全 文 ：浙江大学学报（农业与生命科学版）　３９（３）：２４６～２５２，２０１３
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ａｇｒｉｃ．＆Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ．）
ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｊｏｕｒｎａｌｓ．ｚｊｕ．ｅｄｕ．ｃｎ／ａｇｒ
Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｄｘｂｎｓｂ＠ｚｊｕ．ｅｄｕ．ｃｎ　 ＤＯＩ：１０．３７８５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８－９２０９．２０１２．１０．０６１
　　Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｉｔｅｍ：Ｐｒｏｊｅｃｔｓ　ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ（Ｎｏ．３０８００８７９）ａｎｄ　Ｆｏｒｅｓｔ　Ｓｅｅｄｌｉｎｇ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ　Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ
Ｔｅａｍ　ｏｆ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　ｉｎ　Ｃｈｉｎａ（Ｎｏ．２００９Ｒ５００３５）．
＊Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ：ＬＵ　Ｙｏｎｇｑｕａｎ，Ｔｅｌ：＋８６－５７１－６３７４３８５５；Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｕｙｏｎｇｑｕａｎ＠１２６．ｃｏｍ
　　Ｒｅｃｅｉｖｅｄ：２０１２－１０－０６；Ａｃｃｅｐｔｅｄ：２０１２－１０－２９；Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　ｏｎｌｉｎｅ：２０１３－０５－１５
ＵＲＬ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３３．１２４７．Ｓ．２０１３０５１５．１６０５．００２．ｈｔｍｌ
Ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　ｎｏｖｅｌ　ｃｈａｌｏｎｅ　ｓｙｎｔｈａｓｅ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎ
Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ　ｐｌａｎｔｓ
ＬＵ　Ｙｏｎｇｑｕａｎ１＊，ＪＩＡ　Ｑｉｎｇ１，ＴＯＮＧ　Ｚａｉｋａｎｇ１，ＣＨＥＮ　Ｊｉａｎｙａｎｇ２（１．Ｔｈｅ　Ｎｕｒｔｕｒｉｎｇ　Ｓｔａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｓｔａｔｅ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ
Ｓｕｂｔｒｏｐｉｃａｌ　Ｓｉｌｖｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌｉｎ′ａｎ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ　３１１３００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｔｉａｎｔａｉ
Ｃｏｕｎｔｙ　Ｈｕａｄｉｎｇ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｆａｒｍ，Ｔｉａｎｔａｉ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ　３１７２００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｃｈａｌｃｏｎｅ　ｓｙｎｔｈａｓｅ（ＣＨＳ）ｉｓ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｅｎｚｙｍｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　ｐａｔｈｗａｙ　ｉｎ　ｐｌａｎｔｓ．Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｃｌｏｎｅ
ＣＨＳｇｅｎｅ　ｉｎ　Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ　ｐｌａｎｔｓ，ｔｈｅ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｍａｒｋｅｒｓ（ＡＣＧＭ）ｗｅｒｅ　ｄｅｓｉｇｎｅｄ　ａｎｄ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ
ＲＡＣＥ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，ｔｈｒｅｅ　ＣＨＳｇｅｎｅｓ　ｉｎ　Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａｖａｒ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ，Ｃ．ｊａｐｏｎｉｃａｃｖ．Ａｒａｕｃａｒｉｏｉｄｅｓ　ａｎｄ　Ｃ．ｊａｐｏｎｉｃａ
ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｃｏｄｉｎｇ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ（ＣＤＳ）ｏｆ　ｅａｃｈ　ＣＨＳｇｅｎｅ　ｗａｓ　１　１７６ｂｐ　ｉｎ
ｌｅｎｇｔｈ　ａｎｄ　ｅｎｃｏｄｅｄ　３９１ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ．Ｔｈｅ　ＧＦＧＰＧ　ｔａｇ　ｏｆ　ＣＨＳ　ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ　ａｃｔｉｖｅ　ｓｉｔｅｓ　ｗｅｒｅ　ｆｏｕｎｄ　ｉｎ　ｔｈｅｉｒ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｔｈｒｅｅ
ＣＨＳ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｓｈｏｗｅｄ　９９％ｈｏｍｏｌｏｇｙ　ｗｉｔｈ　ｅａｃｈ　ｏｔｈｅｒ，ｂｕｔ　ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ　７９％ｈｏｍｏｌｏｇｙ　ｗｉｔｈ　ｏｔｈｅｒ　ｐｌａｎｔｓ，ｗｈｉｃｈ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ
ｔｈａｔ　ＣＨＳ　ｗｅｒｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ　ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ　ｄｕｒｉｎｇ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　ｇｅｎｅ　ｃｌｏｎｉｎｇ；ｃｈａｌｃｏｎｅ　ｓｙｎｔｈａｓｅ（ＣＨＳ）；Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ　ｖａｒ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ；Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ
ｃｖ．Ａｒａｕｃａｒｉｏｉｄｅｓ；Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ
ＣＬＣ　ｎｕｍｂｅｒ　Ｑ　７４　　　Ｄｏｃｕｍｅｎｔ　ｃｏｄｅ　Ａ
柳杉属３个查尔酮合成酶（ＣＨＳ）新基因的克隆及其序列特异性分析（英文）。Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ａｇｒｉｃ．＆Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ．），２０１３，３９（３）：２４６－２５２
卢泳全１＊，贾庆１，童再康１，陈见阳２（１．浙江农林大学亚热带森林培育国家重点实验室培育基地，浙江 临安
３１１３００；２．天台县华顶林场，浙江 天台３１７２００）
摘要　查尔酮合成酶（ｃｈａｌｃｏｎｅ　ｓｙｎｔｈａｓｅ，ＣＨＳ）是黄酮类物质合成的第一关键酶。为了获得ＣＨＳ基因，我们在
ＡＣＧＭ标记所扩增的ＰＣＲ片段内设计锚定引物，并结合ＲＡＣＥ技术首次克隆了柳杉属３种植物的ＣＨＳ基因，包
括柳杉（Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ　ｖａｒ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ，ＣｊｓＣＨＳ）、短茸柳杉（Ｃ．ｊａｐｏｎｉｃａｃｖ．Ａｒａｕｃａｒｉｏｉｄｅｓ，ＣｊａＣＨＳ）和日
本柳杉（Ｃ．ｊａｐｏｎｉｃａ，ＣｊＣＨＳ），并对其进行分析。结果表明：３个基因长都为１　１７６ｂｐ，编码３９１个氨基酸，它们都
含有ＣＨＳ高度保守活性位点以及ＣＨＳ标签序列 ＧＦＧＰＧ，其编码蛋白的相似度达９９％，与其他植物相似度在
７９％以上，表明ＣＨＳ基因在进化上具有相对保守性。
关键词　基因克隆；查尔酮合成酶 （ＣＨＳ）；柳杉；短茸柳杉；日本柳杉
　　Ｃｈａｌｃｏｎｅ　ｓｙｎｔｈａｓｅ（ＣＨＳ）ｉｓ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｅｎｚｙｍｅ　ｉｎ
ｔｈｅ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　ｐａｔｈｗａｙ　ａｎｄ　ａｌｓｏ　ａ　ｋｅｙ
ｅｎｚｙｍｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　ｐａｔｈｗａｙ　ｏｆ　ｐｌａｎｔｓ，
ｗｈｉｃｈ　ｃａｔａｌｙｚｅｓ　ｃｏｎｄｅｎｓａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　３－ａｃｅｔｏｘｙ　ｏｆ
ｍａｌｏｎｙｌ　ｃｏｅｎｚｙｍｅ　Ａ　ａｎｄ　１－ａｃｅｔｏｘｙ　ｏｆ　４－ｃｏｕｍａｒｏｙｌ－
ＣｏＡ［１］ａｎｄ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｓ　ｃｈａｌｃｏｎｅ　ｗｉｔｈ　４－ｃｏｕｍａｒｉｃ　ａｃｉｄ－
ＣｏＡ　ａｓ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅ［２］．Ｃｈａｌｃｏｎｅ　ｉｓ　ｔｈｅ　ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ
ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ　ｆｏｒ　ｐｌａｎｔ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄ［３］．Ｍａｎｙ　ｒｅｓｅａｒｃｈｅｓ　ｈａｖｅ
卢泳全，等：柳杉属３个查尔酮合成酶 （ＣＨＳ）新基因的克隆及其序列特异性分析 （英文）
ｂｅｅｎ　ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ａｎａｌｙｓｉｓ
ｏｆ　ＣＨＳｇｅｎｅｓ［４－６］．
　　Ｔｈｅ　Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ　ｇｅｎｅｒａ　ｗｉｔｈｉｎ　Ｔａｘｏｄｉａｃｅａｅ
ｆａｍｉｌｙ　ａｒｅ　ｒｅｌｉｃｔ　ｐｌａｎｔｓ　ｆｒｏｍ　Ｃｒｅｔａｃｅｏｕｓ　ｐｅｒｉｏｄ．Ｔｈｅ
ｆａｍｉｌｙ　ｗａｓ　ａｎ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ　ｉｎ　ｆｏｒｅｓｔ　ｖｅｇｅｔａｔｉｏｎ
ｏｆ　ｔｈｅ　ｎｏｒｔｈｅｒｎ　ｈｅｍｉｓｐｈｅｒｅ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｌａｔｅ　Ｃｒｅｔａｃｅｏｕｓ　ｔｏ
ｔｈｅ　ｍｉｄ－ｔｅｒｔｉａｒｙ　ｅｒａｓ　ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ　１１５ｔｏ　３０ｍｉｌｉｏｎ
ｙｅａｒｓ　ａｇｏ．Ｉｎ　ｔｈｅ　ｌａｔｅ　ｔｅｒｔｉａｒｙ　ａｎｄ　ｐｌｅｉｓｔｏｃｅｎｅ，
ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅ　ｆａｍｉｌｙ　ｕｎｄｅｒｗｅｎｔ　ａ　ｗｉｄｅｓｐｒｅａｄ　ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ
ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｔ　ｄａｙ　ｒｅｌｉｃｔｕａｌ　ｇｅｎｅｒａ　ｗｉｔｈ
ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ　 ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ［７］． Ａｔ　 ｐｒｅｓｅｎｔ， ｔｈｅ
Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ　ｇｅｎｕｓ　ｃｏｎｓｉｓｔｓ　ｏｆ　ｏｎｌｙ　ｔｗｏ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ａｎｄ
ｏｎｅ　ｖａｒｉｅｔｙ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ　ｖａｒ．
ｓｉｎｅｎｓｉｓ，Ｃ．ｊａｐｏｎｉｃａ　ｃｖ．Ａｒａｕｃａｒｉｏｉｄｅｓ　ａｎｄ　Ｃ．
ｊａｐｏｎｉｃａ［８］．
　　Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｎｏ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｈａｓ　ｂｅｅｎ　ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ
ｃｌｏｎｉｎｇ　ＣＨＳｇｅｎｅ　ｆｒｏｍ　Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ　ｐｌａｎｔｓ．Ｉｎ　ｔｈｉｓ
ｓｔｕｄｙ，Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ　ｐｌａｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ
ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｆｏｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ｔｈｅ　ｆｕｌ－ｌｅｎｇｔｈ　ｃＤＮＡ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ
ＣＨＳ　ｇｅｎｅ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ＲＡＣＥ （ｒａｐｉｄ－ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ
ｃＤＮＡ　ｅｎｄｓ）ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ａｎｄ　ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ　ａｎａｌｙｓｉｓ
ｗｅｒｅ　ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＣＨＳｇｅｎｅｓ　ｉｎ
Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａｐｌａｎｔｓ　ａｔ　ｔｈｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｌｅｖｅｌ．
１　Ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ａｎｄ　ｍｅｔｈｏｄｓ
１．１　Ｐｌａｎｔ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ
　　Ｆｒｅｓｈ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｃ．ｊａｐｏｎｉｃａ　ｖａｒ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ，Ｃ．
ｊａｐｏｎｉｃａ　ｃｖ． Ａｒａｕｃａｒｉｏｉｄｅｓ　ａｎｄ　Ｃ． ｊａｐｏｎｉｃａ，
ｎｕｍｂｅｒｅｄ　ｆｒｏｍ　１ｔｏ　３，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｗｅｒｅ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ
ｆｒｏｍ　Ｈａｎｇｚｈｏｕ　Ｐｌａｎｔ　Ｇａｒｄｅｎ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ，Ｃｈｉｎａ．
１．２　ＣＨＳｇｅｎｅｓ　ｃｌｏｎｉｎｇ
　　ＲＮＡｓ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｒｅｅ　ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ　ｕｓｉｎｇ
ＣＴＡＢ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗｉｔｈ　ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ［９］，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
Ｔｈｅｙ　ｗｅｒｅ　ｔｈｅｎ　ｒｅｖｅｒｓｅｄ　ｉｎｔｏ　ｃＤＮＡｓ　ａｓ　ｔｅｍｐｌａｔｅｓ　ｆｏｒ
ＰＣＲ　ｒｅａｃｔｉｏｎｓ．Ｐｒｉｍｅｒｓ　ｏｆ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ　ｇｅｎｅｔｉｃ
ｍａｒｋｅｒｓ（ＡＣＧＭ）ｔａｒｇｅｔｅｄ　ａｔ　ＣＨＳｇｅｎｅ［１０］ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ
ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ＰＣＲ　ｒｅａｃｔｉｏｎ．ＰＣＲ　ｗａｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｉｎ　２０μＬ
ｖｏｌｕｍｅｓ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　５０ｎｇ　ｏｆ　ｔｅｍｐｌａｔｅ　ＤＮＡ，０．５
μｍｏｌ／Ｌ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ｔａｒｇｅｔ　ｐｒｉｍｅｒ（Ｔａｂｌｅ　１），２００μｍｏｌ／Ｌ
ｏｆ　ｅａｃｈ　ｄＮＴＰ，１．５ｍｍｏｌ／Ｌ　ｏｆ　ＭｇＣｌ２，１ｕｎｉｔ　ｏｆ　Ｐｆｕ
ＤＮＡ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ，ａｎｄ　２μＬ　ｏｆ　１０×ＰＣＲ　ｒｅａｃｔｉｏｎ
ｂｕｆｅｒ．Ａ　ｔｏｕｃｈｄｏｗｎ　ＰＣＲ　ｐｒｏｇｒａｍ［１１］ｗａｓ　ｕｓｅｄ：５
ｍｉｎ　ａｔ　９５℃；１０ｃｙｃｌｅｓ　ｏｆ：３０ｓａｔ　９５℃，３０ｓａｔ　５８
℃ ｍｉｎｕｓ　０．３℃ｐｅｒ　ｃｙｃｌｅ，１ｍｉｎ　ａｔ　７２℃；２０ｃｙｃｌｅｓ
ｏｆ：３０ｓａｔ　９５℃，３０ｓａｔ　５５℃，１ｍｉｎ　ａｔ　７２℃；ａｎｄ　７
ｍｉｎ　ａｔ　７２℃ｆｏｒ　ａ　ｆｉｎａｌ　ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ．Ｔｈｅ　ＰＣＲ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ
ｗｅｒｅ　ｃｌｏｎｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｐＧＥＭＴ－ｖｅｃｔｏｒ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ
ｃｌｏｎｅｓ　ｗｅｒｅ　ｐｉｃｋｅｄ　ｏｕｔ．Ｔｈｅ　Ｔ－ｖｅｃｔｏｒ　ｗａｓ　ｔｈｅｎ
ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ　ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ　ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ．Ｔｈｅ
ｃｏｒｒｅｃｔ　ｃｌｏｎｅｓ　ｗｅｒｅ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ｆｏｒ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ
ｔｏ　ｔｈｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｒｅｓｕｌｔｓ，５′ａｎｄ　３′ＲＡＣＥ　ｐｒｉｍｅｒｓ
ｗｅｒｅ　ｄｅｓｉｇｎｅｄ （Ｔａｂｌｅ　１）．Ｆｏｌｏｗｉｎｇ　ｔｈｅ　ＲＡＣＥ
ｍａｎｕａｌ，ｔｈｅ　５′ａｎｄ　３′ｆｒａｇｍｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　ＣＨＳｇｅｎｅｓ
ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
　 　 Ｗｅ　ｔｈｅｎ　ｄｅｓｉｇｎｅｄ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｔｏ　ｃｌｏｎｅ　ｃｏｄｉｎｇ
ｓｅｑｕｅｎｃｅ （ＣＤＳ）ｏｆ　ＣＨＳ　ｇｅｎｅｓ　ｎａｍｅｄ　ＣｊｓＣＨＳ，
ＣｊＣＨＳ　ａｎｄ　ＣｊａＣＨＳ， ｆｒｏｍ　ｔｈｒｅｅ　ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ，
ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｆｏｒ　ｇｅｎｅ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｒｅ　ｉｎ
Ｔａｂｌｅ　２．Ａｌ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｕｓｅｄ　ｗｅｒｅ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ
Ｔａｂｌｅ　１　Ｐｒｉｍｅｒｓ　ｆｏｒ　ｔａｒｇｅｔ　ｇｅｎｅｓ
Ｎｏ． Ｐｒｉｍｅｒ　ｎａｍｅ　　　　　
Ｐｒｉｍｅｒｓ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ
Ｆｏｒｗａｒｄ　ｐｒｉｍｅｒｓ（５′→３′）　　　　 Ｒｅｖｅｒｓｅ　ｐｒｉｍｅｒｓ（５′→３′）　　　　
１ ＡＣＧＭ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｔａｒｇｅｔ　ａｔ　ＣＨＳｇｅｎｅ　 ＡＡＧＧＣＡＣＡＴＴＣＴＧＡＧＣＧＡＧＴ　 ＴＧＴＧＧＣＡＡＴＴＴＡＴＴＧＣＡＴＣＡＴＴ
２　 ５′ＲＡＣＥ　 ＧＡＣＧＡＡＴＣＡＡＧＣＴＴＧＴＧＧ　 ＣＧＡＣＴＴＣＣＴＣＡＴＣＴＣＡＴＣＣＡＡＧ
３　 ３′ＲＡＣＥ　 ＣＴＴＧＧＡＴＧＡＧＡＴＧＡＧＧＡＡＧＴＣＧ　 ＣＣＡＣＡＡＧＣＴＴＧＡＴＴＣＧＴＣ
Ｔａｂｌｅ　２　Ｐｒｉｍｅｒｓ　ｆｏｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ｇｅｎｅｓ
Ｎｏ． Ｇｅｎｅ　ｎａｍｅ　 Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　ｇｅｎｅｒａ　　　　
Ｐｒｉｍｅｒｓ　ｆｏｒ　ＣＤＳ　ｃｌｏｎｉｎｇ
Ｆｏｒｗａｒｄ　ｐｒｉｍｅｒｓ（５′→３′）　　 Ｒｅｖｅｒｓｅ　ｐｒｉｍｅｒｓ（５′→３′）　　
１　 ＣｊｓＣＨＳ　 Ｃ．ｊａｐｏｎｉｃａｖａｒ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ　 ＡＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＡＧＡＧＧＣＡＡＴ　 ＴＣＡＴＴＣＴＴＧＧＡＧＡＧＧＡＡＣＧＣ
２　 ＣｊａＣＨＳ　 Ｃ．ｊａｐｏｎｉｃａｃｖ．Ａｒａｕｃａｒｉｏｉｄｅｓ　 ＡＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＡＧＡＧＧＣＡＡＴ　 ＴＣＡＴＴＣＴＴＧＧＡＧＡＧＧＡＡＣＧＣ
３　 ＣｊＣＨＳ　 Ｃ．ｊａｐｏｎｉｃａ　 ＡＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＡＧＡＧＧＣＡＡＴ　 ＴＣＡＴＴＣＴＴＧＧＡＧＡＧＧＡＡＣＧＣ
　　Ｓｔａｒｔ　ａｎｄ　ｓｔｏｐ　ｃｏｄｏｎｓ　ａｒｅ　ｕｎｄｅｒｌｉｎｅ．
７４２　第３期
浙江大学学报 （农业与生命科学版）
Ｎａｎｊｉｎｇ　Ｊｉｎｓｉｒｕｉ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｎａｎｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ）．Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｅｓ　ｏｆ　ＰＣＲ
ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　１．０％ ａｇａｒｏｓｅ　ｇｅｌ．Ｔｈｅ
ｔａｒｇｅｔ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｗｅｒｅ　ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ａｎｄ　ｃｌｏｎｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ
ｐＧＥＭ－Ｔ　ｖｅｃｔｏｒ （Ｐｒｏｍｅｇａ，ＵＳＡ）ｆｏｒ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ
（Ｓａｎｇｏｎ，Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ）．
１．３　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｅｄｕｃｅｄ　ＣＨＳ　ｐｒｏｔｅｉｎ
　　Ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ＣＨＳｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｄｕｃｅｄ　ｂｙ
ＤＮＡｍａｎ　ｓｏｆｔｗａｒｅ．Ｔｈｅ　ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ　ｐｏｉｎｔｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ
ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍａｓｓｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｅｄｕｃｅｄ　ＣＨＳ　ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ
ｗｅｒｅ　ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ＰｒｏｔＰａｒａｍ　ｔｏｏｌ（ｈｔｔｐ：／／
ｗｅｂ．ｅｘｐａｓｙ．ｏｒｇ／ｐｒｏｔｐａｒａｍ）． Ｔｈｅ　ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ
ｄｏｍａｉｎｓ　ｏｆ　ＣＨＳｓ　ｗｅｒｅ　ａｌｓｏ　ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ　ｂｙ　ＳＭＡＲＴ　ａｔ
ｈｔｔｐ：／／ｓｍａｒｔ． ｅｍｂｌ－ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ． ｄｅ． Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ
ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ＣＨＳ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗａｓ　ｃｈｅｃｋｅｄ　ｂｙ　ＧＯＲ　ａｔ
ｈｔｔｐ：／／ｎｐｓａ－ｐｂｉｌ．ｉｂｃｐ．ｆｒ． Ｆｉｎａｌｙ，ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ－
ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ＣＨＳ　ｗａｓ　ｓｅｔ　ｕｐ　ｗｉｔｈ　３Ｄ－
ＰＳＳＭ　ｏｆ　ＥｘＰＡＳｙ　ａｔ　ｈｔｔｐ：／／ｅｎ．ｗｉｋｉｐｅｄｉａ．ｏｒｇ．
１．４　Ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ　ａｎａｌｙｓｉｓ
　　Ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ　ＣＨＳｓ　ｆｒｏｍ　Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ　ｐｌａｎｔｓ
ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ，ａｓ　ｗｅｌ　ａｓ　ＣＨＳｓ　ｆｒｏｍＬｉｌｉｕｍ
ｓｐｅｃｉｏｓｕｍ，Ａｑｕｉｌａｒｉａ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ，Ｎｅｌｕｍｂｏ　ｎｕｃｉｆｅｒａ，
Ｓｏｒｂｕｓ　ａｕｃｕｐａｒｉａ，Ｐｉｎｕｓ　ｐｉｎａｓｔｅｒ，Ａｂｉｅｓ　ａｌｂａ　ａｎｄ
Ｐｓｅｕｄｏｔｓｕｇａ　ｍｅｎｚｉｅｓｉ，ｗｅｒｅ　ａｌｉｇｎｍｅｎｔ　ｂｙ　ＣｌｕｓｔａｌＸ．
２　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ａｎｄ　ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ
２．１　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ＣＨＳ　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ
　　Ｗｉｔｈ　ＡＣＧＭ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｔａｒｇｅｔｅｄ　ａｔ　ＣＨＳ　ｇｅｎｅ，
ｔｈｒｅｅ　ｆｒａｇｍｅｎｔｓ　ｏｆ　ａｂｏｕｔ　２５０ｂｐ　ＰＣＲ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｗｅｒｅ
ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｒｅｅ　ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ
ＰＣＲ　ｒｅａｃｔｉｏｎ．Ｆｏｌｏｗｉｎｇ　ｔｈｅ　ＲＡＣＥ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，ｔｈｒｅｅ
ＰＣＲ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ（Ｆｉｇ．１）．
Ａｍｏｎｇ　ｔｈｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ｔｈｅ　ｓｔａｒｔ　ａｎｄ　ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｃｏｄｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ａｌ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｉｎ　ｔｈｏｓｅ　ｔｈｒｅｅ　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，
ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｄａｔａｂａｓｅ　ｓｅａｒｃｈ　ｗｉｔｈ　ＢｌａｓｔＮ　ａｔ　ＮＣＢＩ
（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ
ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ　ＣＨＳ　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｈａｄ　ａ　ｈｉｇｈ
ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ　ｗｉｔｈ　ｏｔｈｅｒ　ＣＨＳ　ｇｅｎｅｓ　ｆｒｏｍ　ｂｏｔｈ
ｇｙｍｎｏｓｐｅｒｍ　ａｎｄ　ａｎｇｉｏｓｐｅｒｍ　ｐｌａｎｔ　ｓｐｅｃｉｅｓ．Ｔｈｏｓｅ
ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｆｕｌ　ｃｏｄｉｎｇ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ
ＣＨＳｇｅｎｅｓ　ｉｎ　Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ　ｐｌａｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｉｎ
ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ．Ｔｈｅ　ｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ＣＨＳｇｅｎｅ　ｗａｓ　１　１７６ｂｐ
（Ｆｉｇ．２），ａｎｄ　ｅｎｃｏｄｅｄ　３９１ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ（Ｆｉｇ．３）．
Ｎｕｍｂｅｒｓ　ｏｆ　１ｔｏ　３ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　ｎｕｍｂｅｒ　ｉｎ　Ｔａｂｌｅ　１．
Ｆｉｇ．１　ＰＣＲ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｏｆ　Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ　ＣＨＳｓ
　　Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ
ｗｉｔｈ　ＣｌｕｓｔａｌＸ，ｔｈｅ　ｈｏｍｏｌｏｇｉｅｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｏｓｅ　ｔｈｒｅｅ
ＣＨＳｇｅｎｅｓ　ｉｎ　Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａｐｌａｎｔｓ　ｗｅｒｅ　９９％．Ｆｕｒｔｈｅｒ
ａｎａｌｙｓｉｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅｒｅ　ｗｅｒｅ　ｎｉｎｅ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ｓｉｔｅｓ
（Ｆｉｇ．２），ａｍｏｎｇ　ｗｈｉｃｈ　８ｗｅｒｅ　ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ，ｗｈｉｌｅ　ｔｈｅ
ｏｔｈｅｒ　ｏｎｅ　ｗａｓ　ｔｒａｎｓｖｅｒｓｉｏｎ　ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ
ａｄｅｎｉｎｅ（Ａ）ｔｏ　ｔｈｙｍｉｎｅ（Ｔ）．Ａｍｏｎｇ　ｔｈｅ　ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ，
ｓｉｘ　ｗｅｒｅ　ｆｒｏｍ　ａｄｅｎｉｎｅ（Ａ）ｔｏ　ｇｕａｎｉｎｅ（Ｇ），ｔｈｅ　ｏｔｈｅｒ
ｔｗｏ　ｗｅｒｅ　ｆｒｏｍ　ｔｈｙｍｉｎｅ（Ｔ）ｔｏ　ｃｙｔｏｓｉｎｅ（Ｃ）．Ｎｏ
ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ　ｏｒ　ｄｅｌｅｔｉｏｎ　ｍｕｔａｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ｆｏｕｎｄ．
２．２　Ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ　ｄｏｍａｉｎ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＣＨＳ　ｐｒｏｔｅｉｎ
　　Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ａ　ｆｏｒｍｅｒ　ｒｅｐｏｒｔ［１２］，ＣＨＳ　ｄｏｍａｉｎ
ｕｓｕａｌｙ　ｃｏｎｔａｉｎｓ　ｓｅｖｅｒａｌ　ｈｉｇｈ　ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ．
Ｉｎ　ｏｕｒ　ｓｔｕｄｙ，ｔｈｅ　ｄｅｄｕｃｅｄ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｆｏｒ
ＣＨＳｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｅａｃｈ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｃｏｎｔａｉｎｅｄ　ｆｏｕｒ
ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ　ｓｉｔｅｓ　ａｔ　Ｃ１６４，Ｆ２１５，Ｈ３０３，Ｎ３３６　ａｎｄ　ａ
ＧＦＧＰＧ　ｔａｇ　ｏｆ　ＣＨＳ，ｗｈｉｃｈ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅｙ　ａｌ
ｂｅｌｏｎｇ　ｔｏ　ＣＨＳ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｆａｍｉｌｙ．
２．３　Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ
　　Ｔｈｅ　ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ
α－ｈｅｌｉｘ　ａｎｄβ－ｔｕｒｎ　ｗｅｒｅ　ｔｈｅ　ｍａｊｏｒ　ｍｏｔｉｆｓ　ｏｆ　ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ
ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ＣＨＳ（Ｔａｂｌｅ　３）．Ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒｓ
ｏｆα－ｈｅｌｉｘ　ａｎｄβ－ｔｕｒｎ　ｉｎ　ｅａｃｈ　ＣＨＳ　ｗｅｒｅ　１２ａｎｄ　１４，
ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ａｌｔｈｏｕｇｈ　ｆｏｕｒ　ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ　ｅｘｉｓｔｅｄ　ａｍｏｎｇ
ｔｈｒｅｅ　ＣＨＳ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ａｔ　１５５，２５６，２８１ａｎｄ　２９９，ｔｈｅｉｒ
ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　ｗｅｒｅ　ｅｘａｃｔｌｙ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ，ｗｈｉｃｈ
ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＣＨＳｓ　ｉｎ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ．
２．４　Ｔｈｒｅｅ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ　ｍｏｄｅｌｓ　ｏｆ　ＣＨＳ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ
　　Ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ＣＨＳ　ｐｒｏｔｅｉｎ
ｗａｓ　ｓｅｔ　ｕｐ　ｗｉｔｈ　３Ｄ－ＰＳＳＭ　ｏｆ　ＥｘＰＡＳｙ（Ｆｉｇ．４）．Ｔｈｅ
ｔｈｒｅｅ　ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ　ｄｏｍａｉｎｓ　ｏｆ　ａｃｔｉｖｅ　ｐｏｓｉｔｉｏｎｓ　ｉｎ
ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　ｐａｔｈｗａｙ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｓｅｅｎ　ｃｌｅａｒｌｙ． Ｔｈｅ
８４２ 第３　９卷　
卢泳全，等：柳杉属３个查尔酮合成酶 （ＣＨＳ）新基因的克隆及其序列特异性分析 （英文）
Ｎｕｍｂｅｒｓ　ｏｆ　１ｔｏ　３ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　ｎｕｍｂｅｒ　ｉｎ　Ｔａｂｌｅ　２．
Ｆｉｇ．２　Ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ａｌｉｇｎｍｅｎｔ　ｏｆ　ＣＨＳｇｅｎｅｓ
９４２　第３期
浙江大学学报 （农业与生命科学版）
Ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ　ｓｉｔｅｓ　ａｒｅ　ｍａｒｋｅｄ　ｂｙ　ｂｏｘ．Ｎｕｍｂｅｒｓ　ｏｆ　１ｔｏ　３ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　ｎｕｍｂｅｒ　ｉｎ　Ｔａｂｌｅ　２．
Ｆｉｇ．３　Ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ａｌｉｇｎｍｅｎｔ　ｏｆ　ＣＨＳ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ
Ｔａｂｌｅ　３　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ
Ｎｏ． Ｇｅｎｅ　ｎａｍｅ
Ｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　ＣＤＳ
（ｂｐ）
Ｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ
ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍａｓｓ　 ＰＩ
Ｎｕｍｂｅｒｓ　ｏｆ
α－ｈｅｌｉｘ
Ｎｕｍｂｅｒｓ　ｏｆ
β－ｔｕｒｎ
１　 ＣｊｓＣＨＳ　 １　１７６　 ３９１　 ４２　８５８．５　 ６．２２　 １２　 １４
２　 ＣｊａＣＨＳ　 １　１７６　 ３９１　 ４２　９４３．５　 ５．６５　 １２　 １４
３　 ＣｊＣＨＳ　 １　１７６　 ３９１　 ４２　８５７．４　 ５．７７　 １２　 １４
Ｎｕｍｂｅｒｓ　１ｔｏ　３ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　ｎｕｍｂｅｒ　ｉｎ　Ｔａｂｌｅ　２．
Ｆｉｇ．４　Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ＣＨＳ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ
Ｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｄｏｍａｉｎ　ａｎｄ　Ｃ－ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｄｏｍａｉｎ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ
ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｃｏｕｍａｄｉｎ　ａｃｙｌ　ｃｏｅｎｚｙｍｅ　Ａ　ａｎｄ
ｍａｌｏｎｙｌ　ｃｏｅｎｚｙｍｅ　Ａ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｏｔｈｅｒ　ｏｎｅ　ｗａｓ
ＢＥＮ　ｄｏｍａｉｎ，ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｈｅｌｉｘ－ｈｅｌｉｘ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｗｈｉｃｈ
ｍａｙ　ｍａｋｅ　ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｍｏｒｅ　ｆｌｅｘｉｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｍｏｂｉｌｉｔｙ．
２．５　Ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ　ａｎａｌｙｓｉｓ
　　Ｄａｔａｂａｓｅ　ｓｅａｒｃｈ　ｗｉｔｈ　ＢｌａｓｔＰ　ｉｎ　ＮＣＢＩ　ａｎｄ　ｍｕｌｔｉ－
ａｌｉｇｎｍｅｎｔ　ＣｌｕｓｔａｌＸ　１．８３ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｄｅｄｕｃｅｄ　ＣＨＳ
ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｈａｄ　ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ （ｆｒｏｍ　７９％ ｔｏ　９４％）ｗｉｔｈ
ＣＨＳｓ　ｆｒｏｍ　ｏｔｈｅｒ　ｐｌａｎｔ　ｓｐｅｃｉｅｓ（Ｆｉｇ．５）．Ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ
０５２ 第３　９卷　
卢泳全，等：柳杉属３个查尔酮合成酶 （ＣＨＳ）新基因的克隆及其序列特异性分析 （英文）
　 　 Ｌ．ｓｐｅｃｉｏｓｕｍ （ＡＢ２０１５３０．１），Ａ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ （ＥＦ１０３１９７．１）， Ｎ．ｎｕｃｉｆｅｒａ （ＦＪ９９９６２８．１），Ｓ．ａｕｃｕｐａｒｉａ
（ＤＱ２８６０３７．１），Ｐ．ｐｉｎａｓｔｅｒ（ＡＹ３２１０８７．１），Ａ．ａｌｂａ（ＤＱ３８４１９８．１），Ｐ．ｍｅｎｚｉｅｓｉｉ（ＤＱ３７１８０５．１）．Ｎｕｍｂｅｒｓ　ｏｆ　１ｔｏ
３ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　ｎｕｍｂｅｒ　ｉｎ　Ｔａｂｌｅ　２．
Ｆｉｇ．５　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ａｌｉｇｎｍｅｎｔ
１５２　第３期
浙江大学学报 （农业与生命科学版）
ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＣＨＳ　ｇｅｎｅ　ｄｕｒｉｎｇ
ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ．
　　Ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｔｈｒｅｅ　ｆｕｌ－ｌｅｎｇｔｈ　ＣＨＳｇｅｎｅｓ
ｗｅｒｅ　ｆｉｒｓｔ　ｃｌｏｎｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ　ｐｌａｎｔｓ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ
ＲＡＣＥ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｃｈａｌｃｏｎｅ　ｓｙｎｔｈａｓｅ（ＣＨＳ）ｉｓ　ａ　ｋｅｙ
ｅｎｚｙｍｅ　ｉｎ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　ｐａｔｈｗａｙ［１３－１４］．
Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｃｌｏｎｉｎｇ　ＣＨＳ　ｇｅｎｅ　ｌａｉｄ　ｔｈｅ　ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｔｏ
ｃｌａｒｉｆｙ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｂａｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ．
Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ：
［１］　Ｈｅｒｒｍａｎｎ　Ａ，Ｓｃｈｕｌｚ　Ｗ，Ｈａｈｌｂｒｏｃｋ　Ｋ．Ｔｗｏ　ａｌｅｌｅｓ　ｏｆ
ｓｉｎｇｌｅ　ｃｏｐｙ　ｃｈａｌｃｏｎｅ　ｓｙｎｔｈａｓｅ　ｇｅｎｅ　ｉｎ　ｐａｒｓｌｅｙ　ｄｉｆｆｅｒ　ｂｙ　ａ
ｔｒａｎｓｐｏｓｏｎ－ｌｉｋｅ　ｅｌｅｍｅｎｔ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，
１９８８，２１２ （１）：９３－９８．
［２］　乔小燕，马春雷，陈亮．植物类黄酮生物合成途径及重要
基因的调控．天然产物研究与开发，２００９ （２）：３５４－３６０．
Ｑｉａｏ　Ｘ　Ｙ，Ｍａ　Ｃ　Ｌ，Ｃｈｅｎ　Ｌ．Ｐｌａｎｔ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
ｐａｔｈｗａｙ　ａｎｄ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｔｓ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｇｅｎｅｓ．Ｎａｔｕｒａｌ
Ｐｒｏｄｕｃｔ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２００９ （２）：３５４－３６０．
（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｔｈ　Ｅｎｇｌｉｓｈ　ａｂｓｔｒａｃｔ）
［３］　Ｍａｒｔｉｎ　Ｃ　Ｒ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｃｈａｌｃｏｎｅ　ｓｙｎｔｈａｓｅ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｒｅｖｉｅｗ　ｏｆ　Ｃｙｔｏｌｏｇｙ，
１９９３，１４７：２３３－２８４．
［４］　Ｖｏｇｅｌ　Ｓ， Ｈｅｉｌｍａｎｎ　Ｊ． Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ， ａｎｄ
ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｍｉｎｏｒ　ｐｒｅｎｙｌａｔｅｄ　ｃｈａｌｃｏｎｅｓ　ｆｒｏｍ
Ｈｕｍｕｌｕｓ　ｌｕｐｕｌｕｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，２００８，７１
（７）：１２３７－１２４１．
［５］　Ｈａｎ　Ｙ　Ｙ，Ｍｉｎｇ　Ｆ，Ｗａｎｇ　Ｗ，ｅｔ　ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ　ａｎｄ
ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｓｐｅｃｉａｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｈａｌｃｏｎｅ　ｓｙｎｔｈａｓｅ　ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ
ｆｒｏｍＰｈａｌａｅｎｏｐｓｉｓ　ｏｒｃｈｉｄ．Ｇｅｎｅｔｉｃａ，２００６，１２８ （１／２／３）：
４２９－４３８．
［６］　Ｌｉａｏ　Ｈ　Ｚ，Ｊｉａ　Ｙ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ａ　ｃｈａｌｏｎｅ
ｓｙｎｔｈａｓｅ　ｇｅｎｅ　ｏｆ　Ｃａｓｓｉａ　ｔｏｒａ．Ａｃｔａ　Ｂｏｔａｎｉｃａ　Ｂｏｒｅａｌｉ－
Ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉａ　Ｓｉｎｉｃａ，２００８，２８ （９）：１７２８－１７３３．
［７］　Ｓｅｈｌａｂｒａｕｍ　Ｓ　Ｅ， Ｔｓｕｅｈｉａｙ　Ｔ． Ｃｙｔｏｔａｘｏｎｏｍｙ　ａｎｄ
ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ　ｉｎ　ｃｅｒｔａｉｎ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　ｔａｘｏｄｉａｃｅａｅ． Ｐｌａｎｔ
Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｓ　ａｎｄ　Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ，１９８４，１４７ （１／２）：２９－５４．
［８］　吴征镒．中国植物志第七卷：杉科．北京：中国科学出版
社，１９９８．
Ｗｕ　Ｚ　Ｙ，Ｆｌｏｒａ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ　Ｖｏｌｕｍｅ　７：Ｔａｘｏｄｉａｃｅａｅ．Ｂｅｉｊｉｎｇ：
Ｃｈｉｎａ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｐｒｅｓｓ，１９９８．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［９］　Ｍｕｒｒａｙ　Ｍ　Ｇ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ　Ｗ　Ｆ．Ｒａｐｉｄ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｉｇｈ
ｍｏｌｅｃｕｌａｒ－ｗｅｉｇｈｔ　ｐｌａｎｔ　ＤＮＡ．Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，
１９８０，８：４３２１－４３２５．
［１０］　贾庆，童再康，卢泳全．利用ＡＣＧＭ标记发掘杉科功能基
因．湖北农业科学，２０１２，５１ （１）：１７７－１８１．
Ｊｉａ　Ｑ，Ｔｏｎｇ　Ｚ　Ｋ，Ｌｕ　Ｙ　Ｑ．Ｕｓｉｎｇ　ＡＣＧＭ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｆｏｒ
ｅｘｐｌｏｒｉｎｇ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｇｅｎｅ　ｆｒａｇｍｅｎｔｓ　ｉｎ　Ｔａｘｏｄｉａｃｅａｅ　ｓｐｅｃｉｅｓ．
Ｈｕｂｅｉ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１２，５１ （１）：１７７－１８１．（ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｔｈ　Ｅｎｇｌｉｓｈ　ａｂｓｔｒａｃｔ）
［１１］　Ｄｏｎ　Ｒ　Ｈ，Ｃｏｘ　Ｐ　Ｔ，Ｗａｉｎｗｒｉｇｈｔ　Ｂ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．‘Ｔｏｕｃｈｄｏｗｎ’
ＰＣＲ　ｔｏ　ｃｉｒｃｕｍｖｅｎｔ　ｓｐｕｒｉｏｕｓ　ｐｒｉｍｉｎｇ　ｄｕｒｉｎｇ　ｇｅｎｅ
ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９１，１９：４００８．
［１２］　李成磊，张晓伟，吴琦，等．甜荞查尔酮合酶基因Ｃｈｓ的
克隆及序列分析．广西植物，２０１１，３１（３）：３８３－３８７．
Ｌｉ　Ｃ　Ｌ，Ｚｈａｎｇ　Ｘ　Ｗ，Ｗｕ　Ｑ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ
ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｃｈａｌｃｏｎｅ　ｓｙｎｔｈａｓｅ　ｇｅｎｅ　Ｃｈｓ　ｆｒｏｍ　Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ
ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ．Ｇｕｉｈａｉａ，２０１１，３１ （３）：３８３－３８７．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ
ｗｉｔｈ　Ｅｎｇｌｉｓｈ　ａｂｓｔｒａｃｔ）
［１３］　Ｌｉｕ　Ｋ，Ｈｕ　Ｙ　Ｈ，Ｗａｎｇ　Ｇ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ａ
ｃｈａｌｏｎｅ　ｓｙｎｔｈａｓｅ　ｇｅｎｅ　ｆｒｏｍ　Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ　ｔａｔａｒｉｃｕｍ．
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　＆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１２，１３ （４）：７０８－
７１０，７２６．
［１４］　Ｘｕ　Ｆ，Ｃｈｅｎｇ　Ｓ　Ｈ　Ｙ， Ｗａｎｇ　Ｙ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ
ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｃｈａｌｃｏｎｅ　ｓｙｎｔｈａｓｅ
ｇｅｎｅ　ｆｒｏｍ　Ｇｉｎｋｇｏ　ｂｉｌｏｂａ　ｂｙ　ｔｈｅｒｍａｌ　ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ　ｉｎｔｅｒｌａｃｅｄ
ＰＣＲ．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｆｒｕｉｔ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００７，２４ （２）：２３７－２４３．
２５２ 第３　９卷