全 文 ：第 40 卷第 5 期
2011 年 5 月
应 用 化 工
Applied Chemical Industry
Vol． 40 No． 5
May 2011
收稿日期:2011-02-28 修改稿日期:2011-03-13
基金项目:国家自然科学基金资助项目(20975081)
作者简介:王黎(1978 －) ，女，河南新密人，西安医学院讲师，硕士，主要从事药物质量评价研究。电话:029 － 86172835，
E － mail:t_lizi@ sina． com
粉葛 HPLC指纹图谱研究中
有效成分提取条件的优化
王黎1，高苏亚1，李华2
(1．西安医学院 药学院，陕西 西安 710021;2．西北大学 分析科学研究所，陕西 西安 710069)
摘 要:为了优化粉葛 HPLC指纹图谱研究中有效成分的提取条件，采用梯度洗脱(0 ～ 50 min A 相由 20%升为
55%) ，流动相甲醇-乙腈(70 ∶ 30) (A)和水(B) ，柱温 35 ℃，流速 0． 6 mL /min，检测波长 268 nm的色谱条件监测，
比较方法、溶剂种类及浓度、时间、溶剂用量比例等提取条件。结果表明，以 30%甲醇溶液作为溶剂，超声 30 min
(40 ℃，70 Hz) ，125 倍溶剂用量比例时，提取稳定性好、提取效率高，可作为粉葛 HPLC指纹图谱分析的较优条件。
关键词:粉葛;提取条件;HPLC指纹图谱
中图分类号:TQ 460． 7 + 2;R 931． 6 文献标识码:A 文章编号:1671 － 3206(2011)05 － 0754 － 03
Optimization for the extraction condition of Pueraria
thomsonii for HPLC fingerprints
WANG Li1，GAO Su-ya1，LI Hua2
(1． School of Pharmacy，Xi’an Medical University，Xi’an 710021，China;
2． Institute of Analytical Science，Northwest University，Xi’an 710069，China)
Abstract:To optimize the extraction condition of Pueraria thomsonii for HPLC fingerprints，HPLC was ap-
plied to determine the effective components in different extraction methods． The separation mobile phase
was methanol-acetonitrile (v /v，70 /30) (A)and water(B)． The A elution rose to 55% from 20% (0 ～
50 min)at the column temperature of 35 ℃ and the detection wavelength of 268 nm． The extraction
method，solvent and concentration，extraction time and extraction solution ratio were investigated，re-
spectively． When 30% methanol aqueous and extraction solution ratio of 125 ∶ 1 were applied to extract
for 30 min at 40 ℃ in ultrasonic extraction with 70 Hz，the results were stable and good． This extraction
condition can be used for HPLC fingerprints analysis．
Key words:Pueraria thomsonii;extraction condition;HPLC fingerprints
葛根(Radix Puerariae)又名葛藤、葛麻叶等，市
售葛根药材主要为粉葛(Pueraria thomsonii) ，具有
解肌退热、生津透疹等功能［1］。近年来指纹图谱技
术应用于中药材质量评价越来越广［2-3］，中药材
HPLC 指纹图谱研究中需要预先提取有效成分，除
去干扰色谱分离的物质。粉葛中有效成分葛根素、
大豆苷元、大豆苷等均是异黄酮类化合物，应用冷
浸、热回流、超声提取的方法居多［4］。本文以葛根
素、大豆苷元为提取指标，优化粉葛提取条件，为其
提取工业化及指纹图谱研究提供一定工艺参数。
1 实验部分
1． 1 试剂与仪器
粉葛对照药材(批号为 1175-200001)购于中国
药品生物制品检定所;粉葛药材样品购于西安宝芝
堂医药超市(产地为四川) ;葛根素、大豆苷元对照
品购于陕西省药品检验所(纯度均 ＞ 98． 6%) ;甲
醇、乙腈均为色谱纯;水为超纯水。
SB-5200DT超声波清洗机;Anke TGL-16G 高速
台式离心机;BS210S型电子天平;DZG-303A艾柯超
纯水机;LC-10AT vp 高效液相色谱仪;SCL-10A vp
第 5 期 王黎等:粉葛 HPLC指纹图谱研究中有效成分提取条件的优化
多通道系统控制器;CTO-10AS vp 柱温箱;SPD-
M10A vp 二极管阵列检测器;CLASS vp 色谱工作
站。
1． 2 实验方法
将粉葛药材烘干，粉碎，过 60 目筛，称取 0． 2 g
粉末，加入 30%甲醇 25 mL，回流提取 1 h，放冷，称
重，补足失去溶剂量，离心 5 min(3 500 r /min)后取
上清液，经 0． 2 μm 微孔滤膜过滤，以葛根素、大豆
苷元为提取指标，采用 HPLC 监测，以优化提取条
件。
色谱条件:Kromasil5 C18柱(150 mm × 4． 6 mm，
5 μm) ，采用梯度洗脱，0 ～ 50 min A 相由 20%升为
55%，流动相甲醇-乙腈(70 ∶ 30) (A)和水(B) ，柱温
35 ℃，流速 0． 6 mL /min，检测波长 268 nm，进样量
20 μL。
2 结果与讨论
2． 1 提取方法
准确称取 0． 2 g 粉葛药材样品粉末 3 份，加入
30%甲醇溶液 25 mL，分别采用热回流 1 h、超声
30 min、冷浸 10 h的方法进行提取，按 1． 2 节条件进
样，测得 3 份试样中葛根素的峰面积分别为
1 049 484、1 251 750、1 115 532。结果表明，与传统
的热回流和冷浸的方法相比，超声提取具有操作简
单、提取时间短、提取效率高的优点。
2． 2 提取溶剂种类及浓度的选择
2． 2． 1 甲醇浓度的选择 准确称取 0． 2 g 粉葛药
材样品粉末 6 份，分别加入浓度为 10%，20%，
30%，40%，50%，60% 的甲醇溶液 25 mL，超声提
取，按 1． 2 节条件处理、进样，色谱分离情况见图 1，
分别以试样中葛根素、大豆苷元的峰面积对甲醇浓
度作图，结果见图 2。
图 1 甲醇提取粉葛药材的色谱图
Fig． 1 HPLC chromatogram of Pueraria thomsonii
extracted by methanol
图 2 不同浓度甲醇提取葛根素(A)、
大豆苷元(B)的提取效率
Fig． 2 The extraction efficiency of puerarin(A)and
daidzein(B)with different methanol concentrations
2． 2． 2 乙醇浓度的选择 准确称取 0． 5 g 粉葛药
材样品粉末 6 份，分别加入浓度为 10%，20%，
30%，40%，50%，60% 的乙醇溶液 25 mL，超声提
取，按 1． 2 节条件处理、进样，色谱分离情况见图 3，
分别以试样中葛根素、大豆苷元的峰面积对乙醇浓
度作图，结果见图 4。
图 3 乙醇提取粉葛药材的色谱图
Fig． 3 The chromatogram of Pueraria thomsonii
extracted by ethanol
上述实验表明，提取溶剂的浓度对粉葛药材中
有效成分的提取效率有一定影响，由非极性和极性
两类基团构成的葛根素分子，其非极性基团在溶剂
含水量低时易溶解，极性基团在溶剂含水量高时易
溶解，采用 30%甲醇溶液、20%乙醇溶液的提取效
率最高，虽然用 40%乙醇溶液的提取效率也较高，
557
应用化工 第 40 卷
但葛根素可能已发生水解，葛根素峰不能和相邻峰
完全分离;比较 30%甲醇溶液、20%乙醇溶液的提
取所得的色谱图及有效成分的峰面积(葛根素和大
豆苷元的峰面积分别为:2 147 610，2 138 515，
327 596，287 752) ，说明用 30%甲醇溶液的提取效
率最高，且峰形、基线的情况也较好。
图 4 不同浓度乙醇提取葛根素(A)、大豆苷元(B)的提取效率
Fig． 4 The extraction efficiency of puerarin(A)and daidzein(B)with different ethanol concentrations
2． 3 提取时间的选择
准确称取 0． 2 g 粉葛药材样品粉末 6 份，加入
30%甲醇溶液 25 mL，超声(40 ℃、70 Hz)提取 10，
20，30，40，50，60，90 min，按 1． 2 节条件处理、进样，
以试样中葛根素、大豆苷元的峰面积对提取时间作
图，结果见图 5。
由图 5 可知，对粉葛药材超声 30 min，有效成分
已经基本提取完全，提取时间的延长并不能增加提
取效率。
图 5 不同超声时间提取葛根素(A)、大豆苷元(B)的提取效率
Fig． 5 The extraction efficiency of puerarin(A)and daidzein(B)with different ultrasonic extraction times
2． 4 提取溶剂用量
准确称取 0． 25，0． 20，0． 125 g 粉葛药材样品粉
末，分别加入 30%甲醇溶液 25 mL，溶剂用量分别为
100，125，200 倍，超声提取 30 min，按 1． 2 节条件处
理、进样，测得 3 份试样中葛根素的峰面积分别为
1 326 232，1 977 527，1 115 532，大豆苷元的峰面积
分别为 201 981，253 355，166 350。结果表明，采用
125 倍溶剂量的提取效率、基线效果是比较好的。
3 结论
提取粉葛药材有效成分的优化提取条件为:用
30%甲醇溶液作为提取溶剂，在 40 ℃、70 Hz 超声
提取 30 min，提取溶剂用量比例为 125 倍。该条件
操作简单、快速，提取稳定性好，提取效率高，适用于
粉葛药材的 HPLC指纹图谱分析。
参考文献:
［1］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典一部［M］． 北
京:化学工业出版社，2005:203．
［2］ 易伦朝，吴海，梁逸曾．色谱指纹图谱与中药质量控制
［J］．色谱，2008，26(2) :166-171．
［3］ 邵建强．中药指纹图谱的研究进展［J］．中草药，2009，
40(6) :994-998．
［4］ 赵浩如，郜凤香．葛根总黄酮的提取方法研究［J］． 中
成药，2000，22(11) :756-758．
657