全 文 ：第 23卷第 2期 烟台大学学报(自然科学与工程版) Vol.23 No.2
2010年 4月 JournalofYantaiUniversity(NaturalScienceandEngineeringEdition) Apr.2010
　　文章编号:1004-8820(2010)02-0116-07
　　收稿日期:2008-11-26
　　基金项目:国家 863资助项目(2002AA2Z4061).
　　作者简介:左明(1984-),女 ,内蒙古通辽人 ,硕士 ,研究方向:海洋生化工程;联系人:王长海(chwang2001@sina.com),
教授 ,博士生导师.
微量元素对转植酸酶基因小球藻生长的影响
左　明 1 , 王长海1, 2
(1.大连理工大学 生命科学与工程系 ,辽宁 大连 116024;2.烟台大学 海洋学院 , 山东 烟台 264005)
摘　要:研究了锌 、钼 、钴 、铜 、锰 、铁 6种微量元素对转植酸酶基因小球藻生长的影响.通
过单因子实验确定了此 6种微量元素促进转基因小球藻生长及胞内植酸酶表达的浓度范
围 ,通过正交实验确定了锌 、钼 、钴 、铜 、锰促进转植酸酶基因小球藻生长的最佳浓度 ,获转
植酸酶基因小球藻最大生物量产量的浓度依次为 0.10、0.015、0.01、0.015、0.8 μmol/L;
获转植酸酶基因小球藻最高植酸酶比活值的浓度依次为 0.10、0、0.04、0.015、0.4 μmol/
L.利用微量元素优化配方培养转植酸酶基因小球藻 ,可使胞内植酸酶比活值显著提高 ,
但微藻生物量产量有所下降.
关键词:微藻;转基因小球藻;植酸酶;微量元素;生长
中图分类号:Q949.2　　　　文献标识码:A
　　小球藻为绿藻门 (Chlorophyta)小球藻属
(Chlorela)的一种单细胞绿藻 ,其细胞结构相对
简单且富含营养[ 1-2] ,并可生产一些需要翻译后
修饰的复杂蛋白[ 3-4] .植酸酶能将植酸降解为肌
醇和无机磷酸 ,作为饲料添加剂 ,可提高植物饲料
中磷的利用率 ,减少动物粪便中磷排泄量 ,还具有
降低植酸的抗营养作用[ 5-6] ;如果将转植酸酶基
因小球藻直接作为饲料添加剂 ,不仅可以省去了
复杂的植酸酶提纯分离工艺 ,而且在补充植酸酶
同时 ,还能为动物提供一定的营养成分 ,可谓一举
两得 ,具有很好的开发前景.
关于大量元素对小球藻生长的影响 ,前人已
有较多报道 [ 7-8] ,而微量元素在海水单胞藻的生
长过程中也是不可缺少的.由于有些微量元素是
细胞本身组成必需的元素 ,同时是酶活性基团的
组成部分[ 9] ,所以 ,在海水单胞藻培养过程中 ,需
要使用微量元素.微量元素对海洋单胞藻的生长
影响 ,目前国内报道较少 [ 10] ,本研究通过考察培
养液中 Mn2+ , Cu2+ , Zn2 +, Mo6+, Co2+ , Fe2+对转
植酸酶基因小球藻生长的影响 ,寻求转植酸酶基
因小球藻生长及胞内植酸酶表达的最佳微量元素
浓度 ,以期为转植酸酶基因小球藻的大规模培养
奠定基础.
1　材料与方法
1.1　实验材料
小球藻(Chlorelasp.MACC/C95)购自中国
海洋大学 ,并经本实验室分离纯化除菌;转基因小
球藻:本实验室获得 [ 6] .
硫酸锌 (ZnSO4· 4H2O)、氯化锰 (MnCl2·
4H2O)、硫 酸 铜 (CuSO4 · 5H2O)、钼 酸 钠
(Na2MoO4· 2H2O)、氯化钴(CoCl2· 2H2O)、乙二
胺四乙酸钠(Na2EDTA)、柠檬酸铁(FeC6H5O7 ·
5H2O)、碳酸氢钠 、磷酸二氢钾 、硝酸铵 ,所用试剂
均为分析纯.
1.2　培养条件
海水处理:取自大连水产大学近海 ,沉淀后先
　第 2期 左　明 ,等:微量元素对转植酸酶基因小球藻生长的影响
经脱脂棉过滤 ,再经 0.22 μm微孔膜过滤.
培养方法:将纯种接种于 50 mL三角瓶置于
ZPG-280智能光照培养箱中培养 ,温度控制在 23
℃,光照强度为 2500lx,光暗周期为 12h/12h,不
通气培养 ,每天定时摇动 3次.实验中藻种的接种
量均为 10%,并保证藻种接种密度相同.培养母
液为转植酸酶基因小球藻优化培养基 [ 11] , NaH-
CO3 0.3g/L, NH4NO3 0.5g/L, KH2PO4 0.08g/L,
VB1 0.6mg/L与 VB12 2.0μg/L,微量元素根据实
验取不同浓度梯度.
1.3　分析方法
小球藻细胞生物量的测定:在一定范围内 ,藻
细胞干重与波长 640 nm下的光密度(A640)值呈
线性关系 ,由标准曲线计算细胞干重.自养藻细胞
干重与 A640值回归曲线为 y=0.4291x+0.0398,
R2 =0.9955 , y为单位体积培养液中的藻细胞干
重(g/L), x为 A640值 [ 11] .
微藻细胞破碎:采用超声波法破碎 [ 11] ,取 30
mL藻液 , 5000r/min离心 10 min, 将藻泥重悬于
5 mLpH 5.5 乙酸 -乙酸钠缓冲液中 , 加 1.5
mmol/LPMSF在冰浴中超声破碎 8 min(功率 150
W,占空比 50%),经 5000 r/min离心 10 min,留
上清.
蛋白质的测定采用考马斯亮蓝法 [ 11-12] ,经回
归分析 ,可得蛋白质标准曲线为 y=12.712x+
0.001, R2 =0.9985, y为 A595值 , x为蛋白量 (g/
L).
植酸酶活性测定采用钼蓝法 [ 11-13] ,经回归分
析得磷标准曲线:y= 0.0187x+0.0068, R2 =
0.9998, y为 A660值 , x为磷浓度(μg/mL);酶活 =
A660· N
31kT , N为样品的稀释倍数;31为磷的原子量;
k为磷标准曲线斜率;T为酶作用时间.比活 =酶
活 /蛋白量(U/mg).植酸酶活性单位定义:37 ℃、
pH5.5条件下每分钟水解植酸释放 1 nmol无机
磷所需的酶量为 1个酶活单位(U).
1.4　单因子实验
培养用水为转植酸酶基因小球藻优化培养基
母液加一定量自配混合微量元素实验液 ,即根据
不同单因子试验改变所研究的微量元素浓度 ,其
他微量元素按照转植酸酶基因小球藻优化培养基
原配方添加.
1.5　微量元素正交实验
根据单因子实验结果 , 选取 Mn2+ , Cu2 +,
Zn2+, Mo6+, Co2+微量元素 ,采用 L16(45)正交表 ,
考察 5种微量元素对转植酸酶基因小球藻生长及
胞内植酸酶比活值的影响.
2　结果与讨论
2.1　单因子实验
在单因子实验中 ,分别考察微量元素 Mn2 +,
Cu2 +, Zn2+, Mo6+, Co2+ , Fe2+对转植酸酶基因小
球藻生长的影响 ,各微量元素浓度水平见表 1,结
果表明 ,各微量元素对转植酸酶基因小球藻生物
量及胞内植酸酶活性均有不同程度的影响.
表 1　单因子实验因素水平表
Tab.1　Factorslevelsofthesinglefactortest　μmol· L-1
No. Zn2+ Mo6+ Co2+ Cu2+ Mn2+ Fe2+
1 0 0 0 0 0 0
2 0.02 0.02 0.02 0.02 0.2 10
3 0.10 0.06 0.12 0.08 1.0 20
4 0.20 0.12 0.40 0.16 2.0 40
5 0.30 0.20 1.0 0.20 3.0 80
2.1.1　Zn2+对转基因小球藻生长的影响　当培
养液中 Zn2+浓度为 0.02 μmol/L时 ,转植酸酶基
因小球藻生物量达到最大值 ,为 0.5425g/L,而随
着 Zn2+浓度的增加 ,藻细胞生物量产量呈现下降
趋势(图 1),说明高浓度的 Zn2+对小球藻的生长
存在抑制作用 ,这与阎海等的实验结果[ 14]是一致
的;当 Zn2 +浓度为 0.2 μmol/L时转植酸酶基因
小球藻胞内植酸酶比活值达到最大 ,为 640.64
U/mg(图 2),且在实验范围内 Zn2+对转基因小球
藻生长的影响是显著的(P<0.05).
2.1.2　Mo6 +对转基因小球藻生长的影响　当培
养液中 Mo6+浓度从 0μmol/L增加到 0.2μmol/L
时 ,转植酸酶基因小球藻生物量产量仅从 0.4980
g/L增加到 0.5240g/L(图 3);可见 ,在设计的浓
度内 Mo6+对转植酸酶基因海水小球藻的生长没
有显著影响 (P>0.05).随着 Mo6 +浓度的增加 ,
转植酸酶基因海水小球藻胞内植酸酶比活值呈现
缓慢下降的趋势 (图 4),且在实验范围内 Mo6+
对细胞内植酸酶比活值不产生显著的影响(P>
0.05).
117
烟台大学学报(自然科学与工程版) 第 23卷　
图 1　Zn2+对转基因小球藻生长的影响
Fig.1　EfectofZn2+onthegrowthofC.sp
图 2　Zn2+对转基因小球藻植酸酶含量影响
Fig.2　EfectofZn2+onphytasecontentofC.sp
图 3　Mo6+对转基因小球藻生长的影响
Fig.3　EfectofMo6+onthegrowthofC.sp
图 4　Mo6+对转基因小球藻植酸酶含量影响
Fig.4　EfectofMo6+onphytasecontentofC.sp
2.1.3　Co2+对转基因小球藻生长的影响　由图
5可以看出 , 当培养液中 Co2 +浓度为 0.02
μmol/L时 ,转植酸酶基因小球藻生物量产量达到
最大 ,说明较低浓度的 Co2+对转植酸酶基因小球
藻的生长有促进作用 ,当 Co2 +浓度在 0.02 ～ 0.40
μmol/L范围内 ,转植酸酶基因小球藻均生长较
好 ,当 Co2+浓度继续增大至 1.0 μmol/L时 ,藻细
胞终密度有所下降 ,说明 Co2+只有在较高浓度下
才对藻细胞的生长具有毒性作用.由图 6可以看
出 ,随着培养液中 Co2+浓度的增大 ,转植酸酶基
因小球藻胞内植酸酶比活值呈现先升高后下降的
趋势(图 6),说明高浓度的 Co2+对胞内植酸酶的
表达有着明显的抑制作用.
图 5　Co2+对转基因小球藻生长的影响
Fig.5　EfectofCo2+onthegrowthofC.sp
图 6　Co2+对转基因小球藻植酸酶含量影响
Fig.6　EfectofCo2+onphytasecontentofC.sp
2.1.4　Cu2+对转基因小球藻生长的影响　由图
7、8可以看出 ,在实验范围内 ,不同浓度 Cu2+作用
下的转植酸酶基因小球藻生物量产量并无明显差
异 ,在实验范围内 Cu2+对转植酸酶基因小球藻生
长的影响是不显著的(P>0.05);当 Cu2+浓度达
到 0.02 μmol/L时 ,转基因小球藻胞内植酸酶比
118
　第 2期 左　明 ,等:微量元素对转植酸酶基因小球藻生长的影响
活值达到最大值 ,且实验范围内 Cu2+对转植酸酶
基因小球藻胞内植酸酶比活值的影响也是不显著
的(P>0.05).据资料报道 , Cu主要抑制藻类的
光合作用 ,影响原生质膜的渗透性 ,使 K+从细胞
内丧失 [ 15] ,从本实验结果可以看出 ,较高浓度的
Cu2 +对转基因小球藻的藻细胞生物量产量和植
酸酶活性有一定的抑制作用 ,但此作用并不明显.
图 7　Cu2+对转基因小球藻生长的影响
Fig.7　EffectofCu2+onthegrowthofC.sp
图 8　Cu2+对转基因小球藻植酸酶含量影响
Fig.8　EffectofCu2+onphytasecontentofC.sp
2.1.5　Mn2 +对转基因小球藻生长的影响　锰是
植物光合作用的重要结构成分 ,与光合作用密切
相关.有试验表明 ,缺锰可引起叶绿体膜结构的破
坏 ,使光合放氧受到抑制 [ 16] .由图 9、 10可以看
出 ,随着培养液中 Mn2+浓度的升高 ,转植酸酶基
因小球藻生物量呈现增加的趋势 ,胞内植酸酶比
活值呈现先增大后减小的趋势 ,当 Mn2+浓度为
1.0 μmol/L时 ,胞内植酸酶比活值达到最大值 ,
为 638.63 U/mg,在实验范围内 Mn2+对转植酸酶
基因小球藻生长的影响是不显著的(P>0.05).
2.1.6　Fe2 +对转基因小球藻生长的影响　由图
11、12可以看出 ,不同浓度的 Fe2+对转植酸酶基
因小球藻生长影响很大.在实验范围内 ,随着培养
液中 Fe2+浓度的增加 ,藻细胞生物量有增大的趋
势 ,说明 Fe2 +对转植酸酶基因小球藻的生长起促
进作用;当 Fe2 +浓度为 10μmol/L时 ,胞内植酸酶
比活值达到最大 ,此后 Fe2+浓度继续增大 ,比活
值有所降低 ,说明高浓度的 Fe2+对胞内植酸酶的
表达有抑制作用 ,在实验浓度范围内 , Fe2+对转植
酸酶基因小球藻生长的影响是显著的 (P<
0.05).
图 9　Mn2+对转基因小球藻生长的影响
Fig.9　EfectofMn2+onthegrowthofC.sp
图 10　Mn2+对转基因小球藻植酸酶含量影响
Fig.10　EfectofMn2+onphytasecontentofC.sp
图 11　Fe2+对转基因小球藻生长的影响
Fig.11　EfectofFe2+onthegrowthofC.sp
119
烟台大学学报(自然科学与工程版) 第 23卷　
图 12　Fe2+对转基因小球藻植酸酶含量影响
Fig.12　EffectofFe2+onphytasecontentofC.sp
表 2　微量元素正交实验因子水平表
Tab.2　Factorslevelsoftheorthogonaltestofmicroelement
μmol· L-1
元素 水平
1 2 3 4
Zn2+ 0.10 0.15 0.20 0.25
Mo6+ 0 0.008 0.015 0.020
Co2+ 0.01 0.02 0.04 0.06
Cu2+ 0 0.008 0.015 0.020
Mn2+ 0.2 0.4 0.8 1.5
2.2　5种微量元素正交实验
将 Zn2+, Mo6+ , Co2+ , Cu2+, Mn2+5种微量元
素分别选取 4个水平 ,设计 L16(54)正交实验(表
2).实验结果见表 3.
表 3　正交实验结果和直观分析计算表
Tab.3　ResultsoforthogonaltestofmicroelementforC.spcultureanddirectanalysis
实验号 ZnSO4 Na2MoO4 CoCl2 CuSO4 MnCl2 干重 /(g· L-1)比活值 /(U· mg-1)
T1 1(0.10) 1(0) 1(0.01) 1(0) 1(0.2) 0.4256 729.91
T2 1 2(0.008) 2(0.02) 2(0.008) 2(0.4) 0.4170 958.55
T
3 1 3(0.015) 3(0.04) 3(0.015) 3(0.8) 0.4474 1131.26
T
4 1 4(0.020) 4(0.06) 4(0.020) 4(1.5) 0.4183 579.68
T
5 2(0.15) 1 2 3 4 0.4153 964.11
T6 2 2 1 4 3 0.4165 67915
T7 2 3 4 1 2 0.3994 880.67
T8 2 4 3 2 1 0.4037 865.73
T9 3(0.2) 1 3 4 2 0.3938 898.42
T10 3 2 4 3 1 0.4268 779.95
T11 3 3 1 2 4 0.4247 452.87
T12 3 4 2 1 3 0.4097 860.16
T13 4(0.25) 1 4 2 3 0.4196 775.31
T14 4 2 3 1 4 0.4114 637.10
T15 4 3 2 4 1 0.4148 720.88
T16 4 4 1 3 2 0.4140 762.40
　　干重 /(g· L)
K1 0.427 0.414 0.420 0.412 0.418
K2 0.409 0.418 0.414 0.416 0.406
K3 0.414 0.422 0.414 0.426 0.423
K4 0.415 0.411 0.416 0.411 0.417
R 0.018 0.011 0.006 0.015 0.017
120
　第 2期 左　明 ,等:微量元素对转植酸酶基因小球藻生长的影响
续表 3
实验号 ZnSO4 Na2MoO4 CoCl2 CuSO4 MnCl2 干重 /(g· L-1)比活值 /(U· mg-1)
　　　　　比活值 /(U· mg-1)
K1 849.850 841.938 656.082 776.960 774.118
K2 847.415 763.687 875.925 763.115 875.010
K3 747.850 796.420 883.127 909.430 861.470
K4 723.923 766.992 753.903 719.533 658.440
R 125.927 78.251 227.045 189.897 216.570
　　结果表明 , Mn2+ , Cu2+ , Zn2 +, Mo6 +, Co2+对转
植酸酶基因小球藻生长有不同程度的影响 ,它们
对转植酸酶基因小球藻生物量产量影响作用的大
小顺序为:Zn2+ >Mn2 + >Cu2+ >Mo6+ >Co2 +;对
转植酸酶基因小球藻胞内植酸酶比活值影响作用
大小顺序为:Co2+ >Mn2 + >Cu2+ >Zn2+ >Mo6 +.
获得转植酸酶基因小球藻最大生物量的微量元素
的最佳浓度分别为:Zn2+ 0.10 μmol/L, Mo6+
0.015 μmol/L, Co2 + 0.01 μmol/L, Cu2 + 0.015
μmol/L, Mn2+ 0.8μmol/L;获得转植酸酶基因小
球藻最高植酸酶比活值的微量元素的最佳浓度分
别为:Zn2+ 0.10 μmol/L, Mo6+ 0 μmol/L, Co2+
0.04 μmol/L , Cu2+ 0.015 μmol/L, Mn2+ 0.4
μmol/L.
2.3　验证结果
为验证优化微量元素配方正确性 ,将所获得
最大植酸酶比活值的优化微量元素配方与原培养
液配方用于转植酸酶基因小球藻的培养 ,结果见
表 4.
表 4　不同培养基对转植酸酶基因小球藻生长的影响
Tab.4　EffectofdiferentmediumonthegrowthofC.sp
干重 /(g· L-1) 比活值 /(U· mg-1)
原配方 0.4953 703.66
优化配方 0.4374 1231.63
由表 4得出 ,利用优化的微量元素配方培养
转植酸酶基因小球藻 ,胞内植酸酶比活值有显著
提高 ,但藻细胞生物量却有所降低 ,因为本研究目
的旨在提高转植酸酶基因小球藻胞内植酸酶表达
量 ,所以此微量元素优化配方是可行的.
3　结　论
单因子实验结果表明 , Mn2+ , Cu2+ , Zn2 +,
Mo6 +, Co2+ , Fe2+对转植酸酶基因小球藻的生长
有不同程度的影响 ,较高浓度的 Zn2+抑制转植酸
酶基因小球藻的生长 ,但对胞内植酸酶的表达有
促进作用;Mn2+ , Cu2+ , Mo6+对转植酸酶基因小球
藻的生长影响并不显著;Co2+对转基因小球藻胞
内植酸酶比活值影响较大 ,高浓度的 Co2 +对藻细
胞内植酸酶表达具有明显的抑制作用;Fe2+对转
基因小球藻的生长有显著影响 ,高浓度的 Fe2+仍
能促进转基因小球藻的生长 ,但胞内植酸酶表达
有所降低.
正交实验结果表明 , Mn2+ , Cu2+ , Zn2+ , Mo6 +,
Co2+对转植酸酶基因小球藻生物量产量影响作用
的大小顺序为:Zn2 + >Mn2+ >Cu2+ >Mo6 + >
Co2+;对转植酸酶基因小球藻胞内植酸酶比活值
影响作用大小顺序为:Co2+ >Mn2+ >Cu2+ >Zn2+
>Mo6+.获最大植酸酶比活值的微量元素配方与
常用的 f/2配方[ 17]比较得出 , Zn2+浓度基本相
同 , Mn2+, Mo6+, Co2+ , Cu2+浓度略低于 f/2配方 ,
用此优化微量元素营养液配方培养转植酸酶基因
小球藻使得胞内植酸酶比活值有较大提高 ,为以
后的规模化生产转植酸酶基因小球藻提供了理论
基础.
参考文献:
[ 1] 　王长海.海洋生化工程概论 [ M] .北京:化学工业
出版社 , 2004:55.
[ 2] 　陈峰 , 姜悦.微藻生物技术 [ M] .北京:中国轻工业
出版社 , 1999:55-91.
[ 3] 　KimDH, KimYT, ChoJJ, etal.Stableintegration
offloundergrowthhormonegeneintransformedmicroalga
Chlorelaellipsoidea[ J] .MarineBiotechnology, 2002, 4(1):
63-73.
121
烟台大学学报(自然科学与工程版) 第 23卷　
[ 4] 　王义琴 , 陈颖 ,白琴华 , 等.以小球藻为载体生产兔
防御素的研究 [ J] .高技术通讯 , 2001(9):1-5.
[ 5] 　ChengZL, HardyRW.Effectofmicrobialphytase
onapparentnutrientdigestibilityofbarley, canolameal,
wheatandwheatmiddlingsmeasuredinvivousingrainbow
trout[ J] .AquacultureNutrition, 2002, 8(4):271-277.
[ 6] 　王逸云.小球藻外源基因转化系统的建立及其表达
植酸酶的研究 [ D] .大连:大连理工大学 , 2005.
[ 7] 　王逸云 , 王长海.无菌条件下的小球藻培养条件优
化 [ J] .烟台大学学报:自然科学与工程版 , 2006, 19(2):
125-129.
[ 8] 　于贞 , 王长海.小球藻培养条件的研究 [ J] .烟台大
学学报:自然科学与工程版 , 2005, 18(3):206-211.
[ 9] 　范代娣.细胞培养与蛋白质工程 [ M] .北京:化学工
业出版社 , 2000:108.
[ 10] 　袁有宪 , 曲克明 , 辛福言.海水单胞藻培养液中微
量元素的最佳浓度 [ J] .中国水产科学 , 1998, 5(2):45-
51.
[ 11] 　郑旭龙.转植酸酶基因小球藻的培养及其生理生
化分析 [ D] .大连:大连理工大学 , 2006.
[ 12] 　李合生.植物生理生化实验原理和技术 [ M] .北
京:高等教育出版社 , 2001:184-197.
[ 13] 　郑旭龙 , 王长海.转植酸酶基因海水小球藻生理生
化的初步研究 [ J] .烟台大学学报:自然科学与工程版 ,
2007, 20(3):176-182.
[ 14] 　阎海 ,王杏君 , 林毅雄 , 等.铜 、锌和锰抑制蛋白核
小球藻生长的毒性效应 [ J] .环境科学 , 2001, 22(1):23-
26.
[ 15] 　崔青曼 , 么宗利 , 袁春营.极大螺旋藻培养液中微
量元素的最佳浓度 [ J] .水利渔业 , 2002, 22(4):14-15.
[ 16] 　周云龙.植物生物学 [ M] .北京:高等教育出版社 ,
2006:148-149.
[ 17] 　孙颖颖 , 孙利芹 , 王长海.微量元素对球等鞭金藻
生长的影响 [ J] .烟台大学学报:自然科学与工程版 ,
2005, 18(4):282-286.
EffectofMicro-ElementsonGrowthofTransgenic
MarineChlorelasp.MACC/C95
ZUOMing1 , WANGChang-hai1, 2
(1.DepartmentofBioscienceandBiotechnology, DalianUniversityofTechnology, Dalian116024, China;2.SchoolofOcean,
YantaiUniversity, Yantai264005, China)
Abstract:Theefectsofmico-elements, suchaszinc, molybdenum, cobalt, copper, manganese, andironin
theculturalliquidonthegrowthoftransgenicmarineChlorelasp.MACC/C95arestudiedinbatchculture.
Theirbeneficialconcentrationsaredefinedbysinglefactorexperiments.Theresultsoforthogonalexperiments
showthattheoptimalconcentrationsonthegrowthofC.spinculturalliquidareZn2+ 0.10 μmol/L, Mo2+
0.015μmol/L, Co2+ 0.01 μmol/L, Cu2+ 0.015 μmol/L, Mn2+ 0.8 μmol/L, andtheoptimalconcentra-
tionsonphytasecontentofC.spinculturalliquidareZn2+ 0.10 μmol/L, Mo2+ 0 μmol/L, Co2 + 0.04
μmol/L, Cu2+ 0.015 μmol/L, Mn2+ 0.4 μmol/L.Whenmicro-elementsoftheoptimalconcentrationsare
addedintheculturalliquid, thephytasecontentofC.spissignificantlyincreased, butthebiomassisde-
creased.
Keywords:microalgae;transgenicChlorela;phytase;micro-element;growth
(责任编辑　周雪莹)
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