全 文 ：周红菊.不同培养基及激素浓度配比对欧亚旋覆花愈伤组织诱导的影响 [ J] .江苏农业科学 , 2010(2):60-61.
不同培养基及激素浓度配比对欧亚旋覆花
愈伤组织诱导的影响
周红菊
(衡水学院生命科学系 ,河北衡水 053000)
　　摘要:采用正交设计的方法 ,研究了不同的培养基类型和不同浓度的 6-BA、NAA、TDA、CPPU对欧亚旋覆花组
培苗叶片和根愈伤组织诱导的影响。结果表明:欧亚旋覆花组培苗叶片和根部均能较好地诱导出愈伤组织 ,叶片诱导
愈伤组织适宜的培养基组成为 MS+CPPU0.1mg/L+TDZ0.01 mg/L+6-BA1.0 mg/L+NAA0.05 mg/L;根诱导
愈伤组织适宜的培养基组成为 MS+CPPU0.1mg/L+TDZ0.03 mg/L+6-BA0.5mg/L+NAA1.0 mg/L。
　　关键词:正交设计;欧亚旋覆花;愈伤组织;培养基;激素
　　中图分类号:S682.1+10.4 +3　　文献标志码:A　　文章编号:1002-1302(2010)02-0060-02
收稿日期:2009-08-05
作者简介:周红菊(1981—),女 ,河北衡水人 ,硕士 ,助教 ,研究方向为
植物组织培养。 E-mail:zhouhongjv@126.com。
　　培养基是药用植物组织培养中最重要的基质 ,选择合适
培养基是组织培养的重要环节 ,不同的培养对象需要选择不
同的培养基 。植物生长调节物质是诱导愈伤组织形成的极为
重要的因素 [1 ] 。因此 ,研究不同的培养基及激素浓度配比对
愈伤组织的诱导效果在植物组织培养中具有非常重要的意
义 。菊科药用植物旋覆花属的欧亚旋覆花 (Inulabritannica
L.)分布很广 ,主要分布于中国 、韩国和日本等国 ,是一种传
统的中草药 。其性味咸 、温 ,入肺 、肾经 ,主治咳嗽消痰 、胁下
胀满 、大腹水肿 、去头目风 、泄散风寒 。据报道 ,欧亚旋覆花主
要含黄酮类 [2 -3] 、倍半萜内酯类和萜类等化学成分 [ 4] ,具有多
种生物活性 ,如抗炎 [ 5-6 ] 、抗肝炎 、抗肝损伤 [ 7] 、抗肿瘤和细胞
毒等 。持续地从野生欧亚旋覆花中提取有效活性成分 ,势必
会破坏生物多样性和生态系统的平衡 。人工种植存在品质退
化 、农药污染 、占用大量耕地等问题 。采用植物组织培养的方
法 ,建立欧亚旋覆花的组织培养快速繁殖体系 ,是解决上述问
题的有效途径 。本研究采用正交设计的方法 ,研究不同培养
基 、激素及激素浓度配比对愈伤组织诱导的影响 ,旨在筛选出
适合欧亚旋覆花愈伤组织诱导的最佳组合。
1　材料与方法
1.1　材料
培养于加有活性炭的 MS培养基上的欧亚旋覆花无
菌苗 。
1.2　方法
以欧亚旋覆花无菌苗的根和叶为外植体 ,采用正交设计
方法 ,每处理接种 35个外植体 ,每处理重复 3次 。诱导温度
为(23±1)℃,黑暗培养 , 40d后统计愈伤组织诱导率并观察
愈伤组织生长状况 。分析各类生长调节物质作用的大小 ,筛
选最佳种类及浓度组合 。
L16(45 )正交试验:选择不同的培养基类型 ,不同的激素
种类及浓度 ,进行正交试验 (表 1)。愈伤组织诱导率 =形成
表 1　愈伤组织诱导的因素与水平
水平
因 素
培养基
类型
CPPU
(mg/L)
TDZ
(mg/L)
6-BA
(mg/L)
NAA
(mg/L)
1 1/2MS 0 0 0 0
2 MS 0.1 0.01 0.5 0.05
3 B5 0.5 0.03 1.0 0.5
4 N6 1.0 0.1 3.0 1.0
愈伤组织的外植体 /接种外植体总数 ×100%,结果取平均值 。
2　结果与分析
2.1　不同的培养基和植物激素组合对欧亚旋覆花叶片愈伤
组织的影响
欧亚旋覆花叶片愈伤组织诱导率的直观分析见表 2。影
响叶片愈伤组织诱导率的因素主次顺序为 CPPU>TDZ>
NAA>培养基 >6-BA,因素的最优水平为 MS培养基 、CPPU
0.1 mg/L、 TDZ 0.01 mg/L、 6 -BA 1.0 mg/L、 NAA
0.05mg/L。
从愈伤组织诱导后的生长情况来看 , 2号 、3号 、5号、7
号组合诱导的愈伤组织呈浅黄色 ,质地疏松 ,颗粒状 ,具有光
泽 , 55 d后愈伤组织呈褐色 ,同时愈伤组织长出许多不定芽
(图 1)。 6号和 9号组合可以诱导出愈伤组织 ,生长势一般 ,
生成量少。 10号 、13号 、14号组合诱导出愈伤组织的生长状
况差 。 1号 、4号 、11号 、12号 、15号 、16号组合没有愈伤组织
产生 ,叶片变黄 。这说明适宜浓度外源激素组合对欧亚旋覆
花叶片愈伤组织的诱导有促进作用 。
2.2　不同的培养基和植物激素组合对欧亚旋覆花根愈伤组
织的影响
欧亚旋覆花根愈伤组织诱导率的直观分析见表 3。影响
根愈伤组织诱导率的因素主次顺序为 CPPU>NAA>6-BA
>TDZ>培养基 , 因素的最优水平为 MS培养基 、CPPU
0.1 mg/L、TDZ0.03 mg/L、6-BA0.5 mg/L、NAA1.0 mg/L。
　　从愈伤组织诱导出后的发育情况来看 , 2号 、3号 、5号组
合诱导出的愈伤组织呈浅黄色 ,质地疏松 ,颗粒状 ,具有光泽
—60— 江苏农业科学　2010年第 2期
DOI :10.15889/j.issn.1002-1302.2010.02.060
表 2　不同培养基及激素浓度配对欧亚旋覆花叶片愈伤组织
诱导的 L16(45)正交试验方案与结果
序
号
培养
基
激素(mg/L)
CPPU TDZ 6-BA NAA
愈伤组织
诱导率
(%)
愈伤组
织生长
状况
1 1/2MS 0 0 0 0 0 -
2 1/2MS 0.1 0.01 0.5 0.05 100 +++++
3 1/2MS 0.5 0.03 1.0 0.5 48.6 +++++
4 1/2MS 1.0 0.1 3.0 1.0 0 -
5 MS 0 0.01 1.0 1.0 75.2 +++++
6 MS 0.1 0 3.0 0.5 45.7 ++
7 MS 0.5 0.1 0 0.05 37.1 ++++
8 MS 1.0 0.03 0.5 0 0 -
9 B5 0 0.03 3.0 0.05 28.6 ++
10 B5 0.1 0.1 1.0 0 34.3 +
11 B5 0.5 0 0.5 1.0 0 -
12 B5 1.0 0.01 0 0.5 0 -
13 N6 0 0.1 0.5 0.5 60.0 +
14 N6 0.1 0.03 0 1.0 45.7 +
15 N6 0.5 0.01 3.0 0 20.0 -
16 N6 1.0 0 1.0 0.05 14.3 -
k1 37.2 41.0 15.0 20.7 13.6
k2 39.5 56.4 48.8 40.0 45.0
k3 15.7 26.4 30.7 43.1 38.6
k4 35.0 3.6 32.9 23.6 30.2
R 23.8 52.8 33.8 22.4 31.4
　　注:“ -”代表抑制作用;“ +”代表生长差;“ ++”代表生长一
般;“ ++++”代表生长较好;“ +++++”代表生长最好。
表 3　不同培养基及激素浓度配比对欧亚旋覆花根愈伤组织
诱导的 L16(45)正交试验方案与结果
序
号
培养
基
激素(mg/L)
CPPU TDZ 6-BA NAA
愈伤组织
诱导率
(%)
愈伤组
织生长
状况
1 1/2MS 0 0 0 0 0 -
2 1/2MS 0.1 0.01 0.5 0.05 79.5 +++++
3 1/2MS 0.5 0.03 1.0 0.5 82.7 +++++
4 1/2MS 1.0 0.1 3.0 1.0 0 -
5 MS 0 0.01 1.0 1.0 100 +++++
6 MS 0.1 0 3.0 0.5 66.7 ++
7 MS 0.5 0.1 0 0.05 48.6 ++++
8 MS 1.0 0.03 0.5 0 46.1 ++++
9 B5 0 0.03 3.0 0.05 42.9 -
10 B5 0.1 0.1 1.0 0 42.9 +
11 B5 0.5 0 0.5 1.0 76.4 +
12 B5 1.0 0.01 0 0.5 0 -
13 N6 0 0.1 0.5 0.5 71.4 +
14 N6 0.1 0.03 0 1.0 92.9 +
15 N6 0.5 0.01 3.0 0 0 -
16 N6 1.0 0 1.0 0.05 14.3 +k1 40.6 53.6 39.4 35.4 22.3
k2 65.4 70.5 44.9 68.4 46.3
k3 40.6 51.9 66.2 59.9 55.2k4 44.7 15.1 40.7 27.4 67.3
R 24.8 55.4 26.8 41.0 45.8
　　注同表 1。
(图 1),是诱导欧亚旋覆花根产生愈伤组织的适宜组合 。 7
号和 8号组合诱导的愈伤组织生长较好 ,有芽生成 。 11号 、
13号和 14号组合在诱导初期都有愈伤组织产生 ,但愈伤组
织生长一段时间后逐渐褐化死亡 。 10号组合诱导出极少量
的愈伤组织 ,但出芽率很高 ,几乎所有的外植体都可以长出幼
芽 。 1号组合没有愈伤组织产生 ,但可以诱导芽和根的分化 。
15号和 12号组合没有愈伤组织产生 ,但可以诱导芽的分化 。
3　结论
愈伤组织的诱导是一个外植体 、培养基和培养条件诸因
素之间相互作用的复杂过程 [ 8 ] 。影响外植体愈伤组织诱导
的因素很多 ,其中 ,激素种类和组合 、培养基类型是最重要的
因素 。采用正交设计 ,可以用较少的试验次数得到较好的因
素配比 。本研究应用同一种试验设计 ,确定了影响欧亚旋覆
花根和叶片愈伤组织诱导的主次因素 ,筛选出了愈伤组织诱
导率高的最佳因素组合 ,同时获得了几种生长良好的初代愈
伤组织 。可为下一步筛选有效成分含量高的初代愈伤组织提
供材料 ,同时为欧亚旋覆花愈伤组织的继代培养提供依据。
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