全 文 ：新疆农业科学 2014，51(2) :298 － 304
Xinjiang Agricultural Sciences
doi:10. 6048 / j. issn. 1001 － 4330. 2014. 02. 015
新疆紫草秋水仙素诱变及倍性鉴定研究
潘 颀，朱新帅，王 芳，班 娜，郑 慧
(新疆农业大学农学院，乌鲁木齐 830052)
摘 要:【目的】探索秋水仙素诱变及倍性鉴定的技术条件。【方法】采用不同浓度的秋水仙素分别对新疆紫
草幼苗茎尖和无菌苗茎尖进行点涂、振荡浸泡处理，采用形态学、气孔及染色体计数法对变异株进行鉴定。
【结果】对新疆紫草幼苗采用点涂法，秋水仙素浓度为 500 mg /L 时，幼苗的成活率和变异率分别为 67. 44%、
40. 59%。其变异株叶片宽度明显大于对照株，变异株的气孔长度和宽度显著大于对照株，变异株叶片下表皮
每个视野平均气孔数目(9 个)较对照株(19 个)明显减少;对新疆紫草无菌苗采用振荡浸泡法，秋水仙素浓度
为 700 mg /L、处理时间为 4 h时，成活率和变异率分别为 68. 18%、86. 67%;秋水仙素浓度在 200 ～ 500 mg /L
范围内，茎尖细胞染色体数目为 28 条的比例最高达 68. 4%;诱变后茎尖成活率还受培养基中激素组合的影
响;秋水仙素诱变后产生大量形态变异。【结论】影响染色体加倍效果的因素是秋水仙素浓度和处理时间。
关键词:新疆紫草;秋水仙素;诱变
中图分类号:S182 文献标识码:A 文章编号:1001 － 4330(2014)02 － 0298 － 07
收稿日期:2013 － 07 － 22
基金项目:国家自然科学基金项目(31060205)
作者简介:潘颀(1989 －) ，女，新疆阿克苏人，硕士研究生，(E － mail)1601263797@ qq. com
通讯作者:王芳(1962 －) ，女，甘肃人，教授，硕士生导师，研究方向为植物细胞工程，(E － mail)Wangfang1hao@ 126. com
Ｒesearch on Colchicine Induction and Ploidy Identification of
Arnebia euchroma(Ｒoyle)Johnst
PAN Qi，ZHU Xin － shuai，WANG Fang，BAN Na，ZHENG Hui
(College of Agronomy，Xinjiang Agricultural University，Urumqi，830052，China)
Abstract:【Objective】The project aims to explore the technology conditions on colchicine mutagenesis
and identification of ploidy.【Method】Arnebia Euchroma (Ｒoyle)Johnst seedlings and sterile seedlings stem
tips were dot － daubed and shocked with different concentrations of colchicine respectively，and the variation
strains were identified by morphology，porosity and chromosome counting methods. 【Ｒesult】Seedlings surviv-
al rate and variation rate reached 67. 44% and 40. 59% respectively when the dot － daubed concentration of
colchicine was 500 mg /L. The variant strains leaves width were significantly bigger than those of the normal
strains leaves width，and variant strains stomatal length and width were all significantly bigger than thase of
normal strains. The average 9 number stomata of variant strains leaves hypodermis under each view was signifi-
cantly fewer than that of control strains (19) ;The Arnebia Euchroma (Ｒoyle)Johnst sterile seedlings survival
rate and variation rate were 68. 18% and 86. 67% respectively when soaked with 700 mg /L colchicine and
shocked on shaker for 4h;Stem cells chromosome number was 28(Fig 4c)and the highest proportion of
68. 4% when colchicine concentration ranged in 200 mg /L ～ 500 mg /L;Stem tips survival rate was also af-
fected by the medium of hormone combination;Colchicine mutagenesis produced a large number of morpholog-
ical variation.【Conclusion】The factors affecting chromosome doubling effect are colchicine concentration and
2 期 潘颀等:新疆紫草秋水仙素诱变及倍性鉴定研究
treatment time.
Key words:Arnebia Euchroma (Ｒoyle)Johns;colchicine;mutagenesis
0 引 言
【研究意义】新疆紫草［Arnebia euchroma (Ｒoyle)Johnst］是我国传统药用紫草类植物中临床药效最
好的一种，其中的主要成分紫草素及其衍生物广泛用于医药、食品、化妆品等行业［1］。多倍体植物具有
器官巨大型、产量高、次生代谢产物含量高、抗逆性强等特点［2 ～ 3］，尤其对以根入药的药用植物而言特
别有利。【前人研究进展】目前，已在牛膝、当归、川贝母、菘蓝、板蓝根、黄岑、党参、丹参等等 13 个科、
20 多个属的植物中获得了四倍体、八倍体［4］。许多研究表明，秋水仙素是广泛应用的人工诱导多倍体
的一种诱变剂，并且植物及外植体种类不同，耐受秋水仙素的浓度、处理时间等有所不同［5 ～ 6］。【本研
究切入点】目前未见关于新疆紫草多倍体诱导的研究报道。研究以新疆紫草幼苗、组培苗为试材，以秋
水仙素为诱变源，开展新疆紫草多倍体诱变技术研究。【拟解决的关键问题】构建新疆紫草多倍体诱变
技术体系，以期创造出根粗、株壮、抗逆性强、活性成分含量高的新种质。
1 材料与方法
1. 1 材 料
新疆紫草种子由本课题组提供。
1. 2 方 法
1. 2. 1 制备无菌苗
种子剥壳后，在无菌条件下，先用 70%的乙醇消毒种子 1 min，再用 0. 1%的 HgCI2溶液消毒 5 min，
无菌水冲洗 3 次，最后在 1 000 mg /L青霉素钠溶液振荡 30 min。用灭菌吸水纸沾干种子表面水分，接
种于 1 /2MS培养基上，暗培养，待种子萌发后备用。
1. 2. 2 秋水仙素点涂新疆紫草幼苗生长点
将新疆紫草种子播于装有基质(基质的比例为珍珠岩∶蛭石∶土 = 1∶ 1∶ 1，高温灭菌)的花盆中，播深
1 ～ 1. 5 cm，基质含水量约 80%左右，花盆置于(25 ± 1)℃条件下光照培养。当子叶展平时，将蘸有秋水
仙素药液的脱脂棉球放在幼苗生长点上，于每天 09:00、21:00 用注射器各滴一次秋水仙素溶液，连续滴
5 d。每次滴后均覆膜保湿。秋水仙素浓度分别为 500、800、1 000 mg /L，每个处理 30 株，点涂蒸馏水为
对照。处理结束后定期喷施 1 /8MS 营养液，观察新生叶片的颜色、形态及生长状况。幼苗长至 3 叶 1
心时，进行气孔鉴定。
1. 2. 3 秋水仙素振荡浸泡新疆紫草无菌苗
在无菌条件下，将长至子叶展平的无菌苗分别置于含有 100、300、500、600、700、800、1 000、1 500
mg /L的秋水仙素溶液(含 2%二甲基亚砜)中，20℃黑暗条件下、振荡 2、4、6、8、12、24、48、72 h，蒸馏水
处理相应时间为对照，摇床转速为 90 ～ 100 r /min。然后用无菌水冲洗 3 次，吸水纸沾干后将茎尖接种
于 CI1(MS + ZT 0. 1 mg /L + IAA 0. 1 mg /L)和 1 号(MS +6 － BA 0. 5 mg /L + TDZ 0. 25 mg /L)培养基中，
子叶接种于 2 号(MS +6 － BA 0. 5 mg /L + TDZ 0. 5 mg /L)培养基中。每个处理接种 10 瓶，每瓶接种 5
个茎尖或 10 片子叶。
如无特殊说明，所有 MS培养基均附加蔗糖 30 g /L、肌醇 1 g /L，pH 5. 8，培养温度(23 ± 1)℃、光照
时间 14 h /d、光强 2 000 lx。
1. 2. 4 倍性鉴定
形态学鉴定:秋水仙素诱变后第 30 d，观察变异株与对照株的叶片颜色及形状，并选取倒数第 2 片
叶，测量其长、宽，计算平均值。
气孔鉴定:于晴天上午 10:00，取变异株和对照株倒数第二片叶，用镊子撕下叶片的下表皮，置于载
992
新疆农业科学 51 卷
玻片上，滴少许蒸馏水加盖玻片后在显微镜下观察。每株取 5 片叶，每片观察 5 个视野，每株随机测量
30 个气孔及保卫细胞的大小，每个视野统计气孔数目，取其平均值。
染色体计数:采用数码显微镜(DigilabII － C)及相应软件(Motic Digilabll)对变异株茎尖的染色体数
目进行计数。
1. 2. 5 指标计算
成活率(%)=［成活幼苗(茎尖)数接种总幼苗(茎尖)数］× 100;
变异率(%)=［变异幼苗(茎尖)数接种总幼苗(茎尖)数］× 100;
萌发率(%)=新叶长出的茎尖数接种总茎尖数 × 100;
染色体数目百分数(%)= a /n × 100，其中，a 为某一染色体数目的细胞个数，n 为中期分裂相细胞
总数。
2 结果与分析
2. 1 秋水仙素点涂对新疆紫草幼苗成活及变异的影响
采用不同浓度秋水仙素分别对新疆紫草幼苗生长点点涂。结果表明，当秋水仙素浓度为 500 mg /L
时，新疆紫草幼苗的成活率和变异率相对较高，分别为 67. 44%和 40. 59%。当秋水仙素浓度为 800 及
1 000 mg /L时，点涂的幼苗最终全部死亡。因此，秋水仙素点涂浓度为 500 mg /L对诱变后幼苗的进一
步生长较为适宜。图 1
图 1 不同浓度秋水仙素点涂对新疆紫草幼苗成活及变异的影响
Fig. 1 Effects of colchicine concentration on survival and variation in dot － daubed seedlings
2. 2 秋水仙素振荡浸泡对无菌苗茎尖成活及变异的影响
研究表明，当秋水仙素处理时间为 4 h时，随着秋水仙素浓度的增加，诱变后茎尖的成活率呈先上
升后下降趋势，在秋水仙素浓度为 700 mg /L时达峰值，为 68. 18%，其变异率为 86. 67%;当处理时间为
8 h时，随着秋水仙素浓度的增加，诱变后茎尖的成活率与变异率均呈上升趋势，秋水仙素浓度为 800
mg /L时，成活率最高为 68%，变异率为 94. 12%;当秋水仙素浓度为 700 mg /L，处理时间为 8 h时，诱变
后茎尖接种于 1 号培养基中，其成活率最高达 75%，且叶片深绿色，明显膨大，变异率为 66. 67%。表明
提高秋水仙素浓度及延长处理时间，有利于变异率的提高。此外，诱变后茎尖成活率还受培养基中激素
组合的影响。表 1
003
2 期 潘颀等:新疆紫草秋水仙素诱变及倍性鉴定研究
表 1 不同浓度秋水仙素浸泡不同时间对无菌苗茎尖成活及变异的影响
Table 1 Effects of colchicine concentration and soaking time on
survival and variation in no － vaccine seedlings
秋水仙素浓度
Colchicine concentration
(mg /L)
处理时间
Treating time
(h)
CI1 1 号
成活率
Survival rate
(%)
变异率
Variation rate
(%)
成活率
Survival rate
(%)
变异率
Variation rate
(%)
500
4 29. 17 78. 57 70. 00 57. 14
8 38. 10 50. 00 28. 57 100
12 40. 91 100 28. 57 100
600
4 61. 76 90. 48 － －
8 36. 96 70. 59 － －
12 20. 00 100 0 0
700
4 68. 18 86. 67 － －
6 43. 75 92. 86 － －
8 60. 00 88. 89 75. 00 66. 67
800
4 30. 00 77. 78 － －
6 69. 23 88. 89 － －
8 68. 00 94. 12 － －
2. 3 秋水仙素点涂幼苗生长点的形态学变异
对新疆紫草幼苗生长点进行秋水仙素点涂后，形态变异主要表现在新叶不萌发(图 2a)、新叶缺裂
(图 2b)、新叶变宽(图 2c)、新叶生长缓慢、匍匐(图 2d)、成熟叶片变宽(图 2e)、叶脉较粗(图 2f)、叶片
宽、叶片匍匐、生长较缓慢(图 2g)等。其中 4 株变异株(图 2g下)移栽到田间 3 个月后，长势较对照(图
2g上)缓慢，新生叶片持续保持较宽的水平，叶片仍呈匍匐状，可以认为，这 4 株为多倍体植株，但最终
还有待染色体制片后进行染色体数目的确认。图 2
图 2 秋水仙素点涂新疆紫草幼苗移栽后的变异状况
Fig. 2 Arnebia euchroma (Ｒoyle)Johnst seedlings variation condition after
colchicine dot － daubed and transplant
103
新疆农业科学 51 卷
对 4 株变异株及对照株叶片长、宽分别进行方差分析，结果表明，新疆紫草变异株和正常株叶片在
长度上没有显著差异，而在宽度上差异显著。
采用 Motic Digilabll软件的动态测量工具对气孔的长度和宽度分别进行测量，结果表明，变异株的
气孔长度和宽度均大于对照株，且具显著差异;变异株叶片下表皮每个视野平均气孔数目较对照株明显
减少。表明变异株具有明显的多倍体气孔特征。表 2
表 2 叶片气孔结构比较
Table 2 Euphylla stomata structure comparison
类别
Category
气孔长度
Stomatal length
(μm)
气孔宽度
Stomatal width
(μm)
气孔长 /气孔宽
Stomatal length /
Stomatal width
气孔密度(个 /视野)
Stomatal density (A /field of vision)
对照株
Normal seedling 18. 61 ± 1. 80 17. 33 ± 0. 74 1. 07 19
变异株
Variation seedling 35. 86 ± 13. 2 25. 7 ± 10. 24 1. 40 9
2. 4 秋水仙素诱变无菌苗的形态变异
秋水仙素诱变一定时间后出现多种形态变异株，如叶尖缺裂(图 3 a) ，叶片变宽、变厚(图 3 b) ，叶
片呈“十”字交叉型(图 3 c ) ，茎膨大，叶片发丝状(图 3d) ，生长迟缓(图 3 e) ，形成茎生叶(图 3 f )等，
与对照株(图 3g、3h)的形态有明显差异。图 3
图 3 新疆紫草变异株和对照株
Fig. 3 Arnebia Euchroma (Ｒoyle)Johnst variation and normal no － vaccine seedlings
2. 5 茎尖染色体数目鉴定
对诱变后的变异株茎尖进行染色体制片，结果显示，随着诱变浓度的增加，茎尖细胞染色体数目为
14 条(图 4a)的比例呈下降趋势，茎尖细胞染色体数目为 28 条(图 4b)的比例呈上升趋势，最高达
68. 4%。当秋水仙素诱变浓度为 200 ～ 500 mg /L，四倍体细胞数目大幅增加，表明此浓度范围有利于诱
变形成四倍体。表 3，图 4
表 3 秋水仙素诱变对变异株茎尖染色体数目的影响
Table 3 Effects of colchicine aberration on chromosome number in variation seedling stem tips
秋水仙素浓度
Colchicine concentration
(mg /L)
中期分裂相指数
Metaphase splitting index
(‰)
染色体数目百分率(%)
Chromosome number percentage
＜ 14 14 15 ～ 27 28 ＞ 28
100 136. 55 6. 62 30. 11 10. 06 53. 21 0
200 140. 02 2. 26 18. 94 8. 74 65. 67 4. 39
500 136. 54 1. 82 19. 53 7. 82 68. 40 2. 43
203
2 期 潘颀等:新疆紫草秋水仙素诱变及倍性鉴定研究
图 4 秋水仙素诱变后的变异株茎尖染色体数目
Fig. 4 Chromosome number of variation seedling stem tips after colchicine aberration
3 讨 论
由于茎尖生长点生长旺盛，且分化能力强，因而被许多研究者作为加倍的主要部位［5 ～ 6］。董娟
等［7］采用 0. 2%秋水仙素凝胶法，对大叶铁线莲幼苗顶芽进行加倍，诱导率可高达 80%。乔永刚等［8］
采用秋水仙素琼脂凝胶法对番茄幼苗生长点进行诱变，3 个普通番茄品种均获得了四倍体材料。陈绍
潘等［9］采用点涂生长点的方法，分别获得了甜菊和黄芪的多倍体植株。张海凤等［10］采用 0. 1%秋水仙
素处理生长点 12 h，变异率和四倍体率分别为 63. 3%和 36. 7%。童俊等［11］研究认为 0. 5%秋水仙素处
理紫薇幼苗 72 h的变异率最高，达 54. 17%。研究结果显示，随着对新疆紫草幼苗点涂秋水仙素浓度的
升高，幼苗成活率和变异率迅速下降。表明秋水仙素溶液的浓度越高，幼苗所受到的毒害作用越大。当
采用 500 mg /L秋水仙素溶液棉球点涂，成活率及变异率较高，分别为 40. 59%和 67. 44%，获得了大量
变异株。试验发现新疆紫草对秋水仙素溶液的毒害作用较敏感，因此，保证变异株的存活是获得多倍体
的前提和基础。
形态学鉴定常被多数研究者用于多倍体材料的鉴定与筛选［12］，该法简单直观且节省后期的工作
量。崔广荣等［13］诱导的蝴蝶兰多倍体苗在形态上与二倍体差异显著，普通二倍体植株叶片表面平滑，
叶片较薄、松散，根相对细长且数量较多。郑宝强等［14］发现与春石斛二倍体相比，四倍体植株顶芽和
侧芽膨大成球状，假鳞茎变粗，下层叶片多呈畸形，叶宽、短而厚，叶色浓绿，叶表面粗糙，叶脆易折断。
研究通过秋水仙素诱变，产生了大量形态变异，如茎叶颜色深绿，叶片变大，部分叶畸形，新生真叶短厚，
且多数呈“十”字交叉型，幼苗生长速度较慢等，这些与前人的研究结果一致。
目前根据单位面积的气孔数目、气孔的长度和宽度鉴定多倍体已在许多植物中采用，该法简便易
行，对植株损伤不大，有一定的准确性。马国斌等［15］发现四倍体叶片气孔长度明显长于二倍体，保卫
细胞内叶绿体数目约为二倍体的 2 倍，认为气孔大小及气孔保卫细胞内叶绿体数目可以作为四倍体植
株早期鉴定的指标。研究发现新疆紫草变异株的叶片下表皮气孔长度和宽度明显大于对照株，而气孔
密度明显小于对照，这与相关报道［16］一致。研究有气孔大小不均一的现象，可能是由于新疆紫草变异
植株加倍情况不同，其叶片的气孔结构发生变化的情况也不同。
4 结 论
秋水仙素点涂适宜浓度为 500 mg /L。采用秋水仙素不同浓度、不同时间振荡浸泡，结果表明，秋水
仙素浓度是影响诱变后茎尖成活的主要因子，其次是处理时间;提高秋水仙素浓度及延长处理时间，有
利于变异率的提高;诱变后茎尖成活率还受培养基中激素组合的影响;通过对新疆紫草进行秋水仙素诱
变可产生大量形态变异，如叶片变宽、变厚、夜色深绿、生长缓慢等;变异株较对照株气孔大，气孔密度
小，气孔变长变宽;变异株茎尖细胞染色体数目以 28 条居多，占 68. 4%。
303
新疆农业科学 51 卷
参考文献(Ｒeferences)
［1］肖洁，杨映根，郭奕明，等 . 新疆紫草组织培养的研究进展［J］. 西北植物学报，2004，24(8) :1 560 － 1 564.
XIAO Jie，YANG Ying － gen，GUO Yi － ming，et al. (2004). Advances in tissue culture of Arnebia euchroma［J］. Acta Bot. Boreal. － Oc-
cident. Sin. ，24 (8) :1，560 － 1，564. (in Chinese)
［2］唐宁，高山林 . 白术同源四倍体株系的鉴定和有效成分的含量测定［J］. 药物生物技术，2006，13 (2) :102 － 106.
TANG Ning，GAO Shang － lin. (2006). Ｒhizoma Atractylodis Macrocephalae autotetraploid strains identification and content determination of
the effective components［J］. Pharmaceutical Biotechnology，13 (2) :102 － 106. (in Chinese)
［3］张荣涛，张秀省，聂莉莉，等 . 秋水仙碱对长春花突变细胞生长速率和长春质碱积累的影响［J］. 植物生理学通讯，2005，41(6):728 －730.
ZhANG Ｒong － tao，ZHANG Xiu － sheng，NIE Li － li，et al. (2005). Effect of Colchicine on Growth Ｒate and Accumulation of Catharan-
thine in Mutant Cells of Catharanthus roseus L.［J］. Plant Physiology Communications，41(6) :728 － 730. (in Chinese)
［4］武振华，牛炳韬，王新宇 . 药用植物染色体加倍的研究进展［J］. 西北植物学报，2005，25(12) :2 569 － 2 574.
WU Zheng － hua，NIU Bing － tao，WANG Xin － yu. (2005). Ｒesearch Progresses in Chromosome Doublings of Medicinal Plants［J］. Acta
Bot Boreal － Occident Sin，25(12) :2，569 － 2，574. (in Chinese)
［5］李文文，谢丽琼，王程，等 . 荒漠肉苁蓉多倍体的诱导与鉴定［J］. 新疆农业科学，2008，45(2) :337 － 341.
LI Wen － wen，XIE Li － qiong，WANG Cheng，et al. (2008). Polyploid Induction and Identif ication of Cistanche Deserticola Y. C. Ma［J］
. Xinjiang Agricultural Sciences，45(2) :337 － 341. (in Chinese)
［6］赵晓明，乔永刚，宋芸，等 . 秋水仙素诱导鲁梅克斯四倍体的研究［J］. 中国草地学报，2007，29(3) :109 － 111.
ZHAO Xiao － ming，QIAO Yong － gang，SONG Yun，et al. 2007). Tetraploid Induction of Ｒumex with Colchicine［J］. Chinese Journal of
Grassland，29(3) :109 － 111. (in Chinese)
［7］董娟，杨娜，吴玉香，等 . 大叶铁线莲四倍体的诱导及初步鉴定［J］. 核农学报，2012，26(3) :461 － 465.
DONG Juan，YANG Na，WU Yu － xiang，et al. (2012). Tetraploid Induction and Cytology Identification of Clematis heracleifolia［J］. Jour-
nal of Nuclear Agricultural Sciences，26(3) :461 － 465. (in Chinese)
［8］乔永刚，宋秀英 . 秋水仙素诱导普通番茄多倍体的研究［J］. 山西农业大学学报(自然科学版) ，2008，28(2) :139 － 143.
QIAO Yong － gang，SONG Xiu － ying. (2008). Polyploid Induction of Lycopersicum Esculentum Mill. Var. Vulgare with Colchicines［J］.
Journal of Shanxi Agricultural University (Natural Science Ed. ) ，28(2) :139 － 143. (in Chinese)
［9］陈绍潘，陈绍裘，杨英华，等 . 秋水仙碱诱变甜菊多倍体的研究［J］. 武汉植物学研究，1995，13(1) :1 － 7，97.
CHEN Shao － pan，CHEN Shao － qiu，YANG Ying － hua，et al. I1995). Colchicines Induced Polyploid Plants and Identification in Stevia re-
baudiana［J］. Journal of Wuhan Botanical Ｒesearch，13(1) :1 － 7，97. (in Chinese)
［10］张海凤 . 杜仲多倍体诱导研究［D］. 保定:河北农业大学，2008.
ZhANG Hai － feng. (2008). Study on Polyploid Induction of Eucommia ulmoides olive［D］. Master Dissertation. Agricultural University of
Hebei，Baoding. (in Chinese)
［11］童俊，陈法志 . 秋水仙素诱导紫珠多倍体育种研究［J］. 湖北农业科学，2012，51(10) :2 049 － 2 053.
TONG Jun，CHEN Fa － zhi. (2012). Study on Colchicines Induced Polyploid Breeding of Callicarpa bodinieri［J］. Hubei Agricultural Sci-
ences，51(10) :2，049 － 2，053. (in Chinese)
［12］陶抵辉，李小红，王利群，等 . 植物染色体倍性鉴定方法研究进展［J］. 生命科学研究，2009，13(5) :453 － 458.
TAO Di － hui，LI Xiao － hong，WANG Li － qun，et al. (2009). Progresses on Determination of Cell Chromosome Ploidy Level of Plants［J］
. Life Science Ｒesearch，13(5) :453 － 458. (in Chinese)
［13］崔广荣，张子学，张从宇，等 . 秋水仙素对蝴蝶兰试管苗叶切片胚状体发生期的化学诱变［J］. 中国农业科学，2009，42(9):3 368 －3 373.
CUI Guang － rong，ZHANG Zi － xue，ZHANG Cong － yu，et al. (2009). Colchicine Chemical Induction During Somatic Embryogensis from
Leaf Segments of Phalaenopsis Test Tube Plantlets［J］. Scientia Agricultura Sinica，42(9) :3，368 － 3，373. (in Chinese)
［14］郑宝强，张莹，王雁，等 . 春石斛的多倍体诱导［J］. 园艺学报，2009，36(9) :1 381 － 1 384.
ZHENG Bao － qiang，ZHANG Ying，WANG Yan，et al. (2009). Polyploid Induction of Nobile － type Dendrobium［J］. Acta Horticulturae
Sinica，36(9) :1，381 － 1，384. (in Chinese)
［15］马国斌，王鸣，郑学勤 . 西瓜体细胞无性系变异初探［J］. 上海农业学报，2003，19(3) :9 － 12.
MA Guo － bin，WANG Ming，ZHENG Xue － qin. (2003). Preliminary Study on Watermelon Somaclonal Variation［J］. Acta Agriculturae
Shanghai，19(3) :9 － 12. (in Chinese)
［16］张蜀敏，王晓军，郝秀英，等 . 新疆雪莲多倍体的诱导初探［J］. 西北农业学报，2008，17(1) :216 － 220.
ZHANG Shu － min，WANG Xiao － jun，HAO Xiu － ying，et al. I2008). Polyploid Induction of Saussurea involucrata Kar. et Kir. ［J］. Ac-
ta Agriculturae Boreali － Occidentalis Sinica，17(1) :216 － 220. (in Chinese)
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