全 文 ：Journal of Northeast Agricultural University
东 北 农 业 大 学 学 报第44卷第6期 44(6): 86~89
2013年6月 June 2013
杨树花不同提取物对小鼠免疫功能影响
李 丽
（辽宁医学院畜牧兽医学院，辽宁 锦州 121001）
摘 要：为探究杨树花不同提取物对小鼠免疫功能影响，将180只雄性小鼠随机分成3组，分别为空白对照
组、水提物组和醇提物组，每组60只。灌胃剂量均为0.2 mg·kg-1·d-1，空白对照组灌服灭菌水。15 d后，观察各组
小鼠免疫学指标变化。结果表明，水提物能显著提高小鼠免疫器官指数、巨噬细胞吞噬率、巨噬细胞吞噬指数、
碳粒廓清吞噬指数、脾淋巴细胞增殖能力、迟发性变态反应水平、血清溶血素抗体积数和抗体生成细胞溶血空斑
数；醇提物能显著提高小鼠免疫器官指数、巨噬细胞吞噬率、巨噬细胞吞噬指数、碳粒廓清吞噬指数、血清溶血
素抗体积数和抗体生成细胞溶血空斑数，极显著提高脾淋巴细胞增殖能力和迟发性变态反应水平；以上各指标水
提物和醇提物组间差异显著。说明杨树花水提物和醇提取物均能增强小鼠免疫功能作用，且醇提物作用更强。
关键词：杨树花提取物；小鼠；免疫功能
中图分类号：S859.7 文献标志码：A 文章编号：1005-9369（2013）06-0086-04
李丽.杨树花不同提取物对小鼠免疫功能影响[J].东北农业大学学报, 2013, 44(6): 86-89.
LI li. Effect of poplar flower different extracts on immune function in mice[J]. Journal of Northeast Agricultural University,
2013, 44(6): 86-89. (in Chinese with English abstract)
Effect of poplar flower different extracts on immune function in mice/LI Li
（Liaoning Medical University, School of Animal Husbandry and Veterinary, Liaoning Jinzhou, 121001,
China)
Abstract: In order to study the effects of poplar flower different extracts on immune function of mice.
One hundred and eighty male mice were randomly divided into control group, PWE group and PAE group,
60 mice in each group. All groups adopted intragastric administration by the dose of 0.2 mg· kg- 1· d- 1. The
control group was orally administered sterile water. After 15 d, Changes on immunity function in mice
indexes were detected. The results showed that PWE group could improve distinctly immune organs index,
phagocytose percentage, phagocytose index, the clearance rate of charcoal particles, proliferation ability,
delayed type hypersensitivity reaction, the level of serum hemolysin and number of hemolytic plaque; the
PAE group could also enhance remarkably immune organs index, phagocytose percentage, phagocytose
index, the clearance rate of charcoal particles, the level of serum hemolysin and number of hemolytic plaque,
extremely significantly improve proliferation ability, delayed type hypersensitivity reaction, All immunology
indexes of the PAE showed significant differences as compared with the PWE group. These indicated both
PWE and the PAE can improve immune function in mice and had effects on improving immune function in
mice, and the PAE showed more stronger effects.
Key words: Poplar flower extract; mice; immune function
收稿日期：2013-01-21
基金项目：国家农业科研成果转化资金项目（2012GB000097）。
作者简介：李丽（1967-），女，副教授，硕士，研究方向为兽医药理毒理与新兽药研发。E-mail: rainbow1992@163.co
网络出版时间 2013-6-25 13:57:32 [URL] http://www.cnki.net/kcms/detail/23.1391.S.20130625.1357.005.html
李 丽等：杨树花不同提取物对小鼠免疫功能影响第6期
杨树花为杨柳科植物毛白杨（Populus tomento⁃
sa）、加拿大杨（Populus canadensis）或同属树种植
物干燥雄花序，性味苦寒，具有清热解毒、化湿
止痢之功效 [1]。杨树花不仅富含多种氨基酸、维
生素、微量元素等营养物质，粗脂肪、粗蛋白
质、总糖含量要明显高于一般饲用植物，其药用
成分为黄酮类化合物和酚甙类化合物，具有抗肿
瘤、解热镇痛、抗菌止痢、增强免疫等多种功
效。本文研究杨树花不同提取物对小鼠免疫功能
影响差异，为杨树花提取物在生产中应用提供理
论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 主要试剂
刀豆蛋白 A（ConA）、RPMll640完全培养液、
Hanks液（pH 7.2~7.4）、四甲基偶氮唑（MTT）、吩
嗪二甲酯硫酸盐、注射用印度墨汁、绵羊红细
胞。杨树花水提取物（Poplar flower water extract，
PWE）和醇提物（Poplar flower alcohol extract，PAE）
由辽宁医学院畜牧兽医学院动物药学实验室提
供，1 g相当于原生药20 g。
1.1.2 试验动物
BALB/C纯系小鼠，雄性，体重（20±2） g，由
辽宁医学院实验动物中心提供。
1.2 方法
1.2.1 试验分组
将适应 3 d后 180只小鼠随机分 3组，空白
组、水提物组、醇提物组，每组 60只，预饲 5 d。
杨树花提取物分别用灭菌水溶解至相应浓度，水
提物组、醇提物组剂量为0.2 mg·kg-1，空白对照组
给予灭菌水，每组灌服为0.1 mL·10 g-1，小鼠隔日
称重，以调整灌胃量，1次·d-1，连续给药 15 d，
各组小鼠在相同条件下进行常规饲养和管理。
测定各项免疫功能指标。
1.3 指标与方法
1.3.1 免疫器官指数
小鼠经口灌服杨树花提取物和灭菌水 15 d后
称重。颈椎脱臼处死。取脾脏和胸腺，用滤纸吸
干后称重，计算脾指数和胸腺指数。
1.3.2 腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验
小鼠经口灌服杨树花提取物和灭菌水 15 d
后，取 10只小鼠，每鼠腹腔注射 20%鸡红细胞悬
液 1 mL后，颈椎脱臼处死。依文献[2]方法计数巨
噬细胞、吞噬鸡红细胞巨噬细胞数和被吞噬鸡红
细胞数，按下式计算。
1.3.3 碳粒廓清试验
每组取10只小鼠，末次给药后1 h，从小鼠尾
静脉注射稀释印度墨汁 0. 05 mL·1og-1 g依文献[3]
方法。按照下列公式计算碳廓清指数 K，吞噬指
数 α。
K为未经校正吞噬指数，W为体重，WLS为肝
脾合重，OD1为 t1时（2 min）血标本光密度值，OD2
为 t2时（10 min）血标本光密度值。
1.3.4 ConA诱导小鼠淋巴细胞转化试验
小鼠经口灌服杨树花提取物和灭菌水 15 d
后，颈椎脱臼处死。无菌取脾，制备脾细胞悬
液。应用 ConA刺激脾淋巴细胞分化增殖。采用
MTT比色法[4]测定脾淋巴细胞增殖能力。
1.3.5 迟发型变态反应（耳肿胀法）[5]
连续灌胃10 d后，每组取 10只小鼠，腹部皮
肤用硫化钡脱毛，用1% DNFB丙酮麻油溶液50 μL
均匀涂抹致敏。5 d后，右耳均匀涂抹1% DNFB丙
酮麻油溶液10 μL进行刺激，左耳涂抹丙酮麻油溶
液作为对照，刺激后 24 h处死小鼠，剪下左右耳
壳，于同一部位取直径8 mm耳片称重，用左右耳
重量之差表示迟发型变态反应程度。
1.3.6 血清溶血素检测
小鼠经口灌服杨树花提取物和灭菌水 11 d
后，每鼠腹腔注射2％绵羊红细胞悬液0.2 mL进行
免疫。免疫4 d后摘除眼球取血，分离血清。采用
文献[6]方法测定血清抗体积数。脾或胸腺指数=
脾脏重或胸腺重(mg)
体重（g）
吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数
巨噬细胞数
被吞噬鸡红细胞数
巨噬细胞数 ×100%
×100%
α = W（g）WLS（g）× K3
吞噬率（%）=
lgOD1- lgOD2
t2 - t1K=
吞噬指数=
··87
第44卷东 北 农 业 大 学 学 报
1.3.7 抗体生成细胞（PHC）检测
小鼠经口灌服杨树花提取物和灭菌水 11 d
后，每鼠腹腔注射2％绵羊红细胞悬液0.2 mL进行
免疫。免疫4 d后处死，制备脾细胞悬液。按 Jeme
改良玻片法[7]计数溶血空斑数。
1.4 统计学方法
用 SPASS13.0软件单因素方差分析（one way
anova）进行组间差异比较。数据用（x±s）表示。
2 结果与分析
2.1 杨树花不同提取物对小鼠免疫器官指数影响
与对照组相比，杨树花水提物组和醇提物组
脾指数和胸腺指数均有明显提高，差异显著（P<
0.05）；水提物组与醇提物组也有统计学意义，醇
提物组脾指数和胸腺指数明显高于水提物组，差
异亦显著（P<0.05），见表1。
组 别Group
对照组Control group
水提物组PWE group
醇提物组PAE group
脾指数Spleen index
3.82±0.21c
4.21±0.14b
4.54±0.18a
胸腺指数 Thymus index
2.18±0.18c
2.43±0.12b
2.75±0.20a
组别Group
对照组Control group
水提物组PWE group
醇提物组PAE group
T淋巴细胞增殖（A570nm）T lymphocyte proliferation（A570nm）
0.043±0.006Bc
0.057±0.008ABb
0.072±0.007Aa
迟发性变态反应（mg）Delayed type hypersensitivity
13.47±0.5Bc
15.24±1.07ABb
17.56±1.21Aa
组别Group
对照组Control group
水提物组WPE group
醇提物组PAE group
吞噬率(%)Phagocytic rate
23.37±1.07c
28.52±1.98b
33.68±1.15a
吞噬指数Phagocytic index
0.31±0.08c
0.37±0.02b
0.41±0.03a
碳粒廓清指数carbon clearance index
4.51±0.28c
5.23±0.32b
5.58±0.26a
表1 杨树花不同提取物对小鼠免疫器官指数影响（n=10，x±s）
Table 1 Effect of Poplar flower different extract on index of immune organs in mice（n=10，x±s）
注：同一列数据肩标字母相同表示差异不显著（P>0.05），字母不同表示差异显著（P<0.05），下同。
Note: values with same small letters in a same column show no significant difference(P>0.05), with different small letters show significant differ⁃
ence(P<0.05), the same as below.
表3 杨树花不同提取物对小鼠脾淋巴细胞增殖能力和迟发性变态反应影响（n=10，x±s）
Table 3 Effect of Poplar flower different extract on the ability of spleen lymphocyte proliferation and
delayed type hypersensitivity（n=10，x±s）
表2 杨树花不同提取物对小鼠巨噬细胞吞噬功能和碳廓清能力影响（n=10，x±s）
Table 2 Effect of Poplar flower different extract on phagocytic function of the macrophages and
carbon clearance capacity in mice（n=10，x±s）
2.2 杨树花不同提取物对小鼠巨噬细胞功能影响
与对照组相比，杨树花水提物组和醇提物组
均能明显提高小鼠巨噬细胞吞噬率、吞噬指数和
碳廓清指数，差异均显著（P<0.05）；且醇提物组小
鼠巨噬细胞吞噬率、吞噬指数和碳廓清指数均明
显高于水提物组，差异显著（P<0.05），见表2。
2.3 杨树花不同提取物对小鼠细胞免疫影响
与对照组相比，水提物组和醇提物T淋巴细胞
增殖能力和迟发性变态反应水平均有明显提高，
水提物组差异显著（P<0.05），醇提物组差异极显
著（P<0.01）。水提物组与醇提物组相比，差异亦
显著（P<0.05），见表3。
2.4 杨树花不同提取物对小鼠体液免疫影响
与对照组相比，水提物组和醇提物组小鼠血
清抗体积数和溶血空斑数均有显著提高，差异显
著（P<0.05）；醇提物小鼠血清抗体积数和溶血空
斑数均高于水提物组，差异亦显著（P<0.05），见
表4。
（mg·g-1）
··88
李 丽等：杨树花不同提取物对小鼠免疫功能影响第6期
3 讨论与结论
3.1 杨树花不同提取物对小鼠免疫器官指数影响
本试验研究表明，杨树花水提物和醇提物均
能明显提高正常小鼠脾脏指数和胸腺指数，与对
照组相比差异均显著（P<0.05），且醇提物与水提物
组间差异显著（P<0.05），说明杨树花水提物和醇提
物均能明显促进免疫器官增长，且醇提物优于水
提物。主要是由于杨树花提取物中生物活性物质
黄酮类化合物可促进免疫器官中免疫细胞分化、
增殖和免疫器官生长发育，而醇提物中黄酮含量
较高[8]。
3.2 杨树花不同提取物对小鼠巨噬细胞功能影响
单核巨噬细胞吞噬能力是衡量机体非特异性
免疫功能标志之一，巨噬细胞吞噬率以及吞噬指
数高低可以反映其吞噬功能强弱[9]。本试验结果表
明，杨树花水提物和醇提物均能明显提高正常小
鼠巨噬细胞吞噬率、吞噬指数和碳粒廓清指数，
差异显著（P<0.05），与水提物组相比，醇提物组巨
噬细胞吞噬率、吞噬指数和碳粒廓清指数亦明显
提高，差异显著（P<0.05）。说明杨树花水提物和醇
提物均能提高正常小鼠吞噬细胞吞噬能力，进而
增强非特异性免疫功能，且醇提物作用效果尤佳。
3.3 杨树花不同提取物对小鼠特异性免疫影响
特异性免疫包括细胞免疫和体液免疫，脾淋
巴细胞增殖能力是反映细胞免疫最直接指标，迟
发型超敏反应（DTH）又称 IV型超敏反应，是一种
典型由辅助性T细胞（Th）介导细胞免疫反应，是反
映机体细胞免疫功能重要指标。血清溶血素是 B
淋巴细胞在接受各种抗原刺激后分泌抗体，是衡
量机体体液免疫水平重要指标。本试验结果表明，
杨树花水提物和醇提物物均能提高T淋巴细胞增殖
能力、迟发性变态反应水平。与对照组相比，水
提物组差异均显著（P<0.05），醇提物组差异极显著
（P<0.01），且水提物和醇提物组间差异显著（P<
0.05）；水提物组和醇提物组血清抗体积数和抗体
生成细胞数量亦明显提高，与对照组相比，差异
亦均显著（P<0.05），水提物和醇提物组间差异显
著。说明杨树花水提物和醇提物均能提高正常小
鼠细胞免疫和体液免疫功能，醇提物作用效果更
为显著。这与不同提取物中活性物质黄酮、多糖
等免疫活性物质组成和含量有关，对于不同提取
物中活性物质组成成分、含量及对免疫影响量效
关系有待进一步研究。
[ 参 考 文 献 ]
[ 1 ] 中华人民共和国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典:二部
[M] .北京:中国农业出版社, 2010.
[ 2 ] 柳璐.猴头菇多糖对小鼠免疫调节作用实验研究[D].广州:广
州中医药大学, 2012.
[ 3 ] 李春艳.竹节参多糖提取分离和免疫调节及抗肿瘤活性研究
[D].长沙:中南大学, 2012.
[ 4 ] 林婕,肖义军,吴建璋,等.夹竹桃多糖对小鼠免疫活性影响
[J].福建师范大学学报(自然科学版), 2013, 29(1): 96-100.
[ 5 ] 颜爱,李波,李润成,等.香菇多糖和黄芪多糖对免疫抑制小鼠
免疫功能调节研究 [J]. 中国免疫学杂志, 2012, 28(11): 999-
100, 1005.
[ 6 ] 曹发昊.复方人参皂甙纳米乳制备及其免疫增强作用研究[D].
杨凌:西北农林科技大学, 2012.
[ 7 ] 中华人民共和国卫生部.保健食品检验与评价技术规范[S].北
京:中华人民共和国卫生部, 2003.
[ 8 ] 赵继明.枸杞子不同提取物中总黄酮含量比较[J].现代中西医
结合杂志, 2012, 6: 53-55.
[ 9 ] 邓丽,王琦,赵建宁,等.月见草花两种提取物对免疫小鼠免疫
功能影响[J].宁夏医学院学报, 2008, 30(3): 286-288.
组 别Group
对照组Control group
水提物组PWE group
醇提物组PAE group
抗体积数Antibody aggregate
56.62±2.55c
68.36±3.48b
72.29±2.17a
溶血空斑数（个·10-6脾细胞）Number of hemolytic plaque
87.48±2.59c
104.26±3.37b
116.38±2.15a
表4 杨树花不同提取物对小鼠血清溶血素和抗体生成细胞影响（n=10，x±s）
Table 4 Effect of Poplar flower different extract on serum hemolysin and antibody-producting cell in mice（n=10，x±s）
··89