全 文 ：表 3 菊花样品含量测定结果(n =3)
样品 木犀草素
7-O-β-D-
葡萄糖苷 /%
金合欢素 7-O-β-D-
葡萄糖苷 /%
木犀草素
/%
金合欢素
/%
总含量
/%
亳菊(安徽亳州) 0. 0149 0. 0845 0. 0181 0. 0578 0. 1753
滁菊(安徽滁州) 0. 0333 0. 0813 0. 0289 0. 0109 0. 1544
贡菊(安徽黄山) 0. 0495 0. 0083 0. 0399 0. 0037 0. 1014
杭黄菊(江苏盐城) 0. 4531 0. 0189 0. 0212 0. 0057 0. 4989
怀菊(河南武陟) 0. 0131 0. 0511 0. 0477 0. 0992 0. 2111
川菊(四川中江) 0. 0310 0. 1341 0. 0680 0. 0487 0. 2818
祁菊(河北安国) 0. 2470 － 0. 3343 0. 0174 0. 7740
济菊(山东嘉祥) 0. 0191 0. 0367 0. 0230 0. 0477 0. 1265
3. 3 由测定结果可知，8 种药用菊花中木犀草素
7-O-β-D-葡萄糖苷以杭黄菊含量最高，金合欢素 7-
O-β-D-葡萄糖苷以川菊含量最高，木犀草素以祁菊
含量最高，金合欢素以怀菊最高;样品中 4 种黄酮总
含量以祁菊最高，而 2010 年版中国药典收载的 4 种
药用菊花中的 4 个成分整体含量较低;而传统认为
亳菊质量最优，其中的金合欢素的含量明显高于其
他 3个药用菊花品种，金合欢素的含量是否与菊花的
质量间存在一定的相关性还有待进一步的探讨研究。
致谢:本课题得到美国许氏基金会的资金资助。
参 考 文 献
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广东钩藤属 4 种植物生物碱含量的 UV、HPLC测定
严愉妙1，雷晓林2，方丽华2，莫志贤1*
(1. 南方医科大学中医药学院，广东 广州 510515;2. 东方药林药业有限公司，广东 广州 510515)
摘要 目的:建立 UV、HPLC测定广东钩藤属 4 种植物的总碱以及钩藤碱、异钩藤碱含量的方法，比较其不同
品种、不同部位间有效成分的含量变化。方法:以 UV测定总碱含量，检测波长为 242 nm;以 HPLC 测定钩藤碱、异
钩藤碱含量，采用 Hypersil ODS C18(4. 6 mm × 200 mm，5 μm)色谱柱，甲醇-水(含 0. 50%三乙胺，冰乙酸调 pH 6. 33)
=63∶ 37为流动相，流速为 0. 80 mL /min，进样量 5. 00 μL，柱温为室温，245 nm 波长下检测分析。结果:钩藤碱、异
钩藤碱在 0. 02 ～ 5. 00 μg范围内线性关系良好，钩藤碱的 r1 = 0. 9999，异钩藤碱的 r2 = 1. 0000，平均回收率分别为
98. 52%、99. 12%(RSD1 = 2. 05%，RSD2 = 2. 17%) ;总碱含量在不同品种、不同部位里存在差异性，其线性范围为
6. 00 ～ 14. 00 μg /mL，r = 0. 9989。结论:该法准确，操作简便、快速，重复性较好，精密度较高，可用于对广东钩藤属
植物不同品种、不同部位的总碱以及钩藤碱、异钩藤碱含量测定。
关键词 钩藤属;总碱;钩藤碱;异钩藤碱
中图分类号:R284. 1 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2011)10-1558-05
收稿日期:2011-05-04
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30828033)
作者简介:严愉妙(1985-) ，女，硕士研究生，主要从事植物药学及药理学研究;Tel:13427522129，E-mail:yan62841106@ 163. com。
* 通讯作者:莫志贤，Tel:020-61648261，E-mail:cherrymo@ fimmu. com。
·8551· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 10 期 2011 年 10 月
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2011.10.008
茜草科植物钩藤 Uncaria rhynchophylla(Miq. )
Miq. ex Havil. 为常用中药，味甘，性凉，归肝、心包
经，具有显著的息风止痉、清热平肝等功效〔1〕，对中
枢神经系统和心血管系统具有较强的抑制作用，能
明显降低大脑皮层的兴奋性，显著降低血压，并表现
明显的镇静、安眠、解痉等作用〔2〕，其有效成分是生
物碱，主要含有以下 5 种〔3，4〕:钩藤碱(rhynchophyl-
line)、异钩藤碱(isorhynchophylline)、去氢钩藤碱
(corynoxeine)、去氢异钩藤碱(isocorynoxeine)、柯南
因(corynantheine)。钩藤属植物品种较多，为多源
中药材，全世界约 70 种〔5〕，我国有 14 种〔6〕，在广西、
广东、云南、四川、贵州、湖北、湖南、海南、西藏等地
均有分布。广东的钩藤资源丰富，品种较多，共有 6
种［7］，包括钩藤、大叶钩藤、毛钩藤、侯钩藤、攀枝钩
藤和无柄果钩藤，主要分布于粤西北一带。本研究
选取广东产钩藤属植物大叶钩藤、钩藤、毛钩藤、侯
钩藤 4 个品种，采用 UV、HPLC 对其进行分析，测定
其总碱、钩藤碱及异钩藤碱的含量，为合理评价该属
药用植物资源提供可靠实验依据。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 753N 紫外-可见分光光度计(上海菁
华科技仪器有限公司) ;UltiMate-3000 高效液相色谱
仪(美国戴安公司) ;BS223S-电子天平(德国) ;
PHSJ-4A型 pH 计(广州市金穗达科学仪器有限公
司) ;可控硅恒温水浴锅(上海锦屏仪器仪表有限公
司) ;KQ-250DB型数控超声波清洗器(江苏昆山市
超声仪器有限公司)。
1. 2 材料 4 种钩藤药材均采自广东罗定市，经
南方医科大学中药鉴定中心马骥教授鉴定为茜草科
钩藤属植物钩藤 Uncaria rhynchophylla (Miq. )Miq.
ex Havil. 、大叶钩藤 Uncaria macrophylla Wall. 、毛钩
藤 Uncaria hirsute Havil. 、侯钩藤 Uncaria rhyncho-
phylloides How. 。钩藤碱、异钩藤碱对照品(Wako
Pure Chemical Industries，Ltd. )。甲醇为色谱纯;三
乙胺、冰乙酸、无水乙醇、无水乙醚、氨水、盐酸均为
国产分析纯。
2 方法与结果
2. 1 总碱含量测定〔8〕 钩藤属植物均含有吲哚类
生物碱，根据其各个生物碱基本结构相似，在紫外区
有共同吸收的特点，可用 UV测定总碱含量。
2. 1. 1 对照品溶液的配制:以钩藤碱为对照品，精
密称取 1. 00 mg，用甲醇溶解配成浓度为 1. 00 mg /
mL，低温保存，待测。
2. 1. 2 最大吸收波长的选择:精密吸取 200. 00
μL对照品溶液，用甲醇稀释至浓度为 40. 00 μg /
mL。于紫外分光光度计 200 ～ 800 nm 下进行波长
扫描，钩藤碱最大吸收峰的波长为 242 nm。
2. 1. 3 标准曲线的制备:精密吸取 1. 00 mg /mL 的
钩藤碱对照品溶液，稀释配成 5 个浓度:6. 00、8. 00、
10. 00、12. 00、14. 00 μg /mL。在检测波长 242 nm 处
进行检测，以浓度(C)为横坐标，吸光度(A)为纵坐
标，绘制标准曲线，回归方程为:A = 0. 0573C －
0. 0401，r =0. 9989。线性范围为 6. 00 ～14. 00 μg /mL。
2. 1. 4 样品溶液的制备与样品的测定:分别称取
上述 4 种药材的带钩茎枝粗粉，藤枝(不带钩的茎
枝，下同)粗粉和叶粗粉各一份，浓氨水润湿，分别
加入 20 倍量无水乙醇，浸泡过夜，超声提取 2 次，每
次 40 min，过滤，合并滤液，水浴(80 ～ 90 ℃)挥干，
然后用 2%盐酸溶液溶解干燥物，过滤除去不溶于
酸水的杂质，得酸水层，用浓氨水调 pH9 ～ 11，将之
转移至分液漏斗，用乙醚多次萃取至醚层无色，合并
醚层，挥干，甲醇定容至 5. 00 mL。精密移取 50 μL
原液，稀释 100倍，在检测波长为 242 nm处测得吸光
度值，以钩藤碱计算其总碱的含量，结果见表 1。
表 1 4 种钩藤植物不同部位总碱含量(%)
种类
不同部位
带钩茎枝 藤枝 叶
大叶钩藤 0. 478 0. 177 0. 444
钩藤 0. 330 0. 207 0. 132
毛钩藤 0. 379 0. 060 0. 042
侯钩藤 0. 318 0. 039 0. 034
2. 2 HPLC测定钩藤碱与异钩藤碱的含量〔9，10〕
2. 2. 1 色谱条件:依利特 Hypersil ODS C18柱(4. 6
mm ×200 mm，5 μm) ;甲醇-水(含 0. 50%三乙胺，冰
乙酸调 pH6. 33)= 63∶ 37 为流动相;流速 0. 80 mL /
min;进样量为 5. 00 μL;柱温为室温;检测波长为
245 nm。
2. 2. 2 对照品溶液的制备:精密称取钩藤碱、异钩
藤碱对照品各 5. 00 mg，用流动相溶解并稀释至 10
mL，摇匀，即得 0. 50 mg /mL 对照品溶液，置于 4 ℃
冰箱保存，临用前用流动相稀释配成所需浓度。
2. 2. 3 样品溶液的制备:精密称取大叶钩藤藤枝
粗粉和叶粗粉各一份，浓氨水润湿，分别加入 20 倍
量的无水乙醇浸泡过夜，超声提取 2 次，每次 40
min，过滤，合并过滤液，80 ～ 90℃水浴挥干，然后用
2%盐酸溶液溶解干燥物，过滤除去不溶于酸水的杂
质，得酸水层，用浓氨水调 pH9 ～ 11，将之转移至分
液漏斗，用乙醚多次萃取至醚层无色，合并醚层，水
浴挥干，再用流动相溶解定容至 5 mL。冰箱保存，
·9551·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 10 期 2011 年 10 月
备用。
2. 2. 4 系统适用性试验:分别吸取钩藤碱与异钩
藤碱对照品混合溶液及大叶钩藤(叶)样品溶液、大
叶钩藤(藤枝)样品溶液各 5 μL，在上述的色谱条件
下测定，钩藤碱、异钩藤碱与其相邻峰的基线达到良
好的分离，见图 1。
图 1 对照品(A)、大叶钩藤叶(B)与
大叶钩藤藤枝(C)的 HPLC图
1. 钩藤碱 2. 异钩藤碱
2. 2. 5 线性关系考察:精密吸取钩藤碱(200. 00
μg /mL)、异钩藤碱(200. 00 μg /mL)对照品混合溶
液 0. 10、5. 00、10. 00、15. 00、20. 00、25. 00 μL，按
“2. 2. 1”项下色谱条件测定峰面积。以峰面积积分
值(Y)为纵坐标，钩藤碱和异钩藤碱的进样量(X)
为横坐标，测定结果进行线性回归计算，得到回归方
程:Y1 = 58. 9X － 0. 7164，r1 = 0. 9999，Y2 = 81. 149X2
+ 2. 0135，r2 = 1. 0000。结果表明，钩藤碱、异钩藤
碱在 0. 02 ～ 5. 00 μg范围内线性关系良好。
2. 2. 6 精密度试验:精密吸取钩藤碱和异钩藤碱
对照品混合溶液 5 μL，重复进样 6 次，测定色谱面
积，计算钩藤碱的 RSD 为 0. 94%，异钩藤碱的 RSD
为 1. 38%。
2. 2. 7 稳定性试验:精密吸取大叶钩藤(叶)样品
溶液 5 μL，按 0、2、4、6、8 h的时间间隔，分别进样分
析，测定色谱峰面积，计算钩藤碱的 RSD为 1. 49%，
异钩藤碱的 RSD为 5. 29%。结果表明，样品溶液在
8 h内稳定。
2. 2. 8 重复性试验:精密称取大叶钩藤(叶)药材
6 份，按照样品溶液制备方法制备，依法进样测定峰
面积，将之代入回归方程计算得钩藤碱的平均含量
为 0. 1613 mg /g，RSD为 0. 75%;异钩藤碱的平均含
量为 0. 0706 mg /g，RSD为 1. 08%。
2. 2. 9 加样回收率试验:精密称取大叶钩藤(叶)
药材 6 份，置于锥形瓶，分别精密加入混合对照品溶
液 0. 80 mL(0. 50 mg /mL) ，按照样品溶液制备方法
制备并测定。本方法钩藤碱的加样回收率在
94. 87% ～ 99. 90% 之间，平均回收率是 98. 52%，
RSD为 2. 05%;异钩藤碱的加样回收率 96. 18% ～
102. 73%，平均回收率是 99. 12%，RSD 为 2. 17%。
结果见表 2。
2. 2. 10 样品的测定:分别取广东 4 种钩藤植物大
叶钩藤、钩藤、侯钩藤、毛钩藤的藤枝和叶两个部位，
按照样品溶液制备方法及色谱条件进行测定，根据
回归方程计算含量，结果见表 3。
3 分析与讨论
3. 1 样品溶液的制备 在样品制备过程中，比较
了热回流提取法、超声提取法、冷浸法 3 种不同提取
方法以及多种提取溶剂(石油醚、80%乙醇、无水乙
醇、甲醇、乙醚、氯仿)的提取效果。结果发现，在使
用相同溶剂提取时，超声法提取的效果与热回流提
取法相近、优于冷浸提取法;不同溶剂提取时，综合
考虑，无水乙醇较为合适。本实验确立采用 20 倍量
的无水乙醇超声提取 2 次，每次 40 min，为样品溶液
的提取方法。
3. 2 UV测定钩藤属植物总碱含量方面的讨论
3. 2. 1 不同品种的总碱含量的变化:中国药典收
载的钩藤药用部位为带钩茎枝，因此，本实验在比较
钩藤不同品种总碱含量的研究中，采用药典规定的
药用部位———带钩茎枝。由测定结果可知，广东钩
藤属 4 种植物的总碱含量具有差异性，其中大叶钩
藤总碱含量最高，达 0. 478%;其次为毛钩藤，总碱
含量 0. 379%;再次是钩藤和侯钩藤，总碱含量分别
为 0. 330%和 0. 318%，两者含量较相近。
3. 2. 2 同一品种不同部位总碱含量变化:钩藤的
传统药用部位带钩茎枝在整株植物中所占的比例仅
仅为 20% ～ 30%，剩余 70% ～ 80%的藤枝和叶，并
·0651· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 10 期 2011 年 10 月
未得到充分利用，造成极大的资源浪费。本实验检
测了广东 4 个钩藤品种的藤枝和叶总碱含量，结果
表明，藤枝和叶的总碱含量也较高，其价值不容忽
视。叶中总碱含量以大叶钩藤最高，达 0. 444%，比
其藤枝所含总碱量还高。叶中总碱含量从高到低依
次为大叶钩藤 ＞钩藤 ＞毛钩藤 ＞侯钩藤;而藤枝中
总碱含量为钩藤 ＞大叶钩藤 ＞毛钩藤 ＞侯钩藤，以
钩藤藤枝含量最高，为 0. 207%。研究表明，钩藤属
植物叶和藤枝的总碱含量比较丰富，具有较大的开
发利用价值，尤其是大叶钩藤的叶，资源丰富，一年
可多次采摘，而无需采伐整株植物，既保护了药材资
源，又可持续利用。
表 2 钩藤碱、异钩藤碱加样回收率实验(n =6)
测定
成分
取样量
/g
理论值
/mg
加入量
/mg
实测值
/mg
回收率
/%
平均回收率
/%
RSD
/%
钩藤碱 5. 006 0. 807 0. 400 1. 205 99. 32 98. 52 2. 05
5. 012 0. 808 1. 208 99. 90
5. 008 0. 808 1. 207 99. 73
5. 003 0. 807 1. 186 94. 87
5. 004 0. 807 1. 197 97. 44
5. 027 0. 811 1. 210 99. 86
异钩藤碱 5. 006 0. 353 0. 400 0. 748 98. 67 99. 12 2. 17
5. 012 0. 354 0. 765 102. 73
5. 008 0. 353 0. 751 99. 42
5. 003 0. 353 0. 738 96. 18
5. 004 0. 353 0. 746 98. 14
5. 027 0. 355 0. 753 99. 59
表 3 广东 4 种钩藤植物不同部位的
钩藤碱、异钩藤碱含量 /(mg/g)
种类
钩藤碱含量
藤枝 叶
异钩藤碱含量
藤枝 叶
大叶钩藤 0. 1502 0. 1632 0. 0471 0. 0694
钩藤 0. 0486 0. 0979 0. 0065 0. 0323
毛钩藤 0. 0288 0. 0021 － －
候钩藤 0. 0006 0. 0008 － －
注:“ －”表示其含量在检测限下
3. 3 HPLC检测钩藤属植物钩藤碱、异钩藤碱含量
方面的讨论
3. 3. 1 钩藤碱和异钩藤碱同属于吲哚类生物碱，
天然植物中常共存，两者结构极为相似，极性差异
小，不易分离，此外，在极性溶剂中，两者极不稳定，
易相互转化。久置会降解，较难保存。从化学性质
角度而言，钩藤碱和异钩藤碱与酸反应生成盐，其稳
定性增加〔11〕，故本实验采用偏酸性的流动相对两者
对照品进行溶解、稀释定容，以利检测分析。
3. 3. 2 在选用流动相比例时，曾考察了甲醇-水
(55∶ 45)、(48∶ 52)、(60∶ 40)、(70∶ 30)、(95∶ 5)等多
个流动相配比，研究发现，单以甲醇-水为流动相组
成时，峰形较差，或有拖尾、前伸，因此无法有效将峰
分开。随后在流动相体系中加入 0. 50%三乙胺，并
用冰乙酸调 pH值，上述状况得到明显改善。因此，
在甲醇-水(0. 50%三乙胺)体系上再次进行考察上
述不同的流动相配比、不同 pH 条件下的两峰分离
效果，发现 pH 值对目标峰的影响很大，当控制 pH
6. 1 ～ 6. 4 时，峰形对称且达到良好分离，柱效较高，
因此本实验选择的合理流动相为:甲醇-水(含
0. 50%三乙胺，冰乙酸调 pH 6. 33)= 63∶ 37，进样体
积 5. 00 μL，流速为 0. 80 mL /min。此条件下基线平
稳，能够实现目标组分的良好分离，且分离度高、保
留时间适中、重复性好。
综上所述，采用 UV和 HPLC测定广东钩藤属 4
种植物总碱以及钩藤碱、异钩藤碱含量，方法简便、
准确、可靠，且重现性良好，可为广东钩藤属植物的
药用质量评价提供可靠的实验依据。
参 考 文 献
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收稿日期:2011-03-16
基金项目:国家自然科学基金(30971172) ;广东省教育部产学研结合项目(2009B090300024)
作者简介:吴有莲(1962-) ，女，制药工程师，主要从事药学研究;Tel:0760-88581903，E-mail:fzb@ nhtp. gov. cn。
* 通讯作者:李青南，Tel:020-39352589，E-mail:qingnanli@ sina. com。
·药理·
制何首乌对成骨细胞的作用及其作用机理的研究
吴有莲1，杨璧宇2，高建林2，陈 珺2，卢 丽2，曾昭利3，秦中华3，江汝彬2，李青南2*
(1. 中山市健康科技产业基地发展有限公司，广东 中山 528400;2. 广东药学院生命科学与生物制药学院，
广东 广州 510006;3. 东莞万成制药有限公司，广东 东莞 523040)
摘要 目的:探讨制何首乌单味药含药血清对成骨细胞(Ob)功能的影响，并探讨其作用机理。方法:通过血清
药理学制备制何首乌单味药含药血清，采用 SD新生大鼠头盖骨分离诱导成成骨细胞，应用 CCK-8 法、碱性磷酸酶
(ALP)法，检测制何首乌含药血清对 Ob增殖和分化的功能，同时通过 RT-PCR 方法检测含药血清对 Ob 成骨相关
基因表达的影响。结果:制何首乌含药血清能促进 Ob增殖，浓度 10%、20%、30%促增殖作用显著(P ＜ 0. 01) ，组间
无浓度相关性;5%和 10%的含药血清能下调翻译后水平 ALP，但高浓度无此作用。同时，制何首乌含药血清上调
成骨相关基因(OC、ALP、Cbfα1)mRNA表达(P ＜ 0. 05)。结论:制何首乌单味药含药血清具有刺激体外培养 Ob的
增殖作用，其作用机理可能与上调 Ob成骨相关基因的表达有关。
关键词 制何首乌;成骨细胞;血清药理学
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2011)10-1562-04
Effects and Mechanism of Drug Serum of Prepared
Radix Polygoni Multiflori on Rat Osteoblast in vitro
WU You-lian1，YANG Bi-yu2，GAO Jian-lin2，CHEN Jun2，LU Li2，Zeng Zhao-li3，Qin Zhong-hua3，JIANG Ru-bin2，LI Qing-nan2
(1. Zhongshan Health Technology Park Development Co.，Ltd.，Zhongshan 528400，China;2. The Center for New Drug Research，Col-
lege of Life Science and Bio-pharmaceutical，Guangdong College of Pharmacy，Guangzhou 510006，China;3. Dongguan Super Success
Pharmaceutical Co.，Ltd.，Dongguan 523040，China)
Abstract Objective:To study the effect of drug serum of prepared Radix Polygoni Mutiflori on rat osteoblast(Ob)and its mecha-
nism. Methods:The animal serum was prepared by serum pharmacology means. The cells were getting by separating and inducing the
SD neonatal ratt skull bone. The proliferation and differentiation of Ob were detected by CCK-8，alkaline phosphatase (ALP)activity
analysis. And RT-PCR method was used to determine the osteogenesis-related genes expression. Results:Compared with control group，
the groups with drug serum of prepared Radix Polygoni Mutiflori，10%，20% and 30% had an effect on promotion the proliferation sig-
nificantly on Ob (P ＜ 0. 01). There was no concentration-related manner among groups. The 5% and 10% drug serum decreased ALP
activity at the post-translation phase compared with control group，but higher doses (20% and 30%)did not have the same effect.
However，drug serum of PR /MIN increased significantly osteogenesis-related genes (OC，ALP，Cbfα1)mRNA expression (P ＜ 0. 05).
Conclusion:The drug serum of prepared Radix Polygoni Multiflori can stimulate osteoblast proliferation in vitro，and its mechanism may
be associated with increasing osteogenesis-related genes expression.
Key words Prepared Radix Polygoni Multiflori;Osteoblasts(Ob) ;Serum pharmacology
·2651· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 10 期 2011 年 10 月