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一株小飞蓬内生毒死蜱降解菌的分离鉴定及其降解特性初探



全 文 :农药学学报 2015,17(1) :89 - 96
Chinese Journal of Pesticide Science http:/ /www . nyxxb. com. cn
收稿日期:2014-10-10;录用日期:2014-12-03.
作者简介:冯发运,男,硕士研究生,E-mail:ffy81@ hotmail. com;* 余向阳,通信作者(Author for corresponding) ,男,博士,研究员,主要从事
农药环境归趋及生态毒理研究,E-mail:yuxy@ jaas. ac. cn
基金项目:国家自然科学基金(31071719) ;江苏省农业自主创新资金(CX(12)3090).
·研究论文· DOI:10. 3969 / j. issn. 1008-7303. 2015. 01. 12
一株小飞蓬内生毒死蜱降解菌的分离鉴定
及其降解特性初探
冯发运1,2, 朱 宏2, 李俊领2, 陈安良1, 余向阳*,2
(1. 浙江农林大学 林业与生物技术学院,浙江 临安 311300;
2. 江苏省农业科学院 食品质量安全与检测研究所,南京 210014)
摘 要:为分离筛选具有毒死蜱降解特性的植物内生菌,从农药厂废液池旁采集小飞蓬植物样本,
经表面消毒后研磨提取植物汁液,通过以毒死蜱作为单一碳源的无机盐培养基(MSM)进行连续
5 代培养筛选,获得一株植物内生细菌 XFP-gy,经生理生化试验及 16SrDNA 同源性比对分析,初
步鉴定该菌属阪崎克罗诺杆菌属(Cronobacter sp.)。将菌株 XFP-gy 在以毒死蜱(初始质量浓度
为 20 mg /L)为单一碳源的 MSM 中培养,至第 6 天时达生长高峰,第 9 天时毒死蜱的降解率为
77. 28%。在 MSM 培养基中补充牛肉膏和蛋白胨(加富培养基)可以促进菌株 XFP-gy 的生长,并
将其对毒死蜱第 5 天的降解率由 69. 59%提高到 98. 0%。菌株 XFP-gy 降解毒死蜱的最佳培养条
件为 30 ℃和 pH 7. 0,在此条件下,增加培养液中原始接菌量,降低底物毒死蜱的初始质量浓度,可
明显提高 XFP-gy 对毒死蜱的降解效率,当毒死蜱初始质量浓度为 10 mg /L,原始接菌量为 2%时,
至第 9 天时在培养液中未检出毒死蜱残留。
关键词:植物内生菌;阪崎克罗诺杆菌属;生物降解;分离鉴定;毒死蜱;降解特性
中图分类号:S482. 4 文献标志码:A 文章编号:1008-7303(2015)01-0089-08
Isolation and identification of a chlorpyrifos degrading
endophyte from Conyza canadensis(L.)Cronq and
its degradation characteristics
Feng Fayun1,2, Zhu Hong2, Li Junling2, Chen Anliang1, Yu Xiangyang*,2
(1. School of Forestry and Biotechnology,Zhejiang Agriculture and Forestry University,Linan 311300,
Zhejiang Province,China;2. Institute of Food Safety and Inspection,Jiangsu Academy of
Agricultural Sciences,Nanjing 210014,China)
Abstract:In order to isolate and screen plant endophytes capable of degrading chlorpyrifos,horseweed
herb(Conyza canadensis(L.)Cronq)collected near the waste pool of a pesticide factory was used as
target plant. After surface sterilization,the plant tissues were triturated to obtain plant juice. The plant
edophytes were screended by plating the plant juice on minimal salts media(MSM)modified with
chlorpyrifos as the sole carbon. After 5 times successive screening,a strain named as XFP-gy capable
of degrading chlorpyrifos was isolated. It was identified as Cronobacter sp. based on its physiological-
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biochemical characteristics and 16SrDNA sequence. The growth of strain XFP-gy reached the
maximum at the 6th day in liquid MSM with initial chlorpyrifos concentration of 20 mg /L,and
77. 28% chlorpyrifos was degraded after 9 days inoculation. The degradation rate could be enhanced
up to 98. 0% at the 5th day by adding beef extract and peptone in MSM. The optimal temperature for
XFP-gy degrading chlorpyrifos is 30 ℃,and the optimal pH value is 7. 0. Under optimal incubation
condition,the chlorpyrifos degradation efficiency increased with the increasing initial bacterium
inoculum amount, and the decreasing substrate (chlorpyrifos) concentration in the media. No
chlorpyrifos was detected at the 9th day when the initial inoculum of XFP-gy was 2% and concentration
of chlorpyrifos was 10 mg /L.
Keywords:endophyte;Cronobacter sp.;biodegradation;isolation and identification;chlorpyrifos;
degradation characteristics
毒死蜱(chlorpyrifos) ,化学名称为 O,O-二乙
基-O-(3,5,6-三氯-2-吡啶基)硫代磷酸酯,是美国
陶氏益农化学公司于 1965 年研发的一种高效、低
毒、广谱的有机磷杀虫、杀螨剂[1]。作为代替高毒
有机磷农药的重要品种,毒死蜱在我国已被广泛推
广使用,生产规模和使用量逐年增加,而由此带来的
对生态环境和人体健康的潜在危险性亦不容忽视。
研究表明:毒死蜱的毒性可以通过生物富集作用影
响整个生态系统[2];其对水生生物毒性较高[3];此
外,毒死蜱还是一种可疑的环境内分泌干扰物质,长
期接触可对内分泌系统、呼吸系统、神经系统或免疫
系统带来危害[4–6],并可能增加患肺癌的几率[7–8]。
微生物降解是环境中残留农药降解的一种重要
途径。截至 2011 年报道,从受污染的土壤、污泥或
污水等特殊环境中分离得到的具有毒死蜱降解特性
的微生物已达 50 余株[9],其中部分菌株或其代谢酶
已被应用于土壤污染修复[10–11],或蔬菜残留农药降
解等[12 - 14]。植物内生菌是指一生或至少一生中的
某个阶段能进入活体植物组织内、并与宿主植物建
立和谐共生关系的一类微生物[15]。植物内生菌在
植物对受污染环境的适应过程中发挥重要作用:可
促进植物在受污染环境下生长[16–17],减轻污染物对
植物的毒害[18],参与植物体内金属离子转运积累和
增强植物对重金属的耐受性[19],提高植物对污染物
的代谢活性[20–21]。目前,有关具有毒死蜱降解的活
性植物内生菌的研究尚未见报道。笔者从生长在农
药厂废液池旁的植物体内分离筛选到了一株对毒死
蜱具有降解作用的植物内生细菌 XFP-gy,采用生理
生化试验及 16SrDNA 同源性比对法对其菌属进行
了鉴定,并初步测定了其对毒死蜱的降解特性及影
响因素,旨在为进一步研究内生菌在植物适应农药
污染、代谢体内农药以及增强农药污染植株的修复
提供借鉴和材料。
1 材料与方法
1. 1 试验材料
1. 1. 1 供试植物 小飞蓬 Conyza canadensis (L.)
Cronq,采集自江苏省农业科学院农药厂农药废液池
旁。
1. 1. 2 主要试剂 97%毒死蜱原药(chlorpyrifos,
TC)(南京红太阳股份有限公司);99. 9%毒死蜱标准
品(chlorpyrifos,Standard) (德国 Dr. Ehrensterfer);
色谱纯乙腈(德国 Darmstadt) ;其他试剂除特别说
明外均为分析纯。16S rDNA 序列扩增引物由上
海生工公司合成;2 × Taq PCR Master Mix 由 DBI
Bioscience公司提供。
1. 1. 3 培养基 无机盐培养基(MSM) :0. 4 g
MgSO4·7H2O,0. 2 g FeSO4·7H2O,0. 2 g K2HPO4,
0. 2 g(NH4)2SO4,0. 08 g CaSO4,去离子水1 000 mL,
pH 7. 0 ~ 7. 2。富集培养基:3 g 牛肉膏,5 g 蛋白
胨,5 g 氯化钠,去离子水 1 000 mL,pH 7. 0 ~ 7. 2,
用于菌株的富集扩大培养。加富培养基:在 MSM
培养基中加入 1 000 mg /L 蛋白胨和 1 000 mg /L 牛
肉膏,用于菌株的斜面保存和平板培养。分离纯化
培养基:在 MSM 培养基内添加 15 ~ 20 g /L 琼脂
粉。毒死蜱标准品用乙腈配成母液(20 g /L),过
0. 22 μm 细菌过滤器后加入预先灭菌的培养基中至
所需浓度。
1. 1. 4 仪器设备 MX-F 型漩涡混合器及 D1008
型离心机(SCILOGEX 公司) ;Life Pro 基因扩增仪
(杭州博日科技有限公司) ;DYY-6C 型电泳仪(北
京市六一仪器厂) ;STARTER 2100 型实验室 pH
计(奥豪斯仪器有限公司);a-1506 型紫外分光光
度计(上海奥析科学仪器有限公司);Agilent
No. 1 冯发运等:一株小飞蓬内生毒死蜱降解菌的分离鉴定及其降解特性初探 91
Technologies 1200 高效液相色谱仪(美国安捷伦科
技公司)。
1. 2 植物内生毒死蜱降解菌的分离筛选与纯化
分别将小飞蓬根、茎、叶用自来水冲洗干净,自
然风干后进行表面消毒。消毒步骤参照刘莉华
等[22]的方法并做一定修改:先用 75%的酒精浸泡
3 ~ 5 min,再用无菌水冲洗 3 ~ 4 次,用 2. 5% 的
NaClO2 漂洗 2 ~ 5 min,无菌水清洗 5 次。经表面消
毒的植物样品于已灭菌研钵内研磨,吸取汁液均匀
涂布于加富培养基平板上,于 30 ℃条件下避光培
养。待长出菌落后挑取单菌落进一步划线培养于以
含毒死蜱为单一碳源的 MSM 培养基上,进行分离
纯化。选取能连续 5 次在以毒死蜱为惟一碳源的无
机盐培养基上生长的菌株,保存于加富培养基斜面
上,供进一步研究。
1. 3 分离菌株的鉴定
1. 3. 1 生理生化试验 参照东秀珠等的《常见细
菌系统鉴定手册》[23]进行。
1. 3. 2 16SrDNA 测序和系统发育分析 用灭菌牙
签挑取在富集培养基平板上生长 24 h 的单菌落,放
入装有 10 μL 无菌水的 Eppendorf 管中搅匀,于
100 ℃水浴中温育 2 min,离心 1 min,冰盒冷却后的
上清液用作 PCR 扩增反应的模板。用于 16SrDNA
扩增的 PCR反应引物为一对原核生物通用引物,正
向引物为 27F(5-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3),
反向引物为 1492R(5 -GGTTACCTTGTTACGAC
TT-3)。PCR反应体系为 2 × Taq PCR Mix 10 μL,
引物 27F与 1492R各 0. 5 μL,DNA 模板 4 μL,重蒸
水 5 μL。PCR反应条件:95 ℃ 5 min;95 ℃ 1 min,
56 ℃ 1 min,72 ℃ 2 min,循环 30 次;72 ℃ 10 min;
4 ℃保存。PCR产物的纯化和测序委托生工生物工
程(上海)股份有限公司完成,测序条件为双向,引
物为 27F与 1492R。将测序得到的长度为 1 052 bp
的 16SrDNA 序列登陆 NCBI,在 BLAST 中选择
16SrDNA 核 酸 对 比,然 后 与 GenBank 中 的
16SrDNA 核酸数据进行 BLAST 分析,利用 ClustalX
1. 8. 1 进行比对,用 MEGA 6. 06 软件进行多序列同
源性分析,用 Kimura2-parameter 距离模型计算距离
并构建 Neighbor-Joining 系统发育树,数据用
Bootstrap法重复检验(1 000 次)。同时将序列上传
到 EzBioCloud,寻找与目的菌株最为相近的模式
菌种。
1. 4 分离菌株对毒死蜱的降解特性
1. 4. 1 菌悬液制备 将分离纯化后的菌株接种于
富集培养基,在 30 ℃、200 r /min 下避光培养 24 h
(对数生长期),取 20 mL 菌液于 4 ℃、5 000 r /min
下离心 15 min,浓缩菌体用 0. 85%的无菌生理盐水
冲洗 3 次,用无菌生理盐水稀释配制成菌悬液母液,
调整菌液浓度使 OD600值为 1. 0 左右。
1. 4. 2 分离菌株的生长及对毒死蜱的降解特性
以 2%的接菌量将菌悬液接种于 MSM 培养基或
加富培养基中,添加毒死蜱至其质量浓度为
20 mg /L,测定初始 OD600值和毒死蜱含量。以不接
菌(加入与接菌液等体积的无菌生理盐水)的培养
基作为对照,每处理重复 3 次。于 30 ℃、200 r /min
下避光培养,分不同时间取样测定 OD600值及毒死
蜱残留量。
1. 4. 3 温度和初始 pH 值对菌株降解效率的影响
用 1 mol /L 的氢氧化钠或 1 mol /L 的盐酸调节
MSM 培养基的 pH值分别为 4、5、6、7、8、9,灭菌后,
添加毒死蜱至其质量浓度为 20 mg /L,按 2%的接
菌量接入菌悬液,分别置于 25、30 和 35 ℃ 及
200 r /min下避光培养 6 d,取样测定培养液中毒死
蜱的残留量。每处理重复 3 次。
1. 4. 4 接菌量对菌株降解效率的影响 于 MSM
培养基中分别按 0. 5%、2%、5%、8%和 10%的接
菌量接入菌悬液。添加毒死蜱至其质量浓度为
20 mg /L,调整培养液的 pH 值为 7. 0 ~ 7. 2,于
30 ℃、200 r /min下避光培养,分别于初始和第 3、
6、9 天取样测定培养液中毒死蜱残留量。每处理
重复 3 次。
1. 4. 5 毒死蜱质量浓度对菌株降解效率的影响
将 MSM 培养基中毒死蜱的初始质量浓度分别设
置为 100、80、50 和 10 mg /L,按 2%的接菌量接入菌
悬液,培养、取样及测定方法同 1. 4. 4 节。每处理重
复 3 次。
1. 5 毒死蜱提取分析方法
1. 5. 1 提取及净化 取待测液体培养基 2 mL,加
重蒸石油醚(60 ~ 90 ℃)2 mL,振荡 2 min,静置分
层;重复提取 3 次;合并有机相,氮气吹干后用色谱
纯乙腈定容至 1 mL,过 0. 45 μm 滤膜,待高效液相
色谱测定。
1. 5. 2 高效液相色谱条件 色谱柱为 ZORBA ×
SB-C18柱(4. 6 mm × 250 mm,5 μm);流动相为
V(乙腈)∶ V(水)= 90∶ 10;流速 1. 0 mL /min;检测
波长 290 nm;柱温为室温;进样量 20 μL;在上述条
件下毒死蜱的保留时间为 5. 5 ~ 5. 6 min,检出限为
0. 05 mg /L。
92 农 药 学 学 报 Vol. 17
2 结果与分析
2. 1 小飞蓬内生毒死蜱降解菌的分离筛选
分别从小飞蓬的根、茎、叶中各分离出一株能连
续 5 次在含 50 mg /L 毒死蜱的 MSM 培养基上生长
的菌株,其中从根和叶中分离出的内生菌株通过形
态观察、生理生化试验和 16SrDNA 测序结果分析确
定为同一菌种。该菌株在以毒死蜱为惟一碳源的
MSM 培养基上生长良好,命名为 XFP-gy。
菌株 XFP-gy 为革兰氏阴性,杆状。在以毒死
蜱为惟一碳源的 MSM 平板上,XFP-gy 生长缓慢,
48 h后才可见菌落,且菌落细小稀薄,白色半透明,
透明水解带清晰可见。在加富培养基上 XFP-gy 生
长较快,24 h即可见菌落,白色半透明,随培养时间
延长,菌落渐变为黄色,部分地方呈放射状,质地光
滑黏稠(见图 1)。
图 1 菌株 XFP-gy 生长 48 h 的菌落形态
Fig. 1 The colonial morphology of strain XFP-gy(48 h)
各个分支上的数值为经过 1 000 次重复检验得出的误差百分数。括号中为各菌株的 GeneBank序列号。
Bootstrap values obtained with 1 000 repetitions are indicated as percentages
at all branches. GeneBank accession numbers are given in brackets.
图 2 基于分离菌株 XFP-gy 与亲缘关系相近菌株的 16SrDNA 序列的邻接系统发育树
Fig. 2 Neighbor-joining phylogenetic tree based on the 16SrDNA gene sequences of strain XFP-gy and relating species
2. 2 菌种鉴定
在 NCBI 上经 BLAST 同源性比较发现,菌株
XFP-gy(NCBI登记号:KJ871339)与阪崎克罗诺杆
菌属中部分菌株的 16SrDNA 序列相似性达 99%以
上,其中与菌株 Cronobacter sakazakii ATCC BAA-
895 和 Cronobacter sakazakii ATCC 29544 的序列相
似性分别达 99. 70% 和 99. 40%。将 XFP-gy 的
16SrDNA 序列与相近属种菌株的 16S rDNA 序列通
No. 1 冯发运等:一株小飞蓬内生毒死蜱降解菌的分离鉴定及其降解特性初探 93
过比对后构建系统发育树(图 2) ,表明菌株 XFP-gy
位于 Cronobacter 分支,与 Cronobacter sakazakii 聚
于同一分支。在 EzBioCloud 上,XFP-gy 与模式菌
种 Cronobacter sakazakii ATCC 29544(T)(NCBI登
记号: EF088379)的 16SrDNA 序列相似度为
97. 41%。结合生理生化试验结果(表 1) ,初步鉴定
菌株 XFP-gy 属于阪崎克罗诺杆菌属。
表 1 菌株 XFP-gy 的生理生化特性
Table 1 Physiological-biochemical characteristics of strain XFP-gy
测试项目 Test item 结果 Results* 测试项目 Test item 结果 Results*
菌株形态 Morphology 杆状 Rod 葡萄糖酸盐 Gluconate +
革兰氏反应 Gram reaction - * L-阿拉伯糖 L-arabinose +
接触酶 Catalase + 甘露醇 Mannitol +
氧化酶 Oxidase - 蔗糖 Sucrose +
V-P试验 Test + 丙二酸盐 Malonate -
M. R试验 Test - 硫化氢生成 H2S production -
硝酸盐还原 Nitrate reduction - 柠檬酸盐 Simmons citrate +
明胶液化 Gelatin liquefaction - 吲哚 Indole -
苯丙氨酸脱氨酶 Phenylalanine deaminase + 精氨酸双水解酶 Arginine dihydrolase +
鸟氨酸脱羧酶 Ornithine decarboxylase + 赖氨酸脱羧酶 Lysine decarboxylase +
* + 代表反应呈阳性;- 代表反应呈阴性(+ positive reaction,- negative reaction)。
2. 3 菌株XFP-gy 的生长及其对毒死蜱的降解特性
图 3 菌株 XFP-gy在MSM培养基中的生长
曲线及毒死蜱降解曲线
Fig. 3 Growth curve of strain XFP-gy and degradation
dynamic of chlorpyrifos in MSM
以 2%接菌量接入 XFP-gy,在以 20 mg /L 毒死
蜱为单一碳源的 MSM 培养基中,菌株 XFP-gy 生长
缓慢,第 6 天时达到生长高峰,随后缓慢进入衰退期
(图 3)。培养基中的毒死蜱在前6 d 被快速降解,随
后逐渐变缓,可能是由于菌株生长进入衰退期后降
解能力下降,以及 MSM 培养基中不断积累的毒死
蜱降解代谢物阻碍了菌株对毒死蜱的降解[24 - 25]。
至第 9 天时毒死蜱的残留量为4. 43 mg /L,降解率
达 77. 28%。而在未接菌的对照处理中,第 9 天时
毒死蜱的降解率仅为 0. 78%。
图 4 菌株 XFP-gy 在加富培养基中的生长曲线及
毒死蜱降解曲线
Fig. 4 Growth curve of strain XFP-gy and degradation
dynamic of chlorpyrifos in enriched media
加富培养基是在 MSM 培养基中添加了牛肉膏
和蛋白胨,补充的碳、氮源可以加速菌株 XFP-gy 的
生长,并提高其对毒死蜱的降解效率。在加富培养
基中,菌株 XFP-gy 在 24 h 内快速生长并达生长高
峰(图 4),积累了大量生物量,之后可快速降解培养
液中的毒死蜱,第 2 天至第 4 天培养液中毒死蜱的
含量急剧下降,至第 5 天时降解率已达 97. 95%,第
6 天时已检测不到毒死蜱残留。
94 农 药 学 学 报 Vol. 17
2. 4 菌株 XFP-gy 对毒死蜱降解条件的优化
2. 4. 1 温度和 pH 值的影响 由图 5 可知:在 pH
5. 0 ~ 7. 0 范围内,菌株 XFP-gy 对毒死蜱的降解效
率较高,最适初始 pH 为 7. 0;在相同 pH 条件下,温
度对毒死蜱降解影响不大,30 ℃下降解率略高。
30 ℃、pH 7. 0 条件下培养 6 d,毒死蜱降解率达
74. 35%。
图 5 不同温度和初始 pH 值条件下菌株
XFP-gy 对毒死蜱的降解率
Fig. 5 Degradation rate of chlorpyrifos by strain XFP-gy
under different temperature and initial pH value
图 6 不同接菌量下菌株 XFP-gy 降解
毒死蜱的动态曲线
Fig. 6 Degradation dynamic of chlorpyrifos by strain XFP-gy
under different initial inoculum amount
2. 4. 2 接菌量的影响 由图 6 可知:在毒死蜱含
量为 20 mg /L 的 MSM 培养基中,加大菌株 XFP-gy
的初始接菌量,其对毒死蜱的降解效率明显提高。
接菌量为 2% ~10%时,毒死蜱在 0 ~ 3 d 被快速降
解,随后降解速率变缓;接菌量分别为 2%、5%、8%
和 10%时,第 9 天毒死蜱的降解率分别为 77. 28%、
76. 97%、86. 06%和 93. 57%;而当接菌量为 0. 5%
时,菌株 XFP-gy 的适应期延长,0 ~ 6 d 毒死蜱降解
缓慢,6 ~ 9 d 快速降解,至第 9 天时降解率为
68. 04%。
2. 4. 3 培养基中毒死蜱初始质量浓度的影响 在
菌株 XFP-gy 接菌量为 2%、底物毒死蜱的质量浓度
在 10 ~ 100 mg /L 范围内时,菌株对毒死蜱的降解
率随底物质量浓度的增加逐渐降低(图 7)。当毒死
蜱初始质量浓度为 10 mg /L 时,至第 9 天培养液中
已检测不到毒死蜱残留;当毒死蜱初始质量浓度分
别为 50、80 和 100 mg /L,至第 9 天时其降解率分别
为 61. 67%、41. 37%和 43. 39%。
图 7 不同底物毒死蜱质量浓度下菌株 XFP-gy
降解毒死蜱的动态曲线
Fig. 7 Degradation dynamic of chlorpyrifos by strain XFP-gy
under different initial concentration
3 结论与讨论
从农药厂废液池旁生长的小飞蓬植株体内,分
离到一株能以毒死蜱作为惟一碳源生长的植物内生
细菌 XFP-gy,其在以含 20 mg /L 毒死蜱为单一碳源
的 MSM 培养基中,第 6 天时生长达到高峰,第 9 天
时对毒死蜱的降解率达 77. 28%。生理生化指标及
16SrDNA 同源性比对分析,初步鉴定该菌为阪崎克
罗诺杆菌属(Cronobacter sp.),其亲缘关系与阪崎
克罗诺杆菌 Cronobacter sakazakii 最为接近。菌株
XFP-gy 降解毒死蜱的最适培养条件为 30 ℃和 pH
值 7. 0,加大接菌量或降低毒死蜱的初始质量浓度
均可提高菌株对毒死蜱的降解效率。已有报道指
出,Cronobacter sakazakii 属细菌,可用于降解石油
和烃类环境污染物[26]及处理酒厂废水中的糖蜜类
黑精 等[27]。本 文 首 次 报 道 了 植 物 内 生 菌
Cronobacter sp.可降解毒死蜱,进一步拓展了该属
细菌在农药污染治理领域的用途。
相对于已报道的从土壤、污泥或污水等特殊环
境中分离筛选出的毒死蜱降解菌[11],本文报道的内
生菌 XFP-gy 对毒死蜱的降解活性偏低,这可能与
该菌分离自植物体内、受毒死蜱残留选择压力相对
较小有关。植物内生菌更重要的作用在于可促进宿
No. 1 冯发运等:一株小飞蓬内生毒死蜱降解菌的分离鉴定及其降解特性初探 95
主植物生长,提高植物对环境污染的抗逆性,促进植
物对污染物的代谢降解,以及增强植物的生物修复
作用等[19 - 20,28]。近年来,利用植物内生菌可定植于
植物体内的特点进行环境污染的生物修复已成为研
究 热 点[20]:如 Andreolli 等[29] 利 用 内 生 菌
Burkholderia fungorum DBT1 将多环芳烃的生物修
复效率提高了 99%;Chen 等[30]利用内生菌提高了
水生植物对污染水源的修复效率;Ho 等[31]利用
Achromobacter xylosoxidans F3B 株系对酚类污染物
进行生物修复,接菌植物对污染物的去除率高达
100%。另外,利用定植于农作物体内的内生菌对残
留农药进行降解,也可能成为保障农药污染区农产
品生产安全的一条有效途径。关于植物内生细菌
XFP-gy 在植物体内的定植,以及其在植物代谢体内
残留农药及适应农药污染中的作用还需进一步深入
研究。
致谢:感谢江苏省农业科学院食品质量安全与
检测研究所仪器分析一室为本实验提供了 HPLC 仪
器,以及仲建锋博士、沈燕博士、张霄博士和徐重新
等人对试验进程的指导!
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(责任编辑:金淑惠)