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杨树花提取物对小鼠免疫功能的影响



全 文 :动物医学进展,2013,34(6):54-57
Progress in Veterinary Medicine
杨树花提取物对小鼠免疫功能的影响
李 丽,王金莉,董子诚,任宗正,李芳兵
(辽宁医学院畜牧兽医学院,辽宁锦州121001)
  摘 要:为研究杨树花提取物对小鼠免疫功能的调节作用,每天给小鼠分别经口灌服0.1、0.2、0.4
mg/kg的杨树花提取物和灭菌水30d后,测定其免疫器官指数、脾淋巴细胞增殖能力、抗体生成细胞水平、
腹腔巨噬细胞吞噬功能、自然杀伤细胞(NK细胞)活性和IL-2的变化。结果表明,杨树花提取物的低剂量
组可明显提高IL-2水平;中、高剂量组均可显著提高(P<0.05)小鼠的免疫器官指数、血清溶血素水平,极
显著提高(P<0.01)脾淋巴细胞增殖能力、巨噬细胞吞噬率、巨噬细胞吞噬指数、NK细胞活性和IL-2水平。
说明不同剂量的杨树花提取物均能提高小鼠免疫功能,中高剂量组效果更为显著。
  关键词:杨树花提取物;小鼠;免疫调节
中图分类号:S852.4;S853.71 文献标识码:A 文章编号:1007-5038(2013)06-0054-04
  杨树花为杨柳科植物毛白杨、加拿大杨或同属
树种植物干燥雄花序。性味苦寒,具有清热解毒,化
湿止痢的功效[1]。常用水煮液治疗人和家畜的各类
细菌性痢疾和肠炎,临床效果良好,同时具有明显
的抗肿瘤、解热镇痛和抗风湿等多种药理作用[2]。
但就其对动物免疫功能调节的研究还很少。本研究
探讨杨树花提取物对正常小鼠特异性及非特异性免
疫功能的调节作用,旨在为杨树花提取物在生产中
的应用提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 主要试剂 刀豆蛋白A(ConA)、RPMl640
完全培养液、Hank’s液(pH 7.2~7.4)、IL-2检测
试剂盒为Sigma公司产品,四甲基偶氮唑(MTT)为
Amresco公司产品,吩嗪二甲酯硫酸盐(NP40)为
Fluka公司产品,其他试剂为国产分析纯;YAC-1细
胞为上海研生生化试剂有限公司生产,杨树花提取
物由辽宁医学院畜牧兽医学院动物药学实验室提
供,1g相当于原生药20g。
1.1.2 实验动物 Balb/c纯系小鼠,雄性,体重
20g±2g,由辽宁医学院实验动物中心提供。
1.2 方法
1.2.1 动物分组 将适应3d后的160只小鼠随
机分成对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组
 收稿日期:2012-12-28
 作者简介:李 丽(1967-),女,黑龙江哈尔滨人,副教授,硕士,主要从事兽医药理毒理与新兽药研发工作
櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙櫙

Effects of Heparin Sodium on Blood Coagulation
After Carotid Artery Injury in Rabbits
DU Pei-hang,XU Zai-pin,LYu-huan,MA Zhe,FAN Ya-fen,CHEN Ying-ni
(College of Animal Science,Guizhou University,Guiyang,Guizhou,550025,China)
Abstract:To explore the effects of heparin sodium on blood coagulation after carotid artery injury in rabbit,
24male New Zealand white rabbits were randomly dividedin to 4groups:control,high,medium and low
dosages(1 125,750,375IU/kg),respectively.Blood vessels were injured by squeezing carotid arteries
using two pieces of steel slide.Different dosages of heparin sodium was injected post-operation.Coagula-
tion parameters such as prothrombin time(PT),activated partial thromboplastin time(APTT),thrombin
time(TT),fibrinogen(FIB)were detected 1,3,5,7,9dafter heparin sodium administration.Results
indicated that low-dose of heparin sodium could retrieve blood hypercoagulable state,while high-dose of
heparin sodium had a bleeding tendency.
Key words:heparin sodium;coagulation;blood vessel injury;rabbit
DOI:10.16437/j.cnki.1007-5038.2013.06.014
40只;称重后,每天分别按0、0.1、0.2、0.4mg/kg
体重给药[1],杨树花提取物用灭菌水溶解至相应浓
度,对照组为灭菌水,持续30d,测定各项免疫功能
指标。实验动物饲养于温度为18℃~22℃,相对湿
度为50%~70%的屏障系统中。
1.2.1 免疫器官指数 小鼠经口灌服杨树花提取
物和灭菌水30d后称重。颈椎脱臼处死。取脾脏
和胸腺,用滤纸吸干后称重,计算脾指数和胸腺指
数。
脾或胸腺指数=
脾脏重或胸腺重(mg)
体重(g)
1.2.2 ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化试验 小
鼠经口灌服杨树花提取物和灭菌水30d后,每组取
10只小鼠,颈椎脱臼处死。无菌取脾,制备脾细胞
悬液。应用ConA刺激脾淋巴细胞分化增殖,采用
MTT比色法[3]测定脾淋巴细胞增殖能力。
1.2.3 血清溶血素检测 小鼠经口灌服杨树花提
取物和灭菌水26d后,每组取10只小鼠,每鼠腹腔
注射20mL/L绵羊红细胞悬液0.2mL进行免疫。
免疫4d后摘除眼球取血,分离血清。采用文献[4]
方法测定血清抗体积数。
1.2.4 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验 试
验结束前,每组取10只小鼠,每鼠腹腔注射200
mL/L鸡红细胞悬液1mL后,颈椎脱臼处死。依
文献[5]方法计数巨噬细胞、吞噬鸡红细胞的巨噬细
胞数和被吞噬的鸡红细胞数,按下式计算。
吞噬百分率(%)=
吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数
巨噬细胞数 ×100%
吞噬指数=
被吞噬鸡红细胞数
巨噬细胞数 ×100%
1.2.5 NK细胞活性测定 取上述脾细胞悬液,以
小鼠YAC-l细胞为靶细胞,用乳酸脱氢酶法[6-7]测
定NK细胞活性。
NK细胞活性=
试验组OD值-自然释放组OD值
最大释放组OD值-自然释放组OD值×100%
1.2.6 IL-2的测定 试验结束前,每组取10只小
鼠,摘眼球取血处死,分离血清,按照ELISA试剂盒
说明测定IL-2含量。
1.3 统计学方法
用SPASS13.0软件单因素方差分析(One Way
ANOVA)进行组间差异的比较。数据用(珚X±SD)
表示。
2 结果
2.1 杨树花提取物对小鼠免疫器官指数的影响
与对照组相比,低剂量组、中剂量组和高剂量组
胸腺指数分别提高3.39%(P>0.05)、6.78% (P<
0.05)和7.20%(P<0.05),低、中、高剂量组间差异
不显著(P>0.05);脾指数分别提高2.46%(P>
0.05)、7.20%(P<0.05)和7.01%(P<0.05),低、
中、高剂量组间差异亦不显著(P>0.05)(表1)。
表1 杨树花提取物对小鼠免疫器官指数的影响
Table 1 The effect of extract form poplar flower on index of immune organs in mice
免疫器官指数/(mg·g-1)
Index of immune organs
对照组
Control group
试验组Experimental groups
低剂量组
Low dose group
中剂量组
Middle dose group
高剂量组
High dose group
胸腺指数Thymus index  2.36±0.26b  2.44±0.31ab  2.52±0.66a 2.53±0.42a
脾指数Spleen index  5.28±1.45b  5.41±1.08ab  5.66±1.29a 5.65±0.96a
  注:表中肩标字母不同表示与对照组相比较,差异显著(P<0.05)。
Note:Values with different letters in same row show significant defference compared with control group(P<0.05).
2.2 杨树花提取物对小鼠脾淋巴细胞增殖能力、血
清抗体积数和IL-2活性的影响
  与对照组相比,低、中、高剂量组脾淋巴细胞增
殖能力分别提高15.91%(P<0.05)、38.64%(P<
0.01)和40.91%(P<0.01),与低剂量组相比,中、
高剂量组脾淋巴细胞增殖能力分别提高17.65%
(P<0.05)和19.61%(P<0.05),中、高剂量组之
间差异不显著(P>0.05)。血清溶血素分别提高了
4.78%(P>0.05),9.55%(P<0.05)和10.15%
(P<0.05),低、中、高剂量组之间差异不显著(P>
0.05)。与对照组相比,低、中、高剂量组IL-2分别
提高7.35%(P<0.05),20.10%(P<0.01)和
19.12%(P<0.01);与低剂量组相比,中、高剂量组
IL-2分别提高11.87%和10.96%,中、高剂量组间
差异不显著(P>0.05)(表2)。
2.3 对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能和 NK细胞活
性的影响
  与对照组相比,低、中、高剂量组吞噬率分别提
高了8.70%(P<0.05)、27.94%(P<0.01)和
27.66%(P<0.01);低剂量组与中、高剂量组相比,
分别提高17.70%(P<0.05)和17.44%(P<
0.05);中、高剂量组之间差异不显著(P>0.05)。
55李 丽等:杨树花提取物对小鼠免疫功能的影响
与对照组相比,低、中、高剂量组吞噬指数分别提高
了9.09% (P<0.05)、27.27% (P<0.01)和
30.30%(P<0.01);低剂量组与中、高剂量组相比,
中、高剂量组分别提高 16.67%(P<0.05)和
19.44%(P<0.05);中、高剂量组之间差异不显著
(P>0.05)。与对照组相比,低、中、高剂量组 NK
细胞活性分别提高11.74%(P<0.05)、29.07%
(P<0.01)和31.52%(P<0.01);低剂量组与中、
高剂量组相比,中、高剂量组NK细胞活性分别提高
13.43%(P<0.05)和17.71%(P<0.05);中、高剂
量组之间差异不显著(P>0.05)(表3)。
表2 杨树花提取物对小鼠脾淋巴细胞增殖能力、血清溶血素及IL-2的影响
Table 2 The effect of extracts form poplar flower on proliferation ability of lymphocytes,serum hemolysin and IL-2levels in mice
项目
Item
对照组
Control group
试验组Experimental groups
低剂量组
Low dose group
中剂量组
Middle dose group
高剂量组
High dose group
T淋巴细胞增殖
T lymphocyte proliferation
0.044±0.017Bc  0.051±0.012ABb  0.060±0.010Aa  0.061±0.018Aa
血清溶血素/(pg·mL-1)
Serum hemolysin
61.28±3.26b  63.56±4.14ab  74.59±0.012a 0.369±0.021a
IL-2  0.204±0.012Bc  0.219±0.022ABb  0.245±0.02Aa  0.243±0.01Aa
  注:表中肩标小写字母不同表示与对照组相比较,差异显著(P<0.05);肩标大写字母不同表示差异极显著(P<0.01)。
Note:Values with different lowercase letters in same row show significant defference compared with control group(P<0.05);and with
different capital letters show very significant difference(P<0.01).
表3 杨树花提取物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能和NK细胞活性的影响
Table 3 The effect of extracts form poplar flower on phagocytic function of macrophages and NK cel activity in mice
项目
Item
对照组
Control group
试验组Experimental groups
低剂量组
Low dose group
中剂量组
Middle dose group
高剂量组
High dose group
吞噬率Phagocytic rate  25.16±3.12Bc  27.35±4.82ABb  32.19±3.22Aa  32.12±2.36Aa
吞噬指数Phagocytic index  0.33±0.12Bc  0.36±0.08ABb  0.42±0.48Aa  0.43±0.53Aa
NK细胞活性 NK cel activity  31.44±14.36Bc  35.13±16.79ABb  40.58±12.58Aa  41.35±11.42Aa
  注:表中肩标小写字母不同表示与对照组相比较,差异显著(P<0.05);肩标大写字母不同表示差异极显著(P<0.01)。
Note:Values with different lowercase letters in same row show significant defference compared with control group(P<0.05);and with
different capital letters show very significant difference(P<0.01).
3 讨论
3.1 杨树花提取物对免疫器官指数的影响
胸腺和睥脏是动物主要免疫器官,其发育状态
与动物机体的免疫功能有一定的相关性,免疫器官
指数能客观地反应机体免疫器官的发育状况[8],间
接地指示机体的免疫状态。
胸腺是产生免疫细胞的中枢免疫器官,在机体
自身稳定和免疫监视中起主导作用,其主要功能是
产生T细胞和分泌胸腺因子,T淋巴细胞主要参与
机体的细胞免疫功能[9]。而脾脏是机体重要的外周
免疫器官,是 T淋巴细胞、B淋巴细胞和巨噬细胞
定居和发挥功能的场所,脾脏功能的变化反映机体
细胞免疫与体液免疫的强弱[10]。本研究显示中、高
剂量组均可明显提高小鼠的胸腺指数和脾脏指数,
这表明杨树花提取物可以明显的促进小鼠胸腺和脾
脏的生长发育,进而进而增强机体免疫功能。杨树
花提取物中的富含蛋白质、氨基酸、维生素等营养物
质为小鼠的免疫器官的发育提供了营养成分,同时
其生物活性物质可促进免疫器官中免疫细胞的分
化、增殖,促进免疫器官的生长发育。
3.2 杨树花提取物对小鼠脾淋巴细胞增殖能力、血
清抗体积数和IL-2水平的影响
  T、B淋巴细胞参与机体特异性免疫应答的主
要细胞,IL-2是 Th1细胞分泌的主要细胞因子之
一,是所有T细胞亚群的生长因子,参与细胞免疫。
同时也可促进活化B细胞增殖,参与抗体反应。本
研究表明杨树花提取物3个剂量组均能显著提高
ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力和血清IL-2
水平(P<0.05),中、高剂量组更为明显(P<0.01)。
中、高剂量组亦能显著提高血清中抗体积数(P<
0.05)。说明杨树花提取物能提高小鼠的细胞免疫
和体液免疫水平,增强小鼠特异性免疫功能。杨树
花提取物主要药用成分为黄酮类化合物、酚甙化合
物[11]。植物黄酮具有较强的抑菌作用,促进动物生
长,增强动物机体免疫和提高动物生产性能等方面
的作用。酚甙类化合物具有解热镇痛、抗风湿、抗
炎、免疫调节、抗氧化、降低胆固醇等作用[12]。同时
植物多糖类化合物是一种免疫调节剂,它具有抑制
65 动物医学进展 2013年 第34卷 第6期(总第240期)
肿瘤生长、激活免疫细胞、改善机体免疫功能等作
用[13]。因此,其免疫增强及调节作用可能与杨树花
提取物所含的多糖、黄酮等生物活性物质有关。
3.3 杨树花提取物对小鼠吞噬细胞吞噬率、吞噬指
数和NK细胞活性的影响
  巨噬细胞在免疫应答中属于辅佐细胞,在机体
的特异性和非特异性免疫过程中都起着重要的作
用,是机体防御功能的重要组成部分。NK细胞是
机体重要的免疫细胞,与抗肿瘤、抗病毒感染和免
疫调节有关。NK细胞活力和单核细胞的吞噬能力
是衡量机体非特异性免疫功能的重要标准。本研究
显示杨树花提取物3个剂量组均能明显提高巨噬细
胞的吞噬百分率、吞噬指数和 NK细胞的活性。与
对照组相比,低剂量组差异显著(P<0.05),中、高
剂量组差异极显著(P<0.01)。表明杨树花提取物
能够增强巨噬细胞的吞噬功能和 NK细胞的活性,
提高小鼠非特异性免疫的功能。这可能与杨树花提
取物中的多糖等成分有关。与以往对多糖的研究报
道[14-15]基本一致。
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Effects of Extracts from Poplar Flower on Immune Function in Mice
LI Li,WANG Jin-li,DONG Zi-cheng,REN Zong-zheng,LI Fang-bing
(College of Animal Husbandry and Veterinary Medicine,Liaoning Medical University,Jinzhou,Liaoning,121001,China)
Abstract:To study the effects of extracts form poplar flower on immune function in mice,the mice were o-
raly administered with 0.1,0.2,0.4mg/kg extracts from poplar flower and sterile water for 30days,
changes on indexes of immune organs,proliferation ability of lymphocytes,serum hemolysin level,NK
cel activity,phagocytic function of macrophages and IL-2level were observed.The results showed that
low dose of extracts improved IL-2level,the middle and high doses extracts can significantly enhance the
indexes of immune organs,serum hemolysin level,and can very significantly increase the proliferation a-
bility of lymphocytes,macrophage phagocytosis rate,phagocytic index,NK cel activity and IL-2level.
The extract from poplar flower has effect on improving immune function in mice,and the effects of the
middle and high dose groups were more remarkable.
Key words:extracts from poplar flower;mouse;immune modulation
75李 丽等:杨树花提取物对小鼠免疫功能的影响