全 文 ：第 6 卷 第 4 期 贵阳学院学报 (自然科学版) (季刊) Vol． 6 No． 4
JOURNAL OF GUIYANG COLLEGE
2011 年 12 月 Natural Sciences (Quarterly) Dec． 2011
正交试验法优化朱砂根中岩白菜素的提取工艺
＊
秦晋颖1，2，王瑞2，刘志刚2
(1．天津科技大学 生物工程学院，天津 300222;2．贵阳学院 生物与环境工程系，贵州 贵阳 550005)
摘 要:以朱砂根药材的粒度、甲醇浓度、提取时间、提取次数为考察因素，采用正交设计 L9 (3
4)进行优
选试验，并用反相高效液相色谱法测定提取物中岩白菜素含量。反相高效液相色谱法采用 Kromasil ODS － 1
C18反相柱 (250 mm ×4. 6 mm，5μm) ，流动相甲醇 －水 (体积比为 25:75) ，流速 1. 0 mL·min
－1，检测波长
274nm，柱温 25 ℃。最佳提取工艺为:采用超声提取法，朱砂根药材打成粉末 (过 40 目筛)、甲醇 (分析
纯)为溶剂、提取次数 3 次、提取时间 30min。
关键词:朱砂根;正交试验法;提取工艺
中图分类号:Q949. 773. 1 文献标识码:A 文章编号:1673 － 6125 (2011)04 － 0055 － 03
Optimization of the Extraction Technology of
Bergenin fromArdisia crenataSims by Orthogonal Design
QIN Jin － ying1，2，WANG Rui2，LIU Zhi － gang2
(1． Tianjin University of Science ＆ Technology，Tianjin 300222，China;2． Guiyang University，Guiyang 550005，China)
Abstract:Objective:To optimize the extraction technology of bergenin from Ardisia crenata Sims． Methods :Through
observing levels of the granularity，methanol concentration，extraction time and times of extraction，the optimum of meth-
anol extraction was selected by orthogonal design L9(3
4)． The content of bergenin in the methanol extraction was deter-
mined by RP － HPLC． RP － HPLC method was employed on a Kromasil ODS － 1 C18 column (250 mm × 4． 6 mm，
5μm)with the mobile phase of consisting of 25% (v /v)methanol． The flow rate was 1． 0 mL?min － 1，the detection
was set at 274nm and the column temperature at 25℃ ． Results:The optimum extraction technology was determined as
follows :Using ultrasonic extraction method with adding methanol(AR)into the powders of Ardisia crenata Sims (pas-
sed through 40 mesh sieve)and extracting three times with 30 minutes for each time． Conclusion:The optimized extrac-
tion technology is stable and feasible，and it provides theoretical basis for extraction of bergenin from Ardisia crenata
Sims．
Key words:Ardisia crenata Sims;Orthogonal design;Extraction technology
0 朱砂根(Ardisia crenata Sims)系紫金牛科(Myrs-
inaceae)紫金牛属(Ardisia)植物［1］，又名八爪金龙、
大罗伞、地红消、富贵籽等。朱砂根的根及全株入
药，具有清热解毒、祛痰止咳、散瘀止痛的功用，可
用于治疗咽喉肿痛、扁桃体炎、跌打损伤及关节疼
痛等［2］，为贵州民间习用中药［3］。岩白菜素(ber-
genin)是朱砂根中所含的一种有效药用成分，具有
止咳平喘的作用［4］。目前，从朱砂根中提取、纯化
岩白菜素的研究比较多［5］，但朱砂根中岩白菜素
的提取工艺研究者较少。本文研究了从朱砂根中
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*收稿日期:2011 － 09 － 03
作者简介:秦晋颖(1982 －) ，女，贵州贵阳人，贵阳学院生环系讲师，天津科技大学生物工程学院制药工程专业在读硕士研究生，主要研
究方向:药学。
提取岩白菜素的工艺条件，旨在为朱砂根的进一步
开发利用提供理论依据。
1 仪器与材料
Agilent 1100 高效液相色谱仪:Agilent 1100 二
极管阵列检测器，Agilent Chemstation 色谱工作站
等;TG328A 光学读数分析天平;SG2200H 超声波
清洗机等。朱砂根药材采集于贵州省贵阳市，经贵
阳学院高蓬明教授鉴定为紫金牛科植物朱砂根
Ardisia crenata Sims的根。岩白菜素对照品购于中
国药品生物制品检定所(批号:111532 － 200202)。
药材提取用甲醇为分析纯，HPLC 分析用甲醇为色
谱纯，水为重蒸水。
2 方法与结果
2. 1 岩白菜素含量测定
2. 1. 1 色谱条件:色谱柱为 Kromasil ODS － 1 C18
反相柱 (250 mm × 4. 6 mm，5μm) ，流动相为甲
醇—水(25:75)［6］，流速为 1. 0 mL·min －1，检测波
长为 274nm，柱温为 25 ℃，进样量为 20μL。
2. 1. 2 对照品溶液的制备:精密称取岩白菜素对
照品 0. 0233g，置于 25mL容量瓶中，加适量甲醇溶
解，继续加甲醇至刻度，摇匀，制成 1mL 含 0. 93mg
的对照品溶液。
2. 1. 3 线性关系考察:精密吸取对照品储备液
0. 5mL、1. 0mL、1. 5mL、2. 0mL、2. 5mL 于 5mL 容量
瓶中，加甲醇至刻度，制成浓度为 0. 093mg·
mL －1、0. 186 mg·mL －1、0. 279 mg·mL －1、0. 372
mg·mL －1、0. 465 mg·mL －1的岩白菜素对照品溶
液，将不同浓度对照品溶液用 0. 45μm微孔滤膜过
滤，弃去初滤液，续滤液按 2. 1. 1 项下检测。以进
样量(mg /mL)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，
绘制标准曲线。回归方程为 Y = 1. 0 × 106X －
44845，r2 = 0. 9999(n = 5)。结果表明岩白菜素进
样量在 1. 86μg—9. 30μg 之间时与峰面积积分值
的线性关系良好。
2. 1. 4 供试品溶液的制备
朱砂根药材经自然干燥后，切成小块，取适量
样品，50℃烘箱中干燥 48h，粉碎至 40 目。取朱砂
根粉末 1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入
50 ml甲醇，称定重量，超声处理 2 h［7］，处理完毕
后放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量。取
上清液，过 0. 45μm微孔滤膜，滤液低温避光保存，
即为供试品溶液。取供试品溶液 20μL 进样 ，在
“2. 1. 1”条件下分析。结果，岩白菜素的保留时间
适中，色谱峰形良好，理论塔板数 ＞ 3000 ，分离度
＞ 1. 5。色谱见图 1。
图 1 高效液相色谱
Fig． 1 HPLC
2. 1. 5 精密度试验:取岩白菜素对照品储备液，按
上述色谱条件进样 20μL，重复进样 5 次，记录峰面
积积分值，RSD = 0. 23%，表明仪器精密度良好。
2. 1. 6 稳定性试验:取朱砂根供试品溶液 20μL，
分别在 0、4、8、12、16h 进样，按“2. 1. 1”条件检测，
岩白菜素峰面积积分值的 RSD = 0. 45%，表明供试
品溶液在 16h内测定较稳定。
2. 1. 7 加样回收率试验:准确称取己测定含量的
朱砂根粉末样品 5 份，每份约 0. 5g，分别准确加入
适量岩白菜素对照品溶液，按“2. 1. 4”项制备供试
品溶液，在“2. 1. 1”条件下分析，计算回收率。岩
白菜素的平均回收率为 98. 2%，RSD = 1. 08%(n =
5) ，表明回收率较好。
2. 1. 8 含量测定:将“2. 2. 2”项下得到的提取液
定容至 50mL ，经 0. 45μm 微孔滤膜过滤，在
“2. 1. 1”条件下分析，根据线性回归方程计算其浓
度，按下式计算岩白菜素提取质量分数:提取质量
分数 =提取液中岩白菜素的质量 /朱砂根粉末质量
× 100 %。
2. 2 正交试验
2. 2. 1 试验因素与水平
对影响岩白菜素提取效果的 4 个因素，即药
材粒度(A)、甲醇浓度(B)、超声提取次数(C)、
超声提取时间(D)进行考察，每个因素选取 3 个
水平安排正交设计进行实验，各个因素和水平见
表 1。
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表 1 正交试验因素水平表
Tab. 1 Levels of factors
水平
药材粒度
(A)
甲醇浓度
(B)
提取次数
(C)
提取时间
(D)
1 过 10 目筛 50% 1 20min
2 过 20 目筛 80% 2 30min
3 过 40 目筛 分析纯 3 40min
2. 2. 2 L9(3
4)正交试验
等量称取朱砂根药材 9 份(每份约 1g) ，分别
粉碎成不同粒度，每次均加上述不同浓度的甲醇
10mL，按 L9(3
4)正交设计条件进行超声提取，分别
合并提取液，以相应浓度的甲醇定容于 50 mL量瓶
中，用 0. 45 μm滤膜过滤，取出滤液，按“2. 1. 1”项
下色谱条件测定，计算岩白菜素含量，确定朱砂根
中岩白菜素的最佳提取工艺。正交试验结果见表
2 ，方差分析结果见表 3。
表 2 正交试验结果
Tab． 2 Results of orthogonal design
试验号 A B C D 岩白菜素含量(%)
1 1 1 1 1 0. 85
2 1 2 2 2 1. 14
3 1 3 3 3 1. 56
4 2 1 2 3 0. 91
5 2 2 3 1 1. 22
6 2 3 1 2 1. 33
7 3 1 3 2 1. 39
8 3 2 1 3 0. 95
9 3 3 2 1 1. 37
均值 1 1. 183 1. 050 1. 043 1. 147
均值 2 1. 153 1. 103 1. 140 1. 287
均值 3 1. 237 1. 420 1. 390 1. 140
极差 0. 084 0. 370 0. 347 0. 147
表 3 方差分析结果
Tab． 3 Results of variance analysis
误差来源 偏差平方和 自由度 F比 F临界值 显著性
A 0. 011 2 0. 423 6. 940 无
B 0. 240 2 9. 231 6. 940 有
C 0. 192 2 7. 385 6. 940 有
D 0. 041 2 1. 577 6. 940 无
由表 2、表 3 可知，甲醇浓度(B)和提取次数
(C)对朱砂根中岩白菜素的提取有显著性影响，影
响试验指标的因素主次顺序为:甲醇浓度(B)＞提
取次数(C)＞提取时间(D)＞药材粒度(A)。最
佳提取工艺为 A3B3C3D2，即药材打成粉末(过 40
目筛) ，以甲醇(分析纯)为溶剂，超声提取 3 次，每
次提取时间 30 min。
2. 3 验证试验
取朱砂根粉末 1g，精密称定，按最佳提取工艺
进行验证试验。结果，岩白菜素的提取质量分数为
1. 67 % ，RSD = 0. 37 %(n = 3) ，高于正交试
验中的最高提取质量分数 1. 56%。结果表明，优
选出的工艺条件稳定、可行。
3 讨论
在预试验中，分别用水、甲醇、乙醇为溶剂提取
朱砂根中的岩白菜素。结果表明，甲醇提取效果较
好，用水或乙醇提取效果较差，故选用甲醇的浓度
作为考察因素。在提取方法上，考察了回流提取法
和超声提取法对提取效果的影响。结果表明，两种
方法的岩白菜素提取质量分数分别为 1. 23% 和
1. 22%，提取效果无明显差别，而回流提取法比较
复杂，超声提取法简单易行，故选用超声提取法进
行实验。
参考文献:
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