全 文 ：食用菌学报 2010.17(3):29 ～ 32
收稿日期:2010-03-25原稿;2010-06-08 修改稿
基金项目:云南省应用基础研究(编号:2008CD193)的部分研究内容
作者简介:曹　旸(1983-), 女 , 2008年毕业于云南大学 ,硕士 , 研究实习员 ,主要从事食用菌栽培方面的研究工作 。
＊本文通讯作者　E-mail:jkpcnlc@yahoo.com.cn
文章编号:1005-9873(2010)03-0029-04
瓶栽条件下覆土方法对暗褐网柄牛
肝菌子实体生长的影响
曹　旸 , 纪开萍＊ , 刘　静 , 张春霞 , 何明霞 , 王文兵
(云南省热带作物科学研究所 , 云南景洪 666100)
摘　要:设计 10 种覆土方法研究了瓶栽条件下覆土对暗褐网柄牛肝菌子实体形成的影响及作用机制。结果
表明 ,暗褐网柄牛肝菌在瓶栽条件下出菇必须通过覆土处理。 通过自然条件下覆土 、无菌覆土以及覆土中混
入细菌 、放线菌的对比试验 ,发现覆土中的微生物能抵抗外界微生物的污染 , 并对子实体的形成有促进作用 。
另外 ,对比覆土后封口培养及敞口培养的处理 ,大多数封口培养的处理出菇受到抑制 ,说明 CO2的浓度对暗褐
网柄牛肝菌在瓶栽条件下形成子实体也有一定的影响。
关键词:暗褐网柄牛肝菌;覆土;覆土微生物;CO2浓度
　　暗褐网柄牛肝菌 [ Phlebopus portentosus
(Be rk &Broome)Boedi jn]又名巨型牛肝菌 、黑
牛肝菌等 , 分布在中国云南 、广西和海南等
地[ 1 ～ 3] ,味道鲜美 , 营养丰富 , 深受产地消费者的
喜爱 ,实现其人工栽培具有重要的意义 。纪开萍
等[ 4 , 5] 曾报道将暗褐网柄牛肝菌菌种在盆栽和田
间条件下接种于小粒咖啡(Co f f ea arabica L.)
苗根系 ,能形成子实体并发育成熟 ,但未观察到根
尖有菌丝套及哈蒂氏网形成 ,认为暗褐网柄牛肝菌
可能是腐生菌。LUMYONG和 SANMEE[ 6 , 7] 也曾
报道 ,在培养皿中以腐生菌的培养基培养暗褐网柄
牛肝菌 ,可产生子实体和担孢子 ,担孢子能够萌发 ,
只是子实体的形态不好 ,且产量很低 。
覆土操作常应用于双孢蘑菇(Agaricus
bisporus)、平菇(P leurotus ostreatus)、鸡腿菇
(Coprimus comatus)等许多食用菌的人工栽培
中 ,能促进出菇 ,提高产量。笔者设计了 10 种不
同的覆土方法 ,研究瓶栽条件下覆土对暗褐网柄
牛肝菌子实体形成的影响 ,希望为其大规模人工
栽培提供必要的参考。
1　材料与方法
1.1 材料
1.1.1 暗褐网柄牛肝菌(P.portentosus)菌株
　　菌株编号 B-01-3-11 , 2003 年由采自云南景
洪凤凰木(Delom ix regia)树下的野生子实体分
离获得 ,保存于云南省热带作物科学研究所 ,其
人工培养的子实体凭证标本存放于中国科学院
昆明植物研究所真菌标本室 , HKAS49706 号
标本 。
1.1.2 细菌 、放线菌
　　由本实验应用的覆土中 28 ℃条件下分离纯
化得到的 4 株细菌(固氮类细菌 ,菌株编号:B1 、
B2 、B3 、B4), 3 株放线菌(链霉菌菌株编号:A 1 、
A2 、A 3),本实验室保藏。
1.1.3 覆土
　　由果园土壤 、草炭等体积混合 ,加水至含水
量 60%。
1.1.4 培养基质
　　液体培养基(/L):去皮马铃薯 200.0 g(煮沸
30 min),葡萄糖 20.0 g ,酵母膏 1.0 g , MgSO 4
1.0 g ,KH 2PO 41.0 g 。
子实体培养料:干橡胶木锯末 10 kg 、谷粒
5 kg 、MgSO 415 g 、KH2 PO 4 5 g 、加水拌匀至含水
量 60%,pH 在 6左右 ,分装入 500 mL 玻璃广口
瓶 ,每瓶鲜料 400 g ,121 ℃灭菌 60 min。
1.2 方法
1.2.1 液体菌种制备
　　将菌株 B-01-3-11活化后取直径 8 mm 菌块
匀浆打碎后接入含 300 mL 液体培养基的
500 mL三角瓶中 ,静置过夜后 , 28 ℃、126 r/min
培养 10 d ,即得液体菌种。
食　用　菌　学　报 第 17 卷
1.2.2 栽培菌种制备
　　将 40 mL 液体菌种接入 1.1.4 的广口瓶培
养料中 , 28 ℃避光培养 45 d ,即得栽培菌种。
1.2.3 细菌 、放线菌菌悬液制备
　　以接种环将供试细菌 、放线菌菌株分别接种
于三角瓶中(500 mL 三角瓶中含 150 mL 1.1.4
的液体培养基),接种两环 ,28 ℃、126 r/min培养
48 h ,得细菌 、放线菌菌悬液 ,分别以平板菌落计
数法计算菌液浓度 。
1.2.4 不同的覆土处理
　　将栽培菌种按照以下 10组处理分别进行覆
土 ,覆土厚度均为 4.0 cm ,每处理 7个重复 。
①覆土 ,之后敞口培养;
②覆土 ,之后封口培养至出菇;
③覆灭菌土(121 ℃, 60 min), 之后敞口
培养;
④覆土同③,之后封口培养至菇蕾形成 ,再
敞口培养;
⑤覆土同③,之后封口培养至覆土层长满菌
丝 ,再敞口培养;
⑥覆土同③,并在无菌条件下添加细菌 、放
线菌 ,混匀 ,使覆土中细菌浓度约107 ～ 108 cfu/g ,
放线菌浓度约为 103 ～ 104 cfu/g ,之后敞口培养;
⑦覆土同③,添加细菌和放线菌同⑥,之后
封口培养至菇蕾形成 ,再敞口培养;
⑧覆土同③,添加细菌和放线菌同⑥,之后
封口培养至覆土层长满菌丝 ,再敞口培养;
CK1:不覆土 ,封口培养;
CK2:不覆土 ,敞口培养 。
1.2.5 出菇培养
　　将不同覆土处理的栽培瓶移至砖混泡沫板
菇房中 ,保持温度 28 ～ 30 ℃、光照100 ～ 300 lux 、
湿度 90%～ 95%培养 ,分别在第 5天和第 10 天
测量菌丝在覆土层四个不同方向生长的长度 ,取
平均值作为菌丝生长量;记录原基发生和子实体
生长情况 ,统计污染率(污染率=污染栽培瓶数/
总栽培瓶数 ×100%)和出菇率(出菇率=出菇栽
培瓶数/总栽培瓶数 ×100%),并以Duncan新复
极差法(DPS7.0)对数据进行分析。
2　结果与分析
　　表 1 综合了各处理中暗褐网柄牛肝菌菌丝
生长 、原基形成和子实体生长的情况。由结果可
知 ,覆土后 5 d ,除处理 ③被绿霉污染外 ,其余各
处理间菌丝生长长度差异不显著。覆土后 10 d ,
处理⑥的(覆土混菌 ,敞口培养)部分重复中菌丝
已长满覆土层 ,平均菌丝生长量与处理①(自然
覆土 ,敞口培养)之间差异显著 。菌丝长满覆土
层后 ,逐渐发育出原基和子实体(图 1 ,见封 3 彩
图)。
表 1　不同覆土处理的出菇情况1)
Table1　Vegetative and fruiting characteristics for each casing treatment1)
覆土处理
Casing
method
菌丝长度
(5 d)
Mycelia
growth
in casing
for 5 d(cm)
菌丝长度
(10 d)
Mycelia
growth in
casing for
10 d(cm)
污染率
Contamination
r ate
(%)
原基形成时间
Time for
pr imodia
to emerge
(d)
原基数目
Number
of
pr imodia
子实体成熟数目
Number of
ma tur e fruit
bodies
平均单菇重
Weight of
individual
fr uit bodies
(g)
出菇率
Fruiting
r ate
(%)
① 1.7 2.7 b 37.5 16.2 B 11.5 Aa 1.0 Aa 45.5 Aa 50.0
② 2.4 3.3 ab 71.4 17.0 B 0.1 Bc 0 Cc 0 Cc 14.3
③ 0 0 100 0 C 0 Bc 0 Cc 0 Cc 0
④ 1.8 3.1 ab 0 0 C 0 Bc 0 Cc 0 Cc 0
⑤ 2.4 3.1 ab 0 28.5 A 1.0 Bbc 1.0 Aa 32.5 ABa 57.1
⑥ 1.6 3.5 a 14.3 17.2 B 4.0 Bb 0.3 BCc 11.3 BCb 71.4
⑦ 1.5 2.9 ab 14.8 16.0 B 2.0 Bbc 0.5 ABCabc 35.3 ABa 71.4
⑧ 2.0 3.1 ab 0.0 14.5 B 2.3 Bbc 0.8 ABab 48.3 Aa 71.4
CK1 0 0 C 0 Bc 0 Cc 0 Cc 0
CK2 0 0 C 0 Bc 0 Cc 0 Cc 0
1)表中数据为 7个重复的平均值 ,不同大小写字母代表在 0.01和 0.05水平差异显著
1)Values sh own are th e means ±SD of seven deter min at ions , Different h igher and lower cas e repres en t s igni ficance at 0.01 and 0.05
levels , respectively
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第 3 期 曹　旸 , 等:瓶栽条件下覆土方法对暗褐网柄牛肝菌子实体生长的影响
　　在不覆土的处理中(CK1 、CK2),菌丝能够长
满固体基质 ,但不能形成子实体;处理⑤(覆无菌
土)和其它覆自然土和添加菌土的处理皆有子实
体形成 ,说明覆土是暗褐网柄牛肝菌出菇的必要
条件 。
①和②处理 ,覆自然土 ,敞口培养和封口培
养在菌丝生长 、原基发生时间上差异不显著 ,但
封口培养的处理仅能形成少量的菇蕾 ,且不能发
育成熟 ,比对④、⑤、⑦、⑧的出菇状况可知 , CO2
的浓度过高不利于子实体发育。
⑥、⑦、⑧处理 , 覆无菌土并添加细菌放线
菌 ,三种培养方式在菌丝生长 ,原基发生 ,子实体
成熟上均无极显著差异。比较同样是敞口培养
的①、③、⑥处理 ,仅处理③中发生绿霉污染 ,说
明覆土中的微生物在抵抗其它微生物污染方面
有着重要的作用。
综合各种处理敞口培养的污染率比较高 ,甚
至可在原基上形成污染导致其死亡 。混菌覆土 ,
待菌丝长满覆土层后打开封口的处理⑧,出菇状
况最为理想。
3　讨论
　　大型真菌的营养生长阶段和生殖生长阶段
对环境要求完全不同 。覆土作为双孢蘑菇 、鸡腿
菇等许多人工栽培食用菌的关键因素 ,能诱导菌
丝由营养生长向生殖生长过渡 ,形成子实体 。
LUMYONG 和 SANMEE [ 6 , 7]的报道中曾提到暗
褐网柄牛肝菌菌丝在一般用来生产食用菌的培
养基质上生长良好 ,并能产生成熟子实体 ,但同
时它也能与思茅松形成外生菌根 ,本实验中采用
的菌株是否为兼性外生菌根菌 ,还有待进一步研
究确定。
笔者的实验首次在国内实现了暗褐网柄牛
肝菌在完全没有菌根状态下的子实体培养 ,证明
了覆土与微生物的存在是本实验所用暗褐网柄
牛肝菌菌株形成原基和成熟子实体的重要条件 。
至于覆土与微生物的作用机制 ,其出菇过程参与
的微生物种类 ,尚需进行更多深入细致的研究 。
现有的培养实验中 ,每个栽培瓶中无论形成多少
菇蕾都只有一个子实体能够长大 ,而且这个子实
体在生长过程中也有可能夭折而不能成熟 ,针对
这种状况 ,培养基质的营养配比和出菇的条件等
还需要进一步的调整。
参考文献
[ 1] 杨祝良 , 臧穆.中国南部高等真菌的热带亲缘[ J] .
云南植物研究 , 2003 , 25(2):129-144.
[ 2]臧穆.中国真菌志第 22 卷[ M ] .北京:科学出版社 ,
2006:1-215.
[ 3]臧穆.我国东喜马拉雅及其邻区牛肝菌目的研究(续)
[ J] .云南植物研究 , 1986 , 8(1):1-22.
[ 4]纪开萍 , 何明霞 , 张春霞 , 等.暗褐网柄牛肝菌半人
工模拟栽培及“宿主树” 根系上菌丝生长的持久性
[ J] .微生物学通报 , 2009 , 36(3):277-382.
[ 5]纪开萍 , 张春霞 , 曾雁 , 等.盆栽条件下暗褐网柄牛
肝菌人工菌塘及其子实体培养研究[ J] .云南植物研
究 , 2007 , 29(5):554-558.
[ 6] LUM YONG S , SANM EE R , LUMYONG P.Is lar ge
scale cultiv ation of bo lete po ssible? [ J] .Opera
Mycol , 2007 , 1:34-37.
[ 7] SANMEE R , LUM YONG P , BERNARD D , et al.
I n vitro cultiv ation and fruit body formation o f the
black bo le te , Phlebop us portentosus , a popular edible
ectomycor rhizal fungus in Thailand [ J ] .
Mycoscience , 2010 , 51:15-22.
[本文编辑] 　曹　晖
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食　用　菌　学　报 第 17 卷
Effect of Casing on Fruit ing of Phlebopus portentosus
in Bot tle Culture
CAO Yang , JI Kaiping＊ , LIU Jing , ZHANG Chunxia , HE Mingxia , WANG Wenbing
(Yunnan Institution for Tropic al Crop Research , Jinghong , Yunnan 666100 , Chin a)
Abstract:The eff ect of three casing tre atments(untre ated garden soil , sterilized garden soil , and ster ilized
ga rden soil mixed with thre e bacter ial isolates and four ac tinomyce te isolates obtained from untr eated garden
soil)on the f ruiting of Phlebopus portentosus in bottle culture is descr ibed.I n addition to the dif fer ent casing
tr eatmen ts , the e ffe ct of additional par amete rs consisting of wrapping the bottles until the development cycle
had re ached a par ticula r stage (i.e.complete coloniz ation of the casing layer by fungal mycelium ,
primoridum formation)were also evaluated.Fruiting was dependent upon casing although contam ination of
the bottle cultures occur red except when ster ilized casing combined with wrapping was employed.Our data
indic ated that the microflor a of the casing served to protect the cultur es f rom cont amina tion with gr een mold
and promoted fruit body development.Higher CO2 concentr ations arising in sealed cultur e bottles depr essed
fruit body growth.
Key words:Phlebopus portentosus ;casing;casing m icrof lor a;CO2 concentr ation
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