全 文 ：［收稿日期］ 20110927(005)
［基金项目］ 广东省产学研结合项目(2010B090400455)
［第一作者］ 黄樱华，主管药师，硕士，从事中药新药研究及指纹图谱分析，Tel:020-36591724，E-mail:27688636@ qq． com
［通讯作者］ * 黄月纯，主任中药师，硕士生导师，从事中药新药研究与指纹图谱分析，Tel:020-36591724，E-mail:huangyuechun@ 163. com
粉葛提取物的制备工艺
黄樱华1，段园园2，黄月纯1* ，魏刚2，刘东辉2
(1. 广州中医药大学第一附属医院，广州 510405;2. 广州中医药大学，广州 510405)
［摘要］ 目的:研究粉葛提取物的制备工艺。方法:以葛根素含量为考察指标，采用单因素及正交试验法筛选粉葛的提
取工艺;以葛根素含量及特征图谱主要特征峰面积的转移率为考察指标，评价粉葛提取物的各工艺步骤。结果:优选的提取
工艺为采用 8 倍量 30%乙醇，加热回流 3 次，每次 2 h，葛根素提取率达 97%以上; 主要制备工艺步骤为饮片→醇提液→浓缩
液→醇沉液→浸膏→提取物，各工艺步骤的葛根素转移率分别为 97. 89% ± 2. 17%，81. 70% ± 2. 12%，74. 92% ± 1. 92%，
72. 15% ± 1. 06%，50. 64% ± 2. 57%(n = 3) ，表明葛根素在干燥步骤中损失较大; 特征图谱结果显示，各工艺步骤均能保留粉
葛的 7 个特征峰，其中峰 1 及峰 6 的转移率较高，峰 2，3，4，5，7 的转移率均较低; 粉葛提取物的得率5. 09% ± 0. 06%，葛根素
质量分数(29. 262 ± 1. 500)mg·g － 1。结论:工艺合理、稳定、可行，为含粉葛的中药复方制剂工艺提供了参考。
［关键词］ 粉葛提取物; 正交试验法; 葛根素; 特征图谱
［中图分类号］ R283． 6 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)04-0043-04
Preparation Technology of Dry Extract from Pueraria thomsonii
HUANG Ying-hua1，DUAN Yuan-yuan2，HUANG Yue-chun1* ，WEI Gang2，LIU Dong-hui2
(1. Frist Affiliated Hospital of Guangzhou University of Traditional Chinese
Medicine，Guangzhou 510405，China;
2. Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine，Guangzhou 510405，China)
［Abstract］ Objective:To study on preparation technology of dry extract from Pueraria thomsonii． Method:
Extraction technology of P． thomsonii was optimized by single factor and orthogonal experiment by taking the
content of puerarin as index． Technology steps of dry extract from P． thomsonii was estimated by the content of
puerarin and transfer rate of main feature peak area of specific chromatogram as index． Result:Optimum extraction
technology was established as follows:heating reflux extracted 3 times with 8 times the amount of 30% ethanol for
2 h each time，extraction ratio of puerarin was more than 97%;Main preparation technology steps were:decoction
pieces→alcohol extract fluid→concentrated solution→alcohol precipitating fluid→extract→dry extract，transfer ratio
of puerarin in technology steps were 97. 89% ± 2. 17%，81. 70% ± 2. 12%，74. 92% ± 1. 92%，72. 15% ±
1. 06%，50. 64% ± 2. 57% (n = 3) ，it showed puerarin losed more in drying step;It showed in specific
chromatogram that all technology steps remained 7 characteristic peaks of fingerprint，and transfer ratio of peak 1
and peak 6 was high，but it was low of peak 2，3，4，5，7;Yield of dry extract from P． thomsonii was 5. 09% ±
0. 06%，and the content of puerarin was (29. 262 ± 1. 500)mg·g － 1 ． Conclusion:This technology was simple，
feasible and could provide a reference for technology of P． thomsonii compound preparation．
［Key words］ dry extract from Pueraria thomsonii;orthogonal experiment;puerarin;specific chromatogram
粉葛，又名“葛根”、“甘葛”，始载于《本经》: “主消渴，身大热，呕吐，诸痹，起阴气，解诸毒”［1］。
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2012 年 2 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 4
Feb．，2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.04.025
有解肌退热、生津解渴、透疹、升阳止泻、通经活络、
解酒毒之功效。主治外感发热头痛、项背强痛、麻疹
不透、热痢等疾病［2］。现代化学研究认为粉葛中以
葛根素为代表的异黄酮类成分，是粉葛中的主要有
效成分［1］。
有关粉葛提取工艺的研究已有很多文献报
道［3］，大部分采用葛根素［4］或总黄酮［5］含量为指标
筛选工艺参数，未进一步研究粉葛其他成分的保留
情况。本实验将选用粉葛为研究对象，以葛根素为
考察指标，采用单因素及正交试验法筛选粉葛的提
取工艺;再以葛根素含量结合特征图谱主要特征峰
面积的转移率为考察指标，评价粉葛提取物的制备
工艺，为含粉葛的中药复方制剂工艺提供参考。
1 仪器与试药
HP1100 型高效液相色谱仪( 安捷伦) ，葛根素
对照品( 批号110752-200511，中国药品生物制品检
定所) ，粉葛购自广州市药材公司，经广州中医药大
学第一附属医院黄月纯主任中药师鉴定为豆科植物
甘葛藤 Pueraria thomsonii Benth． 的干燥根，甲醇为
色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 葛根素 HPLC 含量测定［6］
2. 1. 1 色 谱 条 件 ZOBAX SB-C18 色 谱 柱
(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相甲醇-水(25 ∶
75) ，流速1. 0 mL·min － 1，检测波长 250 nm，柱温
30 ℃。
2. 1. 2 对照品溶液的制备 取葛根素对照品适量，
精密称定，30% 乙醇溶解配成 75 mg·L － 1对照品
溶液。
2. 1. 3 供试品溶液的制备
2. 1. 3. 1 饮片供试品溶液 饮片粉碎，取粉末( 过
三号筛)1. 7 g，精密称定，加 70%乙醇 200 mL，加热
回流 1. 5 h，放冷，滤过，取滤液备用; 滤渣加30%乙
醇 200 mL，加热回流 1. 5 h，放冷，滤过，取滤液备
用;滤渣加30%乙醇 100 mL，加热回流 1 h，放冷，滤
过，合并 3 次滤液，置 500 mL 量瓶中，加 30% 乙醇
定容至刻度，即得粉葛饮片提取液;精密吸取粉葛饮
片提取液 100 mL，水浴蒸干，残渣用 30%乙醇溶解
并定容至 10 mL 量瓶中，滤过，取续滤液，即得。
2. 1. 3. 2 各工艺样品供试品溶液的制备 取正交
试验样品( 醇提液) ，减压回收乙醇至无醇味，浓缩
至生药质量浓度为 1 g·mL － 1，取出，放冷，得浓缩
液。取适量浓缩液，加 95%乙醇，边加边搅拌，使其
含醇量达 75%，冷藏，静置过夜，滤过，取滤液，得醇
沉液。取醇沉液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩至相
对密度为 1. 15 ～ 1. 20(60 ～ 65 ℃) ，得浸膏。取浸
膏，80 ℃以下真空干燥，得粉葛提取物。
取醇提液，滤过，取续滤液，即得醇提取供试品
溶液。
精密吸取浓缩液 1 mL、醇沉液 2 mL，分别置于
25 mL 量瓶中，加 30%乙醇稀释定容到刻度，摇匀，
滤过，取续滤液，即得浓缩液、醇沉液供试品溶液。
取浸膏 0. 1 g，精密称定，精密加入 30%乙醇 25
mL，称重，超声处理 5 min，放冷，用 30%乙醇补足减
失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得浸膏供试品
溶液。
取提取物 0. 1 g，精密称定，精密加入 30%乙醇
50 mL，称重，超声处理 5 min，放冷，用 30% 乙醇补
足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得提取物供
试品溶液。
2. 1. 4 线性关系 分别精密吸取葛根素对照品溶
液 2，4，6，8，10，20 μL 注入高效液相色谱仪中，按
2. 1. 1 项下色谱条件测定，以进样量为横坐标，以色
谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程 Y =
3 934. 028X － 34. 152 (r = 0. 999 9) ，线 性 范 围
0. 15 ～ 1. 50 μg。
2. 1. 5 样品的测定 分别精密吸取对照品溶液 10
μL 及供试品溶液 5 μL，注入液相色谱仪中，测定峰
面积，按外标法计算含量。
2. 2 HPLC 指纹图谱分析方法
2. 2. 1 色谱条件［6-7］ 采用 ZORBAX SB-C18色谱
柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ; 流动相甲醇-0. 2%冰
醋酸水溶液，梯度洗脱(0 ～ 30 min，甲醇为 23% ～
30%;30 ～ 45 min，甲醇为 30% ～ 70%;45 ～ 50 min，
甲醇为 70%;50 ～ 60 min，甲醇为 70% ～ 23%) ，检
测波长 250 nm，流速 1 mL·min － 1，柱温 30 ℃。
2. 2. 2 供试品溶液的制备
2. 2. 2. 1 饮片供试品溶液 同 2. 1. 3. 1 项下方法。
2. 2. 2. 2 各工艺样品供试品溶液的制备 精密吸
取醇提液 8 mL，置于 10 mL 量瓶中，加 30%乙醇稀
释定容到刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得醇提取供
试品溶液。
精密吸取浓缩液 1 mL、醇沉液 3 mL，分别置于
25 mL 量瓶中，加 30%乙醇稀释定容到刻度，摇匀，
滤过，取续滤液，即得浓缩液、醇沉液供试品。
取浸膏 0. 1 g，精密称定，精密加入 30%乙醇 25
mL，称重，超声处理 5 min，放冷，用 30%乙醇补足减
失的质量，摇匀，滤过，精密吸取滤液 7 mL，置于 10
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 4
Feb．，2012
mL 量瓶中，加 30% 乙醇稀释定容到刻度，摇匀，滤
过，取续滤液，即得浸膏供试品溶液。
取提取物 0. 18 g，精密称定，精密加入 30% 乙
醇 100 mL，称重，超声处理 5 min，放冷，用 30%乙醇
补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得提取物
供试品溶液。
2. 2. 3 样品的测定 分别精密吸取对照品溶液 10
μL，各供试品溶液 5 ～ 10 μL，注入液相色谱仪中，测
定 7 个主要特征峰的峰面积。
2. 3 提取工艺的优选
2. 3. 1 提取溶媒的单因素考察 称取粉葛饮片 10
g，分别以 10 倍量水、30%乙醇、50%乙醇为溶媒，加
热回流 2 次，每次 1. 5 h，合并提取液，用相应的溶媒
定容至一定量，即得粉葛提取液。精密量取提取液
适量，水浴蒸干，残渣用 30% 乙醇溶解并定容至一
定量，即得供试品溶液。按 2. 1. 1 项下方法测定葛
根素的含量，结果葛根素的提取率依次为 1. 912，
2. 342，2. 215 mg·g － 1，确定 30%乙醇为提取溶媒。
2. 3. 2 正交试验 以 30% 乙醇为溶媒，对溶媒用
量、提取时间、提取次数 3 因素在 3 个水平对最佳提
取条件进行优选，因素水平表见表 1。称取粉葛饮
片 10 g，按正交表提取样品，加 30% 乙醇定容至一
定体积，即得正交样品溶液 ( 生药质量浓度为
0. 03 ～ 0. 15 g·mL － 1) ，按2. 1. 1 项下方法测定各样
品葛根素的含量，正交试验设计及结果见表 2，方差
分析结果见表 3。
表 1 粉葛提取物提取工艺正交试验因素水平
水平 A 溶媒用量 /倍 B 提取时间 / h C 提取次数 /次
1 8 1. 0 1
2 10 1. 5 2
3 12 2. 0 3
表 2，3 结果显示，影响提取的因素依次为 C ＞
B ＞ A;其中C 有显著性差异，A 和 B 因素对结果无
显著性影响，综合直观分析与方差分析的结果，确定
最佳工艺组合为 A1B3C3，即加 8 倍量的 30% 乙醇，
回流提取 3 次，每次 2 h。
2. 3. 3 验证试验 为验证优选工艺的可靠性和重
复性，称取粉葛饮片 500 g，按最佳工艺提取 3 份样
品，按 2. 1 项下方法测定葛根素提取量，结果 3 份样
品葛根素的平均提取量为(2. 877 ± 0. 064)mg·g － 1，
RSD 2. 21%，表明该工艺条件有较好的重复性，方
法可行。
表 2 粉葛提取物提取工艺正交试验正交试验安排
No． A B C D
葛根素提取量
/mg·g － 1
1 1 1 1 1 1. 459
2 1 2 2 2 2. 153
3 1 3 3 3 2. 918
4 2 1 2 3 1. 993
5 2 2 3 1 2. 689
6 2 3 1 2 1. 619
7 3 1 3 2 2. 440
8 3 2 1 3 1. 532
9 3 3 2 1 2. 329
K1 2. 177 1. 964 1. 537 2. 159
K2 2. 100 2. 125 2. 158 2. 071
K3 2. 100 2. 289 2. 682 2. 148
R 0. 077 0. 325 1. 145 0. 088
表 3 粉葛提取工艺方差分析
因素 SS f F P
A 0. 012 2 1. 000
B 0. 158 2 13. 167
C 1. 974 2 164. 500 ＜ 0. 01
D( 误差) 0. 01 2
注:F0. 1(2，2)= 9. 9。
2. 4 粉葛提取物的制备 取 2. 3. 4 验证试验的粉
葛醇提液，按 2. 1. 3. 2 及 2. 2. 2. 2 的方法制备粉葛
提取物及其各工艺样品供试品溶液，按 2. 1 及 2. 2
项下拟定的方法进行含量测定和特征图谱分析，各
工艺样品葛根素量、保留率及转移率结果见表 4，各
工艺样品特征图谱主要特征峰单位生药折算峰面积
见表 5，各工艺样品特征图谱主要特征峰评价结果
见表 6，粉葛提取物得率分别为 5. 11%，5. 02%，
5. 14%;含量分别为30. 81，29. 16，27. 81 mg·g － 1，粉
葛不同工艺样品 HPLC 特征图谱见图 1。
表 4 粉葛提取物各工艺样品单位生药葛根素
含量、保留率及转移率(珋x ± s，n = 3)
样品
葛根素量
/(mg / g 生药)
保留率
/%
转移率
/%
醇提液 2. 877 ± 0. 064 100. 00 ± 0. 00 97. 89 ± 2. 17
浓缩液 2. 360 ± 0. 028 83. 46 ± 1. 37 81. 70 ± 2. 12
醇沉液 2. 202 ± 0. 056 91. 72 ± 2. 86 74. 92 ± 1. 92
浸膏 2. 122 ± 0. 033 96. 32 ± 1. 16 72. 15 ± 1. 06
提取物 1. 488 ± 0. 075 70. 19 ± 3. 02 50. 64 ± 2. 57
注:保留率按相邻两工艺步骤的上一步骤含量为100% 计，转移
率以饮片含量 2. 939 mg·g － 1为 100%计。
·54·
黄樱华，等:粉葛提取物的制备工艺
表 5 粉葛提取物各工艺样品特征图谱主要特征峰单位生药折算峰面积
样品 峰 1 峰 2 峰 3 峰 4 峰 5 峰 6 峰 7
饮片 145. 630 4263. 372 1127. 836 301. 243 421. 872 832. 105 76. 405
醇提液 152. 596 4260. 204 989. 836 280. 636 341. 242 749. 514 58. 940
浓缩液 149. 035 3677. 994 853. 319 243. 684 271. 446 698. 661 54. 444
醇沉液 142. 761 3199. 743 746. 043 213. 066 242. 272 680. 985 54. 254
浸膏 136. 649 3076. 771 718. 591 205. 371 234. 273 657. 577 50. 849
提取物 125. 615 2128. 683 484. 427 134. 303 158. 352 623. 52 35. 211
表 6 各工艺样品特征图谱主要特征峰评价 %
样品
保留率 转移率
峰 1 峰 2 峰 3 峰 4 峰 5 峰 6 峰 7 峰 1 峰 2 峰 3 峰 4 峰 5 峰 6 峰 7
饮片 100. 00 100. 00 100. 00 100. 00 100. 00 100. 00 100. 00 100. 00 100. 00 100. 00 100. 00 100. 00 100. 00 100. 00
醇提液 104. 78 99. 93 87. 76 93. 16 80. 89 90. 07 77. 14 104. 78 99. 93 87. 76 93. 16 80. 89 90. 07 77. 14
浓缩液 97. 67 86. 33 86. 21 86. 83 79. 55 93. 22 92. 37 102. 34 86. 27 75. 66 80. 89 64. 34 83. 96 71. 26
醇沉液 95. 79 87. 00 87. 43 87. 44 89. 25 97. 47 99. 65 98. 03 75. 05 66. 15 70. 73 57. 43 81. 84 71. 01
浸膏 95. 72 96. 16 96. 32 96. 39 96. 70 96. 56 93. 72 93. 83 72. 17 63. 71 68. 17 55. 53 79. 03 66. 55
提取物 91. 93 69. 19 67. 41 65. 40 67. 59 94. 82 69. 25 86. 26 49. 93 42. 95 44. 58 37. 54 74. 93 46. 08
注:保留率按相邻两工艺步骤的上一步骤折算峰面积为100%计，转移率以饮片折算峰面积为 100%计。
A．饮片;B．醇提液;C．浓缩液;D．醇沉液;E．浸膏;F．提取物
图 1 粉葛不同工艺样品 HPLC( 峰2 为葛根素)
3 讨论
粉葛指纹图谱［6-7］及含量测定［8］的供试品溶液
制备方法多参照 2010 年版《中国药典》［2］的提取方
法。本试验也曾应用此法制备饮片供试品溶液，但
在分析中发现峰 2( 葛根素)、峰 6 及峰 7 的峰面积
偏低;后采用加热回流3 次，第 1 次以 70% 乙醇为
溶媒，第 2，3 次以 30%乙醇为溶媒的方法制备饮片
供试品溶液，结果峰 2( 葛根素)、峰 6 及峰 7 的提取
更完全，峰面积较 2010 年版《中国药典》方法提高
了约 10%。
根据文献资料，选择水［4］，30% 乙醇［5］及 50%
乙醇［9］为溶媒进行单因素考察，结果葛根素的提取
率 30%乙醇 ＞ 50%乙醇 ＞水，确定 30%乙醇为提取
溶媒。
制备工艺从饮片→醇提液→浓缩液→醇沉液→
浸膏→提取物，葛根素的转移率分别为 97. 89% ±
2. 17%，81. 70% ± 2. 12%，74. 92% ± 1. 92%，
72. 15% ± 1. 06%，50. 64% ± 2. 57% (n = 3) ，表明
葛根素在干燥步骤中损失较大;特征图谱结果显示，
各工艺环节均能保留粉葛的 7 个特征峰，通过对照
品定位，确定峰 2 为葛根素，其保留率及转移率与含
量测定结果基本一致; 粉葛提取物中峰1 及峰 6 的
转移率较高，峰 2，3，4，5，7 的转移率均较低。本试
验采用含量测定结合特征图谱主要特征峰面积评价
粉葛的制备工艺，能更全面地分析粉葛各成分在制
备工艺中的保留情况。
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［责任编辑 仝燕］
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中国实验方剂学杂志
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Vol． 18，No． 4
Feb．，2012