全 文 ：青藤碱对小鼠吗啡的精神依赖以及 cAMP水平的影响＊
王彩云　莫志贤　邵红霞
(第一军医大学中医系药理药化学教研室 , 广州　510515)
2002 11 12收稿 , 2002 12 16修回
＊国家自然科学基金资助课题 ,No 30271610
作者简介:王彩云 ,女 , 32岁 , 硕士 ,主管药师。 研究方向:中药药理
学。 Tel:020-61648261 , E-mail:qlhuo@fimmu.edu.cn
莫志贤 ,女 , 42岁 ,博士 ,副教授 ,硕士生导师。研究方向:
中药药理学。 Tel:020-61648261(O), Fax:020-61648262 ,
E-mail:cherrymo@f immu.edu.cn
中国图书分类号　R 284.1;R 971.2;R 749.91;R 977;
R-332
文献标识码　A　文章编号　1001-1978(2003)05-0575-03
摘要　目的　观察中药单体成分青藤碱(sinomenine , Sin)对
吗啡诱导的小鼠精神依赖及其中枢 cAMP 水平的变化的影
响。方法　采用有倾向性程序引起小鼠显著的位置偏爱效
应 ,利用条件性位置偏爱实验观察 ip Sin 10、30 、60 mg· kg -1
对小鼠吗啡奖赏效应的影响 , 用放射免疫法测定小鼠脑中
cAMP 含量。结果　Sin可剂量依赖性地缩短小鼠在吗啡伴
药箱的时间 ,对吗啡慢性作用引起的小鼠脑内 cAMP 含量增
加具有抑制作用。 结论　Sin 能减弱小鼠对吗啡的精神依
赖 ,降低中枢 cAMP 水平 ,且其本身未显示精神依赖性反应。
关键词　小鼠;青藤碱;吗啡;条件性位置偏爱;cAMP;精神
依赖
　　阿片类药物成瘾患者脱毒治疗后复吸率常高达
95%,复吸与稽延性戒断症状与家庭 、社会均有关 ,
尤其与药物的精神依赖关系更为密切。目前用于治
疗药物精神依赖的药物甚少 ,且疗效不佳。从中药
中寻找防治阿片类药物精神依赖的有效方剂或有效
成分 ,是当前中药戒毒领域的迫切任务。我们在多
年中药戒毒的临床和实验研究中发现 ,青风藤及其
有效成分青藤碱(sinomenine , Sin)对阿片类依赖的
戒断症状及焦虑状态具有较好的疗效[ 1 ～ 3] 。条件
性位置偏爱(CPP)试验是 20世纪 80年代发展起来
的一项评价药物精神依赖性潜力的有效方法 ,该方
法很少受药物的影响 ,结果可靠 ,近年来被广泛采
用[ 4 ,7] 。为此 ,我们观察了青藤碱对吗啡依赖小鼠
位置偏爱效应的影响 ,及小鼠脑内 cAMP 含量的影
响。旨在寻找治疗觅药行为的药物提供药理学依
据 ,以期为新型戒毒及抗复吸中药的筛选和有效药
物戒毒机制的探讨提供可靠的依据 。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1 　动物 　♂昆明种小鼠 , 体质量(20.13±
2.04)g ,由第一军医大学实验动物中心提供 ,合格
证号:粤检证字第 2001A058号。
1.1.2　药材　盐酸青藤碱 ,广州白云山制药总厂提
供 ,批号:000822。用蒸馏水溶解后配制成所需浓
度 。盐酸吗啡(粉剂),解放军总后勤部药品供应站
提供 ,用生理盐水配制成所需浓度。 3H-cAMP 放射
免疫测定试剂盒 ,北京中国原子能科学研究院提供。
1.1.3　器材　CPP 箱仿文献制作[ 5 , 6] ,箱体由 15
cm×15 cm×15 cm 的两个正方体组成 ,中间有一可
活动的隔板 ,将隔板抽起后 ,小鼠可在两个箱体之间
自由活动。箱体的一侧除玻璃面板外内侧各面均漆
成黑色 ,底板用柔软毛毯底面制成粗糙面 ,另一侧除
玻璃面外漆成白色 ,底板制成光滑面 ,整个实验箱具
有视觉和触觉两种线索 。
1.2　方法
1.2.1　预处理　领回小鼠后在动物实验房适应性
饲养 2 d , d 3将箱体的隔板抽出 ,把小鼠放入箱体
中间 ,逐只观察 15 min ,以小鼠的头部为准记录小
鼠在各箱体停留时间 。观察过程在隔音条件下进
行 。剔除对箱体某一侧有显著偏爱的小鼠 ,以排除
非条件性位置偏爱对实验结果的影响 。结果显示 ,
几乎所有小鼠偏爱黑箱。由此 ,将白箱作为非偏爱
侧 。
1.2.2　青藤碱自身奖赏效应或厌恶效应的测定　
达到实验条件的小鼠 40只 ,随机分为盐水对照组及
青藤碱 10 、30 、60 mg·kg-1共 4 个剂量组 ,每组 10
只 ,青藤碱各剂量组小鼠分别 ip不同剂量的盐酸青
藤碱 ,每天 1次 ,盐水组 ip与其相同容积的生理盐
水 ,连续 6 d ,小鼠注射盐酸青藤碱后置于非偏爱侧
白色箱体 ,注射生理盐水后置于偏爱侧黑色箱体 ,时
间均为 40 min。分别在给药前和d 6给药后 24 h逐
只观察小鼠 15 min ,记录小鼠在白色箱体停留时
间 。
1.2.3　青藤碱对位置偏爱效应的影响　位置偏爱
模型制作及测定:达到实验条件的小鼠 50只随机分
为盐水对照组 、吗啡对照组(6 mg·kg-1)及盐酸青
·575·中国药理学通报　Chinese Pharmacological Bulletin　2003 May;19(5):575 ～ 7
藤碱 10 、30 、60 mg·kg -1给药组 。除盐水对照组外 ,
各小鼠每天分别注射盐酸吗啡和生理盐水 ,给药方
法均背部 sc注射 ,间隔 8 h(8:00 , 16:00), 注射盐酸
吗啡后 ,将动物置于非偏爱侧白色箱体 ,注射生理盐
水后置于偏爱侧黑色箱体 ,时间均为 40 min ,共训
练6 d ,制作位置偏爱模型 。最后一次注射吗啡的
24 h 后逐只进行位置偏爱检测 ,观察 15 min ,记录
小鼠在白箱侧停留时间 。整个实验期间 ,小鼠自由
饮水进食 。
给药方法:(A)为观察药物对吗啡引起的位置
偏爱效应形成的影响 ,小鼠在每次 sc吗啡前 30 min
分别 ip盐酸青藤碱各剂量组 ,正常对照组及吗啡对
照组以同样方式注射相同容积的生理盐水 ,连续给
药 6 d 。(B)为观察药物对已形成的小鼠位置偏爱
的影响 ,在造摸的 6 d内均不给药 ,仅在检测前 30
min ip 盐酸青藤碱各剂量组。
1.2.4　cAMP 含量测定　标本制备:小鼠以前面同
样方式分组给药 ,但不进行位置偏爱训练 ,d 6最后
一次给予吗啡的 2 h后 ,将小鼠断头处死 ,迅速取出
脑组织 ,称取同一部位大脑皮层 ,加入预冷的 6 %三
氯醋酸 , 冰浴中匀浆 , 4℃ 3 000 r·min-1离心 15
min。上清用 5倍体积的水饱和乙醚洗提 4次 ,水相
在70 ～ 75 ℃水浴吹干 ,得标本 。采用竞争性蛋白结
合分析法测定其 cAMP含量。
测定步骤:TE缓冲液配置系列标准溶液 ,使 40
μl中分别含有 16 、8 、4 、2 、1 、0.5 、0.25 pmol的标准
cAMP。将标本干渣中加 TE 缓冲液 ,溶解后加入
3
H-cAMP 40 μl(不摇动),再加结合蛋白溶液 100
μl ,轻轻摇匀。自加入结合蛋白开始 ,孵育 2 h后 ,
每管(除对照管外)加入吸附剂 100μl摇匀。3 500 r
·min-1 ,离心 10 min 。上清倒入已加 3 ml无水乙醇
的测量杯中 ,加闪烁液 3 m l摇匀 。在液闪仪上测3H
放射性 。最后按试剂盒说明方法计算出 cAMP 的
浓度 。
1.2.5　统计学处理　实验数据以 x ±s表示 ,应用
SPSS 10.0统计软件进行单因素设计的方差分析 。
2　结果
2.1　Sin自身位置偏爱检测结果　各组小鼠分别
测得在白色箱体中停留时间 ,盐酸青藤碱各剂量组
与对照组相比 ,差异均无显著性(P > 0.05);与其
各自给药前相比差异也无显著性(P>0.05 ,见 Tab
1),说明青藤碱自身没有使小鼠表现出奖赏效应或
厌恶效应。
Tab 1　The CPP effect of Sin i tsel f( x ±s , n=10)
Drug
/mg·kg-1
Staying t ime
(before ad)/ s
in 15 min
(After ad)/ s
NS+NS 413±36 423±48
Sin 10 432±55 416±32
Sin 30 406±81 421±57
Sin 60 430±32 419±69
2.2　Sin对位置偏爱效应的影响　吗啡模型组与
盐水对照组比较 ,小鼠在非偏爱伴药箱白色侧箱体
中停留时间延长 , P < 0.01 ,见 Tab 2 ,说明吗啡使
小鼠产生了明显的位置偏爱;青藤碱连续 6 d 给药
组及测定前 30 min 单次给药组在白箱中滞留时间
均较吗啡对照组缩短 ,且呈剂量依赖性 ,青藤碱 60
mg·kg-1剂量组的时间均缩短 , P<0.01 ,见 Tab 2 ,
显示青藤碱能够消除吗啡所致小鼠的条件性位置偏
爱 。
2.3　小鼠大脑皮质中 cAMP含量测定结果　小鼠
连续给予吗啡 6 d ,大脑皮质中 cAMP 含量高于正
常对照组 , P <0.01;Sin 连续 6 d 给药组及测定前
30 min单次给药组其 cAMP 含量均剂量依赖性降
低 ,青藤碱 30 mg·kg-1 、60 mg·kg-1剂量组与吗啡
组相比 ,P <0.01 ,见 Tab 2。
3　讨论
Sin是中药防己科植物青藤 Sinomenium acu-
tum(Thunb)Rehd et Wils及毛青藤 Sinomenium
acutum(Thunb)et Wils var cinereum (Diels)Rehd
et Wils的干燥藤茎中的主要成分 。Sin结构类似吗
Tab 2　Effects of Sin on morphine-induced CPP and the cAMP content in cerebral cortex of mice( x ±s , n=10)
G roup
Staying t ime in 15min/ s
ad 6 d ad once
cAMP/ pmol·g -1 tissue
ad 6 d ad once
NS 　　　413±26　　 　　　424±58　　 0.8270±0.1860 0.8310±0.2770
Mor 6 m g·kg -1 　　　598±108## 　　　586±92## 1.5250±0.2567## 1.5312±0.3392##
Sin 10 mg·kg -1 　　　512±60＊　 　　　561±79　　 1.3920±0.2243 1.4049±0.3466
Sin 30 mg·kg -1 　　　476±85＊＊ 　　　503±82＊ 1.1870±0.2418＊＊ 1.2010±0.4121＊＊
Sin 60 mg·kg -1 　　　420±86＊＊ 　　　463±66＊＊ 0.8660±0.2285＊＊ 0.9423±0.3893＊＊
　　##P<0.01 vs NS;＊P <0.05 , ＊＊P<0.01 vs Mor
·576· 中国药理学通报　Chinese Pharmacological Bulletin　2003 May;19(5)
啡 ,由氢菲核和乙胺桥组成 ,母核为吗啡烷 ,但无成
瘾性。我们的实验结果表明 , Sin 自身没有产生奖
赏效应或厌恶效应;Sin能明显抑制吗啡诱导的条
件性位置偏爱的形成 ,且对已形成的位置偏爱亦有
拮抗作用 。
　　cAMP 作为细胞第二信号的信使在阿片类依赖
的形成和维持中起着重要作用[ 8] 。 cAMP 反应元件
结合蛋白(CREB)的上调是阿片成瘾早期细胞内信
号转导的改变之一 。AC和 cAMP 途径的异常增强
与阿片类戒断反应和阿片“心瘾”的维持有着密切的
联系[ 9] ,阿片类药物依赖的形成过程中 ,伴随着细
胞内 AC- cAMP 信号转导过程的变化[ 10 , 11] ,用吗啡
慢性处理可导致 cAMP 的适应性上调[ 8] 。因此认
为AC-cAMP 的改变可能是产生吗啡依赖的生化基
础之一 。本研究发现 ,连续给予吗啡 6 d ,可使小鼠
产生条件性位置偏爱 ,脑内 cAMP 含量明显升高 ,
提示对脑内 cAMP的抑制可能是 Sin消除吗啡诱导
的条件性位置偏爱的机制之一 。
本次实验初步探讨了青风藤的有效成分 Sin 对
吗啡所致的精神依赖的拮抗作用 ,为青风藤及 Sin
用于干预阿片类药物依赖的觅药行为提供了研究线
索 ,也为该药的临床应用提供理论依据。但药物的
作用机制仍有待深入研究 。
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Effects of sinomenine on the psychic dependence on
morphine and the brain cyclic AMP level in mice
WANG Cai-Yun , MO Zhi-Xian , SHAO Hong-Xia
(Pharmacological Department of Tradit ional Chinese Medicine ,
the First Mili tary Medical Universi ty , Guangzhou 　510515)
ABSTRACT 　AIM 　 To explo re the effects of
sinomenine (Sin)on psychic dependence induced by
morphine(Mor)in mice and i ts relation to the cAMP
content of the cerebral cortex.METHODS　A biased
procedure induced the strong place preference.The
effect of Sin (10 , 30 , 60 mg·kg-1 , ip)on the re-
warding property of morphine w as observed in a con-
di tioned place preference(CPP)paradigm in mice , at
the same time , the change of cAMP content in cere-
bral cortex w as measured by the radioimmunoassay
(RIA).RESULTS 　Sin significant ly shortened the
t ime of staying in morphine-pair compartment and
low ered the cAMP level of mice.CONCLUSION　
Sin could at tenuate effects of psychical dependence in-
duced by Mor , it s mechanism may be related to de-
crease of cAMP level in the brain , and Sin did not
display psychical dependence in the experiment.
KEY WORDS　mouse;sinomenine;morphine;con-
ditioned place preference;cyclic AMP;psychical de-
pendence
·577·中国药理学通报　Chinese Pharmacological Bulletin　2003 May;19(5)