全 文 ：正交试验法优选旋覆花提取工艺研究
吴健 高家荣 通讯作者 韩燕全
安徽中医学院第一附属医院 安徽合肥
摘 要 目的 优选旋覆花的提取工艺 。方法 用 测定旋复花中有效成分绿原酸 ,以干浸膏得率和绿原酸的含量为参数指
标 ,采用正交试验法优选最佳提取工艺 。结果 优选最佳提取工艺为 倍量 乙醇 ,回流提取 次 ,每次 。结论 优选出
的工艺稳定 、可行 ,可作为旋复花的提取工艺。
关键词 旋覆花 提取工艺 绿原酸 正交试验
旋覆花为菊科植物旋覆花
或欧亚旋覆花 的干燥头状花序川 ,我
国分布广泛 ,味苦 、辛 、咸 ,微温 。 《本草备要》云 “人肺 、
大肠经 ,消痰结坚痞 ,唾如胶漆 ,隐气不除 。”临床用于风
寒咳嗽 ,痰饮蓄结 ,胸隔痞闷 ,喘咯痰多 ,呕吐嗯气 ,心下
痞硬 。花质虽轻 ,却以降为能 ,既降肺气又降胃气 ,故前
人有 “诸花皆升 ,旋覆独降 ”之说 。本文根据旋覆花中有
效成分的理化性质 等 ,采用正交试验法 ,以绿原酸含量
和浸膏得率为指标 ,优选旋覆花的最佳提取工艺 。
见图 、图 。
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分忡
仪器和材料
仪 器
高效液相色谱仪 泵 , 检测器 ,
工作站 色谱柱
, 卜 一 型旋转蒸发器 上海亚荣生
化仪器厂 一型水浴锅 郑州长城科工贸有限公
司 石 型真空干燥箱 上海博迅实业有限公司
医疗设备厂 型电子天平 德国赛多利斯 电
热套 南通市长江光学仪器有限公司 型
超声仪 昆山市超声仪器有限公司 。
药材及试剂
旋覆花 安徽中医学院第一附属医院中药库提供 ,
批号 ,产自河南 ,经医院李立华主任药师鉴定
符合 《中国药典 》 版一部规定 绿原酸对照品
含量测定用 ,中国药品生物制品检定所提供 ,批号
一 。乙睛 色谱纯 ,美国 公司 ,其
他均为分析纯 ,水为重蒸水并经 卜 滤膜过滤 。
方法与结果
图 旋复花供试品 图谱
护 ,
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绿原酸的 测定
色谱条件 掩。 , 色谱柱
, 林 流动相为乙睛 一 磷酸水溶液 巧
柱温 ℃ 检测波长 流速 而 进
样量 闪 ,在该色谱条件下 ,样品中绿原酸峰与其他非
被测成分峰能够达到基线分离 ,对照品与样品色谱图
图 绿原酸对照品 图谱
对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品
,置 耐棕色量瓶中 ,加 甲醇溶解并稀释至刻
度 ,摇匀 ,即得 含绿原酸 以 岁而 , ℃以下保存 。
供试品溶液的制备 称取干浸膏 ,置
容量瓶中 ,精密加人 甲醇 耐 ,密塞 ,称定重量 ,
超声处理 而 ,放冷 ,再称定重量 ,用 甲醇补足
减失的重量 ,摇匀 ,滤过 ,续滤液用 卜 微孔滤膜滤
过 ,取续滤液作为供试品溶液 。
标准曲线的制备 吸取对照品溶液 以 岁耐
闪 、闪 、 闪 、 闪 、 闪 、 闪分别进样 ,按拟定色谱条
件测定 ,记录峰面积值 。以峰面积 为纵坐标 ,进样量
为横坐标进行线性回归 ,得回归方程为 二 科
一 , 二 。表明绿原酸在 一 此 与
峰面积呈良好线性关系 。
精密度试验 精密吸取绿原酸对照品溶液
DOI :10.16448/j.c jtcm.2013.02.001
168 C JT C M Feb .20 13 V ol.25 N o.2
膏中绿原酸进行含量测定 ,计算绿原酸的提取率 ,结果
见表 ,方差分析结果见表 、表 。绿原酸提取率二干
膏中的质量 旋复花饮片中的质量 。
正交试验 结果见表 ,方差分析结果见表 、 。
表 正交试验设计结果
因 素 评价指标
试验号 浸膏得粼 绿原酸含量· 一
肠
,` ,内」,弓且, `
,`
,`﹄,且
,二,`,且,山内`曰
,`﹃嘴︸且
一
悦凡执得率浸膏
甘,几,印`量绿原酸含
以 岁耐 闪 ,按照上述色谱条件 ,连续进样 次 ,测定
色谱峰面积 ,计算 为 ,表明仪器精密度良好 。
稳定性试验 精密吸取同一样品溶液分别在放置
、 、 、 、 、抖 后进样 ,测定其峰面积值 ,结果 为
,表明样品在 内具有良好的稳定性 。
重复性试验 精密称取样品 份 ,按 项下方
法制备供试品溶液 ,按上述色谱条件进样 闪 ,测定峰
面积 ,结果 为 ,表明方法重复性良好 。
样品含量的测定 取正交试验所得干浸膏制备的
份供试品溶液 ,各精密吸取 闪 ,分别进样分析 ,测定
峰面积 ,每份供试品溶液测定 次 ,取 次测得峰面积的
平均值 ,计算含量 。
加样回收率实验 取已测定含量的样品 绿原酸
含量为 岁 粉末 份 ,每份 左右 ,精密称定 ,
置于 而具塞锥形瓶中 ,分别加入浓度为 以
耐 的绿原酸对照品溶液 耐 间 移液管加样 ,按
, 项下 ”制备供试品溶液 ,进样 闪 ,按 “ 项下 ”
色谱条件测定 ,分别计算加样回收率 ,结果回收率为
, 为 。见表 。
表 加样回收率试验结果表
样品中含
绿原酸氢
添加
绿原酸量
测出绿原酸
总量 啤
回收率 平均
回收率
的
四科
的
的
的
翻
表 浸 得率方差分析
离差平方
田
自由度
切
叨
显著性
勺`,
赢﹄篡姗溯…
因素水平的选择
通过文献研究图及预实验选择乙醇浓度 、回
流时间 、提取次数 、溶剂倍数 为考察因素 ,
每个因素选择三个水平 ,用 正交表安排实验 ,
以绿原酸提取率及干浸膏得率为指标 ,对进行数据分
析 ,优选提取工艺 ,正交试验因素水平设计见表 。
表 旋硬花提取工艺正交试验因素水平
方差来源
误差
和
检验值
侧 】
注 。 二 · 、。, , 》二 · 。
表 绿原酸含 方差分析
离差平方
和
自由度
切
显著性
水平 乙醇浓度 提取时间 提取次数次
溶剂倍数
倍
方差来源
误差
检验值
】
以刃
注 。。叹, 二 · 凡力、` 二 。
浸膏得率的测定
取相当于 药材的提取液置于干燥至恒重并精
密称定的蒸发皿中 ,水浴蒸干 ,减压干燥至恒重 ,精密
称定 ,计算浸膏得率 ,结果见表 。
正交试验结果
按照 正交表安排试验 ,去旋复花药材 飞 ,
置于圆底烧瓶中 ,分别加人相应体积 、分数的乙醇与药
材混合 ,回流提取 ,滤过 ,合并滤液 ,减压浓缩成膏 ,干
燥 ,即得样品 。用 分别对正交试验所得的干浸
结合表 、表 及表 ,由以浸膏得率为考核指标结
果可知 ,各因素作用主次为 ,其中 因素
影响具有显著性意义 ,确定 为最佳 由绿原
酸提取量为考察指标结果可知 ,各因素作用主次为
,以 为佳 考虑到节能省时 、降
低消耗和尽量提取有效成分 ,最终确定最佳工艺为
,即 倍量 乙醇回流 ,提取 次 。
工艺验证 按最佳提取工艺 进行验
证试验 平行 次 ,提取液绿原酸平均含量为
岁 ,干浸膏得率 , 二 ,说明工
艺合理 ,提取较完全 ,稳定性好 。
,二,`门﹃勺砚」…, ,`飞且︼
中医药临床杂志 年第 卷第 期
杏苏止咳糖浆的提取工艺研究
张士洋 , 崔佳 , 程军 ` 叶云 , 张士勇
安徽省蚌埠市第三人民医院药学部
摘 要 目的 优选杏苏止咳糖浆的最佳提取工艺 。方法 采用正交试验法 , 以苦杏仁昔含量和浸膏得率为指标 ,对各个影响因
素进行考察 。结果 确定水提取最佳方案为 ,即加 倍量水 ,提取 次 ,每次提取 。结论 杏苏止咳糖浆最佳提取工
艺的确定为生产提供了科学依据 。
关键词 杏苏止咳糖浆 提取工艺 苦杏仁昔 正交试验
杏苏止咳糖浆来源于我院著名老中医在 《中药制剂
汇编 》杏苏合剂处方的基础上加减的经验方 ,由紫苏叶 、
苦杏仁 、浙贝母 、麻黄 、桔梗 、黄琴 味药组成 ,具祛风镇
咳 、平喘除痰的功效 ,主要用于咳嗽 、痰多的治疗 。该制
剂在我院临床应用已 多年 ,根据临床总结和病人反
馈 ,疗效确切 ,无明显毒副作用或不良反应 ,口感好 ,患者
易接受 。为了进一步控制质量 、保证疗效 ,为制剂注册奠
定良好的基础 ,按照 《中药新药研究技术要求 》 ,有必要
对其药材提取工艺进行优化试验 ,制定严格的质量标准 ,
并进行初步药效学试验 ,确保临床用药安全有效 。
术有限公司 挥发油测定器 ,中国医药 集团 上海化学
试剂公司经销 劝 高效液相色谱仪 ,
工作站 , 双通道紫外检测器 ,美国 公
司 咫 十万分之一电子天平 ,惠普公司 一 型石
英亚沸高纯水蒸馏器 双 刃智能数显真空干燥箱 ,
河南英峪予华仪器厂 。
材 料
药品与试荆
紫苏叶 、苦杏仁 、桔梗 、麻黄 、浙贝母 、黄琴中药材由
本院提供 ,经鉴定符合 《中国药典 》 年版一部相关药
材项下规定 。苦杏仁昔对照品 ,由中国药品生物制品检
定所提供 ,批号 一侧 水为重蒸馏水 自制 甲
醇为色谱纯 试验中所用其他试剂均为分析纯 。
仪器与设备
调温加热器 回 ,上海平环燃烧设备工程技
基金项目 安徽省蚌埠市科技计划项目 蚌科 〔 〕
方法与结果
水提工艺
水提取工艺选择对提取物收率影响较大的加水量
、提取时间 、提取次数 为考察因素 ,以苦杏仁
昔的含量和浸膏得率为考察指标 ,选定华 正交表进
行试验 。正交因素水平见表 。
表 水提工艺正交试验因素水平表
序号 加水倍量 提取时间 提取次数
注 加水量为总药材量的倍数 。
试验方法
按杏苏止咳糖浆原处方 倍的量 ,取苦杏仁 ,
桔梗 ,麻黄 ,浙贝母 ,黄芬 ,合并紫苏叶提
讨 论
在流动相选择上 ,文献 中大多是乙睛
磷酸 ,但考虑于出峰时间的问题 ,增大乙睛的
量 ,经多次预试验 ,当乙睛一 磷酸 时 ,出
峰时间在 而 左右 ,故均以此为流动相 。在样品中
的绿原酸含量测定时 ,曾用甲醇提取后用乙睛
磷酸 为流动相 ,直接进行高效液相测定 ,结果
分离效果不好 ,绿原酸色谱峰拖尾严重 。在查阅多篇
文献之后 ,重新用 甲醇提取后 ,结果发现分离效果
较好 ,拖尾现象明显得到改善 。
绿原酸对光较敏感 ,长时间光照易分解 ,因而实验
中绿原酸对照品与样品均应采用棕色量瓶放置 ,保存
℃以下 。稀释液不宜长期保存 ,最好现配现用 。
绿原酸高效液相色谱法测定波长有 、 、
等文献报道阁 。将绿原酸对照品溶液 、供试品
溶液分别注人高效液相色谱仪中 ,以二极管阵列检测
器进行测定 ,得到它们的色谱扫描图及光谱吸收曲线 。
绿原酸对照品 、旋覆花供试品所含绿原酸的光谱吸收
曲线相一致 ,均在 左右有最大吸收 ,故确定
为检测波长 ,供试品与绿原酸对照品在相应位
置上有相似的吸收峰且分离度良好 。
结 论
本实验对旋复花有效成分绿原酸的提取提供了最
佳工艺条件 ,结果表明 ,本工艺稳定 、切实可行 ,且所得
有效成分的提取率较高 。
参考文献
国家药典委员会 中华人民共和国药典 年版 ·一部 北京
中国医药科技出版社 ,
张馨予 ,王品星 ,单俊杰 旋覆花属植物化学成分及生物活性的研
究进展 国际药学研究杂志 , , 一
耿红梅 高效液相色谱法测定欧亚旋覆花中绿原酸的含量 时珍
国医国药 , 以 ,
易延透 ,蔡光先 ,申传璞 复方红景天颗粒提取工艺优选 中国实
验方剂学杂志 , ,
付轰 ,郭毅 ,张嫡群 ,等 欧亚旋覆花中多糖的苯酚一硫酸法测定
中草药 侧 ,
收稿日期 一 一 资任编校 叶歌