全 文 ：HPLC检测方法精密度 、重现性好 ,杂质干扰少 ,样品
稳定性和回收率均较高 ,是一种理想的测定方法。
③从本实验结果可以看出 ,川西獐牙菜中獐牙菜
苷的量达到 0.81%,含量远小于獐牙菜苦苷的含
量[ 6] ,这可能与其生存环境有较大关系 ,同时 ,獐牙菜
苷是藏茵陈治疗肝炎的重要有效成分 ,因此具有良好
的开发前景。
参考文献:
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(收稿日期:2009-09-25)
HPLC测定国产云实属植物中没食
子酸的含量
代　欣 ,叶世芸＊ ,何顺志 ,徐文芬(贵阳中医学院药学
系 ,贵州 贵阳 550002)
摘要:目的　建立云实属植物中没食子酸的含量测定方法 ,以
寻找该属植物中没食子酸含量较高的资源储备。方法　采用
高效液相色谱法;Agilent SB-C18柱(150 mm ×4.6 mm , 5
μm);流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(15 ∶85);流速:1.0
mL· min-1 ;检测波长:273 nm;柱温:25 ℃。结果　没食子酸
在 0.000 41 ～ 0.041 μg 范围内线性关系良好 , r为 0.999 9 , 没
食子酸的平均回收率为 96.93%, RSD为 0.99%。结果表明肉
荚云实含量最高 ,扭果苏木含量次之 , 其它种均不等量的含有
没食子酸。结论　该方法测定操作简便 、结果准确 , 为确定该
属植物中没食子酸含量高的资源提供了理论依据。
doi:10.3969/ j.issn.1004-2407.2010.02.011
中图分类号:R927.2　　　文献标志码:A　　　
文章编号:1004-2407(2010)02-0099-02
基金项目:贵州省中药现代化项目(黔科合中药专字[ 2007]
5022 号)
作者简介:代欣 ,女 ,在读硕士研究生
＊通信作者:叶世芸 ,女 , 副研究员 ,硕士研究生导师
　　本实验立足于 2000年已完成的国家自然科学基
金项目(39560088)“从国产云实属植物中筛选替代进
口塔拉资源的研究”所取得的研究成果 ,所进行的是
对肉荚云实(Caesalpinia digyna)以及云实属其它
植物所做的一个后续研究。由于肉荚云实中鞣质含
量及水解没食子酸产率均优于进口塔拉 ,因此可作为
工业化生产鞣质及没食子酸的资源储备[ 1-5] 。根据云
实属植物中鞣质含量测定的相关报道[ 6-9] ,笔者采用
HPLC 对国产云实属植物的 15个种中的没食子酸进
行了含量测定 ,建立了更直接 、更快速 、更准确的含量
测定方法。同时为肉荚云实作为工业化生产鞣质及
没食子酸的原料提供了质量控制依据。
1　仪器与试药
1.1　仪器　Agilent 1100 型高效液相色谱仪;分析
天平(METT LER TO LEDO.AG135);电热恒温干
燥箱(型号 GZX-DH-30X35);电热恒温水浴锅(型号
HH.S1-2)。
1.2　试剂与实验样品　没食子酸(中国药品生物制品
检定所 ,批号 110831-200302);甲醇为色谱纯;磷酸 、甲
醇 、盐酸均为分析纯;水为重蒸水。实验样品塔拉(刺云
实 , C.spinosa)来自于秘鲁 ,由贵阳倍隆化工有限公司
提供;其余14个种的样品采自海南 、广东、广西 、贵州等
地 ,经何顺志研究员鉴定为肉荚云实(Caesalpinia
digyna)、老虎刺(Pterolobium punctatum)、喙荚云实
(Caesalpinia minax)、鸡嘴(Caesalpinia sinensis)、云实
(Caesalpinia decapetala)、大 叶 云 实(Caesalpinia
magni foliolata)、扭果苏木(Caesalpinia tortuosa)、刺果
苏木(Caesalpinia bonduc)、苏木(Caesalpinia sappan)、
九羽见血飞(Caesalpinia enneaphy lla)、华南云实
(Caesalpinia nuga)、春云实(Caesalpinia vernalis)、含羞
云实(Caesalpinia mimosoides)、 金凤花(Caesalpinia
pulcherrima),将成熟豆荚 ,除去种子 ,粉碎后过 40目
筛即得实验样品 。
2　方法与结果
2.1　色谱条件及系统适用性实验　Agilent SB-C18柱
(150 mm×4.6 mm , 5 μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸
水溶液(15∶85);流速:1.0 mL ·min-1 ;进样量:10
μL;柱温:25°C;检测波长:273 nm 。理论板数以没食子
酸计不低于 4 000。
2.2　对照品溶液的制备　精密称取在五氧化二磷干
燥器内干燥 12 h 以上的对照品 10.21 mg ,置于 250
mL量瓶中 ,加体积分数 50%甲醇溶解后定容至刻度 ,
制成每 1 mL 含 0.041 mg没食子酸的对照品溶液。
2.3　供试品溶液的制备　精密称取供试品粉末(过 40
目筛)约0.5 g ,精密加入 4 mol·L-1盐酸溶液 50 mL ,
水浴加热水解 3.5 h(沸后调节温度保持微沸即可),放
冷 ,滤过 ,精密量取续滤液 1 mL ,置于 100 mL量瓶中 ,
加体积分数 50%甲醇至刻度 ,摇匀 ,即得 。
2.4　测定法　分别精密吸取过 0.45 μm 滤膜的对照
品溶液与供试品溶液各 10μL ,注入液相色谱仪 ,测定 ,
99西北药学杂志　2010 年 4 月　第 25 卷　第 2 期
即得。
2.5　标准曲线的绘制　精密量取上述没食子酸对照
品(0.041 g ·L-1)1 , 5 ,10 , 20 , 50和 75 mL ,分别置于
100 mL 量瓶中 ,加体积分数 50%甲醇定容至刻度 ,进
样10μL ,分别重复3次 ,以对照品质量浓度为横坐标 ,
对应的峰面积为纵坐标 ,进行回归分析 ,得到回归方
程:Y =29 893.58X -2.13 , r=0.999 9 ,表明没食子
酸在 0.000 41 ～ 0.041μg范围内线性关系良好。
2.6　精密度实验　精密吸取上述对照品溶液 10 μL ,
重复进样6次 ,分别测定 ,计算峰面积的 RSD为0.04%,
表明仪器的精密度良好。
2.7　重现性实验　分别取扭果苏木样品约 0.5 g(n
=6),精密称定 ,依照 2.3项下制备供试品溶液 ,依法
测定 ,记录峰面积 ,计算含量的 RSD为 0.78%,表明
本法测定的重现性良好。
2.8　稳定性实验　取扭果苏木样品约 0.5 g 1 份 ,
精密称定 ,依照 2.3项下制备供试品溶液 ,分别在 0 ,
4 ,8 ,16 ,24和 48 h进样测定 ,计算其峰面积的 RSD为
0.09%,表明供试液在 48 h内稳定性良好 。
2.9　加样回收率实验　取扭果苏木样品约 0.20 g ,6
份 ,精密称定 ,分别按约 1∶1的比例加入没食子酸对
照品 ,按照 2.3项下制备供试品溶液 ,分别进样测定 ,
计算 ,其平均回收率为 96.93%, RSD 为 0.99%,表
明该方法测定的准确度良好。
2.10　样品测定　将 15个云实样品按照供试品制备
方法制备供试液 ,依法测定 ,分别计算其含量 ,结果见
表 1。
表 1　国产云实属植物中没食子酸的含量测定结果(n=4)
种类 拉丁学名 采集地点 没食子酸含量/ %
九羽见血飞 C.enneaphy lla 华南植物所 0.77
大叶云实 C.magni f ol iolata 贵州安龙 2.81
鸡嘴筋 C.sinensis 广西凌云 1.47
老虎刺 Pterolobium punctatum 广东广州 2.87
华南云实 C.nuga 华南植物所 1.47
春云实 C.vernal is 浙江缙云 8.42
含羞云实 C.mimosoides 华南植物所 1.53
金凤花 C.pulcher rima 海南栽培 3.10
扭果苏木 C.tortuosa 西双版纳 28.33
肉荚云实 C.digyna 海南 38.03
塔拉(刺云实) C.spinosa 秘鲁 39.27
云实 C.decapetala 贵州望谟 、安龙 痕量
刺果苏木 C.bonduc 海南三亚 痕量
喙荚云实 C.minax 贵州册亨 、广西龙州 痕量
苏木 C.sappan 广西 、海南 痕量
3　讨论
①用 HPLC 对云实属植物中含有的没食子酸成
分作了定量分析 ,为其提供了一个准确 、方便的含量
测定方法和质量控制依据 。实验结果表明 ,肉荚云实
C.digyna 、扭果苏木 C.tortuosa 都是我国该属植物
中没食子酸含量相对高的种。
②本实验结果显示 ,肉荚云实中没食子酸的含量
与塔拉(刺云实 C.sp inosa)相近 ,验证了肉荚云实C.
digyna 可以作为塔拉(刺云实 C.spinosa)的代用原
料来制备没食子酸这一项研究 。
③由于实验样品的采集时间及储存条件均有差
异性 ,云实 C.decapetala 、喙荚云实 C.mina x 、苏木
C.sap pan 、刺果苏木 C.bond uc 中含有的没食子酸量
较少 ,因此在此实验条件下没有检测到信号 ,有待进
一步研究。
④作者在实验过程中发现 ,在云实属植物的这
14个种的样品峰当中 ,在没食子酸峰的左右两侧都
会各出现一个分离度好 、纯度高的峰 ,但是其峰面积
的大小随着没食子酸峰的增大而有所减小 ,所以在云
实 C.decapetala 、 喙荚云实 C.minax 、 苏木 C.
sap pan 、刺果苏木 C.bonduc 中没有检测到没食子
酸 ,但是在没食子酸峰左右两侧的峰峰面积很大 ,由
于这 2个峰能在提取没食子酸的条件中被完好的提
取出来 ,说明其与没食子酸可能为结构相近的物质 ,
有待进一步研究 。
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