全 文 ：* 国家科技支撑计划子课题(编号:2011BAI13B06)
＊＊ 通信作者 Tel:(023)68251225;E－mail:mminchen@ swu． edu． cn
第一作者 Tel:18580571013;E－mail:ejea@ swu． edu． cn
川木香药材 HPLC指纹图谱及含量测定方法研究*
胡益杰，刘爽，邓丽娜，陈敏＊＊
(西南大学药学院，重庆 400715)
摘要 目的:采用高效液相色谱法建立川木香药材的指纹图谱，并测定不同来源的 12批川木香根茎中木香烃内酯和去氢木香内
酯的含量。方法:采用WondaSil C18色谱柱(4. 6 mm ×150 mm，5 μm)，以 0. 1%甲酸水溶液(pH 3. 2)为流动相 A，甲醇为流动相
B，梯度洗脱，流速 1 mL·min －1，检测波长 280 nm(指纹图谱建立)、254 nm(含量测定)，柱温 25 ℃，进样量 10 μL。结果:以木香
烃内酯为参照峰确立了 40个共有峰，建立了川木香药材的 HPLC指纹图谱，共有峰面积达到总峰面积 90%以上，12 批次药材相
似度均在 0. 9以上;各批次药材中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量分别在 26. 28 ～56. 21 mg·g －1和 9. 40 ～27. 28 mg·g －1之间。
结论:该法经方法学验证，可为川木香药材质量分析、评价与控制提供依据。
关键词:川木香;灰毛川木香;HPLC指纹图谱;含量测定;相似度评价;质量控制;倍半萜内酯;木香烃内酯;去氢木香内酯
中图分类号:Ｒ 917 文献标识码:A 文章编号:0254－1793(2015)11－1946－07
doi:10. 16155 / j. 0254－1793． 2015． 11． 14
HPLC fingerprint and determination method of herbal
Vladimiria souliei (Franch．)Ling*
HU Yi－jie，LIU Shuang，DENG Li－na，CHEN Min＊＊
(School of Pharmaceutical Sciences，Southwest University，Chongqing 400715，China)
Abstract Objective:To establish the chromatographic fingerprint of roots of Vladimiria souliei(Franch．)Ling by
HPLC method，and perform the quantitative analysis of costunolide and dehydrocostuslactone in 12 batches of roots
of Vladimiria souliei(Franch．)Ling．Methods:The 12 batches of samples from different producing areas were ana-
lyzed by HPLC with a Wondasil C18 column(4. 6 mm ×150 mm，5 μm)，gradient eluted with mobile phase A(water
containing 0. 1% formic acid，pH 3. 2)－mobile phase B(methanol)at 25 ℃，and monitored with UV detector at
280 nm for fingerprint establishment and 254 nm for content determination． The flow rate was 1. 0 mL·min －1，and
the injection volume was 10 μL． Ｒesults:Forty common peaks were selected as the fingerprint peaks with costunolide
as the reference compound． The rate of common peak area to the total peak was higher than 90%，and the similarities
of the correlation coefficients were higher than 0. 9． The contents of costunolide and dehydrocostuslactone in different
batches ranged from 26. 28 to 56. 21 mg·g －1 and 9. 40 to 27. 28 mg·g －1，respectively． Conclusion:This
method has passed methodology validation and can provide the basis for the analysis，evaluation and control of quality
of V． souliei．
Keywords:Vladimiria souliei (Franch．)Ling;Vladimiria souliei (Franch．)Ling var． cinerea Ling;HPLC fingerprint;
content determination;similarity evaluation;quality control;sesquiterpene lactone;costunolide;dehydrocostuslactone
川木香为菊科川木香属植物川木香 Vladimiria
souliei(Franch．)Ling或灰毛川木香 Vladimiria souliei
(Franch．)Ling var． cinerea Ling 的干燥根［1］33，是主
产于西藏东部、四川西部及西北部［2］的道地药材。
川木香辛、苦、温，归脾、胃、大肠经，具有行气止痛、
和胃消胀、止泻之功效，主治腹胀肠鸣、食欲不振、腹
—6491— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2015，35(11)
痛、痢疾里急后重等胃肠道疾病［3］。现代药理研究
表明，川木香属植物具有抗菌、抗肿瘤、抗胃溃疡等
活性［4 － 6］。
迄今，已从川木香根中分离得到倍半萜、三萜、
木脂素等类型的化学成分［7 － 8］，其中以存在于挥发
油中的倍半萜内酯—木香烃内酯、去氢木香内酯为
主要活性成分［9］。一般用 GC－MS 作为定量测定挥
发油的方法［10］，近年来用 HPLC 测定已知的主要活
性成分含量的方法也多有报道［11 － 12］。中国药典
2010 年版仅以显微鉴别及使用川木香对照药材为
对照的薄层色谱鉴别作为质控指标［1］33。因此，本
实验使用川木香主要活性成分木香烃内酯和去氢木
香内酯作为指标，参照药典对木香药材的含量测定
方法［1］57，采用 HPLC法构建不同来源川木香药材的
指纹图谱，对 12 批木香药材评价了相似度，以及各
批次药材中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量，为
整体控制和评价川木香药材的质量提供依据。
1 仪器与材料
1. 1 仪器
Shimadzu Prominence 高效液相色谱仪(日本
Shimadzu公司，包括 CMD－20A 系统控制器、DGU－
20A3Ｒ在线脱气机、LC－20AD 双单元泵、SIL－20A 自
动进样器、CTO－20A 柱温箱、SPD－M20A 检测器);
AB135－S电子分析天平(瑞士Mettler Toledo公司)。
1. 2 试剂
木香烃内酯对照品(批号 46993，含量 ＞ 98%，
阿拉丁公司)，去氢木香内酯对照品(批号 111525－
201204，含量 ＞ 98%，中国食品药品检定研究院);甲
醇(色谱纯，美国 Fisher Scientific 公司);水(怡宝纯
净水，华润怡宝有限公司);甲醇、甲酸(均为分析
纯，成都科龙化工试剂厂)。
1. 3 药材
川木香 Vladimiria souliei(Franch．)Ling 干燥根
12 批药材于 2012 年收集，由西南大学陈敏教授
鉴定。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
采用 Wondasil C18色谱柱(150 mm × 4. 6 mm，
5 μm)，流动相 A为 0. 1%甲酸－水(pH 3. 2)，流动
相 B 为甲醇，梯度洗脱(0 ～ 5 min，15% B;5 ～ 10
min，15%B→25%B;10 ～ 20 min，25% B→35% B;20
～ 35 min，35%B→45%B;35 ～ 40 min，45% B→65%
B;40 ～ 55 min，65%B→70%B;55 ～ 65 min，70%B→
78%B;65 ～70 min，78%B→92%B;70 ～80 min，92%B)，
表 1 川木香样品来源
Tab． 1 Origins of 12 batches of Vladimiria souliei
(Franch．)Ling samples
编号(serial No．)
采集时间
(collecting date)
购买 /采集地(origin)
S1 2012． 9 四川甘孜(Ganzi，Sichuan)
S2 2012． 9 四川甘孜(Ganzi，Sichuan)
S3 2012． 9 四川甘孜(Ganzi，Sichuan)
S4 2012． 9 四川雅安(Ya’an，Sichuan)
S5 2012． 9 四川雅安(Ya’an，Sichuan)
S6 2012． 10 四川阿坝(Aba，Sichuan)
S7 2012． 10 四川阿坝(Aba，Sichuan)
S8 2012． 10 四川阿坝(Aba，Sichuan)
S9 2012． 10 四川阿坝(Aba，Sichuan)
S10 2012． 11 四川绵阳(Mianyang，Sichuan)
S11 2012． 11 四川阿坝(Aba，Sichuan)
S12 2012． 11 四川成都(Chengdu，Sichuan)
流速 1. 0 mL·min －1，检测波长 280 nm(指纹图谱建
立)、254 nm(含量测定)，柱温 25 ℃，进样量 10 μL，
记录时间 80 min。
2. 2 混合对照品溶液的制备
分别精密称取木香烃内酯对照品 13. 25 mg、去
氢木香内酯对照品 14. 35 mg，用色谱级甲醇溶解定
容至 5 mL，配制成木香烃内酯 2. 65 mg·mL －1、去氢
木香内酯 2. 87 mg·mL －1的混合对照品溶液，以
0. 22 μm微孔滤膜过滤，4 ℃保存备用。
2. 3 供试品溶液的制备
川木香药材粉碎，过 40 目筛，精密称定 1 g，置
于 50 mL三角烧瓶中，精密加入甲醇 20 mL，称量，
超声(200 W，40 kHz)提取 40 min，冷却后称量，用
甲醇补足减失的量，10 000 r·min －1离心 10 min，取
滤液 1 mL，用 0. 22 μm 微孔滤膜过滤，4 ℃保存
备用。
2. 4 川木香药材样品指纹图谱建立
2. 4. 1 指纹图谱及共有峰的标定 取不同来源的
12 批川木香药材，按“2. 3”项下方法制备供试品溶
液，按“2. 1”项下色谱条件精密吸取 10 μL 进样测
定。将 12 批川木香样品的 HPLC 数据以 AIA 格式
全谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统
(2004A)，对应的峰进行多点校对后进行色谱峰匹
配，得到共有峰 40 个。选择色谱图中 40 个主要峰
为校正点，建立川木香药材对照指纹谱图(图 1)及
12 批药材指纹图谱(图 2)，共有峰分别以 1 ～ 40 数
字为序号，以虚线连接。
—7491—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2015，35(11)
图 1 川木香药材对照指纹图谱
Fig． 1 The reference fingerprint of Vladimiria souliei
1 ～ 40．同表 2(same as Tab． 2)
图 2 12 批川木香药材的 HPLC指纹图谱
Fig． 2 HPLC fingerprints for 12 batches of Vladimiria souliei
根据图 2 匹配结果，中药色谱指纹图谱相似度
评价系统 2004A 版系统软件自动计算出色谱峰中
各峰的峰面积，利用 Excel 表格导出，得到表 2 数
据。表 2 中，12 批川木香药材的非共有峰面积占总
峰面积的百分比均不超过 10%，符合指纹图谱研究
的技术要求。根据图 2 的谱图信息得到 12 批川木
香药材的相对峰面积见表 3。
2. 4. 2 相似度比较 采用中药指纹图谱相似度评
价系统软件，对 12 批次川木香药材图谱进行相似度
比较。以生成的对照指纹图谱为模板，S1 ～ S12 共
12 批次样品与对照指纹之间相似度分别为 0. 945、
0. 918、0. 925、0. 950、0. 954、0. 956、0. 932、0. 931、
0. 909、0. 940、0. 937 和 0. 906。结果表明，12 批川木
香药材相似度值均大于 0. 9，表明目前市场上流通
的川木香商品药材都比较稳定;通过对照品可知
27、29 号峰为木香烃内酯、去氢木香内酯是指纹图
谱中峰面积最大的两个峰，也是川木香药材中主要
活性物质。反映了 12 批川木香药材在化学组成上
基本一致，相对含量有一定差异。
2. 4. 3 系统聚类分析 将各色谱峰相对于内参比
色谱峰的峰面积量化，采用欧氏距离(Euclidean)作
为样品的测度，组间连接法为聚类方法，运用“SPSS
统计分析软件 21. 0”对样品进行系统聚类分析，分
类结果见图 3。根据图 3 可以看出，当聚类重新标
定距离为 15 时，12 批川木香药材可以分为三大类，
S4、S5 聚为一类，S10、S12 聚为一类，其余聚为一类。
其中，S4、S5 均产自雅安，S10 和 S12 分别产自绵阳
和成都，而最后一大类产自阿坝和甘孜。最后一类
在标定聚类为 8 时可分为两亚类且每亚类具有相同
的产地。聚类结果显示了不同产地的样品间存在一
定差异，主要是由于产地的地理环境差异导致的成
分上的区别。
—8491— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2015，35(11)
表 2 共有峰与非共有峰相对峰面积
Tab． 2 Ｒelative peak area in common peaks and non－common peaks
峰号
(peak No．)
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12
1 0. 036 1 0. 030 4 0. 083 5 0. 018 8 0. 019 3 0. 030 8 0. 029 1 0. 022 3 0. 011 1 0. 208 5 0. 017 5 0. 040 9
2 0. 072 7 0. 069 6 0. 061 2 0. 086 5 0. 089 4 0. 040 3 0. 046 0 0. 038 8 0. 028 7 0. 078 0 0. 037 8 0. 029 9
3 0. 076 2 0. 075 0 0. 113 5 0. 053 4 0. 028 6 0. 047 6 0. 064 9 0. 0531 0. 011 5 0. 017 9 0. 009 6 0. 045 9
4 0. 972 6 0. 965 2 0. 861 3 0. 190 2 0. 169 3 0. 628 8 0. 645 1 0. 712 5 0. 720 4 1. 184 5 0. 940 0 1. 569 4
5 0. 182 8 0. 173 5 0. 129 1 0. 151 7 0. 147 2 0. 098 9 0. 103 2 0. 095 0 0. 083 7 0. 589 3 0. 127 9 0. 558 2
6 0. 085 6 0. 080 3 0. 082 2 0. 054 5 0. 056 6 0. 060 1 0. 060 2 0. 046 9 0. 047 1 0. 109 4 0. 073 8 0. 051 7
7 0. 074 5 0. 072 2 0. 064 0 0. 066 1 0. 054 1 0. 159 4 0. 060 2 0. 062 9 0. 107 3 0. 219 3 0. 151 8 0. 212 4
8 0. 083 3 0. 079 3 0. 083 6 0. 074 1 0. 074 9 0. 074 9 0. 070 7 0. 063 9 0. 047 5 0. 040 0 0. 065 8 0. 070 0
9 0. 078 5 0. 077 7 0. 085 7 0. 034 1 0. 035 9 0. 052 3 0. 049 9 0. 049 7 0. 060 7 0. 046 4 0. 070 9 0. 059 7
10 0. 017 7 0. 017 5 0. 020 3 0. 030 2 0. 030 3 0. 019 6 0. 019 7 0. 026 4 0. 033 3 0. 071 5 0. 048 0 0. 163 5
11 0. 042 3 0. 049 4 0. 061 7 0. 046 0 0. 042 7 0. 040 2 0. 042 2 0. 040 0 0. 043 1 0. 003 8 0. 031 8 0. 007 9
12 0. 051 7 0. 054 8 0. 068 2 0. 140 2 0. 139 0 0. 045 4 0. 047 0 0. 045 2 0. 038 1 0. 0840 0. 054 5 0. 276 2
13 0. 156 1 0. 150 1 0. 165 0 0. 286 3 0. 268 2 0. 115 8 0. 112 5 0. 104 6 0. 090 8 0. 827 8 0. 128 0 0. 548 7
14 0. 119 1 0. 109 2 0. 045 8 0. 3333 0. 286 7 0. 072 6 0. 076 8 0. 063 3 0. 038 5 0. 563 3 0. 059 4 0. 442 2
15 0. 035 4 0. 036 4 0. 035 2 0. 0701 0. 057 8 0. 046 8 0. 047 4 0. 044 4 0. 037 2 0. 180 7 0. 048 4 0. 206 3
16 0. 019 8 0. 023 1 0. 031 3 0. 0904 0. 091 2 0. 030 2 0. 030 5 0. 027 5 0. 024 8 0. 149 7 0. 042 1 0. 174 5
17 0. 154 6 0. 138 8 0. 092 2 0. 2852 0. 269 4 0. 093 2 0. 088 3 0. 094 7 0. 079 7 0. 717 7 0. 095 5 0. 599 9
18 0. 035 9 0. 041 8 0. 052 9 0. 0341 0. 033 3 0. 035 5 0. 034 2 0. 030 1 0. 030 8 0. 016 8 0. 034 5 0. 014 3
19 0. 019 8 0. 028 6 0. 033 5 0. 0607 0. 072 3 0. 023 9 0. 025 0 0. 027 5 0. 027 2 0. 032 0 0. 024 5 0. 005 7
20 0. 082 9 0. 111 7 0. 160 5 0. 1952 0. 261 5 0. 169 7 0. 195 9 0. 103 5 0. 104 2 0. 329 8 0. 095 6 0. 179 8
21 0. 099 9 0. 137 4 0. 191 4 0. 1387 0. 201 4 0. 083 3 0. 086 7 0. 092 9 0. 096 0 0. 135 1 0. 063 6 0. 014 6
22 0. 147 2 0. 219 7 0. 332 1 0. 1594 0. 264 4 0. 172 1 0. 182 0 0. 153 6 0. 153 0 0. 134 5 0. 139 6 0. 118 4
23 0. 031 4 0. 100 8 0. 095 1 0. 1119 0. 234 4 0. 057 7 0. 063 0 0. 085 8 0. 085 4 0. 018 8 0. 003 5 0. 007 5
24 0. 062 0 0. 062 0 0. 058 4 0. 0584 0. 088 0 0. 049 2 0. 049 2 0. 081 8 0. 080 1 0. 039 7 0. 051 6 0. 067 9
25 0. 024 7 0. 027 2 0. 021 4 0. 0622 0. 066 5 0. 021 8 0. 021 0 0. 034 6 0. 057 1 0. 027 3 0. 039 8 0. 041 0
26 0. 029 5 0. 029 7 0. 113 5 0. 0934 0. 091 9 0. 025 7 0. 025 3 0. 036 4 0. 034 1 0. 030 3 0. 018 3 0. 024 0
27 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 0000 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0
28 0. 227 0 0. 236 0 0. 388 3 0. 2211 0. 222 0 0. 116 9 0. 116 1 0. 153 8 0. 150 9 0. 113 2 0. 143 6 0. 183 2
29 0. 996 1 0. 994 6 1. 086 0 1. 1734 1. 175 2 0. 871 8 0. 865 9 0. 789 4 0. 786 8 0. 671 5 0. 847 1 0. 973 6
30 0. 059 2 0. 063 9 0. 088 6 0. 0316 0. 031 1 0. 053 2 0. 044 8 0. 038 9 0. 038 8 0. 018 4 0. 012 7 0. 037 0
31 0. 044 4 0. 046 9 0. 046 6 0. 0825 0. 082 3 0. 039 4 0. 042 8 0. 036 5 0. 033 4 0. 037 9 0. 036 0 0. 043 8
32 0. 048 4 0. 053 7 0. 056 2 0. 0306 0. 029 5 0. 033 4 0. 041 1 0. 049 2 0. 050 3 0. 026 7 0. 015 7 0. 030 7
33 0. 021 1 0. 012 0 0. 009 1 0. 0546 0. 036 5 0. 010 7 0. 008 9 0. 007 5 0. 009 0 0. 007 2 0. 008 1 0. 005 6
34 0. 099 0 0. 024 1 0. 033 8 0. 1125 0. 203 5 0. 035 0 0. 030 9 0. 039 2 0. 016 8 0. 022 3 0. 033 1 0. 062 1
35 0. 092 6 0. 029 3 0. 070 0 0. 0782 0. 080 4 0. 045 2 0. 049 4 0. 047 6 0. 011 5 0. 030 2 0. 037 2 0. 074 1
36 0. 5512 0. 283 5 0. 504 0 0. 6390 0. 647 0 0. 436 0 0. 432 1 0. 357 9 0. 278 7 0. 336 6 0. 296 6 0. 573 7
37 0. 324 3 0. 170 9 0. 096 9 0. 1447 0. 156 7 0. 061 4 0. 058 9 0. 062 4 0. 023 5 0. 026 4 0. 037 6 0. 088 7
38 0. 044 2 0. 018 8 0. 041 2 0. 0861 0. 085 0 0. 031 5 0. 030 5 0. 029 8 0. 009 2 0. 015 3 0. 015 8 0. 035 7
39 0. 052 3 0. 024 3 0. 039 6 0. 0593 0. 064 2 0. 043 3 0. 041 1 0. 045 1 0. 027 1 0. 0253 0. 026 2 0. 045 6
40 0. 119 2 0. 084 3 0. 094 1 0. 1652 0. 160 8 0. 092 6 0. 097 4 0. 083 5 0. 070 2 0. 050 7 0. 077 3 0. 100 3
—9491—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2015，35(11)
表 3 12 批次川木香特征指纹图谱的相对峰面积
Tab． 3 Ｒelative areas of common peaks
for 12 batches of Vladimiria souliei
编号
(serial No．)
总共有峰面积
(total area of
common peaks)
总非共有峰面积
(total area of
non－common peaks)
相对总共有峰面积
(relative total area
of common peaks)/%
S1 4 463 000. 09 142 783. 175 96. 90
S2 4 641 477. 121 299 529. 919 93. 94
S3 3 874 553. 938 264 781. 43 93. 60
S4 3 976 269. 58 364 062. 185 91. 61
S5 3 965 275. 46 346 242. 851 91. 97
S6 6 035 566. 62 426 824. 033 93. 40
S7 6 146 126. 07 394 779. 128 93. 96
S8 5 067 331. 384 457 537. 576 91. 72
S9 4 882 031. 377 330 672. 781 93. 66
S10 6 624 074. 511 484 856. 093 93. 18
S11 3 615 242. 516 215 183. 663 94. 38
S12 6 562 992. 938 395 928. 584 94. 31
2. 5 含量测定
2. 5. 1 线性关系考察 分别精密吸取“2. 2”项下
配制木香烃内酯和去氢木香内酯混合对照品溶液
2、4、6、8、10、12 μL 进样分析，在 254 nm 下记录色
谱图，木香烃内酯和去氢木香内酯保留时间分别为
52. 02 min和 54. 12 min(图 4)。以峰面积值为纵坐
标，进样量(μg)为横坐标作图，得到木香烃内酯和
去氢木香内酯回归方程:
Y = 1. 740 × 105X + 6. 968 × 103 r = 0. 999 1
Y = 4. 021 × 105X + 3. 651 × 105 r = 0. 999 3
结果表明，木香烃内酯和去氢木香内酯进样量
分别在 5. 30 ～ 31. 80 μg 和 5. 74 ～ 34. 44 μg 范围内
线性关系良好。
2. 5. 2 检测限和定量限 取“2. 2”项下配制木香
烃内酯和去氢木香内酯混合对照品溶液适量，用甲
醇逐级稀释，分别以基线噪声的 10 倍(S /N≈10)和
基线噪声的 3 倍(S /N≈3)作为定量限和检测限。
在选定色谱条件下，木香烃内酯和去氢木香内酯的
定量限分别为 0. 191 μg和 0. 028 μg，检测限分别为
0. 066 μg和 0. 009 μg。
图 3 川木香药材指纹图谱的聚类分析
Fig． 3 Cluster analysis for HPLC fingerprints of Vladimiria souliei
图 4 木香烃内酯和去氢木香内酯对照品 HPLC图
Fig． 4 HPLC chromatogram of hybrid reference substance of costunolide and dehydrocostuslactone
2. 5. 3 精密度试验 精密吸取同一批供试品溶液
10 μL，按“2. 1”项下色谱条件连续进样 6 次。测得
木香烃内酯和去氢木香内酯峰面积，其 ＲSD分别为
0. 79%和 0. 89%，表明仪器精密度良好。
2. 5. 4 稳定性试验 取同一批供试品溶液，，分别
在 0、4、8、16、24 h各精密吸取 10 μL，按“2. 1”项下
色谱条件进行测定。测得木香烃内酯和去氢木香内
酯峰面积，计算其 ＲSD 分别为 1. 6%和 1. 5%，结果
—0591— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2015，35(11)
表明供试品溶液在 24 h内稳定性良好。
2. 5. 5 重复性试验 取同一批样品 6份，按“2. 3”项
下方法，制备成供试品溶液，按“2. 1”项下色谱条件进
样。测得木香烃内酯和去氢木香内酯含量平均值分
别为 41. 22 mg·g －1和 18. 86 mg·g －1，计算其 ＲSD分
别为 2. 0%和 2. 3%，表明该法重复性良好。
2. 5. 6 加样回收率试验 精密称取木香烃内酯对照
品 19. 85 mg，去氢木香内酯对照品 13. 09 mg，置
10 mL量瓶中，加适量甲醇超声使溶解并稀释至刻
度，摇匀，即得混合对照品溶液;取已知含量(每 1 g
中含木香烃内酯 40. 23 mg，去氢木香内酯 18. 64 mg)
的同一川木香样品 6 份，每份约 0. 1 g，分别置于
50 mL三角瓶中，精密混合对照品溶液 1. 5 mL，制备
供试溶液，按“2. 1”项下色谱条件分别进样10 μL，计
算回收率。结果木香烃内酯和去氢木香内酯平均回
收率(n = 6)分别为 100. 0%和 100. 0%，ＲSD 分别为
1. 2%和 1. 3%，表明该方法的回收率良好。
2. 5. 7 耐用性试验 精密吸取同一批供试品溶液
10 μL，按“2. 1”项下色谱条件分别用 Wondasil C18
(150 mm ×4. 6 mm，5 μm)、Kromasil C18(150 mm ×
4. 6 mm，5 μm)和 YMC－ Pack ODS－ A(150 mm ×
4. 6 mm，5 μm)3 种品牌的色谱柱进行分离测定，结
果无明显差别。
2. 5. 8 木香烃内酯和去氢木香内酯的含量测定
精密吸取供试品溶液 10 μL，按“2. 1”项下色谱条件
进样测定，以外标法计算含量，结果见表 4。结果表
明 12 批川木香药材中木香烃内酯和去氢木香内酯
的含量分别在 26. 28 ～ 56. 21 mg·g －1和 9. 40 ～
27. 28 mg·g －1之间。
表 4 川木香药材木香烃内酯和去氢木香
内酯的含量(mg·g －1)
Tab． 4 Contents of costunolide and
dehydrocostuslactone of Vladimiria souliei
编号
(serial No．)
木香烃内酯
(costunolide)
去氢木香内酯
(dehydrocostuslactone)
S1 50. 53 27. 28
S2 39. 81 21. 41
S3 26. 28 19. 85
S4 40. 23 18. 64
S5 40. 64 20. 31
S6 56. 21 26. 62
S7 44. 26 16. 54
S8 42. 10 15. 56
S9 42. 57 21. 96
S10 31. 45 17. 39
S11 28. 02 9. 40
S12 39. 97 21. 49
3 讨论
3. 1 流动相的选择
为保证川木香药材含量的准确性，减少多次提
取萃取间的误差，本文采用甲醇作为提取溶剂。试
验中考察了甲醇－水、乙腈－水、甲醇－甲酸水不同
pH等多种流动相系统，结果表明采用甲醇－0. 1%
甲酸水(pH 3. 2)进行梯度洗脱，各共有峰之间能达
到基线分离，分离度较好。
3. 2 检测波长的确定
本文采用 DAD 检测器对川木香药材的检测波
长进行考察，得到川木香药材在 280 nm各成分在选
定的流动相体系中有较大吸收，且色谱峰数目最多，
基本能概括所测成分的全貌。254 nm 处色谱峰数
目相对较少，但木香烃内酯和去氢木香内酯呈现较
大吸收，故采用 280 nm作为指纹图谱建立的检测波
长，254 nm作为含量测定的检测波长。
3. 3 川木香药材指纹图谱的建立
本文采用 ＲP－HPLC法建立了川木香药材根茎
部位指纹图谱，标定了 40 个共有峰，通过相似度分
析，12 批川木香药材相似度均达到 0. 9 以上，表明
12 批川木香药材的化学成分组成较一致;指纹图谱
中的 40 个共有峰相对保留时间基本一致，相对面积
略有差异，表明批次间各成分种类高度相似而木香
烃内酯和去氢木香内酯含量有一定差异;聚类分析
结果表明于收集不同地方的药材其产地可能相近或
相同。同时本文还利用指纹图谱色谱条件，同时测
定了药材中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量，不
同批次样品中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量分
别在 26. 28 ～ 56. 21 mg·g －1、9. 40 ～ 27. 28 mg·g －1
之间。
实验数据显示各批次药材木香烃内酯和去氢木
香内酯的含量均在线性范围之内，样品间无显著性
差异。不同来源的川木香药材表现出较高的相似
度，说明目前市场上流通的川木香药材质量比较
稳定。
3. 4 小结
指纹图谱是目前控制中药材质量最有效、最
直观的手段之一。本文利用 ＲP－HPLC 法建立了
川木香药材指纹图谱，并同时用于测定木香烃内
酯和去氢木香内酯的含量，该方法稳定、可靠、重
复性好，可为川木香药材质量分析、评价与控制提
供依据。
—1591—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2015，35(11)
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