全 文 ：鄂尔多斯高原锦鸡儿属药用植物的 ISSR分析
杨九艳 1, 2 ,杨　 1 ,杨明博 1 ,鞠爱华 2 ,渠　弼 2
( 1. 内蒙古大学生命科学学院 ,内蒙古 呼和浩特　 010021; 2. 内蒙古医学院药学院 ,内蒙古 呼和浩特　 010059)
摘　要: 目的　分析鄂尔多斯高原分布的 8种锦鸡儿的遗传多样性。方法　采用 I SS R技术进行研究。结果　 8种锦
鸡儿总的多态位点百分率 ( PPB)很高 ,达 100% ,表明它们的遗传多样性很丰富。但是在种间的分布是不均匀的 ,藏
锦鸡儿、柠条锦鸡儿、狭叶锦鸡儿、荒漠锦鸡儿和中间锦鸡儿的遗传多样性较高 ,甘蒙锦鸡儿和秦晋锦鸡儿较低 ,短
脚锦鸡儿最低。此结果与 Nei′s基因多样度和 Shannon信息指数的遗传多样性分析结果一致。根据非加全算术平均
聚类法以及 I SSR特征图谱可以将不同种区分开来。结论　 I SSR分子标记可很好地用于锦鸡儿物种的分子鉴定和
遗传背景研究 ,其结果为制定有效的保护策略和措施提供了科学依据。
关键词: 锦鸡儿属 ;鄂尔多斯高原 ;遗传多样性 ; ISSR
中图分类号: R282. 7　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2006) 10 1562 05
ISSR Analysis on medicinal plants of Caragana Fabr. in Ordos Plateau
YANG Jiu-yan1, 2 , Y ANG Jie1 , Y AN G Ming-bo2 , JU Ai-hua1 , QU Bi1
( 1. Colleg e of Life Science, Inne r Mongolia Univ er sity , Huhho t 010021, China; 2. Schoo l
o f Pharmacy, Inner Mongolia M edical Colleg e, Huhhot 010059, China )
Abstract: Objective　 To analy ze the genetic div ersi ty o f eight species of Caragana Fabr. in Ordos
Plateau. Methods　 To study the genetic div ersi ty o f the eight species w ith ISSR method. Results　 The to-
tal percentag e of polymorphic bands ( PPB) o f the eight species was up to 100% , which w as ex t remely high
and show ed an abundant g enetic div ersity. How ever, the genetic div ersi ty o f di fferent species was not the
same. The genetic div ersi ty of C . tibetica , C. korshinsk ii , C . stenophylla , C. roborovskyi , and C. interme-
dia was higher, while that of C . opulens and C . purdom ii was low er, and tha t of C. brachypoda was the
low est. The analytic results o f the Nei′s g ene div ersi ties and the Shannon′s info rmation index w ere simi-
lar. Dif ferent species could be dif ferentiated th rough U PGM A method and characteristic banding pat tern of
ISSR. Conclusion　 ISSR Molecula r marker could be used in molecular authentica tion and heredi ta ry back-
g round study of the species of Caragana Fabr. These resul ts provide the scienti fic basis of developing
ef fectiv e pro tection measures fo r these species.
Key words: Caragana Fabr. ; Ordos Plateau; g enetic div ersi ty; ISSR
　　锦鸡儿为豆科落叶灌木 ,全草、根、花和种子入
药 ,味甘 ,微辛 ,性平。 具有滋阴养血 ,清热解毒 ,利
尿 ,益气安神 ,通经下乳 ,祛痰止咳及祛风湿止痹痛
等功效。主要用于治疗妇科疾病 ,头晕头痛 ,心慌气
短 ,咳嗽多痰 ,风湿痹痛等症 [ 1]。锦鸡儿不仅具有药
用价值 ,而且抗逆性强 ,可防风固沙保持水土 ,在生
态建设中发挥着重要的作用。锦鸡儿目前尚属未被
大量开发利用的药材。为防止滥采引起生态问题 ,应
以保护先行的思想对其进行研究。本实验选取分布
于鄂尔多斯高原的 8种锦鸡儿 [2 ]为研究对象 ,结合
不同的生境 ,采用简单重复间序列 ( inter-simple se-
quence repeat , ISSR)标记 ,从分子水平分析其遗传
多样性 ,揭示它们种间的亲缘关系 ,为锦鸡儿的保
护、引种驯化、繁育栽培和分子鉴定提供理论依据。
1　实验材料
8种锦鸡儿采自鄂尔多斯高原。 每种随机选
取 20株 ,采集幼叶 ,分别用变色硅胶进行快速干
燥 , - 20℃保存备用。 材料及采样地点概况见表 1,
实验材料由内蒙古大学赵一之教授鉴定。
2　方法
·1562· 中草药　 Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 37卷第 10期 2006年 10月
收稿日期: 2006-01-25基金项目:内蒙古自治区教育厅科学研究项目 ( N J03136)作者简介:杨九艳 ( 1963- ) ,女 ,副教授 ,硕士生导师 ,从事药用植物的教学、科研工作 ,现在内蒙古大学生命科学学院攻读博士学位。 　
Tel: ( 0471) 6636293　 E-mai l: yangiy1122@ 163. com
表 1　材料及采样地点
Table 1　Materials and sites of samples
种　名 (代号 ) 采集地 东经 / (°) 北纬 /(°) 海拔 /m 年降水量 /mm 平均气温 /℃
秦晋锦鸡儿 ( QJ) Caragana purdomii 准格尔旗　 110. 41 39. 28 1 170 401. 6 7. 3
甘蒙锦鸡儿 ( GM) C. opu lens 准格尔旗　 111. 05 39. 45 1 105 401. 6 7. 3
中间锦鸡儿 ( ZJ) C. intermed ia 乌审旗　　 108. 42 38. 36 1 348 360. 4 6. 7
柠条锦鸡儿 ( N T) C . korsh inskii 鄂托克旗　 106. 45 39. 58 1 076 162. 4 8. 2
荒漠锦鸡儿 ( HM ) C . roborovskyi 鄂托克前旗 107. 16 38. 08 1 488 194. 6 6. 4
狭叶锦鸡儿 ( XY) C . stenophylla 鄂托克旗　 108. 02 39. 14 1 375 271. 4 6. 4
藏锦鸡儿 ( Z) C . t ibetica 鄂托克前旗 107. 16 38. 08 1 488 194. 6 6. 4
短脚锦鸡儿 ( D J) C. brachypoda 鄂托克旗　 106. 45 39. 58 1 076 162. 4 8. 2
2. 1　总 DNA的提取:采用 CTAB法 [3 ]并略作修改。
称取 80 mg经硅胶干燥后的样品置于研钵中 ,加入
50 mg PV P粉 ,在液氮中迅速研磨至粉状 ,然后加
入到 700μL预热到 65℃的 CTAB提取液中 ,并在 65
℃水浴下温浴 60 min,期间不断颠倒混匀 ,使其抽提
完全 ;加入等体积 ( 700μL)的氯仿 -异戊醇 ( 24∶ 1) ,
颠倒混匀 , 10 000× g离心 10 min,取上清液转入另
一 1. 5 mL离心管中 ,用 700μL氯仿 -异戊醇重复抽
提 1次 (可重复至白色界面消失 ) ,记录 ,取出上清液
的体积 ;加入 2 /3体积的- 20℃异丙醇 ,混匀后置于
- 20℃、 30 min以上 , 10 000×g离心 10 min,弃上
清液 ,风干沉淀。 用 700μL 70%冷乙醇溶液洗涤沉
淀两次 , 10 000×g离心 5 min,风干沉淀 ;加入20μL
T E缓冲液融解 DNA。0. 7%琼脂糖凝胶电泳检测各
模板有无降解 ,并估计 DNA大致的量 ,结合 DU- T
型紫外分光光度计测定的吸光度 A260和 A280 ,计算其
质量浓度和纯度 ,配平所有模板浓度 ,每种优选出 11
株的 DNA用于扩增。
2. 2　引物筛选:选用羽状叶的中间锦鸡儿和假掌状
叶的狭叶锦鸡儿进行预试验 ,采用由上海生物工程
公司 ( Sangon)生产的随机引物进行筛选 ,选出 14个
扩增良好、带型清晰、稳定且具有多态性的引物用于
样品的扩增。
2. 3　 ISS R反应体系及扩增程序: 反应体系为总体
积 25μL,其中模板 DNA 1μL( 20 ng ) , 5 mmol /L
MgCl2 2. 0μL, 10× PCR buffer 2. 5μL, 10 mmol /L
dN TP 0. 4μL, Taq酶 ( 5 U /μL) 0. 2μL,引物 ( 10
μmo l /L) 1μL,无菌双蒸水 17. 9μL,上述药品购自
上海生物工程公司 ( Sangon)。 扩增反应在美国 M J
Resea rch Inc. 生产的 PTC- 100 TM型 PCR热循
环仪上进行。扩增程序为: 94℃预变性 5 min, 94℃
变性 45 s, 54℃退火 1 min, 72℃延伸 1. 5 min,进行
45个循环 ,最后 72℃延伸 5 min, 4℃保温。
2. 4　扩增产物的检测: 扩增产物在 2. 0%的琼脂糖
凝胶中电泳分离 , JY600C型电泳仪稳压 80 V 2. 5
h,溴化乙锭染色 ,用 100 bp的 DAN ladder作为相对
分子质量标记 , Tanon GIS- 2008紫外凝胶成像系
统成像拍照。
2. 5　数据统计分析: 同一引物的扩增产物中 ,属于
同一位点的条带按有或无记录 ,清晰可见的强带或
反复出现的弱带记为“有” ,赋值 1,无带计为“无” ,赋
值 0,建立二元数据矩阵。重现性不好的弱带不予统
计。利用 Popgen 32软件计算基因频率 ,多态位点数
及百分率 ( P ) , Shannon多样性指数 ( I* ) , Nei基因
多样度指数 ( H ) ,遗传一致度 ( I )和遗传距离 (D ) ;
并用非加全算术平均聚类法 ( UPGMA)进行系统聚
类分析 ,构建树状图。
3　结果与分析
3. 1　遗传多态性分析: 本研究 PCR反应扩增的
DNA片断大小一般在 300～ 2 000 bp(图 1) ,引物序
列及扩增结果见表 2。 14个 ISSR引物共扩增出 355
条带 ,即 355个位点 ,平均每个引物扩增带数为
25. 36条 ,多态位点为 355个 ,总的多态性条带比率
( PPB)达 100% ,揭示了锦鸡儿基因组具有丰富的多
态性。
表 2　引物序列及扩增结果
Table 2　 Sequence of primers and amplif icat ion results
引物 序列 ( 5′→ 3′) 位点数 多态位点数
多态位点百
分率 /%
AW64746 ACACACACACACACACT 16 16 100
AW64747 ACACACACACACACACAG 20 20 100
AW64749 TG TG TGTGTGTG TG TGC 13 13 100
AW64750 CTCCTCCTCCTCCTCCTC 32 32 100
AW64751 TATTATTATTATTATTA T 38 38 100
AW77934 AGAGAGAGAGAGAGAGC 32 32 100
AW77935 AGAGAGAGAGAGAGAGG 27 27 100
AW77936 GAGAGAGAGAGAGAGAC 27 27 100
AW77937 CACACACACACACACAG 10 10 100
AW77938 GAGAGAGAGAGAGAGAA 17 17 100
AW77939 AGAGAGAGAGAGAGAGTC 34 34 100
AW77940 GAGAGAGAGAGAGAGAGG 23 23 100
AW77941 GAGAGAGAGAGAGAGAA T 30 30 100
AW77943 GGAGAGGAGAGGAGA 36 36 100
合　　计 355 355 100
·1563·中草药　 Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 37卷第 10期 2006年 10月
图 1　引物 AW64751对 8种锦鸡儿不同个体的扩增结果
Fig. 1　 ISSR Amplif ied products generated by Primer
AW64751 to diff erent samples of eight
species of Caragana Fabr.
3. 2　遗传多样性分析:由表 3可知 , 8种锦鸡儿多态
位点百分率的大小顺序为:藏锦鸡儿> 柠条锦鸡儿
> 狭叶锦鸡儿> 荒漠锦鸡儿> 中间锦鸡儿> 秦晋锦
鸡儿> 甘蒙锦鸡儿> 短脚锦鸡儿 ;根据 Nei基因多
样度分析 ,由高到低为:柠条锦鸡儿> 藏锦鸡儿> 荒
漠锦鸡儿> 狭叶锦鸡儿> 中间锦鸡儿> 甘蒙锦鸡儿
> 秦晋锦鸡儿> 短脚锦鸡儿 ;由 Shannon信息指数
分析结果为: 柠条锦鸡儿> 藏锦鸡儿> 狭叶锦鸡儿
> 荒漠锦鸡儿> 中间锦鸡儿> 秦晋锦鸡儿> 甘蒙锦
鸡儿> 短脚锦鸡儿。 3种分析的结果基本一致 ,藏锦
鸡儿和柠条锦鸡儿的遗传多样性最高 ,狭叶锦鸡儿
和荒漠锦鸡儿次之 ,中间锦鸡儿较高 ,甘蒙锦鸡儿和
秦晋锦鸡儿较低 ,短脚锦鸡儿最低。
3. 3　遗传一致度和遗传距离:表 4是 8种锦鸡儿间的
遗传一致度和遗传距离。其中藏锦鸡儿与狭叶锦鸡
儿、藏锦鸡儿与柠条锦鸡儿、柠条锦鸡儿与中间锦鸡
儿的遗传一致度均很高 ,分别达 0. 891 7、 0. 884 7、
0. 881 7,遗传距离很小 ,分别为 0. 114 6、 0. 122 5、
0. 125 9;秦晋锦鸡儿与甘蒙锦鸡儿的遗传一致度较
低 ,为 0. 793 9,遗传距离较大 ,为 0. 230 7;短脚锦鸡
儿与其他种间的遗传一致度最低 ,为 0. 703 4～
0. 759 1,遗传距离最大 ,为0. 275 6～ 0. 351 8。
3. 4　聚类分析: 根据种间的遗传距离 ,采用 UPG-
表 3　 8种锦鸡儿的遗传多样性比较
Table 3　 Comparison of genet ic diversity among eight
species of Caragana Fabr.
种　名 位点数 多态位点数
多态位
点百分
率 /%
位点 /
引物
N ei基因
多样度
Shannon
多样性
指数
秦晋锦鸡儿 155 128 82. 58 11. 07 0. 110 0 0. 168 3
甘蒙锦鸡儿 148 113 76. 35 10. 57 0. 110 9 0. 165 8
中间锦鸡儿 191 165 86. 39 13. 64 0. 135 7 0. 211 4
柠条锦鸡儿 199 182 91. 46 14. 21 0. 163 5 0. 249 3
荒漠锦鸡儿 178 154 86. 52 12. 71 0. 142 4 0. 214 8
狭叶锦鸡儿 183 167 91. 26 13. 07 0. 140 2 0. 216 5
藏锦鸡儿　 185 176 95. 14 13. 21 0. 157 5 0. 239 3
短脚锦鸡儿 126 54 42. 86 9. 00 0. 046 1 0. 070 4
表 4　 8种锦鸡儿的遗传一致度与遗传距离
Table 4　 Genet ic identity and genetic distance
among eight species of Caragana Fabr.
品种代号 Q J GM ZJ NT HM XY Z DJ
Q J * * * * 0. 793 9 0. 847 4 0. 846 7 0. 839 3 0. 844 9 0. 837 6 0. 703 4
GM 0. 230 7 * * * * 0. 810 7 0. 815 6 0. 816 0 0. 817 9 0. 846 4 0. 722 1
ZJ 0. 165 6 0. 209 9 * * * * 0. 881 7 0. 827 4 0. 856 0 0. 857 3 0. 731 8
N T 0. 166 4 0. 203 8 0. 125 9 * * * * 0. 839 8 0. 853 2 0. 884 7 0. 728 2
HM 0. 175 5 0. 203 4 0. 189 4 0. 174 6 * * * * 0. 840 5 0. 857 2 0. 724 1
XY 0. 168 5 0. 201 0 0. 155 5 0. 158 7 0. 173 8 * * * * 0. 891 7 0. 759 1
Z 0. 177 2 0. 166 7 0. 154 0 0. 122 5 0. 154 1 0. 114 6 * * * * 0. 744 3
DJ 0. 351 8 0. 325 6 0. 312 2 0. 317 2 0. 322 8 0. 275 6 0. 295 3 * * * *
　　 Nei′s遗传一致度 (对角线以上数据 )与遗传距离 (对角线以下
数据 )
　　 Nei′s g enetic identi ty ( above diagonal ) and g enetic dis tance
( b elow diagonal )
M A法进行聚类分析 ,结果见图 2。由树状图可以看
出 ,当取值水平 D= 0. 114 6时 ,狭叶锦鸡儿和藏锦
鸡儿聚到一起成为第 1类群 ; D= 0. 125 9时 ,中间锦
鸡儿和柠条锦鸡儿聚到一起成为第 2类群 ;然后这
两类聚到一起成为第 3类群 ;以后逐级与秦晋锦鸡
儿聚成第 4类群 ,与荒漠锦鸡儿聚成第 5类群 ,与甘
蒙锦鸡儿聚成第 6类群 ;而短脚锦鸡儿自成一支。此
结果揭示了狭叶锦鸡儿和藏锦鸡儿遗传基础相近、
中间锦鸡儿和柠条锦鸡儿的亲缘关系最近 ;短脚锦
鸡儿与其他种的亲缘关系较远 ,甘蒙锦鸡儿次之。
3. 5　 8种锦鸡儿的特有带:特有带为某种所特有出
现 ,而其他种没有出现的 ISSR条带 , 8种锦鸡儿各
自的扩增带及特有带数见表 5。14个引物在 8种锦鸡
儿中只产生 10条特有带 ,占总带数的 2. 82%。 各种
的特有带均很少或无。这说明他们之间的亲缘关系
密切。
3. 6　 ISSR特征图谱: 将每种的 11株个体的 DNA
等量混和 ,进行扩增。 引物 AW64751、 AW64750、
AW 77934、 AW77939的扩增结果见图 3。8个种具
·1564· 中草药　 Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 37卷第 10期 2006年 10月
图 2　 8种锦鸡儿的 Nei′s遗传距离聚类图
Fig. 2　 Dendrogram of UPGMA based on Nei′s genetic
distance of eight species of Caragana Fabr.
表 5　 8种锦鸡儿 ISSR特有带
Table 5　 ISSR Peculiar bands of eight species
of Caragana Fabr.
品种代号 总带数 特有带数 特有带率 /%
Q J 155 0 0. 00
GM 148 2 1. 35
ZJ 191 1 0. 52
NT 199 0 0. 00
HM 178 3 1. 69
X Y 183 2 1. 09
Z 185 2 1. 08
DJ 126 0 0. 00
合计 355 10 2. 82
有不同的特异性条带 ,呈现出清晰的谱带特征 ,利用
这些引物获得的 ISSR特征图谱可以将不同的锦鸡
儿种区分开来。
4　讨论
从聚类图上可以看出 ,不同种的锦鸡儿属植物
得到了明显的区分 ,表明 ISSR分子标记可以做为其
种的分子鉴定依据。在聚类图中 ,藏锦鸡儿和狭叶锦
鸡儿首先聚在了一起 ,说明它们有相近的遗传基础。
藏锦鸡儿和狭叶锦鸡儿的适应性均很强 ,都是半荒
漠地带的建群植物 ,相似的遗传特征是它们的基础。
柠条锦鸡儿和中间锦鸡儿是地理替代种 [4 ] ,两个种
之间存在明显而强大的基因流 [5 ] ,削弱了种间的遗
传差异 ,两种的亲缘关系很近。
在扩增带中 ,秦晋锦鸡儿、中间锦鸡儿、荒漠锦
鸡儿、狭叶锦鸡儿和藏锦鸡儿均有特有带存在 ,将不
同种的特有带进行克隆测序 ,转化为 SCAR标记 ,可
对不同种进行 DNA分子鉴定 ,并在一定程度上区分
其道地性 [6 ]。
ISSR技术可以比 RFLP、 SSR、 RAPD等技术更
多地揭示基因组中的多态性 ,是一种很好的 DNA分
图 3　 8种锦鸡儿的 ISSR图谱 [引物 AW64751(A)、
AW64750(B)、 AW77934(C)和 AW77939(D) ]
Fig. 3　 Banding pattern of ISSR of eight species
of Caragana Fabr. [Primer AW64751 (A) ,
AW64750 (B) , AW77934 (C) , and
AW77939 (D) ]
子标记 ,因此 ,该技术在种质资源方面显示出比其他
方法更高的优越性 ,在植物种质资源鉴别中发挥越
来越大的作用 [7 ] ,此法在锦鸡儿的鉴别中得到了很
好的运用。
在分子标记中 PPB值的大小代表了遗传多样
性的高低 [6 ]。从扩增结果看出 , 8种锦鸡儿属植物总
的 PPB很高 ,达 100% ,表明该属植物遗传多样性很
丰富 ,但在种间的分布是不均匀的。藏锦鸡儿、柠条
锦鸡儿、狭叶锦鸡儿、荒漠锦鸡儿和中间锦鸡儿的遗
传多样性较高 ,甘蒙锦鸡儿和秦晋锦鸡儿较低 ,短脚
锦鸡儿最低。多态位点百分率对遗传多样性只是一
个粗略的估计 ,虽然能反映所测位点中不同等位基
因的位点有多少 ,但是它并不能反映每个位点的等
位基因的丰富程度。而基于条带表型频率的 Shan-
non信息指数和基于 Hardv-Weinberg假设的 Nei基
因多样性指数则可以得到更为可信的衡量指标 [8 ]。
对 8种锦鸡儿的遗传多样性进行分析时 ,这两者的
结果与 PPB的结果基本一致。 从遗传学的角度来
看 ,丰富的遗传多样性意味着比较高的适应能力 ,蕴
涵着比较大的进化潜能及比较丰富的育种和遗传改
良能力 [9 ]。藏锦鸡儿、柠条锦鸡儿、狭叶锦鸡儿、荒漠
锦鸡儿和中间锦鸡儿均具有很强的适应力 ,分布于
极干旱的半荒漠地区 ,且为该地区的优势植物 [10 ] ,
丰富的遗传多样性是它们的内在基础 ,具有广阔的
利用前景。秦晋锦鸡儿和甘蒙锦鸡儿的遗传多样性
相对较低 ,在鄂尔多斯高原的储量也较少 ,应注意保
护利用。短脚锦鸡儿的遗传多样性最低 ,而且与其他
·1565·中草药　 Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 37卷第 10期 2006年 10月
种的遗传相似度低、遗传距离大 ,加强对该种的保护
显得尤为重要。
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( 1. 北京中医药大学 ,北京　 100102; 2. 北京麋鹿生态实验中心 ,北京　 100076; 3. 大连市药品检验所 ,辽宁 大连　 221100)
摘　要: 目的　采用特异引物 PCR扩增鉴定马鹿和梅花鹿源中药材。 方法　从马鹿、梅花鹿等国内 11种鹿的鹿血
和鹿茸中提取 DN A,用通用引物 L1091和 H1478调取细胞线粒体 12S rRN A基因片段 ,在该片段核苷酸序列比对的
基础上 ,设计马鹿和梅花鹿高特异性 PCR鉴定引物对 ,并进行 PCR特异性鉴定。结果　 12S r RN A基因片段能较好
地在种的水平上将不同的种区分开来 ;特异引物对 ( EP-1 / H1478和 EP-2 / H1478) PCR可准确地鉴定出马鹿和梅花
鹿等。 结论　特异引物 PCR适宜马鹿、梅花鹿等珍贵中药材的鉴定。
关键词: 鹿: DN A序列 ; PCR鉴定
中图分类号: R282. 7　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2006) 10 1566 04
Analysis of DNA sequence of Chinese medicinal materials deers and PCR identification
of Cervus elaphus andC . nippon
BAI Gen-ben1 , ZHANG Lin-yuan2 , L IU Chun-sheng1 , CHENG Wei1 , CHEN Dai-xian3
( 1. Beijing Univ ersity o f Tr aditional Chinese Medicine, Beijing 100102, China; 2. Beijing M ilu Eco log ical Research
Center , Beijing 100001, China; 3. Da lian Institute for Drug Contr ol, Da lian 221100, China )
Abstract: Objective　 To identify the animal drug of Cervus elaphs andC . nippon f rom o rigin of deers.
Methods　 To ex t ract DN A from deer blood and hairy antler o f 11 species of deers such as C . elaphus , C .
nippon and so on, and to gain the mito chondrial 12S rRN A gene fragment using the general primers of
L1091 and H1478. Based on the sequence multialinement of 11 species deers above gene f ragments, design-
ing the couples of special di fference primers and identi fying C. elaphs and C . nippon. Results　 12S rRN A
Gene fragments can distinguish dif ferent deers w ell. The couple of primers ( EP-1 /H1478 and EP-2 /
H1478) PCR can ef fectiv ely identify C. elaphus and C. nippon. Conclusion　 Special primer PCR is sui table
fo r the identi fica tion o f v aluable Chinese medicina l ma terials, such a sC . elaphus and C. nippon.
Key words: deer; DN A sequence; PCR identi fica tion
·1566· 中草药　 Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 37卷第 10期 2006年 10月
收稿日期: 2005-12-26基金项目:北京中医药大学 211工程项目资助作者简介:白根本 ( 1958- ) ,教授 ,博士后 ,长期从事遗传学、生物技术的教学与科研工作 ,主持完成 2项国家自然科学基金等 ,发表论文
40余篇。 　 Tel: ( 010) 64219516　 E-mai l: baigb@ 263. net