全 文 ：　基金项目:云南省教育厅科学基金资助项目(编号:06Y195C)
实验研究
岩白菜素体外抗氧化作用研究
郝志云1 , 高云涛2 , 王雪梅2
(1.德宏师范高等专科学校职业技术教育系 , 云南 德宏 678400;2.云南民族大学化学与生物技术学院 , 云南 昆明 650031)
　　摘　要:目的:研究岩白菜素抗氧化作用。方法:通过硫
代巴比妥分光光度法研究岩白菜素过氧化脂质抑制作用及
抗 OH引起的 DNA 氧化损伤的保护作用。结果:实验结果
表明岩白菜素物有较明显过氧化脂质抑制作用 , 对 DNA
的 OH氧化损伤有显著抑制作用。结论:岩白菜素有较强的
抗氧化作用。
关键词:岩白菜素;抗氧化;DNA;自由基;过氧化脂质;分
光光度法
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A
文章编号:1007 - 2349(2007)08 - 0027 - 02
岩白菜素(bregenin),分子式为 C14H 16O 9 . 又称岩白菜内
酯 、矮茶素 、佛手配质[ 1] ,为虎耳草科植物岩白菜 、落新妇的有
效成分。岩白菜素有止咳作用 ,《中华人民共和国药典》收为
镇咳祛痰药. 用于慢性支气管炎 , 目前已制成片剂用于临床。
岩白菜素主要作用是止咳祛痰 , 但近来的药理实验发现岩白
菜素还具有抗炎 、护肝 、抗溃疡 、提高免疫等作用[ 2 ～ 3] 。 但岩
白菜素的抗氧化作用未见报道。
本文使用大理产岩白菜素 , 通过硫代巴比妥分光光度法
研究其过氧化脂质抑制作用及抗 OH引起的 DNA 氧化损伤
的保护作用。实验结果表明岩白菜素物有较明显过氧化脂质
抑制作用 ,对 DNA 的 OH氧化损伤有显著抑制作用 , 岩白菜
素有较强的抗氧化作用。
人体在进行一系列氧代谢的同时 , 不断地产生自由基 ,过
剩的自由基可作用于血液等脂类物质 , 使其变成脂质过氧化
物 ,这些过氧化物沉积在细胞膜上 , 使细胞膜丧失功能 , 造成
细胞活力下降 , 机体衰老 , 此外 , 这些过氧化物还会沉积在血
管壁上 ,造成血管壁硬化 , 容易产生血管破裂。过剩的自由基
还会作用于细胞内的遗传物质 DNA , 使细胞癌变或死亡等 ,
即所谓的氧化损伤。开发研究抗氧化作用的药物是目前研究
的热点 ,中药天然植物抗氧化作用日益受到重视[ 4 ～ 5] 。 本研
究表明:金钱草提取物具有良好的抗脂质氧化 、抑制 OH对
DNA 氧化损伤作用 ,为岩白菜素药用保健价值研究提出了有
益的启示。
1 　实验材料与方法
1. 1　材料与仪器　岩白菜素提取物 , 大理丸荣制药有限公司
生产 ,岩白菜素>97%;小牛胸腺 DNA(ctDNA 购自 sigma 公
司), 硫代巴比妥。胆固醇;卵磷脂;0. 05mo l/ L 磷酸缓冲液
(pH 为 7. 4), T ris - HCl缓冲溶液(pH=8. 2);200. 0 μmol /L
Fe2+溶液 , 20 mmo l /L H2O 2 溶液。 7200 型可见分光光度计
(上海尤尼柯上海仪器有限公司)。
所用试剂中小牛胸腺 DNA 、胆固醇和卵磷脂为生化试
剂 ,其它试剂均为分析纯 ,实验用水为离子交换纯水。
1. 2　实验方法
1. 2. 1　岩白菜素溶液配制　称取岩白菜素提取物500. 0 mg ,
用 5. 0 ml甲醇溶解后 , 用水定容至 100. 0ml ,制得 5. 0 mg / ml
岩白菜素溶液。
1. 2. 2　过氧化脂质抑制率的测定　参考文献[ 6]方法制备。
准确称取 40mg 卵磷脂和 15mg 胆固醇 , 溶入 0. 5ml的氯仿溶
液中 , 然后移入 10ml封口的医用硬质塑料管中 , 用氮气吹赶
干 ,加入 8ml 0. 05mo l /L(pH 为 7. 4)的磷酸缓冲液 , 充氮封
口 ,旋涡混合器混匀 ,于超声发生器中处理 10min , 得液体单层
小体积脂质体 ,置于 0℃条件下保存备用。于 10 ml比色管中
加入 0. 2ml脂质体液体 、不同体积的岩白菜素溶液 , 混匀 , 加
入 1. 0m l 200. 0μmol / L Fe2+溶液 , 用磷酸缓冲液用补足 3ml ,
37℃水浴中 30min , 每 5min 振摇 1 次。用硫代巴比妥(TBA)
法[7]检测样品的λ532nm处吸光度 A 。以不加岩白菜素溶液为
模型 ,同样的条件测模型的 Am ,不加 FeSO 4 溶液为空白 , 同样
的条件测空白的 A 0 。
抑制率=A m - A
Am - A 0
×100%
1. 2. 3　 OH引发 DNA 损伤抑制 TBA 法　取 2 μg DNA , 加
入 2 ml pH=8. 2 T ris - HCl缓冲溶液 , 各种浓度的岩白菜素
溶液 , 2ml 200. 0 μmol /L Fe2+溶液 , 2 ml 20 mmo l /L H2O2 溶
液 ,定容至 10ml , 混匀 , 37℃保温 48h 后 , 水浴加热 30min , 用
硫代巴比妥(TBA)法[7]检测 A 532nm处吸光度。以不加岩白菜
素溶液为模型 ,同样的条件测模型的 Am , 不加 FeSO 4 溶液为
空白 ,同样的条件测空白的 A 0。
抑制率=A m - A
Am - A 0
×100%
272007 年第 28 卷第 8 期　　　　　　　　　　云 南 中 医 中 药 杂志DOI牶牨牥牣牨牰牪牭牬牤j牣cnki牣牭牫牠牨牨牪牥牤r牣牪牥牥牱牣牥牳牣牥牪牱
2　结果与讨论
2. 1　对脂质过氧化的抑制作用　脂质过氧化主要发生在细
胞膜上 ,细胞膜的主要成分是磷脂和蛋白质 , 其中磷脂最容易
发生脂质过氧化反应 , 很多疾病和衰老与脂质过氧化有关。
引起 Fe2+是生物体内最主要的脂质过氧化促进剂。本文以
Fe2+为脂质过氧化促进剂 , 以卵磷脂脂质体为模型 , 研究岩白
菜素对脂质过氧化的抑制作用 ,结果见图 1。
图 1　岩白菜素对 OH引发脂质过氧化的抑制作用
从图 1 可知反应体系中加入 0. 4 mg /ml 岩白菜素 , 对脂
质过氧化的抑制率接近 77%, 说明岩白菜素有较好的抗脂质
过氧化作用。
2. 2　对 OH引发 DNA 氧化损伤抑制作用　硫代巴比妥酸
(TBA)可与丙二醛(MDA)类似物反应生成粉红色物质 , 该物
质在 A 532nm处有最大光吸收 , 采用 TBA 反应可定量检测脱氧
核糖或 DNA 上脱氧核糖环的受 OH攻击氧化断裂产生的丙
二醛类似物[ 8] 。本文选择 DNA 为 OH靶底物 ,结果见表 1 ,
未加岩白菜素时 , 体系有较大的 A 532nm , 说明 OH能对 DNA
的脱氧核糖进行攻击 , 使糖环断裂 , 产生丙二醛类似物 , 加入
岩白菜素后 , A 532nm值明显减小 ,表明丙二醛类似物产生减小 ,
DNA 氧化损伤被抑制 , 抑制率随岩白菜素浓度增加而增加 ,
说明岩白菜素能有效抑制 MDA 生成 , 对 DNA 上脱氧核糖的
氧化损伤抑制作用较好。结果见表 1。
表 1　岩白菜素对 OH引发 DNA产生 MDA的抑制作用
浓 度 (mg /ml) A 532nm 抑制率 /%
0 0. 178 0. 00
0. 10 0. 157 11. 80
0. 20 0. 111 37. 64
0. 40 0. 042 76. 40
0. 60 0. 041 76. 97
3　讨论
岩白菜素是多酚类物质 ,实验表明多酚类物质多数具有
独特的药理活性[9] , 与茶多酚中的儿茶素类似具有酚羟基的
结构[10] ,酚羟基与自由基反应可形成稳定半酮式自由基结
构 ,从而终止自由基链式反应 ,这是酚羟基化合物清除自由基
的最主要机制。可以认为酚羟基是多酚类物质抗氧化作用的
主要活性基团;多酚类物质也是种供氢体 , 可以通过形成氢键
达到稳定并降低自由基活性目的 ,酚羟基结构同时还能通过
螯合体系中的 Fe2+ 、Cu2+等微量元素 ,阻止 OH的产生 , 其中
的机制有待进一步研究。
参考文献:
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(1):58～ 41.
[ 3] 李百华 ,王俊平. 岩白菜素研究慨况[ J] . 西北药学杂志 , 1990 , 5
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[ 5] 阿不旺都热依木 ,阿不都艾尼 ,哈木拉提 ,等. 5种维吾尔药的清除
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Biochem , 1971 , 44:276～ 287.
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[ 9] Cut teridge M C. T hiobarbituric acid react ivity follow ing iron-depenent
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(收稿日期:2007- 03- 15。)
28 云 南 中 医 中 药 杂 志　　　　　　　　　　2007 年第 28 卷第 8 期
Yunnan Journal of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica
Vol. 28. No. 8 (General No. 170) August , 2007
Main Content
Effect of the Treatment of 43 Primary Hepatocarcinoma Patients with the Combination of Anti-hepatocarcinomaMixture with ArteriaHepatica
Perfusion Chemotherapy and Embolotherapy
　　 QIAN Jun , HUNAG Fang-fang⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯
Study on the Anti-oxidation of Bregenin in Vitro
　　 HAO Zhi-yun , GAO Yun-tao , WANG Xue-mei⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯
Extraction Technology of Baishao PeifangGranules
　　 HE Jian , WU Yan , HAN Zheng-zhou , et al.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯
Study on the Effect of Anti-anoxic and Anti-lipid Peroxidation of Aqueous Extract Qishengwan
　　 FANG Yu-zhen , XIE Da-sha , CHEN Xiu-fen⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯
Effect of the Treatment of 43 Primary Hepatocarcinoma Patients with the Combination of Anti-hepatocarcinomaMixture with ArteriaHepatica
Perfusion Chemotherapy and Embolotherapy
QIAN Jun , HUNAG Fang-fang
(Zhejiang Traditional Chinese Herbal Medicine University ,Hangzhou ,Zhejiang ,310051)
Abstract:Objective:To observe clinical effectiveness of the treatment of primary hepatocarcinoma patients with the combination of anti
-hepatocarcinoma mix ture with ar teria hepatica perfusion chemotherapy and embolotherapy (TACE). Methods:86 patients were divided into
one test g roup and one control group at random sampling. The test group w as treated with the combination of anti-hepatocarcinoma mix ture
and TACE while the control g roup was treated only with TACE . Results:The effectiveness of the test g roup w as better than that of the
control group. The rate of AFP negative transfer increased. The symptom improved obviously. The side-effect decreased. The intra period
ex tended. Conclusion:The treatment of the primary hepatocarcinoma patients with the combination of anti-hepatocarcinoma mix ture and
TACE has a better effect and alleviate the harmful effect of complication and embolotherapy.
Key words:primary hepatocarcinoma;combination of traditional Chinese medicine and westernmedicine;anti-hepatocarcinoma mix ture;
TACE
Study on the Anti-oxidation of Bregenin in Vitro
HAO Zhi-yun , GAO Yun-tao , WANG Xue-mei
(Dehong Higher Teachers Training School , Dehong , Yunnan , 678400)
Abstract:Objective:To study the effect of anti-oxidant effect of Bregenin. Methods:A thiobarbital spectrophotometry w as used to test
the lipid inhibitive peroxide effect of Bregenin and the pro tective effect of DNA lesion peroxide caused by anti-OH. Results:The experiment
results showed Bregenin had an obvious lipid inhibitive peroxide effect , and an obvious inhibitive effect on the DNA lesion peroxide.
Conclusion:Bregenin has a strong anti-oxidant effect.
Key words:Bregenin;anti-oxidation;DNA;free radical;lipid peroxide;spectrophotometry
Extraction Technology of Baishao PeifangGranules
HE Jian , WU Yan , HAN Zheng-zhou , et al.
(999 Pharmacy CO. Lid , Shenzhen , Guangdong , 518029)
Abstract:Objective:To establish an ex traction process of Baishao Peifang granules. Method:An orthorhombic experiment w as carried
out to test the effects of four factors. Result:In the orthorhombic experiment of the ex traction , Paeoniflo rin was a main index. The four
facto rs were A (decocting temperature)>B (decocting frequency)>C (decocting time)>D (w ater volume). The optimum extraction
process was A3B2C2D2 , i. e. 10 times water to the medical material , 30min. for soaking , ex tracting at 1000C /h for twice. Conclusion:The
technology can be used fo r industrial production.
Key words:Baishao Peifang granule;extraction process;ortho rhombic experiment
Study on the Effect of Anti-anoxic and Anti-lipid Peroxidation of Aqueous Extract Qishengwan
FANG Yu-zhen , XIE Da-sa , CHEN Xiu-fen
(Pharmacology Section , Guizhou Traditional Chinese Medicine College , Guiyang , Guizhou , 550002)
Abstract:Objective:To observe the effect of anti-anoxia and anti-lipid peroxidation of ex tract liquid Qishengwan. Methods:An anoxic
experiment was employed to observe the survival time of test mice and determine the SOD and MDA of the test mice in the condition of
cerebral tissue ischemia and anoxia and the MDA content of normal big mice to observe their antioxidation. Results:Extract liquid
Qishengwan could obviously improve the protective effect on the mice anoxia , revive the SOD activity of the cerebral tissue ischemia and
anoxia mice , inhibit the overproduction of MDA and decrease the MDA content of the normal mice. Conclusion:Extract liquid Qishengwan
has an obvious anti-anoxic effect and can improve the free radical metabolism in vivo.
Key words:Extract liquid Qishengw an;anti-anoxia;SOD;MDA