全 文 ：· 药剂与工艺
葡萄属低聚蔑含量的 H P L C 测定△
中国科学院成都生物研究所 ( 6 10 41 ) 李文武 朱 李宇飞 丁立生 李朝塞 李伯刚
摘 要 采用 H P L C法测定 n 种葡萄属植物低聚蔑的含量 ,方法简便 ,快速准确 , 为合理利用和
评价本属药用植物提供依据 。
关键词 葡萄属 白黎芦醇 低聚蔑 H IP ￡
葡萄科葡萄属全世界有 60 余种 ,分布于
温带或亚热带 , 我国有 37 种 , 其中葡萄 iV ist
v in ife ar L
. 是著名的水果和酿酒原料 〔`〕 , 也
作为药用植物被药典收载 〔2 , , 该属其它多种
植物在民间也广为药用 , 收载入 《中药大辞
典 》中 。 葡萄属植物的植物化学研究表 明它们
富含低聚茵 ( o l i g o s t il b e n e s ) 〔卜 6〕 。 低聚茂是
以白黎芦醇 ( r es ve ar t or l) 为单体聚合而成 的
一类化合物 , 其结构独特复杂 , 且具有抗菌 、
抗炎 、 抗癌 、 抗血栓 、 降脂和保肝等多方面 的
活性 〔 , , 8 〕 , 吸引了国外学者的关注和研究 ,而
国 内这方面研究极 少 。 我们首先对毛葡萄
V
·
h卿 n e ` n a R o e m · 乙 S e h u l t 茎的化学 成分
作了研究 ,该植物的根皮具有舒筋活血 ,清热
解毒的作用 ,其全株及叶具有止血 ,祛风湿等
作用〔 9〕 ,从其茎的 乙醇提取物中分离得到 1
个新的白黎芦醇 四聚体一 h e y n e an ol A 和单
体 白薄芦 醇 , 2 个 二 聚 体 。一 v i n i f e r i n , a m -
p e l o p s i n A 和 1 个三聚 体 a m p e l o p s i n C 〔6〕 ;
为进一步寻找和扩大药用资源 , 了解化学成
分与物种之间的关系 , 我们收集了不 同产地
的 n 种葡萄属植物 ,对它们所含的 5 种苗类
化合物的含量做了 H IP 尤 的测 定 ,对合理利
用 、评价本属药用植物资源 , 探讨化学成分与
属种之 间的关系及物种的鉴定具有重要意
义 。
1 仪器与试剂
高效液相色谱仪 w a t e r s 9 9 0 H P L e 系
统 ,检测器为 U V 一 W at e sr 9 90 型检测器 。 色
谱柱 C l 。 ( 4 m m 又 2 5 O m m , 1 0 拼) 不锈钢柱 ,
所用水为超纯水 , 乙腊为色谱纯 , 其余试剂为
分析纯 。 r e s v e r a t r o l , 。一 v i n i f e r i n , a m p e lo p s i: ,
A
、
C
,
h e y n e a n ol A
,均 为从毛葡萄中分离得
到 。
2 实验条件
固定相 : C 1 8柱 ; 流动相 : C H 3C N 一 H 2 0 从
1 : 9~ 9
: l 梯度洗脱 , 流速 : 1 m L /m in ;检
测 波 长 2 8 0 n rn ( a m p e lo p s i n A 和 C ) 和 3 2 0
n m ( r e s v e r a t r o l
, 。一 v i n i f e r i n 和 h e y n e a n o l
A )
,定量方法采用外标法 。
3 实验方法
.3 1 标准曲线
3
.
1
.
1 准确称取 a m p e l o p s i n A 5 . 4 m g , 定
容于 50 m L 容量瓶中 , 分别吸取 0 . 1 、 0 . 5 、
1
.
0
、
2
.
0 m L 上述溶液 , 蒸干 , 加 入 1 . 0 m l -
甲醇 , 每次进样 10 川 J 。
以峰面积 ( Y )为纵坐标 ,对照品量 ( X )为
横坐 标 , 以 拼g 表示 , 测得 回归方程为 Y 一
1
.
1 6 3 又 1 0 一 ’ X 一 1 . 1 6 3 X I O一 4 , 相关系数 r =
0
.
9 9 9 9
。
3
.
1
.
2 准确称取 a m p e l o p s i n C 6 . 4 m g , 定
容于 50 m L 容量瓶中 ,分别配制成 0 . 01 28 、
令 A d d r e s s : L i W
e n w u
,
C h e n g d u I n s t i t u t e o f B i o l o g y
,
C h i n e s e A e a d e m y o f S e i e n e e s
,
C h e n g d u
李文武 男 , 助理研究员 。 1 9 9 2一 。7 毕业于吉林大学分子生物学系 (本科 ) , 1 9 9 5一 。7 在中国科学院成都生物研究所获植物化学专业硕士学位 , 19 9 8一。 2 在浙江大学化学系获理学博主要从事天然药物的化学与生物活性研究 , 已在国内外刊
现在中国科学院成都生物研究所天然药物研究室工作 。余篇论文 。△ 本课题受中科院成都地奥科学基金资助 。
《中草药 》 1 9 9 8 年第 29 卷第 5 期 3 0 1
0
.
06 4
、
0
.
12 5
、
0
.
2 56
、
0
.
6 4 0 m g /m L 的 5 个 m L 的对照品液 , 每次进样 1 0 拌L 。
不同浓度的溶液 ,每次进样 10 拜L 。 回归方程为 Y 一 1 . 5 61 X 1 0月 X 一 7 . 3 14
回 归 方 程 为 Y = 9 . 1 9 4 1 又 1 0 一 3 X 一 X I O一 ` , r = o · 9 6 6 5 。
8
.
9 6 x l o
一 5 , : 一 1 . 0 0 0 0 。 3 . 2 回收率 : 称取粒度为 45 目秋葡萄粉末
3
.
1
.
3 准确称取 r e s v e r a t r o l 5 . 8 m g 定容于 1 . 0 9 ,加入准确量的 0 . 3 m g r e s v e r a t r o l ,精
50 m L 容 量 瓶 中 , 分 别 配制 成 0 . 0 2 3 2 、 确加入甲醇一丙酮 (1 : 1) 混合溶液 10 . o m L ,
0
.
0 5 5
、
0
.
1 1 6
、
0
.
2 3 2
、
0
.
5 5 0 m g /m L 的 5 个 密封 , 冷浸过夜 , 超声振荡 4 0 m i n , 取溶液进
不 同浓度的溶液 ,每次进样 10 拼L 。 样 ,进样量为 5 拼L 。 同时另外称量生药粉末
回 归方 程为 Y 一 。 . 1 2 2 2 X 一 1 . 0 49 x 1 . 0 9 , 平行操作 , 为空白对照 ,测量峰面积 ,
1 0一 , , r = 0
.
9 9 7 8
。 计算回收率 ,计算结果表明 r e s v e r a t r o l 的回
3
.
1
.
4 准确称取 。一 v i n i f e r i n 5 . 0 m g ,按前法 收率为 1 0 7 . 1 % 。
配制成 0 . 0 1 、 0 . 0 5 、 0 . 1 0 、 0 . 2 0 、 0 . 50 m g /m L 3 . 3 蔑类化合物的测定 : 精密称取粒度为
的溶液 , 每次进样 10 拜L 。 45 目生药粉末 1 . 0 9 , 定量加入 甲醇和 丙酮
回归方程为 Y 一 3 . 6 02 义 1 0月 X 一 5 . 6 85 的混合液 (1 : 1 ) 10 . 0 m L , 密封 , 冷浸过夜 ,
x 1 0 一 3 , r = 0
.
9 9 8 8
。 超声振荡 4 0 m i n 。 取溶液进样 ,每次 5 拌L ,测
3
.
1
.
5 准确称取 h ey en an ol A 4 . 0 m g ,按前 峰面积 ,计算各茵类化合物的含量 。结果见表
法 配成 0 . 0 0 8 、 0 . 0 4 、 0 . 0 5 、 0 . 1 6 、 0 . 4 0 m g / 1 。
表 1 葡萄属 n 种植物荣类化合物的含量 ( % )
种 采收地点 r e s v e r a t r o l a m p e l o p s in C a m p e lo p s i n A ￡一 v i n i fe r in h e y n e a n o l A
庐山葡萄 v i t i : h u i C h e n g 江西庐山 微量 0 . 1 1 7 0 0 . 0 3 2 4 5 2 . 0 7 0 0 · 4 90 6
变叶葡萄 V . P e a s e z 几11 M a x in 河北霸县 微量 0 . 2 2 7 6 0 . 0 4 7 4 2 0 . 4 3 5 4 0 . 4 7 1 8
葡萄 V . u i n ife r a L . 载培 微量 0 . 3 5 5 1 0 . 3 3 4 0 . 0 . 16 2 1
东南葡萄 V . 认 u n邵 n e n s i : H u 江西井冈山 微量 0 · 0 0 6 8 0 8 0 . 0 6 0 7 0 . 0 74 7 1
龙泉葡萄 V . zo n g g u a n e n s i s 浙江龙泉 微量 0 . 0 7 1 7 5 0 . 3 7 4 4 0 . 7 3 5 1 0 . 0 12 3 0
P
.
L
.
Q i n
秋葡萄 V . or m a n e t i i R o m a n d u
e a i l e x P l a n e h
.
V a r
桑叶葡萄 V . 人即 n e a n a R o e m . 衣
S e h u l t s u b s p
·
湖北葡萄 V . : i zv es t万1 P a m p
毛葡萄 V . hey n ea an R oe m 挂
S e h u l t
刺葡萄 V . d a v id i i ( R o e m . d u
C a i l
.
) F o 6 x
狭叶葡萄 v . t s o i M e r r .
湖南凤凰 微量 0 . 0 6 5 7 0 . 1 1 0 4 0 . 9 5 39 0 . 0 4 80 1
陕西华山 微量 0 . 0 9 6 3 0 . 1 1 97
湖北白河 微量
湖北兴 山 微量
微量 0 . 1 5 1 5 0 . 20 8 9
0
.
0 7 2 7 7 0
.
0 54 5 1
四川南川 微量 0 . 0 0 8 9 7 2 0 . 0 0 7 9 2 7
江西井冈山 微量 。 . 0 2 7 8 2 0 . 0 4 0 5 2 0 . 1 0 8 6 微量
4 结果与讨论
低聚茵独特的化学结构和广泛的生理活
性 日益受到重视 。 葡萄属植物在我国资源丰
富 ,且富含低聚茵 ,是研究该类活性化合物的
理想材料 。 我们对毛葡萄进行了化学成分的
研究 ,分离得到 5个蔑类化合物 ,然后利用高
效液相色谱法 , 建立了以乙睛一水的体系 ,较
好地分离了苗类化合物 ,该方法能快速方便
地定性定量测定它们在植物中的含量 , 实验
结果表明所有的葡萄属植物都含有白黎芦
醇 ,含量都明显低于其聚合物的含量 ,这可能
是植物体内白黎芦醇的氧化偶合产生了丰富
一
3 0 2
-
的低聚茵的缘故 , 结合我们对葡萄属其它植
物 ,桦叶葡萄 V . be t u l ifo l i a D i e l 邑 G i l g 、 网脉
葡萄 V . w i l s o n a 。 V e i t e h 和葛慕 V . fl e x u o s a
T h u n b 化学成分的研究 〔` 。 , ,进一步说明低聚
茵是该属植物主要和特征的化学成分 , 也是
葡萄属药用植物的活性成分 ,这对葡萄科的
植物化学分类具有重要意义 。 O s ih m a 从葡萄
科蛇葡萄属 蛇葡萄 A mP el oP is : br ve iP ed u n -
c u l a t a v a r
·
h a n c e i R e h d
· 的根中分离得到多
种低 聚 茵 1t , 12j 以 及 我 们 从 羽 叶 蛇 葡 萄
A
·
c h a fj 瓦n’o n i i ( L e v l . ) R e h d . 分离到 白黎
芦醇〔` 3 〕表明 , 从化学分类角度看 ,蛇葡萄属
植物在亲缘关系上更靠近葡萄属植物 ;同时
我们对葡萄科地锦属的地锦 尸 a rt h en oc is s us
t ir c u sP i da t
a ( S i e b
·
& Z u e e
.
) P l a n e h
. 、 川鄂
爬 山虎 p . h e n yr a n a ( H e s m l . ) D i e l s 、 美国地
锦 p · 、 u i n o u efo l i a p l a n e h
. 、 三 叶 地 锦
p
·
s e m ic o dr
a t a ( w a l l ) p l a n e h 和 长 梗 地锦
尸 · fe d d ie C . L L e ; 俞 藤 属 的 大 果 俞 藤
Y u a u s t r 一 o ir e n t a l i s M e t e a l f
、 绿 牙 俞 藤
.y hc in en is C
.
L
.
iL 和崖爬藤属 的三叶崖爬
藤 几 t ar s t i g m a h e m s l妙 a n u m D i e l s e t G i l g
的甲醇一丙酮提取物做了 H P L C 分析 ,表明这
8 种植物不含或者含极微量的低聚茂 , 这说
明该科的地锦属 、俞藤属和崖爬藤属在亲缘
关系上离葡萄属和蛇葡萄属植物更远 ,这对
于我们寻找活性茵类化合物资源具有指导意
义 。 我们相信 ,随着葡萄科植物的化学成分和
药理研究的深入 , 将发现更多的活性低聚茵
类化合物并促进该科的植物化学分类的深入
和完善 ,从而指导我们寻找新药 。
参 考 文 献
1 李朝鉴 , 等 . 应用与环境生物学报 , 1 9 6 , 2 ( 3 ) : 2 34
2 中华人 民共和国卫生部药典委员会编 . 中华人民共和
国药典 , 北京 : 人民卫生出版社 , 1 9 9 0( 第一部 ) 附录 .
2 2
3 L a n g e a k e P
, e t a l
.
E x p e r i e n t i a
,
1 9 7 7
,
1 3 ( 2 )
:
1反l
4 P r y e e R J
, e t a l
.
P h y t o e h e m i s t r y
,
1 9 7 7
,
1 6
:
1 4 5 2
5 O
s
h inr a Y
,
et a l
.
J O r g C h e m
,
1 9 9 3
,
5 5
:
8 5 0
6 L I W e n w u (李文武 ) , e t a z . P h y t o e h e m i s t r y , 2 99 6 , 4 2
( 4 )
:
1 1 6 3
7 冯永红 ,等 . 国外医药 · 植物药分册 , 19 9 6 , 1 1 ( 4) : 15 5
8 斯建勇 . 国外医药 · 植物药分册 , 19 91 , 6( 4) : 15 5
9 江苏新医学院 . 中药大辞典 . 上海 : 上海科技出版社 ,
1 9 8 5
.
3 9 6 ; 2 1 5 8
1 0 L i W
e n w u (李文武 ) , 。 t a l . 合成化学 , 1 9 9 7 , ( 5 )增刊 :
2 80
1 1 O
s
h im a Y
, e t a l
.
T e t r a h e d r o n
,
19 9 0
,
4 6 ( 1 5 )
: 5 1 2 1
1 2 O s h im a Y
, e t a l
.
P h y t o e h e m i
s t r y , 1 9 9 3
,
3 3 ( 1 )
:
1 7 9
13 李文武 , 等 . 化学研究与应用 (有机分析论文专辑 ) ,
1 9 94
:
1 4 4
( 1 9 9 7
一
1 2
一
0 3 收稿 )
Q u a n t i t a t i v e D e t e r m i n a t i o n o f o l i g o s t i l b e n e s i n G r a P e ( V i t i s L
.
) S P e e i e s b y H P L C
L i W
e n
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u , L i Y
u
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,
D i n g L i s h e n g
, e t a l ( C h e n g d u I n s t it u t e o f B io lo g y
,
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A
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e m y o f S e ie n e e s
,
C h
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u 6 1 0 0 4 1 )
A b s t r a e t A
r a p id
, s im p l e a n d s e n s i t iv e m e t h o d w a s e s t a b l is h e d f o r t h e q u a n t i t a t iv e d e t e r m i n a t io n o f f i v e
s t il b e n e s i n e le v e n s p e e ie s o f V i t i s L
.
b y H P L C
.
T h
e n e w m e t h o d w a s r e lia b l e f o r t h e e v a l u a t i o n o f t h e m e d i e i
-
n a l r e s o u r e e s o f V i t i s L
.
p la n t s
.
K e y W o r d s V i t i
s L
.
S t il b e n e s H P L C
。 会讯 。
全国针灸临床与文献研讨会拟于 1 9 9 8 年 10 月在江西庐山召开 ,现开始征文 。 征文内容 :临床各科针灸治
疗经验 、 针药结合治疗疑难急重病的经验 、 医案医话 、 文献研究等 。 来稿请寄南昌市阳明路 20 号 《江西中医
药 》编辑部王庆伦收 ,信封标明“会议征文 ”字样 。 截稿日期 : 1 9 9 8 年 9 月底 。
一
3 0 3
·