全 文 ：李　涛 ,王元忠 ,袁天军 ,等.超声波辅助提取 -离子色谱法测定绒柄牛肝菌中 5种阴离子含量 [ J] .江苏农业科学 , 2011, 39(4):408-409.
超声波辅助提取 -离子色谱法测定
绒柄牛肝菌中 5种阴离子含量
李　涛 1 , 王元忠2 , 袁天军2, 3 , 刘鸿高 4
(1.玉溪师范学院 ,云南玉溪 653100;2.云南省农业科学院药用植物研究所 ,云南昆明 650223;
3.云南民族大学化学与生物技术学院 ,云南昆明 650031;4.云南农业大学 ,云南昆明 650201)
　　摘要:利用超声波辅助提取 -离子色谱法检测绒柄牛肝菌中 F-、Cl-、NO
2
-、NO
3
-、PO
4
3- 5种阴离子含量。采
用 3.0 mmol/LNaOH溶液超声渗提 30 min后进样 100 μL, 流速为 1.2 mL/min淋洗液 , 3.50 mmol/LNa
2
CO
3
+ 1.0
mmol/LNaHCO3洗脱。结果表明 , 这 5种离子检出限在 0.097 6 ～ 1.098 4 mg/L之间 ,线性范围分别为 2 ～ 25、2 ～ 20、2
～ 100、10 ～ 55、10 ～ 100 mg/L,峰面积 RSD分别为 0.58%、1.27%、0.73%、 0.92%、2.33%。绒柄牛肝菌样品中 NO2 -
未检出 ,各离子加标回收率在 92.48% ～ 102.50%之间。该方法具有精密度好 、准确度高 、简单快捷等特点。
　　关键词:绒柄牛肝菌;离子色谱;阴离子;含量
　　中图分类号:R284.2　　文献标志码:A　　文章编号:1002-1302(2011)04-0408-02
收稿日期:2010-10-19
基金项目:教育部科学技术研究重点项目(编号:209118);云南省自
然科学基金(编号 2007C083M、2008CD128)。
作者简介:李　涛(1976—),硕士 ,副教授 ,从事食用菌教学与研究。
通信作者:刘鸿高 , 硕士 , 副教授 , 主要从事资源真菌开发与利用。
Tel:(0871)5220338;E-mail:honggaoliu@ 126.com。
　　绒柄牛肝菌 (Boletustomentipes)别称黑牛肝 、大巴菌、毛
脚牛肝菌 ,隶属于伞菌目牛肝菌科牛肝菌属 [ 1] ,在我国主要
分布于云南 ,在秋季散生于针阔叶林中的地上 [ 2 ] 。据文献记
载 ,牛肝菌子实体中富含碳水化合物 、蛋白质、铁 、钙 、磷及 8
种人体必需氨基酸等多种营养成分 ,还含有腺嘌呤 、腐胺 、胆
碱等生物碱 ,可用于治疗腰腿疼痛 、手脚麻木 、四肢抽搐 、妇女
白带症等疾病 [ 3 ] 。此外 ,绒柄牛肝菌具有外形美观 、口感鲜
美等特点 ,早已成为人们熟知的烹饪佳肴 。 F-、Cl-、NO2 -、
NO3 -、PO4 3-等阴离子对维持食用菌生命活动和代谢起着重
要的作用 ,同时 NO2 -、NO3 -等 2种阴离子含量的高低已成为
判别无公害蔬菜的重要指标 [ 4] 。因此 ,测定食 、药两用的绒
柄牛肝菌中这 5种阴离子含量为研究其生长机理提供了参
考 ,同时为判断食用菌安全性提供了理论依据 。
超声辅助萃取 (ultrasonic-assistedextraction, UAE)是利
用热效应、空化效应、乳化作用 、凝聚作用 、机械搅拌、强化扩散
等理化特性对目标产物进行提取 ,具有能耗低、常温 、提取率
高 、快速等优点 [ 5] ,因此备受重视 。本试验以绒柄牛肝菌为研
究对象 ,采用离子色谱法测定绒柄牛肝菌中 F-、Cl-、NO2 -、
NO3 -、PO4 3- 5种阴离子的含量 ,取得了令人满意的结果 。
1　材料与方法
1.1　试验材料与试剂
1.1.1　试验材料　将采自云南省普洱市安嘎寨的绒柄牛肝
菌样品置于 60 ℃的烘箱中干燥 ,粉碎 ,过 100目筛 ,准确称取
(2份)样品 0.5 g。
1.1.2　仪器及试剂　WK-Ⅱ型离子色谱仪(江苏江分电分
析仪器有限公司 ), 配有自动再生抑制电导检测器;
CDMC-21V3.0色谱工作站;阴离子交换柱;YSB-2型往复
平流泵(中科院上海原子核研究所试验工厂 );SY3200-T型
超声波清洗机(上海声源超声仪器设备有限公司);TGL-16B
型高速离心机(上海安亭科学仪器厂);移液枪;0.45 μm过
滤膜(天津奥特赛恩斯仪器公司)。
NaF、NaCl、 NaNO2 、 NaNO3 、 NaH2 PO4 、 NaOH、 Na2CO3 、
NaHCO3(购于天津市风船化学科技有限公司)均为分析纯 ,
所用溶剂均为去离子水(电阻率 18.25 MΨ·cm)。
1.1.3　色谱条件　色谱柱:PACKINGNJ-SA-4A(250mm,
4.6mm),淋洗液为 Na2CO3 -NaHCO3(3.5 ～ 1.0 mmol/L),
流速为 0.1 ～ 10 mL/min;柱温为 30℃,电导检测器量程为
10 mS,进样体积为 100 μL,柱压 <5 MPa。按上述条件获得
的标准品(a)和样品(b)对照色谱图见图 1。
1.2　试验方法
1.2.1　溶液的制备　(1)标准储备液 。精确称取 120 ℃下
干燥至恒重的 NaF、NaCl、NaNO2 、NaNO3 、NaH2PO4标准样品 ,
将其配制成 1 g/LF-、Cl-、NO2 -、NO3 -、PO4 3 -的标准储备
液;将 NaOH配制为 0.30mol/L的标准储备液。使用时将其
—408— 江苏农业科学　2011年第 39卷第 4期
DOI :10.15889/j.issn.1002-1302.2011.04.141
配制成不同质量浓度的标准混合溶液 。 (2)淋洗液配制 。精
确称取 120 ℃下干燥至恒重的 Na2 CO3 25.44 g、NaHCO3
25.20g,将其配制成浓度为 0.35、 0.10 mol/L的储备液
1 000 mL。
1.2.2　样品处理 　将称取的绒柄牛肝菌样品加至装有
50 mL3.0 mmol/LNaOH溶液的容量瓶(100 mL)中 ,超声提
取 30 min,放至室温 ,取其主体部分 5 mL于 50 mL容量瓶中
定容 ,离心 20min,过 0.45μm微孔滤膜过滤 ,收集滤液备用 。
2　结果与分析
2.1　关于线性关系 、精密度和检出限的分析
精确量取 “1.2.1”部分标准溶液 ,将其配制成质量浓度
比 ρ(F-)∶ρ(Cl-)∶ρ(NO2 -)∶ρ(PO43 -)∶ρ(NO3 -)=
1.5∶2.0 ∶20.0 ∶30.0 ∶10.0的系列浓度 ,按上述色谱条件
测定峰面积 ,以峰面积 S为纵坐标(y)、质量浓度 ρ为横坐标
(x)作标准曲线 ,得各离子线性回归方程;将混合标准溶液同
时测定 n=7次 ,对其峰高和峰面积进行精密度(用相对标准
差表示)计算 ,其结果如表 1所示。将标准混合溶液逐渐稀
释至信噪比 RSN =3时 ,将仪器灵敏度调至较高档 ,以所测得
的各离子峰高与噪音峰高计算检出限(DL),为 3S/H。
表 1　线性范围和精密度
阴离子
名称 线性方程 r2
线性范围
(mg/L)
峰面积
RSD(%)
F- y=7.226 8x-7.731 8 0.991 6 2～ 25 0.85
Cl- y=5.201 6x+6.029 6 0.995 0 2～ 20 1.27
NO2 - y=3.313 3x-4.785 7 0.996 1 2～ 100 0.73
PO43- y=3.238 8x-13.245 0.995 2 10～ 55 0.92
NO
3
- y=1.349 3x+74.611 0.995 0 10～ 100 2.33
2.2　回收率试验
将精确称取的 1份绒柄牛肝菌样品加到浓度比为
ρ(F-)∶ρ(Cl-)∶ρ(NO2 -)∶ρ(PO4 3-)∶ρ(NO3 -)=1.5∶
2.0∶20.0 ∶30.0∶10.0的标准混合系列溶液中 ,按 “1.2.2”
处理样品 ,同时做空白样品处理 ,进样 100 μL,按上述色谱条
件平行测定 6次 ,除 NO2 -未测出外 ,其余各离子加标回收率
如表 2所示 。由表 2可知 , F-、Cl-、NO2 -、NO3 -、PO43 -等
4种离子加标回收率分别为 102.50%、 93.50%、 96.46%、
92.48%、93.40%, NO2 -未检出 ,测定结果较为准确 。
表 2　回收率试验结果(n=6)
离子
名称
加标量
(mg/L)
实测量
(mg/L)
加标后测定值
(mg/L)
加标回
收率 (%)
RSD
(%)
F- 1.2 20.245 21.475 102.50 2.54
Cl- 1.4 11.708 13.017 93.50 1.88
NO2 - 2.4 — 2.3105 96.46 1.47PO43- 3.5 12.506 15.743 92.48 2.03
NO3 - 50.0 343.547 390.248 93.40 2.14
2.3　准确性试验
将精确量取 “ 1.2.1”的标准溶液 , 配制成质量浓度比
ρ(F-)∶ρ(Cl-)∶ρ(NO2 -)∶ρ(PO43 -)∶ρ(NO3 -)=1.5
∶2.0∶20.0 ∶30.0∶10.0的系列浓度 ,按上述色谱条件进行
测定 ,平行测定 13次 ,其结果如图 2所示 。在上述条件下测
定样品 ,各离子分离效果较好 ,各离子峰面积相对标准偏差
RSD<2.50%,说明准确性较高 。
2.4　供试样品测定
将供试样品绒柄牛肝菌按 “1.2.1”部分的方法在上述色
谱条件下进行检测 ,平行测定 6次 ,求其峰面积的平均值 ,以
各离子峰面积对样品质量浓度进行回归测定 。结果表明 ,绒
柄牛肝菌样品各离子含量 NO3 - >PO43 - >F- >Cl- ,供试样
品绒柄牛肝菌中除 NO2 -离子含量未检测出外 , 其余 F-、
Cl-、PO43 -、NO3 -等 4种离子平均含量分别为 0.901、0.164、
1.767、11.315 mg/g。
3　讨论
用 3.0mmol/LNaOH作为浸提液 , 进行超声波辅助提
取 ,用离子色谱检测绒柄牛肝菌中 F-、Cl-、NO2 -、PO4 3-、
NO3 -5种离子含量。除 NO2 -未检出外 ,其余 4种离子平均
含量分别为 0.901、0.164、1.767、11.315 mg/g。 5种离子加
标回收率分别为 102.50%、 93.50%、 96.46%、 92.48%、
93.40%,测定结果令人满意 。许多药理研究结果表明 , NO2 -
对人体具有强致癌作用 ,而 NO3 -对人体几乎没有副作用 [ 6] ,
绒柄牛肝菌中 NO2 -含量未检测出 , NO3 -含量 11 315 mg/kg。
测定结果与我国制定的无公害蔬菜中亚硝酸盐和硝酸盐等含
量标准限量 [ 4]相比 , 亚硝酸根含量远低于叶菜类亚硝酸盐
(≤4.0 mg/kg)、硝酸根离子含量比硝酸盐(≤3 000 mg/kg)
稍高 。用该方法测定阴离子含量具有准确性高 、稳定性好 、重
现性高等特点 ,为揭示绒柄牛肝菌是安全无公害的食用菌提
供了理论依据 ,同时对其他食用菌的安全监督具有指导意义 。
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—409—李　涛等:超声波辅助提取 -离子色谱法测定绒柄牛肝菌中 5种阴离子含量