全 文 ：果 树 学 报 2011，28（1）: 46~50
Journal of Fruit Science
浙江部分柿属植物鉴定及亲缘关系的 SSR分析
陈方永 1，倪海枝 1，何理坤 2，王 引 1，卢国耀 2，王冬米 2，任正初 1
（1浙江省农业科学院柑橘研究所，浙江黄岩 318020； 2台州市林业科学研究所，浙江黄岩 318020）
摘 要: 应用 SSR 对浙江省分布的部分柿属植物（包括柿、浙江柿和金枣柿在内的 3 种 46 个基因型）进行了种质鉴
定和亲缘关系分析。 从已公开序列的 20 对柿属植物 SSR 引物中筛选出扩增谱带清晰和多态性丰富的引物 11 对；应
用建立的技术体系， 可将同物异名和同名异物的试材得以系统整理， 一般认为是同一品种的兰溪大红柿与永康方
柿，玉环长柿与永嘉长柿指纹图谱各有不同，应为不同种质。聚类分析结果表明，金枣柿（Diospyros sp.）与其他供试试
材间的亲缘关系较远，支持其可能为一新种的观点；浙江柿（D. glaucifolia Metc.）与金枣柿的亲缘关系较远但与柿（D.
kaki Thunb.）较近；部分供试日本柿种质与浙江省柿种质的亲缘关系较近。研究结果可为浙江省柿属植物种质资源保
护和利用提供一定的科学依据。
关键词: 柿属植物； 分子鉴定； 亲缘关系； SSR
中图分类号：S665．2 文献标识码：A 文章编号：1009－9980(2011)01－46－05
Identification and genetic relationships analysis of some oriental persim-
mon (Diospyros kaki) and related species in Zhejiang province based on
SSR analysis
CHEN Fang-yong1，NI Hai-zhi1，HE Li-kun2，WANG Yin1，LU Guo-yao2，WANG Dong-mi2，REN Zheng-
chu1
（1Citrus Research Institute of Zhejiang Agricultural Academy of Science，Huangyan，Zhejiang 318020 China； 2Forestry Sci-
ence Institute of Taizhou，Huangyan，Zhejiang 318020 China)
Abstract: The objective of the present study was to distinguish germplasm and clarify genetic relationships
of 46 genotypes of Diospyros kaki Thunb.， D. glaucifolia and Jinzaoshi (D. sp.) which distributed in Zhe-
jiang Province. Eleven of the tested 20 primer combinations produced prominent and strong bands with
high polymorphism. Synonymous and homonymous materials were identified using SSR markers. Lanxida-
hongshi and Yongkangfangshi while Yuhuanchangshi and Yongjiachangshi as previously assumed as the
same cultivar should be different germplasm. Clustering analysis showed the genetic relationship between
Jinzaoshi and other D. spp. was far which suggest Jinzaoshi may be a new species. D. glaucifolia closely re-
lated to D. kaki but not with Jinzaoshi. Several cultivars originated in Japan had a close relationship with
those from Zhejiang province. The results of the present study could provide scientific basis for genetic re-
source conservation and utilization of D. spp. distributed in Zhejiang province.
Key words: Diospyros glaucifolia； Molecular characterization； Genetic relationships； SSR
浙江省柿属植物（Diospyros spp.）资源丰富，全省
11个市（地）、67个县（市、区）均有柿（D. kaki Thunb.）
栽培[1]。但在长期的引种和栽培过程中，同物异名和
同名异物现象比较普遍， 种质间的亲缘关系更不明
了。 有关研究虽有报道，但涉及的种质较少[2]。 自从
Browers 等[3]在 Science 上发表利用 SSR 技术研究葡
萄起源和亲缘关系的论文以来，SSR 分子标记因其
多态性丰富、稳定性好、操作方便等特点，已成为研
究植物种质鉴定和亲缘关系的遗传多样性最常用的
方法之一。我们对采自浙江省的 46份柿属种质进行
SSR分析， 并基于 SSR数据对供试种质的鉴定和亲
缘关系进行了探讨，以期为浙江省柿属植物种质资源
收稿日期： 2010－03－26 接受日期: 2010－08－20
基金项目： 浙林计（2008）133 号－浙江柿种质资源发掘和开发利用研究
作者简介： 陈方永，男，硕士，副研究员。 研究方向：果树种质资源和育种研究。 Tel: 0576-84112516，E-mail: cfy17266@126.com
DOI:10.13925/j.cnki.gsxb.2011.01.006
表 1 供试材料及其采集地
Table 1 The materials and collection sites in this study
的科学保护和合理利用提供科学依据。
1 材料和方法
1.1 材料
自 2008年底至 2009年初陆续在省内外收集冠
以浙江的柿种质名称的试材， 有些试材虽未冠名但
在浙江有分布， 共 3 种 46 个基因型。 其中柿（D.
kaki Thunb.）43 份（含原产湖北种质 1 份、原产安徽
种质 2 份和原产日本种质 6 份），浙江柿（D. glauci-
folia Metc.）2 份，金枣柿（D. sp.）1 份。 全部高接（接
穗）或栽植（苗木）保存于浙江省农业科学院柑橘研
究所柿圃内。 各基因型及采集地详见表 1。
编号
Code
基因型
Genotypes
来源
Origin
编号
Code
基因型
Genotypes
来源
Origin
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
玉环长柿
Yuhuanchangshi
临海水柿
Linhaishuishi
天台山红朱柿
Tiantaishanhongzhushi
黄岩药山大道柿
Huangyanyaoshandadaoshi
永嘉无核长方柿
Yongjiawuhechangfangshi
永嘉玉朱柿
Yongjiayuzhushi
苍南无核牛心柿
Cangnanwuheniuxinshi
苍南咸柿
Cangnanxianshi
宁波铜盆柿
Ningbotongpenshi
宁波高方柿
Ningbogaofangshi
槽箕柿
Caojishi
富阳无核方柿
Fuyangwuhefangshi
浙农大水柿
Zhenongdashuishi
四沟柿
Sigoushi
金瓶柿
Jinpingshi
唐村柿
Tangcunshi
铜盆柿
Tongpenshi
永康方柿
Yongkangfangshi
兰溪大红柿
Lanxidahongshi
缙云大柿 1 号
Jinyundashi No.1
缙云大柿 2 号
Jinyundashi No.2
缙云大柿 3 号
Jinyundashi No.3
松阳水柿
Songyangshuishi
浙江台州
Taizhou， Zhejiang
浙江台州
Taizhou， Zhejiang
浙江台州
Taizhou， Zhejiang
浙江台州
Taizhou， Zhejiang
浙江温州
Wenzhou， Zhejiang
浙江温州
Wenzhou， Zhejiang
浙江温州
Wenzhou， Zhejiang
浙江温州
Wenzhou， Zhejiang
浙江宁波
Ningbo， Zhejiang
浙江宁波
Ningbo， Zhejiang
浙江宁波
Ningbo， Zhejiang
浙江杭州
Hangzhou， Zhejiang
浙江杭州
Hangzhou， Zhejiang
浙江杭州
Hangzhou， Zhejiang
浙江杭州
Hangzhou， Zhejiang
浙江杭州
Hangzhou， Zhejiang
浙江杭州
Hangzhou， Zhejiang
浙江金华
Jinhua， Zhejiang
浙江金华
Jinhua， Zhejiang
浙江丽水
Lishui， Zhejiang
浙江丽水
Lishui， Zhejiang
浙江丽水
Lishui， Zhejiang
浙江丽水
Lishui， Zhejiang
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
松阳扁柿
Songyangbianshi
诸暨小铜盆柿
Zhujixiaotongpenshi
诸暨小牛心柿
Zhujixiaoniuxinshi
嵊州方柿
Shengzhoufangshi
嵊州早柿
Shengzhouzaoshi
嵊州沙皮柿
Shengzhoushapishi
新昌牛心柿
Xinchangniuxinshi
江山无核柿
Jiangshanwuheshi
安徽大柿
Anhuidashi
安徽方柿
Anhuifangshi
甘秋
Ganshu
早秋
Soshu
大秋
Taishuu
无核长方柿
Mukaku-chohoshi
阳丰
Youhou
夕红
Yubeni
未知 A
Unknown A
未知 B
Unknown B
未知 C
Unknown C
罗田甜柿
Luotiantianshi
浙江柿雌株
Chekiang persimmon (♀)
浙江柿雄株
Chekiang persimmon (♂)
金枣柿
Jinzaoshi
浙江丽水
Lishui， Zhejiang
浙江绍兴
Shaoxing， Zhejiang
浙江绍兴
Shaoxing， Zhejiang
浙江绍兴
Shaoxing， Zhejiang
浙江绍兴
Shaoxing， Zhejiang
浙江绍兴
Shaoxing， Zhejiang
浙江绍兴
Shaoxing， Zhejiang
浙江衢州
Quzhou， Zhejiang
安徽
Anhui
安徽
Anhui
日本
Japan
日本
Japan
日本
Japan
日本
Japan
日本
Japan
日本
Japan
浙江
Zhejiang
浙江
Zhejiang
浙江
Zhejiang
湖北罗田
Luotian， Hubei
浙江杭州
Hangzhou， Zhejiang
浙江杭州
Hangzhou， Zhejiang
浙江丽水
Lishui， Zhejiang
1.2 方法
1.2.1 DNA 提取 采集幼叶，用塑料袋密封后冰盒
保存带回实验室； 称重后置于加有液氮的研钵中研
磨成粉末；参考 Doyle 等[4]的 CTAB 法进行基因组总
DNA 提取；用分光光度法和琼脂糖凝胶电泳法检测
DNA 质量；稀释至所需浓度后置-20℃保存。
1 期 陈方永等: 浙江部分柿属植物鉴定及亲缘关系的 SSR 分析 47
果 树 学 报 28 卷
图 1 引物 DQ204618 对 46 份浙江省柿种质的 SSR-PCR 扩增
M，DL2000；材料编号见表 1
Fig. 1 SSR primer DQ204618 amplification patterns in 46 accessions of Oriental persimmon in Zhejiang province,China
M，DL2000 marker； the code number of accessions are showed in Table 1
表 2 本研究采用的 SSR 引物
Table 2 SSR primers for this study
引物名/GenBank 编号
Locus name/Genbank accession no.
重复基元
Repeat motif
引物序列（5’－3’）
Primer sequence （5’－3’）
DKMP 1
DQ204606
DKMP 2
DQ204606
DKMP 3
DQ204606
DKMP 7
DQ204618
DKMP 8
DQ204618
DKMP 14
DQ222480
DKMP 15
DQ222481
ssrDK14
DQ097482
Dp2
AB073008
Dp 3
AB073006
4133
（GCCA）10
（TCCG）5
（GCCA）5
（AG）15
（AG）7
（GA）14…（AG）5… （GA）9
（AG）9
（AG）9
（AG）16
（GA）7
（AGA）4
内部资料，未发表 Internal data, unpublished
F: GGGTATCCTTGCCTGCTC
R: CGAACTGGTTGGTGACGG
F: GGG TAA TCT TGCCTGCTC
R:CTTGCTGACTCTTGGGTGT
F: ATGTGCGTTGAA AGTGTCG
R:GAGGGTTGTGAAATGGAA AG
F: CTA AATCCCCCTTTCTTCAT
R: TAGTCGCCTTCGTCTCCACC
F:AGAGAGACGACCAACGACAA
R: CTCACCTTTCCTGACCGCTA
F: GTTACCGCATTACTCCAG
R:ATCTCCGACATCCAAAGC
F: ACGCCAGGAACATTGAAG
R:TTACCGCATTAGGACCAG
F: GTGAAGGAACCCCATAGAA
R: CCATCATCAGGTAGGAGAGA
F: CATCTACTGCGTGCTTGTGT
R: TGGGAAACTCTGGATTGCTC
F: ATCGTTGGTTGCTATCTTGG
R: ATGGTG AATCCTACGGGGTC
1.2.2 SSR 分析 引物序列、PCR 反应体系以及电
泳检测方法参考郭大龙等[5]、 Soriano 等[6]以及阮小凤
等[7]，本研究选用的清晰、重复性强的引物 11 对，如
表 2；PCR 反应在 PTC-100 PCR 仪上进行。
1.2.3 数据分析 将电泳图上清晰且可重复谱
带记作 1， 同一位置没有出现谱带记作 0；用
NTSYS-pc 2.10 软件中 SimQual 程序计算 Nei-Li
相似系数矩阵；用 SHAN 程序中 UPGMA 法进行聚
类分析，并通过 Tree plot 模块生成聚类图。 方法参
考 Guo等[8-9]。
2 结果与分析
图 1 为引物对 DQ204618 在全部供试材料中的
扩增图谱。 46 份供试材料的相似系数分布在 0.47~
0.99，供试种质间的遗传差异性较大。 其中原产浙江
的柿属植物金枣柿（D. sp.）与其他试材的相似系数
最小（0.47~0.64）；原产浙江的另一种柿属植物浙江
柿（D. glaucifolia Metc.），其雄株与供试其他试材的相
似系数 0.53~0.78，与金枣柿间为 0.48；雌株为 0.53
~0.83，与金枣柿间为 0.57；雄株和雌株间为 0.71。
采用 SSR 技术对采自绍兴的新昌牛心柿和日
本原产完全甜柿夕红， 采自杭州的铜盆柿和丽水缙
云大柿 2号，采自丽水的缙云大柿 1号和松阳水柿，
采自温州的苍南咸柿和绍兴的嵊州沙皮柿， 以及采
自宁波的宁波高方柿、 槽箕柿和采自绍兴的诸暨小
牛心柿等 5组 11份试材分析表明，其组内相似系数
非常接近外，其他试材均可区分。这些不能区分的试
材有可能是在长期的引种和栽培过程中存在同物异
名现象所致，有待进一步研究。
在供试试材中，铜盆柿、宁波铜盆柿和诸暨小铜
盆柿虽然均冠名铜盆柿，嵊州方柿、安徽方柿、无核
长方柿、永嘉无核长方柿、富阳无核方柿和永康方柿
48
1 期
虽然均冠名方柿，浙农大水柿、松阳水柿和临海水柿
虽然均冠名水柿，新昌牛心柿、苍南无核牛心柿和诸
暨小牛心柿虽然均冠名牛心柿， 但分析结果认为其
为完全不同的基因型。
兰溪大红柿、永康方柿、天台红朱柿、永嘉长柿
为 4 个著名的地方品种， 产量占浙江全省柿产量
70%左右，但民间曾有品种间亲缘关系的争议。永康
方柿和兰溪大红柿外观相似，2 者在地域上一直隶
属金华市，曾被认为是同一品种。本研究结果表明上
述 4份试材互不隶属，应为不同的基因型。
此外，无论从相似系数还是聚类图上看，未知材
料 A、B、C 3者各不相同。未知材料 A与罗田甜柿聚
在一起， 未知材料 B 与未知材料 C 均为独立基因
型，其中后者更为原始（图 2）。
图 2 基于 SSR 标记的 46 份浙江省柿种质聚类分析
Fig. 2 Dendrogram of the 46 Oriental persimmon accessions in Zhejiang province, China based on SSR markers
1 玉环长柿 Yuhuanchangshi
6 永嘉玉朱柿 Yongjiayuzhushi
13 浙农大水柿 Zhenongdashuishi
27 嵊州方柿 Shengzhoufangshi
3 天台山红朱柿 Tiantaishanhongzhushi
30 新昌牛心柿 Xinchangniuxinshi
39 夕红 Yubeni
35 早秋 Soshu
36 大秋 Soshu
7 苍南无核牛心柿 Cangnanwuheniuxinshi
17 铜盆柿 Tongpenshi
21 缙云大柿 2 号 Jinyundashi No.2
16 唐村柿 Tangcunshi
38 阳丰 Youhou
20 缙云大柿 1 号 Jinyundashi No.1
23 松阳水柿 Songyangshuishi
8 苍南咸柿 Cangnanxianshi
29 嵊州沙皮柿 Shengzhoushapishi
33 安徽方柿 Anhuifangshi
10 宁波高方柿 Ningbogaofangshi
11 槽箕柿 Caojishi
26 诸暨小牛心柿 Zhujixiaoniuxinshi
34 甘秋 Ganshu
37 无核长方柿 Wuhechangfangshi
9 宁波铜盆柿 Ningbotongpenshi
41 未知 B Unknown B
4 黄岩药山大道柿 Huangyanyaoshandadaoshi
24 松阳扁柿 Songyangbianshi
5 永嘉无核长方柿 Yongjiawuhechangfangshi
15 金瓶柿 Jinpingshi
12 富阳无核方柿 Fuyangwuhefangshi
32 安徽大柿 Anhuidashi
40 未知 A Unknown A
43 罗田甜柿 Luotiantianshi
14 四沟柿 Sigoushi
18 永康方柿 Yongkangfangshi
19 兰溪大红柿 Lanxidahongshi
44 浙江柿雌株 Chekiang persimmon (♀)
2 临海水柿 Linhaishuishi
45 浙江柿雄株 Chekiang persimmon (♂)
28 嵊州早柿 Shengzhouzaoshi
22 缙云大柿 3 号 Jinyundashi No.3
25 诸暨小铜盆柿 Zhujixiaotongpenshi
42 未知 C Unknown C
31 江山无核柿 Jiangshanwuheshi
46 金枣柿 Jinzaosh
0.930.830.740.640.54
Cocfficicet
3 讨 论
聚类结果表明， 原产浙江丽水的金枣柿与包括
浙江柿和普通柿在内的全部供试种质单独成组，说
明金枣柿（D. sp.）与所有供试材料间亲缘关系较远，
应为柿属植物中有别于柿（D. kaki Thunb.）和浙江柿
（D. glaucifolia Metc.）的新种。 供试浙江柿（D. glau-
cifolia Metc.）虽与金枣柿遗传背景差异较大，而与柿
（D. kaki Thunb.） 亲缘关系相对较近； 从相似系数
0.64 处可将除金枣柿外的其他供试材料分成 2 组，
江山无核柿、缙云大柿 3 号、诸暨小铜盆柿和未知 C
与包括浙江柿在内的其他试材独立成组， 可能说明
前述 4个品种形成较早，在遗传上更为原始。
特别值得注意的是， 除少数可能的同物异名之
外， 原产日本的柿种质， 包括完全甜柿和非完全甜
柿， 均与浙江省的柿品种聚在一起， 而没有出现像
Guo等[8]报道的日本柿种质单独成组的现象，说明供
试日本柿种质与我国浙江的柿品种间可能存在某种
亲缘关系。 从中日文化，尤其是浙江省与日本文化、
经济交流的历史来看，这种可能性并不排除。但该观
点还需更多的证据支持， 如采用更多的日本柿种质
等并结合其他技术。
迄今， 涉及浙江柿种质鉴定和亲缘关系研究的
作者有 Guo 等 [8]和童敏 [2]，但涉及试材范围比较有
限。 童敏[2]采用 RAPD 技术研究 9 个浙江农家柿品
种 40个基因型鉴定和亲缘关系推测。鉴于形态鉴定
的局限性， 本试验采用目前广泛应用于种质鉴定和
亲缘关系研究的 SSR 分子标记技术对 46 份柿基因
型进行种质鉴定和亲缘关系分析， 所采用的技术和
获得的结果将为浙江省柿属植物种质资源的科学保
陈方永等: 浙江部分柿属植物鉴定及亲缘关系的 SSR 分析 49
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
2010年本刊审稿人名单
我刊 2010年来稿由以下专家审查。公布本名单（以姓氏汉语拼音字母顺序为序）以表示衷
心的感谢。
护和有效利用提供必要的参考。
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曹 珂 曹克强 曹尚银 陈汉杰 陈厚彬 陈杰忠 陈劲枫 陈昆松 陈力耕
陈维信 陈学森 戴洪义 邓秀新 邓子牛 董雅凤 杜国强 方成泉 方金豹
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李建国 李林光 李绍华 李世访 李天忠 李向东 李秀根 李亚东 李中安
梁国鲁 林顺权 刘成明 刘崇怀 刘继红 刘孟军 刘庆忠 刘威生 刘文革
吕德国 罗国光 罗正荣 马宝焜 马锋旺 马焕普 马瑞娟 马忠明 聂继云
牛 良 彭埃天 彭德良 彭良志 彭抒昂 秦 岭 冉 春 沈裕生 沈兆敏
孙光明 孙建设 汤浩茹 滕元文 田呈瑞 田世平 屠 康 汪良驹 王 军
王 俊 王 然 王 忆 王璧生 王长柱 王春生 王贵禧 王国平 王纪华
王家福 王进军 王力荣 王联德 王世平 王思新 王同坤 王文辉 王跃进
王运华 魏钦平 吴 俊 吴国良 吴振先 武予清 肖崇刚 肖炎农 谢 鸣
徐 娟 徐昌杰 许 勇 薛 洁 杨朝选 杨洪强 杨建民 杨立军 杨茂发
杨晓红 姚玉新 叶正文 伊 凯 俞明亮 郁志芳 喻大昭 张 显 张宏宇
张加延 张立彬 张茂新 张明方 张绍铃 张文庆 张新春 张新忠 张运涛
张志宏 张志华 章 镇 赵密珍 郑宝东 郑少泉 周厚成 周增强 周志钦
朱立武
果 树 学 报 28 卷50