全 文 ：第 3 2 卷 第 7 期針真机為 裘 用 化 ＜ 1Ｖｏｌ ． 3 2 ，Ｎｏ ． 7
2 0 1 5 年 7 月 2 8 日 Ｃｏｍｐｕｔｅｒｓａｎｄ Ａｐｐ ｌｉｅｄＣｈｅｍｉｓ ｔｒｙ Ｊｕｌｙ 2 8 ’ 2 0 1 5
柿属植物叶片 多齡 Ｆｏｌｉｎ－ｃｉｏｃａｌｔｅｕ 测定法的优化及
部分种 （品种 ） 叶片多酚含量测定分析
韩卫娟 1 ， 2 ， 梁玉琴 ］ ＇ 2 ， 孙鹏 1 ＞ 2 ， 李加茹 1 ＞ 2 ， 傅建敏
（ 1 ． 国家林业局 泡桐研究开发中心 ， 河南 ， 郑州 ， 4 5 0 0 0 3 ；
2 ． 中 国林业科学研究院 经济林研究开发中心 ， 河南 ， 郑州 ， 4 5 0 0 0 3 ）
摘要 ： 为 了精确测定柿属植物叶片的多酚含量 ， 本研究通过单因素试验和正交试验确定 Ｆｏｌｉｎ－ｃ ｉｏｃａ ｌｔｅｕ法测定柿属植物叶
片多酚含量的最佳条件 ， 然后利用优化后 的方法测定 2 0 份柿属植物叶片的多紛含量 。 结果表明 ： 样 品提取液中需依次加入
Ｆｏｌｉｎ－ｃ ｉｏｃａｌｔ ｅｕ试剂 （ 0 ． 2 5 Ｍ ） 2 ． 5 ｍＬ 和 1 0 ％Ｎａ 2Ｃ 0 3溶液 3 ｍＬ ， 再用去离子水定容至 1 0 ｒａＬ ， 该溶液室温显色 1 ｈ 后在
7 6 5 ｎｍ波长处吸光度最大 ， 且多酚在质量浓度为 （ 2？ 1 4 ） ｕｇ／ｍＬ 范围 内与吸光度呈 良好线性关系 。 改 良后 的方法具有较好的
稳定性 、 重现性 、 精密度及加标回收率 ， 其相对标准偏差分别为 0 ． 5 8 ％、 0 ． 6 9 ％、 0 ． 1 6 ％和 0 ． 9 6 ％ 。 所测定的 2 0 份柿属植
物叶片多酚含量丰富 ， 平均含量为（ 4 4 ． 1 9 ± 8 ． 3 0 ） ｍｇ／ｇ ， 其中美洲柿含量最高 ， 可达（ 8 0 ． 8 3 ±  0 ． 9 5 ）ｍｇ／ｇ 。 本研究一方面优化
了柿属植物叶片多酚含量的 Ｆｏ ｌｉｎ－ｃｉｏ ｃａｌｔｅｕ 测定法 ， 为精确测定柿属植物叶片 多酚含量提供 了技术支撑 ； 另一方面测 定了
具有代表性的柿属植物叶片多酚含量 ， 对叶片资源的深入开发利用具有指导意义 。
关键词 ： 柿属植物叶片 ； 多紛 ： Ｆｏ ｌｉｎ－ｃ ｉｏｃａｌｔｅｕ正交试验 ； 种 （品种 ） 。
中图分类号 ： Ｓ 7 1 3文献标志码 ： Ａ文章编号 ： 1 0 0 1 4 1 6 0 （ 2 0 1 5 ） 0 7 － 7 8 7 － 7 9 2
ＤＯＩ： 1 0 ． 1 1 7 1 9 ／ｃｏｍ．ａｐｐ． ｃｈｅｍ 2 0 1 5 0 7 0 5
1引 言 含量测定的最常用方法 。 然而由于显色条件的不 同 ， 导
致柿叶多酸含量的测定结果存在一定的差异 ， 因此本研
2 ？ 究采用单 因素试验 和正交试验相 结合的方法对影响
Ｆ— 法检测柿叶多酚含量 的反应条件逐一研
究 ， 进行施学縣紐价 ， ＿确定碰在检测柿叶ＳｒａＪｅｔｌＳ， ｉＵｍ＇ 6－ｔ？ｈ！ 1 多酚含量时的最佳反应体系 ， 并对参试的 2 0 份柿属资源
5 °叶片多酚含量进行验证性检测 ， 不仅 为柿叶多酚类物质
2 2 ｎ 含麵定提供—■单 、 練 、 ＿的方法 ， 并为 以柿
ｆ ｉＵ土 叶多酚为加工利用 目 的的产业发展提供技术支撑 。草再新 》 记载用于“治咳嗽吐血 ， 止渴生津” ， 以后诸家
本草及医药书籍也多有记载 【 3 ］ 。 现代研究表明 ， 柿叶含有 2与 力法
黄酮、 多酚 、 维生素 、 香豆素等多种化学成分 ， 其中 多、 ．
酚为其重要的活性成分 ， 擴、 止血、 活血化游 、 降脂 、 2 1 样品 、 试剂与仪器
抗氧化、 抗癌等药理細都与其有关
多酚是－类广泛存在于植物体内 的含有酚羟基化合 种 ） 为材料 ’ 包括 5 份柿近缘种 （細柿 、 浙江柿 、 油
物的总称 ， 主要存在于植物的根 、 皮 、 ？ 叶 、 果中 ， 含量Ｗ 、 Ｉ— 、 ■〒 ） 、 3—？（― Ｉｔ
可达 2 0 ％ 【 6 ＂ 7 】 。 目前 ， 常见的 多酚含翻定方法主要有高 野柿 、 浙江野柿 ） 、 8 份涩柿品种 （面窝窝 、 耀县五花柿 、
锰酸钾滴定法 、 酒石酸亚铁显色法和 Ｆｏ ｌ ｉｎ－ｃｉｏｃａｌ ｔｅｕ 法 棉 、 黑稀 、 玉环长柿 、 海安小方柿 、 博爱八月黄 、 架
等 ， 但難酸钾滴定法终点难 以观察 ， 丽石酸亚铁显 川 牛心 ） 和 4 份甜柿品种 （正月 、 次郎 、 阳丰 、 富有 ） 。
色法稳定时间短 ， 胸因素多 ［ 8 ］ ？Ｆｏ ｌｉｎ－ ｃｉｏｃａ ｌｔｅｕ 法利用 2 0 1 3 年 7 月于新乡市原阳县原武镇靳屋村 （ 中 国林非科
Ｆｏ ｌｉｎ－—細麵難性 ， 将麵化合般龍化 ， 学職隨浦職开”心臓猶麵 ） 采集 叶片 。
自身被还胜雌色的化合物 ， 蓝憾職与麵＾？量 每佩验材料舰 5 株立地餅和长势－雜健康植
呈正相关 ， 此法不但简单 、 精确 、 快速 ， 而且能在－定 株
丨
机采？枝 ，＿ 5 ＞ｔ 。程度上克勝 ！ａ随Ｉ性和錢細隨 ［ 9 ］ ， 是濟縣ｍ
收稿 日期 ： 2 0 1 4 ＂ 0 8 － 2 7 ； 修回 日 期 ： 2 0 1 5 － 0 1 － 2 8
基金项目 ： 国家 “ 十二五” 农村领域科技计划课题 “涩柿种质资源收集评价与新品种选育 ” （ 2 0 1 3 ＢＡＤ 1 4Ｄ 0 5 0 2 ）
作者简介 ： 韩卫娟（ 1 9 8 7—） ， 女 ， 河南周 口 人 ， 实习研究员 ， Ｅ－ｍａｉ ｌ：ｈａｎｗｅｉｊｕａｎ2 0 1 3＠ 1 6 3 ． ｃｏｍ
联系人 ： 傅建敏（ 1 9 6 6－） ， 女 ， 河南禹州人 ， 副研究员 ， 主要从事经济林育种与栽培研究 ； Ｅ－ｍａ ｉｌ ：§ｍ 3 7 1 ＠ 1 6 3 ． ｃｏｍ
7 8 8

針真机 ■＆ 右 用 化 摩

2 0 1 5 ’  3 2 （ 7 ）
试剂 ： 没食子酸标准品 （ＨＰＬＣ＾ 9 8 ％ ， 上海源叶生的相对标准偏差 ， 评价该方法的稳定性 。
物科技有 限公司 ） ； Ｆ ｏｌ ｉｎ－ｃ ｉｏｃａ ｌｔｅｕ试剂 （ 以下简称 ＦＣ 试 （ 2 ） 重复性实验 ： 取 6 份质量相问的神叶 ， 按照上
剂 ） （美国 ｓｉｇｍａ 公司 ） ， 其他试剂均为 国产分析纯 。述方法制备溶液并测定多酚含量 ， 计算相对标准偏差 ，
仪器 ： 紫外可见分光光度计 （Ａｇ ｉ ｌｅｎｔＣＡＲＹ 3 0 0 ） ；评价该方法的 重复性 ＾
ＨＴ－ 3 0 0ＢＱ 型数控超声波清洗器 （ 济宁恒通超声 电子设备 （ 3 ） 精密度实验 ： 取 1 份柿叶样品 ， 采用 1 ． 2 ． 4 确
有限公司 ） ； ＡＬ 2 0 4 电子天平 （海特勒 －托利多仪器 （上定的测定方法 ， 重复测定 6 次 ， 评价该方法的精密度 。
海 ） 有 限公司 ） 。（ 4 ） 加样回收率实验 ： 向 已知多 酚含量的柿叶样品
2 ． 2 方法 中加入没食子酸标准溶液 0 ． 0 5 ｍＬ 、 0 ． 1 5 ｍＬ、 0 ． 2 5 ｍＬ 、
2 ． 2 ． 1 样品制备 0 ． 3 5ｍＬ 、 0 ． 4 5ｍＬ ， 测定并计算多酚含量 ， 评价该方法
柿叶样品 6 0°Ｃ干燥至恒重 ， 粉碎后过 0 ． 3 ｍｍ 筛 。的准确性和可靠性 。
精密称取 5 ． 0 0 0 ｇ ， 用 5 0 ｍＬ 6 0 ％乙醇超声波萃取 3 0 ｍ ｉｎ ， 2 ． 2 ． 6 标准 曲线制作及柿叶 多酚含量测定
减压抽滤后定容至 1 0 0 ｍＬ 。精密吸取 0 ． 2 ｍｇ／ｍＬ 的没食子酸标准溶液（ 0 ． 1 、 0 ． 2 、
2 ． 2 ． 2 检测波长选择 0 ． 3 、 0 ． 5 、 0 ． 7 ）ｍＬ ， 按照 1 ． 2 ． 3 正交试验结果确定的最佳
精密吸取没食子酸标准溶液 （ 0 ． 2ｍｇ／ｍＬ
＾
下同 ）实验条件 ， 以吸光度为纵坐标 ， 标准溶液质量浓度为横
0 ． 2 1 1＾ 置于试管中 ， 加入 ？ （： 试剂 （ 0 ． 2 5 ＼ 1 ， 下同 ） 3 1 1 1 1 ， 坐标 ， 绘制标准曲线 。 精密吸取 5 0 ｕＬ 柿叶样品 ， 按照静置 3 ｍ ｉｎ 后加人 1 0 ％ＮＭＸ＊ 3赚 2 ． 4 ｍＬ ’ 去离子水 上述方法测定吸光度值 ， 棚标准 曲线计算 出棉叶中多定容至 1 0 ｍＬ ， 室温反应 1ｈ 后于 2 0 0 至 9 0 0 ｎｍ 区域 内航＋旦
Ａ 、丄 丄 3 里 。全波长扫描 。
ｉＷｒ＋Ｂ ／ Ｔｋ ｉｍ ｔ＝： ＺＶ＋ Ｃ
鱼 表士＋ 2 ． 3 数据处理与分析
ｒｎ 所有数据均平行测定 3 次 ，釆用 ＳＰＳＳ 2 0 ． 0 、Ｍ ｉＣｒＯＳＯｆｔ2 ． 2 ？ 3 ． 1 1 0 ％ Ｎａ
2
Ｃ 0
3 用 里的确又＿ ．．、 4＾八
精密吸取没食子酸标准溶液 1 0 份 ， 加入 ＦＣ 试剂ＯｆｉｃｅＥｘｃｅ ｌ 2 0 0 7 和 Ｏｒｉｇ ｉｎ 6 ． 0 进 彳了分析 。
3 ｍＬ ， 静置 3 ｍｉｎ 后分别加入 1 0 ％ Ｎ ａｆＯ 3 溶液（ 0 ． 6 、 1 ． 2 ＞ 3社果与分析
1 － 8 、 2 ． 4 、 3 ． 0 、 3 ． 6 、 4 ． 2 、 4 ． 8 、 5 ． 4 、 6 ． 0 ）ｍＬ ， 去离子水 －口木
定容至 1 0 ｍＬ ， 室温反应 1ｈ 后测定其吸光度 ， 确定 1 0 ％ 3 ． 1 检测波长的选择
Ｎａ
2
Ｃ 0
3 溶液用量 。
曰 —按照 2 ． 2 ． 2 的方法 ， 对没食子酸标准溶液显色体系在
＾？如＿￣ 9 0 0 ）ｎｍ 之间进行全波长扫描 ， 结果如图 1 所示 。精密吸取没食子酸标准溶液 7 份 ， 分别加入 ＦＣ 试剂 ｍｘ ＾，Ａ Ｌ ｍｚ ｓＪｚ． ｒｔＰ
（ 0 ． 2 5 ， 0 ． 5 、 1 ． 0 、 1 ． 5 ． 2 ． 0 、 2 ． 5 、 3 ． 0 ） ｍＬ ， 静置 3 ｍｉｎ 后 吸收随波长的增大先增大后减少 ’ 在 7 6 5 ｒｕｎ处吸光度
加入 1 0 ％ Ｎａ2 Ｃ 0 3 溶液 3 ． 0 ｍＬ ， 去离子水定容至 1 0 ｍＬ ，最大 。 因此选择 7 6 5 ｎｍ 作为 多粉含量测定的检测波长 。
室温反应 ｌ ｈ 后测定其吸光度 ， 确定 ＦＣ 试剂用量 。 ｙ＾ｓ
－
2 ． 2 ． 3 ． 3 显 色温度的确定。 6 ＿广 ， Ｎ．精密吸取没食子酸标准溶液 7 份 ， 加入 ＦＣ 试剂 ／、
2 ． 5 1 1＾ ， 静置 3 1 1 1 1 1 1 后加入 1 0％ 灿 2 （： 0 3 溶液 3 ． 0 1 1 1￡ ， 去Ｚ “离子水定容至 1 0 ｍＬ ， 分别在不同 的温度下 （ 2 0 、 3 0 、 ｚ 0 ． 5 － ／ 7 6 5 ？
4 0 、 5 0 、 6 0 、 7 0 、 9 0 ）°Ｃ反应 1ｈ 后测定其吸光度 ， 确ｊ／定反应温度 。
1／
2 ． 2 ． 3 ． 4 显 色时间 的确定 1Ｘ 4 、／精密吸取没食子酸标准溶液 9 份 ， 加入 ＦＣ 试剂、 ／
2 ． 5 ｍＬ ． 静置 3 ｍｉｎ后加入 1 0 ％Ｎａ 2Ｃ 0 3 溶液 3 ． 0 ｍＬ ， 4 0 0 5 0 0 6 0 0 7 0 0 8 0 0 9 0 0
去离子水定容至 1 0 ｍＬ ， 室温条件下反应不 问 的时间 ｗａｖ ｅｌｅｎｇｔｈ／ｎｍ
（ 0 ． 5 、 1 、 1 ． 5 、 2 、 3 、 4 、 5 、 6 、 8 ）ｈ后测定其吸光Ｒｇ ． ｌ＾ｓｐｅ ｃｔｒｏｇｒａｍｏｆ ｓｔａｎｄａｒｄｓｏｌｕｔｉ ｏｎｏｆ ｇａ ｌ ｌｉｃ ａｃ ｉｄ ．度 ， 确定反应时 间 。 图 1 食子酸标准液吸收光谱
2 ． 2 ． 4 正交实验
为 了进一步考察各因素影响的 显著性 ， 确定柿叶多 3 ． 2 单＠素实验
酚测定 的最佳条件 ， 在单因素基础之上 以碳酸钠用量 、 ＦＣ试剂具有强氧化性 ， 在碱性条件下将多酚类物质
ＦＣ 试剂用量 、 反应时间为 因素 ， 进行三因素三水平正交定量氧化 ， 自 身被还原生成蓝色的化合物 ， 蓝色 的深浅
试验 （见表 1 ） 。跟多酚含量呈正相关 ， 其中 Ｎ ａ2Ｃ 0 3 溶液是显色的支持介
2 ． 2 ． 5 方法学考察 质 ［ 1 0 ］ ， 提供反应的碱性环境 ， 其用量会影响反应体系的
（ 1 ） 稳定性实验 ： 按照 1 ． 2 ． 4 确定的测定方法 ， 反比色效果 ［ 1 1 】 。 考察结果如图 2 所示 ， 在一定范围内 ， 随
应完全后放置（ 0 ． 5 、 1 、 1 ． 5 、 2 ． 0 、 2 ． 5 、 3 ． 0 ）ｈ ， 计算结果着 Ｎ ａ2 Ｃ 0 3 用 量的增加吸光度值不断增加 ， 当用量达到
2 0 1 5
，
3 2 （ 7 ）

韩卫娟 ， 等 ： 柿属植物叶片多 酚 Ｆｏ ｌ ｉ ｎ－ ｃｉｏｃａ ｌ ｔｅｕ 测定法的优化及部分种 （ 品种 ） 叶片多酚含量测定分析

7 8 9
3 ｍＬ 时 ， 显色反应进行完全 。由 图 5 可知 ， 随着反应时间 的延长 ， 吸光值逐渐增
0 ． 7 5
1
大 ， 当反应时间达到 1ｈ 后增加不再明显 ， 曲线变得平
0 7 0 
． 坦 ， 4 小时后吸光度值逐渐降低 ， 因此选择 1 ｈ 作为 显色
时间 。
0
．
6 5 －￥
Ｉ
0 ． 9
1

玄 0 ． 6 0 －／
0 ． 5 5－ 0 ． 8 －
。 4 5 ＿Ｉ Ｉ 0 ， －＾￣？
 Ｉ Ｉ ＩＩＩＩ
0 1 2 3 4 5 6
ｖｏ ｌ ｕｍｎ ｏｆ 1 0 ％Ｎ ａ，Ｃ 0
3
ｓｏ ｌ ｕｔ ｉｏ ｎ 0 ． 6
“
Ｆ ｉｇ ． 2Ｅｆｆｅｃ ｔｏｆ ｄｏｓａｇｅ ｏｆ 1 0 ％ ｓｏｄｉｕｍｃ ａｒｂｏｎａｔｅ ｏｎａｂ ｓｏｒｂｅｎｃｙ．
图  2 1 0 ％ Ｎａ
2
Ｃ 0
3
用量的确定 0 5 ！－＾‘ ？ ｜‘
01 2 3 4 5 6 7 8 9
ｒｅａｃ ｔ ｉｏｎ ｔｉｍ ｅ／ｈ
0 ． 7－
．
1＿＿ Ｆｉｇ ． 5Ｅｆｆｅ ｃｔ ｏｆｔ ｉｍｅｏｎａｂｓｏｒｂｅｎｃｙ ．？ ？ 图 5 显色时间的确定
3 ． 3 正交实验
釆用正交试验对 ＦＣ 试剂用量 、 Ｎａ 2 Ｃ 0 3 用量和显色
时 间的组合进行蹄选 ， 以确定 Ｆｏ ｌｉｎ －ｃ ｉｏｃａ ｌｔｅｕ 比色法测定
柿叶多酚含量的最佳实验条件组合 。 由单因素考查实验
结果可知 ， 室温作为最佳反应温度即可 ， 不需对温度进
° － 3
0Ｉ 2 3 4 5 6行正交实验考查 。
ｖｏ ｌ ｕｍ ｎｏｆ ＦＣ ｒｅｇｅｎｔ／ｍＬ 表 1Ｆｏ ｌ ｏｎ－ ｃ ｉｏｃａ ｌｅ ｔｕ比色法 Ｌ？（ 3 3 ） 正交试验结果
Ｆ ｉｇ ． 3Ｅｆｆｅ ｃｔｏｆ ｄｏ ｓａｇｅ ｏｆ ＦＣｒｅｇｅｎｔｏｎａｂ ｓｏｒｂｅｎｃｙ ．Ｔａｂ ｌｅ 1Ｔｈｅ ｏｒｔｈｏ ｇｏｎａ ｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｒｅｓｕ ｌ ｔｓｏ ｆＦｏｌｏｎ－ｃ ｉｏｃ ａ ｌｅｔｕ
图 3 ＦＣ 试剂用 量的确定ｍｅｔ ｈｏ ｄ ．
ｆｃ 试剂用Ｎａ2ｃｏ 3 用 显色时间
＂＂“ｒｒｒｒ＂
由 图 3 可知 ’ＦＣ试剂用量达到 1 ． 5ｍＬ 之前 ’ 随其纖ｆｔ／ （ｍＬ ） Ｍ／ （ｍＬ ）／ （ｈ）■雜
体积的增加吸光度值不断增加 ， 在 2ｍＬ 时基本达到平 ｌ ｂ 3 3 0 ． 6 5 8
衡 ， 显色反应基本进行完全 ， 所 以选择 2 ｍＬ 作为 ＦＣ 试 2 1 5 4 2 0 ． 6 4 0
， 、 且 3 1 ’ 5 2 1 0 ． 6 4 0剂的加入里 。
4 2 3 2 0 ． 6 8 6
反应温度对反应体系也有一定的影响 ， 温度过高将 5 2 4 10 ． 7 0 7
影响络合物的稳定性 。 由 图 4 可知 ， 当温度在 （ 2 0？ 4 0 ） °Ｃ 6 2 2 3 0 ． 7 0 5
之间时 ， 吸光度值保持稳定 ， 温度超过 4 0  °Ｃ时 ， 吸光度 1 1 5 3 10  7 1 9
值随着温度的升高而逐渐降低 ， 所以选择室温作为最佳丨 ｇ ＼＼ 1 2 1
反应温度即可 。 1 ． 9 3 7 2 ． 0 6 2 2 ． 0 7 1
Ｋ2 2 ． 0 9 8 2 ． 0 5 5 2 ． 0 1 9
0 8
Ｋ3 2 ． 1 2 0

2， 0 3 8 2 ， 0
6 6


ｋ＼ 0 ． 6 4 6 0 ． 6 8 7 0 ． 6 9 0
0 1 ‘
一￣
ｋ 2 0 ． 6 9 9 0 ． 6 8 5 0 ． 6 7 3
0  6＿ ｋ 3 0 ． 7 0 7 0 ． 6 7 9 0 ． 6 8 9
＼Ｒ 0 ． 0 6 1 0 ． 0 0 8 0 ． 0 1 7
．
0 5
－ ＼￥ 0 ． 4 －＼ 表 2 各因素不 同水平间方差分析 Ｐ值表
Ｔａｂ ｌｅ  2Ｐ ｖ ａｌｕｅ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃ ｅａｎａ ｌｙｓ ｉｓ ａｍｏｎｇ ｄ ｉｆｆｅ ｒｅｎｔｌｅｖｅｌ ｓｏｆ ｅ ａｃｈ
0 ． 3 “

ｆａｃ ｔｏｒ．

0 ． 2－ ＼ＦＣｆ；〒量 Ｎ？、显：间／（ｍＬ）

／（ｍＬ） ／（ｈ ）
0 ． 1 ＇

2 0

4 0
為ｇｏ ￣尸值 （ 吸光度 ） 0 ． 0 0 1 ＊ 0 ． 7 4 6 0 ． 4 9 1
注 ： ？表示在 尸＜ 0 ． 0 5 水平差异显著 。
ｒｅａｃｔ ｉ ｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕ ｒｅ／
°Ｃ Ｎｏｔｅ ： ？ ｍｅ ａｎｓ ｓ ｉｇｎｉ ｆｉ ｃａｎｔ ｄｉ ｆｆｅｒｅ ｎｃ ｅ ａ ｔ Ｐ＜ 0 ． 0 5  ｌｅｖｅ ｌ ．
Ｆｉｇ ． 4Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆｔ ｅｍｐｅ ｒａ ｔｕｒｅ ｏｎ ａｂｓｏ ｒｂｅｎｃｙ． ． … ， ．
图 4 显色温度 的确定 由表 1 中 的极差分析可知 ， ＦＣ试剂用量 的 值最大 ，
说明 3 个实验条件中 ＦＣ 试剂用量对吸光度值的影响最
7 9 0

针真机 ？＆ ％． 用 化 旁

2 0 1 5
，
3 2 （ 7 ）
大 ， 而 Ｎａ 2Ｃ 0 3 用量对其影响最小 。 方差分析结果 （ 表 2 ） 3 ． 4 方法学考察
表明 ， Ｎａ 2 Ｃ 0 3 用量和显色时 间在各水平间差异不显著 ， 按照 2 ． 2 ． 5 的方法 ， 对提取液进行稳定性试验 。 0 ． 5 、
应选择较低体积 ； ＦＣ 试剂加入量各水平间存在显著性差 1 、 1 ． 5 、 2 ． 0 、 2 ． 5 、 3 ． 0 ｈ 测得的 吸光度值分别为 0 ． 8 5 3 、
异 （ＰＣ 0 ． 0 5 ） ， 应选择较高体积 。 综上所述 ， 柿叶多酚 0 ． 8 6 5 、 0 ． 8 6 6 、 0 ． 8 6 6 、 0 ． 8 6 5 、 0 ． 8 6 3 ， 相对标准偏差 （ ＲＳＤ ）
最佳测定条件为 ： ＦＣ 试剂 2 ． 5 ｍＬ ，Ｎａ 2 Ｃ 0 3 溶液 3 ｍＬ ，为 0 ． 5 8 ％（ 见表 3 ） ， 表明该方法在一定时间 内稳定性较
室温下显色 1 小时 。好 。
表 3 稳定性 、 重现性 、 精密度试验结果

Ｔａｂｌｅ 3Ｒ ｅｓｕｌｔ ｓｏｆｓｔａｂｉ ｌ ｉｔｙ，ｒｅｐｒｏｄｕｃ ｉｂｉ ｌ ｉ ｔｙａｎｄａｃ ｃｕｒａｃｙ ．

项 目

1

2

3

4

5

6
土挂ＲＳＤ％
稳定性（Ａ 7 6 5 ） 0 ． 8 5 3 0 ． 8 6 50 ． 8 6 6 0 ． 8 6 6 0 ． 8 6 5 0 ． 8 6 3 0 ． 8 6 3 0 ． 5 8
重现性 （ｍｇ ／ｇ） 3 7 ． 7 0 3 7 ． 7 6 3 7 ． 6 4 3 7 ． 7 6 3 7 ． 7 9 3 7 ． 6 5 3 7 ． 7 2 0 ． 1 7
精密度 （ｍｇ／ｇ） 3 4 ． 5 2 3 4 ． 5 6 3 4 ． 6 53 4 6 1 3 4 ． 6 2 3 4 ． 6 8 3 4 6 1 0 ． 1 7
表 4 加标回收试验结果 1 6
｜


Ｔａｂ ｌ ｅ 4Ｒ ｅｓｕｌ ｔ ｓｏｆ ｒｅ ｃｏｖｅｒｉｅｓ ．
ｙ＝0 ． 0 9 5 8 ｘ＋ 0 ． 1 3 0 6
＾加标样品总检回收回收平均回Ｄ Ｑｎ
｜ 量 含量 出量 量率收率＝ ＇ － 2 －Ｒ 2 ＝＿Ｚ

／（ｍｇ）／（ｍｇ） ／（ｍｇ）／（ｍｇ ）／（％）／（％）

1
 0 ． 0 1 0 ． 0 5 5 7 0 ． 0 6 6 3 0 ． 0 1 0 6 1 0 5 ． 9 8 Ｍ令 0 ． 8－
2 0 ． 0 3 0 ． 0 5 5 70 ． 0 8 7 6 0 ． 0 3 1 9 1 0 6 ． 2 0
3 0 ． 0 5 0 ． 0 5 5 70 ． 1 0 7 6 0 ． 0 5 1 9 1 0 3 ． 7 7 1 0 5 ． 0 8 0 ． 9 6ｊｒ
4 0 ． 0 7 0 ． 0 5 5 70 ． 1 2 9 1 0 ． 0 7 3 4 1 0 4 ． 8 4 0  4 “
5 0 ． 0 9 0 ． 0 5 5 70 ． 1 4 9 9 0 ． 0 9 4 2
個－柿叶样品中取 6 份分别提取并测定其多酚含％没食子‘准溶液质量分： 1 5
量 ， 结果如表 3 所示 ， 相对标准偏差为 0 ． 6 9ｏ／ｏ ， 表幌 ＿Ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｕｒｖｅ ｏｆｇａｍｃ ａｃ ｉｄ方法重现性较好 。 图 6 没食子酸标准 曲线
用 2 ． 2 ． 5 的实验方法重复 6 次分析同一份柿叶 ， 评价＋至 ， ｃ 0／
该方法的精密度 。 结果如表 3 所示 ， 其相对标准偏勃 ？
0 ． 1 6 ％ ， 表明该方法具撤高的精密度 ， 能够满足棉叶 最低 的清化南野棉 Ｓ 量仅为清化北
样品多？含量的分析 。野柿的 4 5 ． 0 0 ％ ； 涩柿多酚含量变异系数为 4 0 ． 9 9 ％ ， 含
由表 4 可知 ， 5 次加标回 收试验 的最低 回收率为 量最高的 为海安小方袖 （ 7 5 ． 5 4± 0 ． 6 2 ）ｍｇ ／ｇ ， 含量最低
1 0 3 ． 7 7％ ， 最高 回收率 为 1 0 6 ． 2 0％ ， 平均 回 收率 为的为面窝窝 （ 2 0 ． 9 1 ± 1 ． 1 1 ）ｍｇ／ｇ ， 前者为后者的 3 ． 6 1 倍 ；
1 0 5 ． 0 8％ ， 相对标准偏差为 0 ． 9 6°／。 ， 表明本研究所建立甜柿资源多酚含量为次郎 ＞阳丰＞正月＞ 富有 。
的检测法准确可靠 ， 可用于柿叶多酚的分析 。由 柿 叶 中 多 酚 含 量 测 定 结 果 可 知 ， 优 化 的
3 ． 5 标准曲线制作及柿叶多酚含量分析 Ｆ ｏｌ ｉｎ－ｃｉｏｃａｌｔｅｕ 比色法能够简单快速的分析不 同种 （ 品种 ）
以吸光度值为 纵坐标 ， 没食子酸质量浓度为 横坐标柿叶中 的多酚含量 ， 结果准确可靠 ， 具有操作简单 、 灵
建 立 标 准 曲 线 ， 如 图 6 所 示 。 回 归 方 程 为敏度高 、 稳定性好、 精密度高 、 准确可靠等优点 。
尸 0 ． 0 9 5 8ｘ＋ 0 ． 1 3 0 6 （／？＝ 0 ． 9 9 9 5 ） ， 在（ 2 ￣ 1 4 ）ｕ ｇ／ｍＬ范 围 内 ，水 ｆｃ； 、 4本
吸光度与没食子酸质量浓度线性关系 良好 。 4
棉叶 中含有丰富 的多酸类物质 （ 见表 5 ） ， 不 同类型本研究对 Ｆｏ ｌ ｉｎ－ｃｉ ｏｃａｌ ｔｅｕ 比色法测定神叶多粉含量
间含量大小顺序为 ： 柿近缘种＞涩柿 〉野柿＞甜柿 ， 不的实验条件进行了系统深入的研究 ， 以没食子酸为标准
同种 （ 品种 ） 资源间差异极显著 （ ＿Ｆ＝ 2 4 1 ． 9 5 ，Ｐ＜ 0 ． 0 5 ） ，品 ， 对试验中各影响 因素在单因素考察 的基础上 ， 进行
其均值为 4 4 ． 1 9ｍｇ ／ｇ ， 分布区域为 （ 9 ． 3 4？ 8 0 ． 8 3 ）ｍｇ／ｇ ，三 因素三水平正交试验 ， 确定 了各因素的影响 大小顺序
变异系数为 4 0 ． 8 2％ ， 其中含量最高的是美洲柿 （ 8 0 ． 8 3为 ： ＦＣ 试剂用量〉显色时 间〉 Ｎａ2 Ｃ 0 3 用量 。 筛选出柿
± 0 ． 9 5 ）ｍｇ／ｇ ， 含量最低的是富有 （ 9 ． 3 4± 1 ． 2 2 ）ｍ ｇ／ｇ ，二叶 多酚最佳测定条件为 ： ＦＣ 试剂 （ 0 ． 2 5Ｍ ） 2 ． 5ｍＬ ，
者相差 8 ． 6 5 倍 。 柿近缘种多酚含量大小顺序为美洲柿 ＞ 1 0 ％Ｎａ 2Ｃ 0 3 溶液 3 ｍＬ ， 室温下显色 1ｈ 后 7 6 5 ｎｍ 测定
油柿＞浙江柿 〉君迁子 ＞金枣柿 ， 最低的金枣柿含量仅其吸光度值 ， 这与赵丰丽等 ［ 1 2 ］研究结果一致 。 该方法稳
定性实验 、 重复性实验 、 精密度实验 、 加样回 收率实验
2 0 1 5
， 3 2 （ 7 ）

韩卫娟 ， 等 ： 柿属植物叶片多酚 Ｆｏｌ ｉｎ－ ｃｉｏｃａｌｔ ｅｕ 测定法的优化及部分种 （品种 ） 叶片多酚含量测定分析

7 9 1
的相对标准偏差分别为 0 ． 5 8 ％ 、 0 ． 6 9 ％ 、 0 ． 1 6 ％ 、 0 ． 9 6 ％ 。种间差异以及柿种下不同类型间 的种内差异 。 釆用优化
柿属植物共有 1 9 0 多个种 ［ 1 3 】 ， 除柿外 ， 其他果用树种还后的 Ｆｏｌ ｉｎ－ｃｉｏｃａ ｌｔｅｕ 比色法分析柿叶总酚含量 ， 发现各资
有君迁子 、 浙江柿 、 油柿 、 金枣柿 、 美洲柿等柿近缘种 ，源柿 叶中含有丰富的 多酚类物质 ， 4 种类型含量从高到
另外君迁子是北方温带地区最常用的柿姑木 ， 南方亚热低的顺序依次为柿近缘种＞涩柿＞野柿 ＞甜柿 ， 且不同
带地区多采用浙江柿 、 油柿为砧木 ， 并且浙江柿是南方种 （ 品种 ） 间变异程度高 。 费学谦等 ［ 1 4】对野生资源 、 甜
优 良的用材树种 。 柿种内 的面窝窝 、 博爱八月黄 、 栾川柿品种 、 涩柿 品种等 2 0 份柿叶中多粉含量进行了研究 ，
牛心为河南省涩柿 品种 ； 耀县五花柿 、 吊柿均为陕西省发现野生资源＞涩柿 ＞甜柿 ， 这一结果与本文结果有所
涩柿品种 ， 且耀县五花柿为珍贵的雄性资源 ； 海安小方不同 ， 可能是供试品种不同引起 的 。 另外 ， 其研究结果
柿为江苏省涩柿品种 ， 玉环长柿为浙江省涩柿资源 ， 这显示甜柿资源多酚含量最低 ， 本文结果显示相对其他类
些品种代表 了我 国不同地区的原产涩柿品种 。 正月 、 次型 ， 甜柿多酚含量也普遍较低 ， 这可能与甜柿单宁含量
自
1
3 、 阳丰 、 富有为 日本甜柿品种 。 本研究所用植物材料较低有关 ［ 1 5 ］ 。
具有一定代表性 ， 能在一定程度上反映不同柿属植物的
表 5 不 同种 （ 品种 ） 柿叶多酚含量测定结果

Ｔａｂｌｅ  5Ｔｈ ｅｒｅｓｕｌｔ ｓｏｆ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｐｅｃｉ ｅｓ （ｖａｒｉｅｔｉ ｅｓ） ｐｅｒｓｉｍｍｏｎ ｌｅａｖｅ ｓ ．
柿类型种（品种）多酚含量／（ｍｇ／ｇ）均值／（ｍｇ／ｇ）变异系数／（％ ）总均值／（ｍｇ／ｇ）平均变异系数 ／（％）
美洲柿 8 0 ． 8 3± 0 ． 9 5 ＂
浙江柿 4 5 ． 6 3± 3 ． 4 4 4 ｅ
柿近缘种油柿 4 9 ． 8 8± 3 ． 1 9 ｄ 5 2 ． 3 2± 1 6 ． 3 1 3 1 ． 1 7
金枣柿 4 0 ． 1 3刼 ． 2 7 ＾
君迁子
浙江野柿 3 8 ． 2 8± 1 ． 5 7 ｆ
野柿 6 1 ． 4 5± 3 ． ｉｒ 4 2 ． 6 7 ± 1 7 ． 0 2 3 9 ． 8 9
2 8 ． 2 7 士 1 ． 4 7 ｂ

￥Ｔｖ Ｖ
面窝窝 2 0 ． 9 1 ± 1 ． 1 1 1
嫌且
3 5 ． 9 9± 1 ． 7 5 ｆ
4 4 ． 1 知 8 ． 3 0 4 0 ． 8 2
吊柿 7 4 ． 5 7± 2 ． 2 7 ｂ
黑柿 3 8 ． 5 1 ± 2 ． 1 7 ｆ
＿玉环长梯 3 5 ． 3 8± 1 ． 1 0ｒ 4 8 ． 5 1± 1 9 ． 8 94 0 ． 9 9
7 5 ． 5 4± 0 ． 6 2 ＊－ ｂ小方柿
憧麥
4 5 ． 9 9± 0 ． 2 2 ｄ ，ｅ八月黄
栾川牛心6 1 ． 2 〗 ±3 ． 7 4 ｅ
正月 3 4 ． 5 8ｉ 2 ． 7 6ｆ
次郎 4 9 ． 1 4± 1 ． 4 9 ｄ
甜棉 ？ 3 3 ． 2 6± 1 7 ． 0 4ｑ  0Ａ阴丰 3 9 ． 9 9 ± 1 ． 3 2 ？ｆ

9 ． 3 4士 1 ． 2 2 ｊ
注 ： 所有数据均平行渊定 3 次并进行了方差分析和 Ｔｕｋｅｙ ＨＳＤ？ 多重比较 ， 同列中 ａ－ｉ 表示在 5 ％多重比较结果 ， 同样的字母表示差异不显著 。
Ｎｏｔｅ ：Ａ ｌ ｌｖａｌｕｅｓ ｗｅｒｅｍｅａｎ 士ＳＤ （ｎ ＝ 3 ） ．Ｒｅｓｕｌｔｅ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙ ｚｅｄ ｂｙＡＮＯＶＡ ａｎｄＴｕｋｅｙＨＳＤ＊ ．Ｖａｌｕｅ ｗｉｔｈａ－ｈ ， ｒｅｐｒ ｅｓｅｎｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｆｅｒ ｅｎ ｔａｔ 尸 ＜ 0 ． 0 5 ．
不 同种 （ 品种 ） 柿属植物叶片总紛含量测定结果进本文仅分析了几个常见的果用树种 ， 今后可加强其他柿
一步说明优化后的 Ｆｏｌ ｉｎ－ｃｉｏｃａ ｌｔｅｕ 比色法具有操作简单、属植物的收集与评价 。
灵敏度高 、 稳定性好 、 精密度高 、 准确可靠等优点 ， 能
够广泛用于分析柿近缘种 、 野生资源 、 甜涩品种等不 同Ｋｅｆｅｒｅｎｅ ｅｓｚ
类型的柿叶多酚含量 ， 对柿属植物资源评价具有重要意 1Ｚ＆ＣｆａｉｎＬＨ， ＨｕＣ ＾ｅ ｓｅａｒｃＪ ？ｄｅｖｅ ｌｏｐｍｅｎ ｔｏｆ ｇｅｎｎｐ ｌａｓｍｒｅｓｏｕｒｃｅｓｏｆ Ｄ ｉｏｓｐｙｒｏｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｒ ｕｍｌｉｚａｔ ｉｏｎ． Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ Ｈｕａｚｎｏｎｇ乂 。 我 国淫神品种近 1 0 0 0 种 ， 分布旭围广泛 ， 资源开发Ａｇｒｉｃｕｌ ｔｕｒ ａｌＵｎｉｖｅｒｓｉ ｔｙ， 1 9 9 6 ， 1 5 （ 4 ） ： 3 8 1 － 3 8 8 ．
利用潜力 巨大 ， 尤其是各地农家品种 ， 野生资源等 ， 可 2＾Ｆ ｌ 0 ｒａ 0 ｆＣｈｉｎａ ＇ 6 0 （ 1 ） －Ｂｅｉｊ ｉｎｇ ：Ｓｃ ｉｅｎｃｅＰｒｅｓｓ， 1 9 8 7 ，
能存在特异优 良变异 ， 值得进行深入分析 。 此外本研究 3Ｆｕ ＪＭ， ＬｉａｎｇＪ Ｊ，Ｚｈ ｏｕ ＤＳ．Ｒｅｖｉｅｗｏｎｅｆｅｃｔｉｖｅ ｃｏｎｓｔｉ ｔｕｅｎｔｓ ｏｆ
对柿近缘种进行了考察 ， 不仅弥补 了文献中 的不足 ， 也ｐｅｒｅ ｉｍｍｃｍｌ ｅａｖｅｓ．Ｊ Ｃｅｎ ｔｒａｌＳｏｕｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆ Ｆｏｒｅｓｔ ｒｙ＆ Ｔｅｃ ，
、 、，＿ ｌ＿丄 、 2 0 1 3 ， 3 3 （ 1 1 ） ： 6 6 － 7 2 ．证实近缘种总酷含量最闻 ， 说明棉属植物种 间差异很大 ， 4Ｗａｎｇ Ｙ．Ｓｔｕｄｙｏｎｄｅｏｄｏｒｉｚａｔ ｉｏｎａｎｄｅｘｔ ｒａｃｔｉｏｎｏｆ ｐｏｌｕｐｈｅｎｏ ｌ
7 9 2

针其机怎 裘 用 化 旁 2 0 1 5 ， 3 2 （ 7 ）
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ｃｒｅａ ｔｉｏｎ ｏ ｆｓｏｍｅｓｔａｍｉｎａ ｔｅ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｉｎＤｉｏｓｐｙｒｏｓｈ ．ｎａｔ ｉｖｅ ｔｏ创制的研究 ［Ｄ］ ． 武汉 ：华中农业大学， 2 0 0 8 ．■Ｃｈｉｎａ ． Ｗｕｈａｎ ：Ｈｕａｚｈｏｎ ｇＡｇｎｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，  2 0 0 8 ．＿． ．一…． ． ．． ＿＾＿
1 4Ｆｅ ｉＸＱ ，ＺｈｏｕＬ Ｈ， ＧｏｎｇＢ Ｃ． Ｔｈｅ Ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｖｉｔａｍ ｉｎ Ｃａｎｄ 1 4 费学谦， 周立红， 袭榜初 ． 不 同柿种柿叶维生素 Ｃ 和酚类物质
Ｐｈｅｎｏｌｉｃ ｓＣｏｎｔｅｎｔｓｉｎ Ｌｅａｖｅｓｏｆ ＤｉｏｓｐｙｒｏｓＬ． Ｆｏｒｅｓｔ Ｒｅｓ， 2 0 0 4 ，的差异 ［Ｊ］ ． 林业科学研究 ， 2 0 0 4 ， 1 7 （ 5 ） ： 6 1 6 － 6 2 2 ．
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6 2 2 ． ｔｖ＾ｆ＾ ，1 5 周舟 ， 钟晓红 ， 曾建国 ， 等 ？ 柿果 实多酚含量变化规律研究 ［Ｊ］ ．
1 5Ｚｈｏｕ Ｚ ， Ｚｈｏｎｇ Ｘ Ｈ，Ｚｅｎｇ ＪＱｅ ｔａｌ． Ｖａｎａｔ ｉｏｎ ｔ ｒｅｎｄｏｆ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ
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ＯｐｔｉｍｉｚｉｎｇｏｆＦｏｌｉｎ－ｃｉｏｃａｌｔｅｕｍｅｔｈｏｄｆｏｒ ｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｏｔａｌｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ
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（ 1 ．ＰａｕｌｏｗｎｉａＲｅｓｅａｒｃｈ＆ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＣｅｎｔｅｒ ｏｆＣｈｉｎａ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ 4 5 0 0 0 3 ’ＨｅｎａｎＰｒｏｖ ｉｎｃｅ ，
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Ａｂｓｔｒａｃｔ ： Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ａｃ ｃｕｒａ ｔｅｌｙ ｄｅｔ ｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｔｏｔａｌｐ ｏｌｙｐｈ ｅｎｏｌ ｃｏｎｔｅｎｔｏｆ Ｄｉｏｓｐｙｒｏｓｌｅａｖｅｓ，  ｓｉｎｇｌ ｅ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｄｅ ｓ ｉｇｎｗｅｒｅ ｕｓｅｄｔｏ
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ｒｅｐｒｏｄｕｃ ｉｂｉｌｉ ｔｙ，ａｃｃｕｒａｃｙ ａｎｄ ｓｔ ａｎｄａｒｄ ｒｅｃｏｖ ｅｒｙｒａｔ ｅｏｆ ｏｐｔ ｉｍｉｚｅｄｍｅｔｈｏｄ ｗａｓｇｏｏｄ， ａｎｄｔｈｅ ｒｅｌａ ｔｉｖｅ ｓｔａｎｄａｒｄｄｅｖｉａｔｉｏｎ （ＲＳＤ ）ｏｆ ｗｈ ｉｃｈ ｗｅｒｅ
0 ． 5 8 ％ ， 0 ． 6 9 ％ ， 0 ． 1 6 ％ａｎｄ 0 ． 9 6 ％ ，ｒｅｓｐｅｃｔ ｉｖｅ ｌｙ． Ｔｈｅ 2 0 ｓｐ ｅｃｉｅ ｓ （ｖ ａｒｉｅｔ ｉｅｓ ）ｏｆＤｉｏｓｐｙｒｏｓ ｗｈｉｃｈｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｃｏｎ ｔａｉｎ ａｂｕｎｄａｎｔｔｏｔａｌ
ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｃｏｎｔ ｅｎｔｏｆ ｔｈｅｓｅｒｅｓｏｕｒｃｅｓｗａ ｓ（ 4 4 ． 1 9 土  8 ． 3 0 ） ｍｇ／ｇ， ａｎｄ ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆＤｉｏｓｐｙｒｏｓ ｖｉｒｇｉｎ ｉａｎａ ｗａｓｈｉｇｈｅ ｓｔ， ｗｈｉｃｈ ｒｅａｃｈｅｄ
（ 8 0 ． 8 3 土 0 ． 9 5 ） ｍｇ／ｇ． Ｉｎ ｔｈｉ ｓｓｔｕｄｙ， ｔｈｅ Ｆｏｌｉｎ－ｃ ｉｏｃａｌｔｅｕｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒｔｈｅ ｄｅｔｅ ｒｍｉｎａｔ ｉｏｎｏｆ ｔｏｔａｌｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ ｃｏｎｔｅｎ ｔ ｉｎ ｌｅａｖｅ ｓｏｆ Ｄ ｉｏｓｐｙｒｏｓ ｗａｓ
ｏｐｔ ｉｍｉｚｅｄ， ｗｈｉｃｈｗｉ ｌｌｈｅ ｌｐｔｏａｃｃｕｒａｔｅ ｌｙｄｅｔｅｒｍｉｎｅ  ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｐｏ ｌｙｐｈ ｅｎｏｌ ｃｏｎｔｅｎｔ  ｉｎｌｅａｖｅｓｏｆＤｉｏｓｐｙｒｏｓ ． Ｉｎ ａｄｄｉｔｉｏｎ ，ｔｈｅｔｏｔａｌ ｐ ｏｌｙｐｈｅｎｏｌｃｏｎｔｅｎｔ
ｉｎ ｌｅａｖｅｓ ｏ ｆ
ｓ ｏｍｅｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉ ｖｅＤｉｏｓｐｙｒｏｓ ｒｅｓｏｕ ｒｃｅ ｓｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄ ，ｗｈｉｃｈｗｉｌｌｂｅ ｒｅｌｅｖａｎｔ ｆｏｒｆｏｒｔｈｅｒｄｅｖｅ ｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄｕｔｉ ｌｉｚａｔｉ ｏｎ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｌｅａｆ
ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐ ｅｒｓｉｍｍｏｎ ｌ ｅａｆ；ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ ；Ｆｏｉ ｉｎ－ｃｉ ｏｃａｌｔ ｅｕｍｅ ｔｈｏｄ；ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ ； ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｓｐｅｃｉｅ ｓ（ｖａｒｉｅｔ ｉｅｓ）
（Ｒｅｃｅ ｉｖｅｄ ： 2 0 1 4－ 0 8－ 2 7 ；Ｒｅｖｉｓｅｄ ： 2 0 1 5 － 0 1 － 2 8 ）