全 文 ：biochemical index of blood relationship． Results:1)The luteinizing hormone(LH) ，glycerin three greases (TG)associ-
ated with phlegm;estradiol (E2) ，blood urea nitrogen and creatinine ratio (BUN / CREA)and yin deficiency related;
estradiol (E2) ，follicle stimulating hormone (FSH) ，high density lipoprotein (HDL － C)and qi stagnation and related．
2)Deficiency，stagnation of phlegm，each grade difference was very significant (P ＜ 0． 01) ，and we detected by LH，
FSH，TG，BUN /CREA，HDL － C five indexes in the three groups of numerical showed:Level 2 ＞ Level 1 ＞ Level 0，
E2 Level 0 ＞ Level 1 ＞ level 2，after the test of significance，with statistical significance． Conclusion:Sex hormones，bi-
ochemical blood may be perimenopausal women“ sub － health”state of existence of the biochemical basis of syndrome;
sex hormones，blood biochemistry level and related to hormone changes in the presence of relationship，and a certain
correspondence．
Key words:Perimenopausal syndrome;“Sub － health”state;Syndrome essence;Sex Hormone;Blood biochemistry;Etiol-
檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼
ogy and pathogenesis
中 药 研 究
锦鸡儿属和杜鹃属植物抗乙酰胆碱酯酶活性研究
杨中铎* ，任晋，薛鹏辉
(兰州理工大学生命科学与工程学院，甘肃 兰州 730050)
摘 要:目的:从产自甘肃的锦鸡儿属和杜鹃属植物中筛选出对乙酰胆碱酯酶具有高抑制活性的植物提
取物。方法:锦鸡儿属植物经乙醇提取，碱酸处理，乙酸乙酯萃取后，得到多酚提取物。杜鹃属植物经乙
醇提取，硅胶柱层析进行粗分后，得到粗分离组分。总多酚组分和粗分离组分采用薄层色谱生物自显影
法初步筛选其乙酰胆碱酯酶抑制活性，再用改良的 Ellman 法进一步测定其对乙酰胆碱酯酶的抑制率。
结果:锦鸡儿属中柠条锦鸡儿(Caragana korshinskii)的抑制活性最强，在终浓度为 100μg·mL －1时，抑制
率超过 50%。杜鹃属中，头花杜鹃(Rhododendron capitatum) ，千里香杜鹃(Rhododendron thymifolium) ，
烈香杜鹃(Rhododendron anthopogonoides)的抑制活性最强，它们的粗分离组分在终浓度为 100μg·mL －1
时，抑制率大于 60%。结论:柠条锦鸡儿(Caragana korshinskii) ，头花杜鹃(Rhododendron capitatum) ，千
里香杜鹃(Rhododendron thymifolium) ，烈香杜鹃(Rhododendron anthopogonoides)提取物的抑制活性最
强，说明其含有抑制乙酰胆碱酯酶的成分，为进一步跟踪分离得到活性化合物奠定基础。
关键词:锦鸡儿;杜鹃;阿尔茨海默病;乙酰胆碱酯酶
中图分类号:R285 文献标识码:A 文章编号:1002 － 2392(2012)04 － 0067 － 03
收稿日期:2012 － 03 － 16 修回日期:2012 － 06 － 21
基金项目:国家自然科学基金(20802031) ;兰州理工大学优秀青年教师
培养计划资助项目(Q200904)
作者简介:杨中铎(1976 －) ，男，博士，副教授，研究方向:天然药物研究
与开发，E － mail:yangzhongduo@ 126． com．
* 通讯作者:杨中铎。
阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)亦称早
老性痴呆，是一类神经退行性疾病。其症状主要表现
为患者记忆和认知能力不同程度丧失，行为活动发生
障碍［1］。随着老龄化社会的到来，其发病率与日俱
增，现已成为继肿瘤、心脏病、脑血管病之后引起老年
人死亡的第四大疾病，有人甚至干脆将其称为 21 世纪
家庭的灾难［2］。
AD发病机制复杂，人们经过一个世纪的研究，至
今仍未明确病因。目前，临床上主要依据“胆碱能缺
失学说”［3］，采用乙酰胆碱酯酶(AchE)抑制剂如他克
林、多奈哌齐、利斯的明等治疗 AD。但是这些药物只
能用于轻度和中度 AD患者，只能缓解 AD 症状，而且
多存在半衰期短、较严重的外周胆碱能系统副作用等。
大量研究表明，天然植物药用成分具有疗效好，副作用
小，作用面广，适宜长期服用等优点。因而进一步开展
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药用植物中乙酰胆碱酯酶抑制活性成分研究，寻找新
作用机制的化合物对发现新的治疗老年性痴呆的药用
成分具有重要意义。
1 材料与方法
1． 1 植物
甘蒙锦鸡儿(Caragana opulens)、甘肃锦鸡儿(Ca-
ragana kansuensis)、红花锦鸡儿(Caragana rosea)、树
锦鸡儿(Caragana arborescens)、荒漠锦鸡儿(Caragana
roborovskyi)、白毛锦鸡儿(Caragana licentiana)、狭叶
锦鸡儿(Caragana stenophylla)、短脚锦鸡儿(Caragana
brachypoda)、柠条锦鸡儿(Caragana korshinskii)、川青
锦鸡儿(Caragana tibetica)、川西锦鸡儿(Caragana eri-
nacea)、短叶锦鸡儿(Caragana brevifolia)、昆仑锦鸡儿
(Caragana polourensis) ;陇蜀杜鹃(Rhododendron przew-
alskii)、头花杜鹃(Rhododendron capitatum) ，千里香杜
鹃(Rhododendron thymifolium) ，烈香杜鹃(Rhododen-
dron anthopogonoides)、黄毛杜鹃(Rhododendron ru-
fum)、无柄杜鹃(Rhododendron watsonii)、秀雅杜鹃
(Rhododendron concinnum )、山光杜鹃(Rhododendron
oreodoxa)、岷江杜鹃(Rhododendron Hunnewellianum)、
麻花杜鹃(Rhododendron maculiferum)。以上植物均采
自甘肃省，由兰州大学张国梁教授鉴定。
1． 2 仪器
HH －2 数显恒温水浴锅(江苏省金坛市荣华仪器
制造有限公司) ;ZF － 7 型三用紫外分析仪(上海金达
生化仪器有限公司) ;RE －5286A型旋转蒸发仪(上海
亚荣生化仪器厂) ;Biotek Elx 808 型酶标仪。
1． 3 药品与试剂
乙酰胆碱酯酶(AchE，EC 3． 1． 1． 7，sigma 公司)、
石杉碱甲(huperzine A，Sigma 公司)、0． 1M 的 pH =
8. 0 和 pH = 7． 0 的磷酸盐缓冲溶液(PBS)、5，5’－二
硫代双(2 － 硝基苯甲酸) (Dithiobisnitrobenzoic acid，
DTNB，sigma公司)、碘化硫代乙酰胆碱(Acetylthiocho-
line iodide，ATCI，sigma公司)、硅胶 G 板(青岛海洋化
工厂分厂)、乙酸 － 1 －萘酯(化学纯，国药集团化学试
剂有限公司)、Fast Blue B Salt(sigma 公司) ，其余所用
试剂均为分析纯。
1． 4 待测样品的制备
1． 4． 1 锦鸡儿多酚提取物的制备
称取晒干粉碎后的植物 50g于 1 000mL圆底烧瓶
中，加入 600mL乙醇水浴回流提取 2 次，第 1 次 2h，第
2 次 1h，抽滤，合并滤液，减压回收乙醇得稠浸膏，加入
100mL 蒸馏水悬浮浸膏，用 1M NaOH 调 pH 至 10 ～
11，静置过夜，抽滤，滤液用 2M HCl调 pH至 2 ～ 3。酸
液用乙酸乙酯萃取(150mL ×3) ，减压回收乙酸乙酯即
得总多酚。将所得样品用乙醇溶解配制成 10mg /mL
和 1mg /mL溶液，备用。
1． 4． 2 杜鹃粗组分的制备
称取晒干粉碎后的植物 100g 于 1 000mL 圆底烧
瓶中，加入 600mL乙醇水浴回流提取 2 次，第一次 2h，
第二次 1h，抽滤，合并滤液，减压回收乙醇得稠浸膏。
此浸膏采用硅胶柱层析，依次用石油醚:丙酮(V /V =
10∶ 1，7∶ 1，4∶ 1，2 ∶ 1) ，氯仿:甲醇(V /V = 10 ∶ 1，7 ∶ 1，
4∶ 1，2∶ 1)进行梯度洗脱，按每份 100mL 收集为一流
份，减压蒸馏回收溶剂。薄层层析检查后合并相同组
分，即得到粗分离组分。将所得组分用乙醇溶解配制
成 10mg /mL和 1mg /mL的溶液，备用。
1． 5 活性测定方法
1． 5． 1 薄层色谱生物自显影法［4］
取硅胶 G板一块，丙酮展开除去杂质，用电吹风
完全吹干。用 10 L 的移液枪吸取样品溶液(10mg /
mL)1 L，点于经上述处理过的硅胶板上，用适当的展
开剂展开，完全吹干。均匀的喷上乙酰胆碱酯酶(1U /
mL)和乙酸 － 1 －萘酯(1． 5mg /mL) ，37℃湿润的环境
下孵育 20min 后，均匀的喷上 Fast Blue B Salt 溶液
(0. 5mg /mL) ，有活性的化合物将在薄层板上出现白
色斑点(紫色背景)。
1． 5． 2 酶标法
采用改进的 Ellman 方法［5］在 96 孔酶标板上测定
样品的乙酰胆碱酯酶抑制活性。具体操作如下:在 96
孔酶标板中依次加入 140 L PBS(0. 1M pH = 8. 0) ，
20μL样品溶液(1mg /mL) ，15 L AChE(0. 28U /mL，
pH =8. 0 PBS溶解稀释)。4℃孵育 20min后，加 10 L
DTNB(0. 075mol /L)及 10 L ATCI(0. 01mol /L)。
37℃孵育 20min后，用酶标仪在 405nm 下测定其吸光
度值。根据下式计算抑制率:
抑制率(%)=［(空白组 －完全抑制组)－(样品
－样品本底) ］/ (空白组 －完全抑制组)× 100%
其中，空白组用 20μL PBS(pH8． 0)代替 20μL 样
品溶液;完全抑制组用 20μL 石杉碱甲(0. 125mg /mL)
代替 20μL样品溶液。样品本底组用 15μL PBS(pH =
8. 0)代替 15μL AChE(0. 28U /mL，pH = 8. 0 PBS 溶解
稀释)。
2 结果
13 种锦鸡儿属植物多酚提取物的活性测定结果
见表 1，从表 1 中可以看出，13 种锦鸡儿属植物中只有
柠条锦鸡儿(Caragana korshinskii)显示出较强的抑制
活性，在终浓度为 100μg /mL时，其抑制率超过 50%。
表 2 中列出了 10 种杜鹃属植物的测定结果。从
表中可以看出，在薄层生物自显影法中，千里香杜鹃、
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头花杜鹃、烈香杜鹃的粗分离组分显示出了抑制斑点，
说明其可能具有抑制乙酰胆碱酯酶的作用，进一步的
Ellman法测定结果表明，在终浓度为 100μg /mL 这些
组分的抑制率均大于 60%，说明这三种杜鹃具有强的
乙酰胆碱酯酶抑制活性。
3 讨论
锦鸡儿属(Caragana)植物系落叶灌木，是一个典
型的温带亚洲分布属。属豆科(Leguminosae) ，蝶形花
亚科(Faboideae)。在我国主要分布在黄河流域以北
干燥地区，在甘肃省分布 24 种［6］。杜鹃属(Rhododen-
dron)是杜鹃花科(Ericaceae)中的一个大属，共有 850
余种植物，主要分布在南、北半球的温带和北半球的亚
寒带。我国杜鹃属植物约有 530 种［7］，中国西南山区
被认为是全国也是全世界的杜鹃花属分布中心。
锦鸡儿属和杜鹃属植物在我国不仅分布广泛，资
源丰富，而且具有很高的药用价值。如锦鸡儿属药用
植物的花具有补气益肾、滋阴、活血、健脾的功效，根可
用于活血通络、清热散肿等。全草入药内服平血压，
治疗由高血压引起的发烧头痛，外用消毒散肿，治疗疖
疮痈疽等疾病。杜鹃的根、茎、叶也皆可入药，可治内
伤、风湿、痈疮、咳嗽等。此外，还可以作为工业原料和
植物杀虫剂。因此，其广阔的开发应用前景已引起国
内外的重视。
近年来，人们对锦鸡儿属植物的化学成分和生物
活性做了大量研究，研究发现锦鸡儿属中含有黄酮类、
香豆素类、倍半萜类，多聚二苯乙烯类等化学成分。生
物活性方面的研究表明，锦鸡儿属植物具有强的抗氧
化，抗病毒以及降血糖等作用。目前，国内对于杜鹃属
植物的研究，主要基于其植物化学研究、孢粉学、形态
学分类、生态与分布和新种与变种的发现等领域。对
于这两个属的植物来说，目前系统的对其在抗乙酰胆
碱酯酶方面的研究报道较少。
表 1 锦鸡儿属植物 AchE抑制活性
No． 植物名称 拉丁名 多酚提取率(%) 薄层生物自显影斑点 抑制率(%)
1 甘肃锦鸡儿 Caragana kansuensis 0． 74 － nd
2 树锦鸡儿 Caragana arborescens 1． 80 － nd
3 甘蒙锦鸡儿 Caragana opulens 1． 66 － nd
4 荒漠锦鸡儿 Caragana roborovskyi 3． 61 － nd
5 白毛锦鸡儿 Caragana licentiana 1． 01 － nd
6 红花锦鸡儿 Caragana rosea 1． 83 － nd
7 狭叶锦鸡儿 Caragana stenophylla 1． 62 － nd
8 柠条锦鸡儿 Caragana korshinskii 1． 58 + 55． 89 ± 1． 56
9 短脚锦鸡儿 Caragana brachypoda 1． 23 － nd
10 川青锦鸡儿 Caragana tibetica 0． 75 － nd
11 川西锦鸡儿 Caragana erinacea 0． 714 － nd
12 昆仑锦鸡儿 Caragana polourensis 0． 83 － nd
13 短叶锦鸡儿 Caragana brevifolia 1． 15 － nd
注:－表示薄层生物自显影上无抑制斑点，+表示薄层生物自显影上有抑制斑点;nd表示未测定。
表 2 杜鹃属植物 AchE抑制活性
No． 植物名称 拉丁名 乙醇提取率(%) 薄层生物自显影斑点 抑制率(%)
1 陇蜀杜鹃 Rhododendron przewalskii 18． 05 － nd
2 千里香杜鹃 Rhododendron thymifolium 27． 52 + 60． 43 ± 2． 14
3 头花杜鹃 Rhododendron capitatum 20． 27 + 77． 33 ± 1． 32
4 烈香杜鹃 Rhododendron anthopogonoides 35． 18 + 66． 53 ± 3． 58
5 黄毛杜鹃 Rhododendron rufum 35． 27 － nd
6 无柄杜鹃 Rhododendron watsonii 26． 33 － nd
7 秀雅杜鹃 Rhododendron concinnum 20． 91 － nd
8 山光杜鹃 Rhododendron oreodoxa 20． 55 － nd
9 岷江杜鹃 Rhododendron Hunnewellianum 21． 27 － nd
10 麻花杜鹃 Rhododendron maculiferum 20． 12 － nd
注:－表示薄层生物自显影上无抑制斑点，+表示薄层生物自显影上有抑制斑点;nd表示未测定。
本文采用薄层生物自显影法和改良的 Ellman 法
系统的研究了 23 种从甘肃采集的锦鸡儿属和杜鹃属
植物提取物的乙酰胆碱酯酶抑制活性。在本研究中由
于样品量较大，而薄层生物自显影法具有快速，简便，
检测灵敏度高的优点，因此先采用此法对植物提取物
的活性进行测定，结果发现柠条锦鸡儿(Caragana kor-
shinskii)多酚提取物，头花杜鹃(Rhododendron capita-
tum) ，千里香杜鹃(Rhododendron thymifolium) ，烈香杜
鹃(Rhododendron anthopogonoides)组分显示出抑制斑
点，因此可以确定它们具有抑制乙酰胆碱酯酶的活性。
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但是考虑到这种方法只能定性，不能定量的显示出抑
制活性的大小，因此采用经典的 Ellman 法对其进行进
一步的确定，结果显示，这几种提取物组分具有显著的
乙酰胆碱酯酶抑制活性，在终浓度为 100μg /mL 时，它
们的抑制率均超过 50%，其中头花杜鹃组分的抑制率
将近 80%。
上述测定结果说明，柠条锦鸡儿(Caragana kor-
shinskii) ，头花杜鹃(Rhododendron capitatum) ，千里香
杜鹃(Rhododendron thymifolium) ，烈香杜鹃(Rhododen-
dron anthopogonoides)植物提取物具有抑制乙酰胆碱
酯酶的作用。但在本研究中，它们均为粗提取物，可能
有效成分含量低，若进一步分离得到活性成分的话，可
能得到活性很高的先导化合物，因此本研究为分离得
到活性先导物奠定了基础。
参考文献:
［1］ 王颖，于榕，姚明辉．阿尔茨海默病治疗药物进展［J］．内科理论与
实践，2007，2(5) :351 － 353．
［2］ 盛一珉，杭汉翔．乙酰胆碱酯酶抑制剂的研究进展［J］．海峡药学，
2005，17(4) :10 － 12．
［3］ 邹垒，全明海，程永强，等．乙酰胆碱酯酶抑制剂的研究进展［J］．
食品科学，2005，26(增刊) :105．
［4］ Yang Z D，Zhang X，Duan D Z，et al． Modified TLC bioautographic
method for screening acetylcholinesterase inhibitors from plant extracts
［J］． J Sep Sci，2009，32(18) :3257 － 3259．
［5］ Orhan I，Sener B，Choudhary MI，et al． Acetylcholinesterase and bu-
tyrylcholinesterase inhibitory acitivity of some Turkish medicinal plants
［J］． J Ethnopharmacol，2004，9(1) :57 － 60．
［6］ 郝英魁．藏药鬼箭锦鸡儿化学成分的研究［D］． 天津:天津大学，
2007．
［7］ 陈俊愉．中国花卉品种分类学［M］．北京:中国林业出版社，2001:180．
Acetylcholinesterase Inhibitory Activity of the Plants of
Caragana and Rhododendron
YANG Zhong － duo，REN Jin，XUE Peng － hui
(School of Life Science and Engineering，Lanzhou University of Technology，Lanzhou 730050，China)
Abstract:Objective:To screen acetylcholinesterase inhibitory activity of the plants of Caragana and Rhododendron which
were collected from gansu． Methods:The Plants of Caragana were extracted by ethanol and treated with base and hydro-
chloric acid，and then extracted by ethyl acetate to obtain the total polyphenol fractions． The Plants of Rhododendron
were extracted by ethanol，after a initial separation of silica gel column chromatography，the crude fractions were ob-
tained． The AChE inhibitory activity was tested by TLC bioautographic method and modified Ellman＇s colorimetric method
in 96 － well microplates． Results:The results indicated that Caragana korshinskii，Rhododendron capitatum，Rhododen-
dron thymifolium，Rhododendron anthopogonoides were demonstrated to have significant activity ，and their inhibition ra-
tio was more than 50% under the concentration of 100 g·mL －1 ． Conclusion:Caragana korshinskii，Rhododendron cap-
itatum，Rhododendron thymifolium，Rhododendron anthopogonoides，as sources of AchE inhibitor，are worthy of futher
study．
Key words:Caragana;Rhododendron;Alzheimer’s disease;
檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼
Acetylcholinesterase
肺炎口服液的质量标准研究
梁喆1，张嫣1，吕艳莉1，张丽1，陈惠铮2
(1．哈尔滨市儿童医院，黑龙江 哈尔滨 150010;2．黑龙江中医药大学附属第一医院，黑龙江 哈尔滨 150040)
摘 要:目的:确定肺炎口服液的质量标准。方法:采用薄层色谱法对牡丹皮、大黄进行鉴别，以大黄素
为指标，采用高效液相色谱法测定制剂的含量。结果:所制口服液每毫升中大黄素含量应高于 0. 10mg。
结论:该方法操作简便、快速、准确，可用于肺炎口服液的质量标准制定。
关键词:肺炎口服液;质量标准;薄层色谱;液相色谱
中图分类号:R284． 1 文献标识码:A 文章编号:1002 － 2392(2012)04 － 0070 － 03
收稿日期:2012 － 04 － 18 修回日期:2012 － 06 － 21
作者简介:梁喆(1964 －) ，女，主任药师，主要研究方向:药物质量标准
的研究。
肺炎口服液是我院特色中药制剂，方药由石膏、甘
草、绵马贯众、牡丹皮、大黄等十味中药组成，具有清热
解毒，止咳定喘的功效，主治肺热壅盛病毒性肺炎、气
管炎等病症。该制剂还没有建立完整的质量标准。为
确保产品的质量，本实验在文献报道的基础上，建立了
肺炎口服液处方中大黄、牡丹皮的薄层色谱鉴别和处
方中主药大黄含量测定的高效液相色谱法，以有效地
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