峰为共有峰 ,确定了其相对保留时间和峰面积比值的范围。结论:利用缬草属药用植物极性成分的指纹图谱可以
对不同种缬草属植物进行鉴别 ,并可在一定程度上进行质量控制。
[ 关键词] 　缬草属;HPLC指纹图谱;绿原酸;橙皮苷
[ 中图分类号] R 284.1　[ 文献标识码] A　[ 文章编号] 1001-5302(2005)05-0426-04
[ 收稿日期] 　2003-03-01
[ 通讯作者] 　＊石晋丽 ,E-mail:shijl@vip.sina.com
　　缬草属 Valeriana L 植物药用历史久远 ,蜘蛛香
V.jatamansi Jones早在我国明代的《本草纲目》中就
有记载 ,主治脘腹胀痛 、消化不良 、腹泻 、痢疾等疾
病 ,1977年版《中国药典》一部曾加以收载[ 1] 。缬草
V.officinalis L.根和根茎入药 ,性平味辛 ,具有镇静
安神 ,解痉止痛之功 ,主治心神不安 ,心悸失眠 ,癫
狂 ,脏躁 ,风湿痹痛 ,脘腹胀痛 ,痛经 , 经闭 ,跌打损
伤[ 2] 。一直以来 ,作为温和的镇静 、安神 、催眠药 ,其
药用价值在世界上受到高度重视[ 3] ,且作为高档烟
用香精原料 ,不少国家已经对其进行开发 ,产值不
菲。目前关于缬草属药用植物的质量控制和分析方
法报道不多 ,对其极性成分指纹图谱的研究未见报
道。为了深入了解我国缬草属药用植物资源 ,从中
寻找疗效确切的具有镇静作用的国产新资源 ,使其
得到充分合理的利用 ,同时也为了更有效地控制缬
草类药材的品质 ,作者采用HPLC/UV对其极性成分
指纹图谱进行了研究 。
1　仪器及试药
HP1050型高效液相色谱仪 ,二极管阵列检测
器 。乙腈为色谱纯(美国 Fisher公司);水为娃哈哈
纯净水 ,并经 0.45μm 水系滤膜过滤;绿原酸购于中
国药品生物制品检定所;橙皮苷自行提取精制 ,经
UV , IR ,NMR等鉴定结构 ,纯度大于 99.5%(归一化
法计算)。实验中所用缬草属药用植物均经笔者鉴
定 ,见表 1。
2　方法
2.1 　色谱条件　默克C18色谱柱(4 mm×125 mm , 5
μm),预柱为 C18柱(8 mm×10 mm , 5 μm)。柱温 40
℃,流速 0.95 mL·min-1 ,检测波长 280 nm 。乙腈和
水每100mL分别加0.1 moL·L-1的磷酸 1mL。梯度
洗脱条件见表2。
2.2　供试品溶液的制备　精密称取各样品粉末(经
20目筛)10 g , 包在滤纸筒中 ,置索氏提取器内 ,用
正己烷水浴回流提取至无色 。将提取后的药材粉末
干燥 ,再用二氯甲烷 、甲醇依次同上法提取至无色。
甲醇提取液浓缩至 25 mL ,放冷 ,过滤 ,取滤液再过
0.45 μm微孔滤膜为供试品溶液 。
2.3 　对照品溶液的制备　精密称取绿原酸 、橙皮
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　　 表 1　缬草属药用植物样品及鉴定
实验编号 购入 、采集地点 时间 名称
1 河北安国 2002-07 蜘蛛香 Valeriana jatamansi
2 四川成都 2002-07 蜘蛛香 V.jatamansi
3 贵州贵阳 2002-07 蜘蛛香 V.jatamansi
4 四川雅安 2002-07 蜘蛛香 V.jatamansi
5 陕西 2002-07 蜘蛛香 V.jatamansi
6 云南昆明 2002-07 蜘蛛香 V.jatamansi
7 四川峨眉山(自采) 2002-07 蜘蛛香 V.jatamansi
8 北京松山(自采) 2003-07 缬草 V.officinalis
9 内蒙古赤峰(自采) 2002-07 缬草 V.officinalis
10 中国植物园(产于欧洲)(自采) 2003-08 缬草 V.officinalis
11 湖北巴东县(自采) 2002-08 宽叶缬草 V.officinalis var.latifalia
12 贵州贵阳(自采) 2002-08 宽叶缬草 V.officinalis var.latifalia
13 黑龙江塔河林场(自采) 2002-09 黑水缬草 V.amurensis
14 云南昆明西山(自采) 2002-10 长序缬草 V.hardwickii
15 云南大理苍山(自采) 2002-10 长序缬草 V.hardwickii
16 云南丽江玉湖乡雪松村(自采) 2002-10 长序缬草 V.hardwickii
表 2　梯度洗脱条件
时间
/min
流动相
乙腈/ % 水/ %
2 4 96
6 5 95
9 8 92
20 8.7 91.3
24 12.5 87.5
30 13 87
50 14 86
60 15 85
苷 ,加甲醇制成每 1 mL 甲醇含绿原酸 3.2 mg ,橙皮
苷3.2 mg 的溶液作为对照品溶液 。
2.4 　精密度及稳定性考察　取同一份缬草属药用
植物(实验编号 4)的供试液重复进样 5次 ,比较不
同色谱峰的绝对保留时间 、相对保留时间及峰面积
比值。因进样间隔时间为 90 min ,故同时对该方法
进行了稳定性考察。结果表明所标定色谱峰的绝对
保留时间 、相对保留时间及峰面积比值基本一致
(RSD分别为 0.02%～ 2.3%,0 ～ 1.9%,0 ～ 2.7%),
符合指纹图谱检测要求[ 4] 。
2.5　重复性实验　取缬草属药用植物(样品编号
4)样品 5份 ,分别精密称定 ,按 2.2 项方法制备供试
品溶液 ,并分别按上述液相色谱条件测定 ,计算不同
指纹峰的相对保留时间及峰面积比值。结果表明所
标定色谱峰的绝对保留时间 、相对保留时间及峰面
积比值基本一致(RSD分别为 0.01%～ 0.36%, 0 ～
0.75%, 0 ～ 2.6%),符合指纹图谱检测要求[ 4] 。
3　缬草属药用植物极性成分的 HPLC 指纹图谱及
技术参数
3.1 　缬草属药用植物极性成分的 HPLC 指纹图谱
及共有峰的标定　按上述液相色谱条件对 7份缬草
属药用植物样品(表 1中的 1 ～ 7号样品)进行了测
定 ,样品中所有成分的色谱峰在 60 min之内出完 ,
比较各样品的色谱图 ,其中 12个峰是共有的 ,确定
为指纹峰(见图 1)。各共有峰的紫外吸收(共有峰
峰号)为:202 ,256 nm(3), 218(sh), 324 nm(4 , 9 , 10 ,
12);202 ,276 nm(5 ,6 ,8);202(sh);282 nm(7 ,11)。
图 1　缬草属药用植物极性成分的指纹图谱
1～ 12.共有峰;4.绿原酸峰;11.橙皮苷峰
3.2 　共有峰保留时间及峰面积的比值确定　以绿
原酸为参照 ,把各色谱峰保留时间与同一图谱中绿
原酸保留时间的比值作为各色谱峰的相对保留时
间 。结果各共有峰峰号(相对保留时间)为:1
(0.11),2(0.70 ～ 0.73), 3(0.85 ～ 0.86), 4(1.00), 5
(1.12 ～ 1.14), 6(1.23 ～ 1.26), 7(1.68 ～ 1.70), 8
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(1.96 ～ 1.99), 9(2.52 ～ 2.58), 10(2.75 ～ 2.80), 11
(2.85 ～ 2.90),12(3.31 ～ 3.39)。精密吸取对照品溶
液10 μL ,按上述色谱条件测定 ,以所得的绿原酸峰
面积作为 1 ,计算各样品图谱中色谱峰的峰面积比
值 ,结果各共有峰的峰号(峰面积比值)为:1(0.03 ～
0.10), 2(0.05 ～ 0.10), 3(0.06 ～ 0.09), 4(0.79 ～
1.40), 5(0.07 ～ 0.11), 6(0.06 ～ 0.08), 7(0.23 ～
0.38),8(0.16 ～ 0.18), 9(0.09 ～ 0.27), 10(0.31 ～
0.91),11(0.27 ～ 1.52),12(0.25 ～ 0.97)。
7号峰和 12号峰有时出现肩峰 。
3.3 　不同来源的样品 HPLC 图谱的比较　笔者同
时采用上述液相色谱条件测定了几种不同植物来源
的缬草属植物样品(表 1中的 8 ～ 16号样品),见图
2。各样品极性成分的 HPLC 图谱与所建立的缬草
属药用植物极性成分的指纹图谱比较结果见表 3。
结果表明 ,其他植物来源的各缬草属药用植物的样
品的极性成分 HPLC图谱与来源于蜘蛛香的样品差
别明显 ,对缬草属药用植物的真伪鉴别有重要意义。
图 2　5种不同植物来源的缬草属植物样品极性成分的 HPLC图谱
A.蜘蛛香;B.缬草;C.宽叶缬草;D.黑水缬草;E.长序缬草
表 3　不同来源样品极性成分的 HPLC 图谱与所建立的缬草属药用植物极性成分指纹图谱的比较
样品 缬草属药用植物指纹图谱共有峰编号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Valeriana jatamansi + + + + + + + + + + + +
V.officinalis + - - + + + + + - + - -
V.officinalis var.latifolia + - - + + + + + + + - -
V.amurensis + - + + + + + + - + - -
V.hardwickii + - + + + + - + + + + +
　　注:“ +”表示具有该色谱峰 , “ -”表示不具有该色谱峰
4　讨论
4.1　笔者建立了缬草属药用植物极性成分的 HPLC
测定方法 ,该方法能使缬草属药用植物甲醇提取物
中的大部分化学成分得到较好分离 ,具有很好的稳
定性 、重复性和可行性。
4.2　在液相色谱条件建立的过程中 ,笔者比较了波
长 190 ～ 400 nm所测得的HPLC图谱(DAD检测器检
测),结果表明 ,波长280 nm 检测时 ,其HPLC图谱中
可见比较多的色谱峰 ,同时各色谱峰分离较好;并且
该波长接近所选用对照品绿原酸的最大吸收波长;
故确定波长 280 nm为检测波长。
4.3 　本实验所应用的峰面积比值计算方法不同于
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文献[ 5] 。由于缬草属药用植物不同样品 HPLC 指
纹图谱中 ,各共有峰的峰面积均有一定的波动 ,故笔
者认为不宜把各样品色谱图中某一共有峰峰面积均
作为 1 来计算峰面积比值。因此 ,本实验以已知浓
度的绿原酸参照物溶液 ,固定体积进样后 ,同样色谱
条件所得峰面积作为 1 ,计算峰面积比值 。这样既
消除了一定的系统误差 ,又能客观地反映不同样品
中各共有峰所代表的化学成分的含量高低。通过缬
草属药用植物指纹图谱主要特征峰的面积比例的制
定 ,亦能有效地控制中药缬草的质量 ,确保缬草样品
质量的相对稳定 。
4.4 　利用所建立的缬草属药用植物极性成分的
HPLC指纹图谱的特征性(如其稳定的共有峰相对保
留时间),有效地区分了所收集的来源于蜘蛛香的样
品和其他植物来源的样品 ,对缬草类药材的鉴别具
有重要意义。
蜘蛛香 、缬草 、宽叶缬草 、黑水缬草 、长序缬草 ,
这5种植物药材极性成分的 HPLC图谱相互之间存
在较大差别;而同一植物来源的不同样品极性成分
的HPLC 图谱基本一致 ,其差别明显小于不同植物
的样品HPLC图谱;鉴于几种缬草样品性状 、显微特
征及原植物形态较相近 ,故可以认为从化学成分的
角度进行区分应该是有效的途径 ,可以从化学分类
上为缬草属这几种植物的分类提供佐证。
另外 ,本研究结果也提示 ,在制定指纹图谱的过
程中 ,对于多来源的中药材 ,应把不同植物分别进行
研究。
4.5　从结构和性质上说 ,由于缬草属药用植物的脂
溶性成分中含有倍半萜 、环烯醚萜等不稳定组分 ,化
学结构复杂易变 ,化学性质极其活泼 ,在制备过程中
受酸 、碱 、热等较剧烈条件影响 ,易发生断键 、开环 、
异构化作用 ,难以获得稳定的标准物质。因此 ,对缬
草属药用植物而言 ,其脂溶性成分可能不适宜做
HPLC 指纹图谱。
[参考文献]
[ 1] 　中国药典.一部.1978.633
[ 2] 　国家中医药管理局中华本草编委会.中华本草.第 7册.第 12
卷.上海:上海科技出版社 ,1999.574.
[ 3] 　张振学 ,姚新生.药用植物缬草的化学研究进展.中国药物化
学杂志 , 2000 , 10(3):226.
[ 4] 　关于印发《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)的通
知》.中国药品标准 , 2000 , 1(4):3.
[ 5] 　屠鹏飞.中药材指纹图谱的建立及技术要求实例解说.中国
药品标准 , 2000 ,1(4):22.
Sdudies on HPLC fingerprint of the hydrophilic constituents
of Valeriana medicinal plants
SHI Jin-li , LIU Yong , XIAO Pei-gen
(School of Chinese Pharmacology , Beijing University of Chinese Medicine , Beijing 100102 , China)
[ Abstract] 　Objective:To establish the fingerprint of the hydrophilic constituents of Valeriana medicinal plants.Method:The HPLC-
UV assay was used to establish the fingerprint of the hydrophilic constituents of Valeriana medicinal plants.Result:The HPLC fingerprint pro-
files of the hydrophilic constituents of Valeriana medicinal plants contains 12 common peaks.The relative retention time and the ranges of rela-
tive area of the common peaks were determined.Conclusion:The fingerprint profile can be used for the identification and quality control of
Valeriana medicinal plants.
[ Key words] 　Valeriana medicinal plants;HPLC fingerprint;chlorogenic acid;hesperidin
[ 责任编辑　王康正]
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