全 文 ：蚕 业 科 学
第 26卷 第 4 期 CANYE KEXUE 2000年 12 月
桑属种质资源的随机扩增多态性 DNA研究＊
赵卫国 潘一乐
(中国农业科学院蚕业研究所 ,镇江 212018) 黄敏仁(南京林业大学林木遗传和基因工程重点实验室)
摘 要 用 RAPD技术对桑属 12个种 3个变种的 44份材料和 1份构属材料的基因组DNA 进行了多
态性分析。在事先优化的反应条件下 ,用筛选的 24个随机引物扩增 ,共得到 113条清晰稳定的多态性
片段,多态性达 72.0%,表明材料间有较丰富的遗传多样性。统计这些片段 ,根据扩增计算出遗传相似
系数和遗传距离 ,然后用 UPGMA法进行分析 ,构建了 45份材料间的系统发生树 ,并进一步探讨了材料
间的亲缘关系。
关键词 桑 种质资源 RAPD
桑树是异花授粉植物 ,在自然界分布极广 ,很易杂交 ,并能无性繁殖 ,易于形成过渡类
型。经过长期的自然杂交和人工杂交繁殖 ,使桑树的遗传背景十分复杂。传统的形态学 、
染色体核型以及同工酶等分析方法难以解决系统进化及分类上的许多分歧。1990年
Williams等[ 1]开创了利用人工合成的短核苷酸引物经 PCR扩增进行基因组 DNA 多态性
分析的新方法 ,即随机扩增多态性 DNA(Randomly Amplified Polymorphic DNA ,RAPD),使人
们从 DNA分子水平检测植物遗传变异成为可能 ,国内外应用 RAPD技术对主要农作物的
遗传和育种等方面的研究均取得了突出进展 。但分子标记技术在桑树上的应用较晚。20
世纪 80年代进行的桑树 DNA研究仅停留在 DNA的分离和纯化上[ 2 ,3] 。国内1995年向仲
怀等[ 4]首次利用 RAPD技术构建了桑属 9个种的共 9份材料的基因 DNA指纹图谱 ,对桑
属植物分类进行了探索性研究 ,菅贵史等[ 5]报道了利用 RAPD技术评价桑树品种的研究 。
1996年楼程富等[ 6]对 12个桑品种 DNA多态性进行了研究 ,冯丽春等[ 7 ,8]对桑树 4个栽培
种的 DNA多态性进行了研究 ,并探讨了桑树栽培种及各品种间的亲缘关系 。基于以上研
究背景 ,本文采用 RAPD技术 ,利用中国农业科学院蚕业研究所建立的国家种质 ———镇江
桑树圃保存的丰富桑种质资源 ,对桑属 12个种 3个变种的共 44份材料的遗传背景进行
了分析 ,并构建桑属植物基因组DNA的指纹图谱 ,从 DNA分子水平研究了桑属植物的系
统发育 、亲缘关系。
1 材料与方法
1.1 供试材料
供试桑属种质资源共 44份 ,包括鲁桑 、广东桑 、白桑 、山桑 、长果桑 、长穗桑 、暹逻桑 、
鸡桑 、瑞穗桑 、华桑 、蒙桑 、黑桑等 12个种及垂枝桑 、大叶桑 、白脉桑等 3个变种 ,并以桑科
本文承蒙施炳坤研究员 、吴朝吉副研究员 、夏明炯副研究员审阅 ,特此致谢。
收稿日期 2000-08-09
DOI :10.13441/j.cnki.cykx.2000.04.001
构属的构树作为对照(表 1)。采集春季同株新梢嫩叶提取 DNA 。
表 1 供 试 桑 属 、构 属 材 料
编号 品种 种名 倍数性 原产地
1 伦教 40 广东桑 M.atropurpurea Roxb. 3 广东省顺德
2 保靖 5号 华桑 M.cathayana Hemsl. 4 湖南省保靖
3 雅安 3号 华桑 M.cathayana Hemsl. 4 四川省雅安
4 德江 10号 长果桑 M.laevigata Wall. 6 贵州省德江
5 湖桑 32号 鲁桑 M.multicaulis Perr. 2 江苏省无锡
6 皖白桑 白桑 M.alba Linn 2 安徽省合肥
7 垂枝桑 垂枝桑 M.alba var.pendula Dipp. 2 朝鲜
8 丽江山桑 山桑 M.bombycis Koidz. — 云南省丽江
9 纹契桑 白脉桑 M.alba var.venose Delile. 2 陕西省周至
10 吉蒙桑 蒙桑 M.mongolica Schneid. 2 吉林省
11 乌克兰 1号 白桑 M.alba Linn 2 乌克兰
12 鸡桑 白桑 M.alba Linn 2 法国
13 T11 暹逻桑 M.rotundi loba Koidz. 2 泰国
14 特早 鲁桑 M.multicaulis Perr. 2 阿尔及利亚
15 T12 暹逻桑 M.rotundi loba Koidz. 2 泰国
16 阿富汗 1号 白桑 M.alba Linn 2 阿富汗
17 水源大叶 白桑 M.alba Linn 2 朝鲜
18 龙川秋雨 白桑 M.alba Linn 2 朝鲜
19 思南 2号 华桑 M.cathayana Hemsl. 6 贵州省思南
20 胜利 鲁桑 M.multicaulis Perr. 2 乌兹别克
21 辐 1号 鲁桑 M.multicaulis Perr. 2 江苏省镇江
22 苏湖 16号 鲁桑 M.multicaulis Perr. 2 江苏省镇江
23 打洛 1号 广东桑 M.atropurpurea Roxb. 2 云南省勐海
24 K54 广东桑 M.atropurpurea Roxb. 2 印度
25 珙县黑油桑 大叶桑 M.alba var.macrophlla Loud. 2 四川省珙县
26 越 4 广东桑 M.atropurpurea Roxb. 2 越南
27 凤尾芽变 鲁桑 M.multicaulis Perr. 2 江苏省镇江
28 大叶四之目 白桑 M.alba Linn 2 日本
29 剑持 山桑 M.bombycis Koidz. 2 日本新泻
30 大鸡冠 鲁桑 M.multicaulis Perr. 2 山东省临朐
31 云南水桑 长果桑 M.laevigata Wall. 3 云南省
32 新一之濑 白桑 M.alba Linn 2 日本蚕丝试验场
33 火桑 瑞穗桑 M.mizuho Hotta 3 浙江省余杭
198 蚕 业 科 学 26 卷
续表1
编号 品种 种名 倍数性 原产地
34 金龙 瑞穗桑 M.mizuho Hotta 2 日本
35 牛耳桑 白桑 M.alba Linn 2 山西省阳城
36 插桑 鸡桑 M.australis Poir — 四川省
37 钦二 广东桑 M.atropurpurea Roxb. 2 广东省钦州
38 毕节 5号 长穗桑 M.witt iorum Hand-Mazz 6 贵州省毕节
39 药桑 黑桑 M.nigra Linn. 22 新疆自治区
40 纳溪桑 鲁桑 M.multicaulis Perr. 2 四川省纳溪
41 黔鄂 1号 长穗桑 M.witt iorum Hand-Mazz 2 贵州省德江
42 节曲 鲁桑 M.multicaulis Perr. 2 日本上野
43 贵 14 长穗桑 M.witt iorum Hand-Mazz 4 贵州省毕节
44 无柄桑 白桑 M.alba Linn 2 日本
45 构树 构属 cudrania —
注:编号 1～ 44材料来源于中国农业科学院蚕业研究所;构树材料来源于南京林业大学。
1.2 DNA提取
总DNA的提取按照Murray等[ 9]的方法并稍加改进。在5mL离心管中加入2mL CTAB
提取液(100mmol/L Tris pH8.0 , 20mmol/L EDTA pH8.0 , 1.4mol/L NaCl ,1%CTAB ,5%PVP ,
350mmol/L β-mercaptoethanol),在水浴锅中 65℃预热;每个样品取 2 ～ 3片嫩叶剪碎置于研
钵中 ,加液氮速冻 ,充分研磨后移到上述离心管中在 65℃下保温 30min ,并不时摇动;取出
离心管置于冰浴冷却至室温;向离心管中加氯仿 2mL ,摇匀;10 000r/min离心 10min ,取上
清液至另一已编号的 5mL 离心管中;加入 2L 无水乙醇沉淀 DNA ,在-20℃下冷却 2h;
10 000r/min离心 10min ,弃上清液 ,倒置干燥后加 500μL 纯净水溶解;10 000r/min 离心
10min ,取上清液至编号的 1.5mL 离心管中;加等体积酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1),抽提 2
次 ,加氯仿∶异戊醇(24∶1)抽提 2次;加 2L 无水乙醇沉淀 DNA ,过夜;离心10min后用 70%
无水乙醇漂洗;倒置干燥后加入100μL TE(10mmol/L Tris pH8.0 ,0.1mol/L EDTA pH8.0)溶
解;-20℃下保存备用。DNA浓度用琼脂糖凝胶比色法检测。
1.3 引物筛选
首先用 1个 DNA样品对 182个寡核苷酸引物(购自Operon公司)进行第一次筛选 ,选
出有扩增条带且清晰的 60个引物;然后用 4个 DNA样品对其进行第二次筛选 ,选出多态
性强的引物用于桑种质资源遗传多样性检测 。
1.4 PCR扩增
反应体系:RAPD扩增反应用薄壁管在GeneAmp PCR System 9700扩增仪上进行;采用
总体积 20μL 的 25ng 模板 DNA , 50ng/μL 引物 2μL , 1单位 Tag 聚合酶(购自中国农业大
学),10倍反应缓冲液(100mmol/L Tris-HCl pH8.3 ,500mmol KCl ,0.01% gelatin)2μL , dNTP
2μL(其中含 dATP 、dGTP 、dTTP 、dCTP各 200μmol/L),2μLMgCl2(终浓度为 2.5mmol/L),用纯
水补充至 20μL;充分混匀后加 1滴矿物油即进行扩增反应。反应程序为:95℃预变性
2min , 94℃变性 30s ,40℃退火 30s ,72℃延伸90s ,38个循环后 ,72℃延伸 8min;最后在 4℃保
1994 期 赵卫国等:桑属种质资源的随机扩增多态性 DNA 研究
存。扩增产物用含 0.2%溴化乙锭的 1.5%琼脂糖凝胶中以 1×TBE缓冲液为介质电泳分
离。电泳结果在紫外灯用 Polaroid摄像系统照像记录 。
1.5 扩增产物分析
每个样品的扩增带按有“1”或无“0”记录 。按 Nei等[ 10]的方法计算样品间的遗传相似
系数(I):I=2×mxy/(mx+my),其中mx 、my 为两个样品间各自的总扩增带数;mxy为两个样
品间共有扩增条带数 。根据 I ,求出样品间的遗传距离(D):D=-lnI 。利用系统软件 pop-
gene32(PHYLIP3.5版本)按类平均数聚类方法(UPGMA)进行聚类分析 ,绘制 UPGMA 系统
树状图。
2 结果与分析
2.1 引物筛选及 PCR扩增
通过对引物的两次筛选 ,从182个引物中筛选出 24个多态性较强且扩增产物清晰的
引物用于 RAPD分析 ,其结果见表 2 、3。
表 2 桑属材料的随机引物扩增结果
引物 序列(5 -3 ) G+C含量(%)
扩增
带数
多态性
带数
多态性带数
比例(%)
O-12 CAGTGCTGTG 60 8 5 62.5
D-20 ACCCGGTCAC 70 9 7 77.8
F-06 GGGAATTCGG 60 11 9 81.8
J-12 GTCCCGTGGT 70 6 5 83.3
O-09 TCCCACGCAA 60 7 5 71.4
D-09 CTCTGGAGAC 60 2 1 50.0
J-15 TGTAGCAGGG 60 6 3 50.0
J-13 — - 4 3 75.0
F-14 TGCTGCAGGT 60 2 1 50.0
J-16 CTGCTTAGGG 60 8 6 75.0
L-06 GAGGGAAGAG 60 1 1 100.0
G-04 — - 6 3 50.0
J-01 CCCGGCATAA 60 10 9 90.0
J-05 CTCCATGGGG 70 8 7 87.5
J-20 AAGCGGCCTC 70 5 4 80.0
D-07 TTGGCACGGG 70 7 6 85.7
A-09 GGGTAACGCC 70 6 3 50.0
K-01 CATTCGAGCC 60 7 5 71.4
J-04 CCGAACACGG 70 8 6 75.0
J-18 TGGTCGCAGA 60 9 7 77.8
D-06 ACCTGAACGG 60 7 5 71.4
D-03 GTCGCCGTCA 70 9 6 66.7
L-07 AGGCGGGAAC 70 8 5 62.5
A-06 GGTCCCTGAC 70 3 1 33.3
合计/平均 157 113 72.0
200 蚕 业 科 学 26 卷
采用 24个引物对桑属的44个样品以及1个构树样品的 DNA进行扩增 。桑属材料共
形成 157条清晰谱带 ,平均每个引物可扩增 6.5条 ,每份材料则平均可扩增 93.1条谱带 ,
变幅为 83 ～ 102条 ,片段大小在 100 ～ 2 500bp之间。扩增带数最多的是 F -06 ,为 11条;
最少的为 L-06 ,仅 1条。157条谱带中有 113条在桑属植物间表现出多态性 ,占总谱带
的72.0%,平均每个引物多态性带数为 4.7条。可见引物不同 ,扩增产物均有显著差异 ,
其中引物 D-20的扩增结果见图 1。桑属材料与桑科构属的构树相比 ,在 157条带中 ,共
有谱带仅为11条 ,说明桑科植物属与属间存在显著遗传差异。
图 1 引物 D-20 扩增 45份材料基因组 DNA产物电泳图
样品名称与编号与表 1同(下同)
表 3 部分桑树种内品种间的 DNA 多态性
样品 鲁桑 白桑 广东桑 瑞穗桑 长果桑 长穗桑 华桑 暹逻桑
个体数 9 10 5 2 2 3 3 2
区内总带数 123 124 120 118 103 113 112 95
区内共有带数 68 69 74 78 72 82 72 94
区内多态性(%) 44.7 44.4 38.3 33.9 30.1 27.4 35.7 1.1
从表 3可看到 ,各桑树种内的品种间也存在丰富的 DNA 多态性(除暹逻桑外高达
27.4%～ 44.7%),说明同一桑种由于地理位置的差异 、品种间的杂交以及人工选育 ,使桑
树遗传背景发生变化 ,产生了较丰富的遗传多样性;桑属材料间共同拥有 44条谱带 ,占总
带数的 28.0%,这是桑属植物存在共性的重要依据 。另外 ,从表 3还可看到 ,暹逻桑个体
间 RAPD多态性极低 ,仅为 1.1%,可能是从同一地方引进形态特征相似的品种 ,因而表现
出遗传的相似性 。
2.2 桑属材料 DNA多态性的聚类分析
根据Nei等[ 1]的公式 ,计算出了 44份桑属材料及构树间的随机扩增DNA片段的遗传
相似系数(Ⅰ)和遗传距离(D)。结果为暹逻桑系的两个材料间相似系数最高 ,达到了
0.991 2 ,可见两者间遗传背景几乎完全一致;鲁桑系的 8个材料间的相似系数都在 0.760
以上 ,最高是湖桑 32号与凤尾芽变间的相似系数 ,为 0.876 1 ,表明它们间有较近的亲缘
2014 期 赵卫国等:桑属种质资源的随机扩增多态性 DNA 研究
关系 ,特早与其它 8个材料间的遗传相似系数都在 0.75以下 ,说明它们间存在遗传差异;
白桑系的 10个材料 ,有 9个材料间相似系数在 0.740 0以上 ,说明它们间亲缘关系较近 ,
无柄桑与其它材料间存在一定遗传差异 ,这可能与其特殊形态有关;广东桑系的 5个材料
间的相似系数都在 0.740 0以上 ,表明样品间亲缘关系较近 ,但钦二与垂枝桑间的相似系
数达到了0.867 3 ,大于它与广东桑间的系数;山桑系的两个材料间相似系数为0.654 9 ,表
明两者间亲缘关系较远;长穗桑系的3个材料间相似系数都在 0.800 0以上 ,表明其亲缘
关系相近;2个长果桑间的相似系数为 0.708 0 ,两者间有一定遗传差异;3个华桑间的相
似系数在 0.740 0以上 ,表明样品间亲缘关系较近 。
为进一步揭示不同桑种及与构树的遗传进化关系 ,表 4列出了种(类型)间的平均遗
传相似系数。鲁桑 、白桑及白桑变种间平均遗传相似系数多在 0.79以上 ,垂枝桑与白脉
桑间最高 ,达 0.867 3 ,说明各桑种有相近的遗传背景 ,亲缘关系较近 ,以鲁桑为对照 ,它们
之间平均遗传相似系数由大及小的顺序为垂枝桑 —白脉桑 —大叶桑 —白桑 。广东桑与上
述种间的平均遗传相似系数也都在 0.75以上 ,证明也有较相近的遗传背景 。山桑与其它
栽培种相比 ,亲缘关系较远 ,平均相似系数在 0.660 0以下。瑞穗桑与鲁桑 、白桑及其变种
也有较相近的亲缘关系 ,其平均遗传相似系数都在 0.74以上。野生种与栽培种相比 ,平
均遗传相似系数在 0.700 0以下 ,说明存在遗传差异 ,亲缘关系远 。野生种中以黑桑亲缘
关系最远 ,与其它种间的平均遗传相似系数都在 0.654 9以下 ,亲缘关系与其最近的是蒙
桑 ,华桑次之 ,以下为长穗桑和长果桑。
表 4 桑属种间 、种内及与构树间的平均遗传相似系数
材料 鲁桑 白桑 广东桑 山桑 长果桑 长穗桑 华桑 蒙桑 瑞穗桑 鸡桑 大叶桑 白脉桑 垂枝桑 暹逻桑 黑桑
鲁桑 0.8041
白桑 0.7930 0.7763
广东桑 0.7553 0.7614 0.7894
山桑 0.6571 0.6487 0.6390 0.6549
长果桑 0.6770 0.6690 0.6345 0.6947 0.7080
长穗桑 0.6479 0.6413 0.6089 0.6800 0.7345 0.8112
华桑 0.6277 0.6198 0.6094 0.6387 0.7006 0.7217 0.7404
蒙桑 0.6305 0.6248 0.5752 0.6700 0.6681 0.7021 0.6047 -
瑞穗桑 0.7633 0.7646 0.7416 0.6859 0.7213 0.7051 0.6519 0.6637 0.7876
鸡桑 0.6527 0.6443 0.6690 0.6328 0.6342 0.5882 0.6077 0.5664 0.6638 -
大叶桑 0.7965 0.7823 0.7788 0.6770 0.6682 0.6637 0.6490 0.6549 0.8054 0.6460 -
白脉桑 0.8142 0.8053 0.7929 0.6416 0.6593 0.6401 0.6254 0.6372 0.7523 0.6460 0.8584 -
垂枝桑 0.8230 0.8248 0.7982 0.6682 0.6770 0.6490 0.6342 0.6814 0.7965 0.6372 0.8319 0.8673 -
暹逻桑 0.7365 0.7230 0.7283 0.7036 0.6991 0.6800 0.6770 0.6328 0.7478 0.7567 0.7478 0.7478 0.7213 0.9912
黑桑 0.5918 0.5717 0.5416 0.5885 0.6151 0.6165 0.6431 0.6549 0.5753 0.5221 0.5752 0.5575 0.6195 0.5531 -
构树 0.5797 0.5770 0.5681 0.5620 0.5443 0.5546 0.5162 0.5575 0.5452 0.6018 0.5664 0.5664 0.6283 0.5885 0.5133
注:鲁桑系的特早没列入表中进行统计。
202 蚕 业 科 学 26 卷
图 2 45 份材料的 UPGMA系统树状图
用 UPGMA法对 44份桑属材料和 1份构树材料进行聚类分析 ,建立遗传关系聚类图
(图 2)。从图 2可见:鲁桑(特早除外)、白桑及白桑变种聚为一类 ,亲缘关系较近;从阿尔
及利亚引进的特早属于鲁桑 ,但从聚类图中看到它较特殊 ,亲缘关系较远 ,表现出与其它
鲁桑种有较大的遗传差异(可能与其来源有关);暹逻桑的 2份材料为一类 ,是首先聚类桑
种 ,再和鸡桑系的插桑聚为一类;长果桑的 2份材料 ,德江 10号与长穗桑聚为一类;云南
水桑与白桑聚为一类;华桑中的保靖 5号和雅安 3 号先聚类 ,再和思南 2 号总的聚为一
类;长穗桑的 3个材料首先聚成一类 ,接着和长果桑的德江 10号聚类;山桑系的剑持和瑞
穗桑系的金龙聚为一类 ,丽江山桑和吉蒙桑聚为一类;黑桑系的药桑单独聚为一类 ,该品
种为 22倍体 ,有“桑王”之称 ,与其它桑种相比 ,亲缘关系最远 ,是参试材料中最早分化的
桑种 ,这从分子水平充分解释了药桑难以与其它种质杂交产生后代的原因;作为外源种的
构树单独聚为一类。以上聚类结果与传统的形态分类基本一致。但广东桑系除伦教 40 、
越4及打洛 1号聚为一类之外 ,钦二与垂枝桑 ,K54与苏湖 16号亲缘关系较近 ,这可能与
广东桑的遗传背景有关 ,与冯丽春等[ 7]的研究结果一致。瑞穗桑系的金龙与剑持聚为一
类 ,雌花为长花柱 ,这与形态分类一致 ,同属瑞穗桑的火桑与白桑品种亲缘关系相近 ,但白
桑短花柱或无花柱 ,与形态分类不一致 ,这可能是因为瑞穗桑是白桑和山桑的杂交后代 ,
其亲缘关系倾向两者 ,这也进一步说明基因型比表现型分析其遗传特征更可靠 、准确 。
桑树遗传背景复杂 ,从形态学对桑树分类存在局限 ,本文利用 RAPD技术 ,从分子水
平构建了桑树 DNA指纹图谱 ,并对它们之间的亲缘关系进行了探讨 ,但我国桑树种质资
源丰富 ,要弄清整个桑种质资源的遗传关系 ,解决桑树分类上的分歧 ,仍需做大量深入的
研究 。
参 考 文 献
1 Williams J G K ,Kubelic A R , LivakK J , et al.DNA polymorphic amplif ied by arbitrary primers are useful as genetic markers.Nu-
2034 期 赵卫国等:桑属种质资源的随机扩增多态性 DNA 研究
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2 赵学峰 ,蒋建平 ,张裕清 ,等.桑叶中 DNA 的含量及桑品种间的差异.蚕业科学 , 1984 ,10(3):182～ 183
3 町井.桑叶全 DNA的分离.日蚕杂 , 1989, 58(4):349～ 183
4 向仲怀 ,张孝勇 ,余茂德 ,等.采用随机扩增多态性DNA技术(RAPD)在桑属植物系统学研究的应用初报.蚕业科
学 , 1995, 21(4):203～ 208
5 菅贵史 ,平田丰 ,堀内秀纪 ,等.利用 RAPD分析桑品种的评价.见:日本蚕丝学会第 65次学术讲演要旨集 , 1995
6 楼程富 ,张有做 ,张耀洲 ,等.桑树随机扩增 DNA多态性研究.浙江农业大学学报.1996 , 22(2):179～ 151
7 冯丽春 ,杨光伟 ,余茂德 ,等.桑树栽培种的随机扩增DNA多态性(RAPD)研究.蚕业科学 , 1996, 22(3):135～ 139
8 冯丽春 ,杨光伟 ,余茂德 ,等.利用 RAPD 对桑属植物种间亲缘关系的研究.中国农业科学 , 1997, 30(1):52～ 56
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10 Nei N.Mathemat ical model for studying genetic variation in term of restriction endonuclease.Proc.Natl.Acad Sci.USA , 1979 ,76
(3):5269～ 5273
RAPD Analysis for the Germplasm Resources of Genus
Mulberry ,Morus L.
Zhao Weiguo Pan Yile
(The Sericultural Research Institute , Chinese Academy of Agricultural Sciences , Zhenjiang 212018)
Huang Minren
(Forest Genetic and Gene EngineeringKey Laboratory , Nanjing Forestry University , Nanjing 230037)
Abstract 44 mulberry accessions , which belong to 12 species and 3 varieties , and 1 cudrania
were examined for RAPD analysis.Total 157 bands ,which are approximately 100 ～ 2 500bp sizes ,
were produced from 44 mulberry accessions by using 24 10bp random primers selected from 182.Of
them ,113 bands showed polymorphism with the ratio of 72.0%.Based on RAPD data ,Nei s genetic
similarity coefficients and genetic distance were calculated and analysied using the UPGMA dendo-
gram.Additionally , phylogenetic relationship among 45 materials was determined.The results from
cluster analysis indicated that they are basically consistent with the morphological classification.
Key Words Mulberry Germplasm resource RAPD
204 蚕 业 科 学 26 卷