全 文 ：药物分析杂志C h inJ p lla rm A刀 a l ZX ( )5 , 25 ( 2)
旋覆花 1 一 口 一 A ce ltr b ir at 刊吐lac ot ne R P 一 B P L C 含量测定方法的研究 ’
王维娜 , 王云志 , 张嫡群 *
(河北医科大学新药开发研究室 石家庄 05 0 17)
摘要 目的 :建立了旋覆花 l 一 O 一 A e e yt l b ir at 耐 l ac otn e 含量测定的 RP 一 H P L C法 , 用该法对不同产地的旋覆花 、旋覆花不同部
位进行了含量测定和比较 。 方法 :采用高效液相色谱法 。 用 H y p e sr il C l :色谱柱 ( 250 ~ x 4
.
6
~
,
5 协m ) , 以乙睛 一水 ( 3 :3
67 )为流动相 ,流速 : l mL
· 面 n 一 ` ;柱温为室温 ;检测波长 Z or nm 。 结果 : 1 一 o 一 A ce yt lb ir ant in al ot on e 在 0 . 36 一 1 . 86 林g 范围内
线性 良好 ,其高 、 中 、 低 3 个量的平均回收率分别为 9 . 61 % , 9 . 29 % , 98 . 83 % ; R SD ( % ) 为 1 . 0 , 0 . 3 , 0 . 6 (n = 3 ) 。 结论 :方法
简便 、 快速 、 重复性好 , 可作为旋覆花的质量控制方法 。
关键词 :旋覆花 ;l 一 O 一 A c e yt l b ir tan inl ac ot ne ;反相高效液相色谱法
S ut dy o n R P 一 H P L C D e t e r而n a it o n o f
1 一 O 一 A c e yt lb r i at n n l l a c t o n e i n nI u 勿 b ir 勿 n n ic a L ·
WA N G W e i 一 n a
e d i e i n e
W AN G Y u n 一 z h i , Z H AN G D i 一 q u n
U n i v esr iyt
o f H e b e i
,
Shij iaz h
u an g 0 5X() 17 )
A b s t r a e t O bj ec it
v e : T o e s tab l i s h an R P 一 H PL C m
e th o d to s e p ar
t e l 一 O 一 A e e t y比 ir t
an
i l a e t o n e in nI u la bir at n
-
n ic a L
.
fo r QC p
u甲o s e . M e ht od : C h or m a t o g r a p h i e e o n d i ti o n s i n e l u d e H邓 e r s i l C l : e o l u m n ( 2 5 0 m m x 4 . 6 m m , 5
林m ) an d m o b il e p h as e e o n s i s t i n g o f a m i x tu er o f a e e t o n iitr l e w at e r ( 3 3 : 6 7 )
.
1 一 O 一 A e e yt lb ir ta n n i l a e t o n e w a s d e -
t e e t e d at 2 10 n m
.
hT
e n o w ar et w a s 1
.
0 m L
·
m i n
一 ` . 砒耐 t : iL n e ar ar n g e of l 一 O 一 A e e yt b ` ta n n i l a e ot n e w as
O
·
3 6 一 l
·
8 6 林g , hT e a v e ar g e re e o v e ir e s of l 一 O 一 A e e ty lb ir t an n i l a e t o n e w as 9 9
.
6 1%
,
99
.
2 9% 和 9 8 . 8 3% , w i th
e o
er
s P o n d i n g R SD o f 1
.
0%
,
0
.
3% an d 0
.
6 % (
n = 3 ) er
s p e e t i v e ly
.
C o cn lu it o n
: M e ht o d e an b
e u s e d fo r ht e 卿山 yt
e o n
otr l
o f nI u 阮 b irt a n ic a L二
K e y w o r d s : nI u l a bir ta n n ic a L
.
: l 一 O 一 A e e t y lb ir t a n n i lac ot n e : R P 一 H P LC
旋覆花 ( nI ul a ibr t an ic a L . ) 为菊科旋覆花属植
物 。 是常用中药 , 具有降气 、 消痰 、 行水 、 止呕 的功
效 。 现代药理学研究证明 ,旋覆花含有对人体肿瘤
细胞具有细胞毒作用 〔` 」的成分 。 旋覆花在中国药
典 20 0 年版有收载 , 但无含量测定项 〔“ 〕 ,旋覆花总
黄酮含量测定曾有报道 〔’ J , 但方法烦琐 , 精度差 。
为了旋覆花的质量控制 ,我们从旋覆花中分离出了
l 一 。 一 A e e ty场` t a n n i l a e ot n e ( I ) ,并以它为指标 ,首
次用高效液相色谱法测定旋覆花中 1 一 O 一 A ce ltr -
b ir tan in lac t
o n e 。
1 仪器与药品
CL 9 8 高效液相色谱仪 (北京分析仪器厂 ) , U V
一 10 可变波长紫外检测器 、 色谱工作站 (浙江大学
智能信息工程研究所 ) 。
乙睛色谱纯试剂 、 甲醇分析纯试剂 ( 95 % ) 、 重
蒸水 。 对照品 I 为本室从旋覆花中提取分离得到 ,
m p 1 2 3
.
9 一 12 5
.
2 ℃ ,经 UV 、 I R 、 I H 一 NM R 、 M S 测
定 ,波谱数据与文献冈 一致 , 结构见图 ;1 纯度经
H PL C 归一化法检查 ,含量在 9 . 5% 以上 。 旋覆花
及其地上部分采自山西省平陆 ,旋覆花购自河北省 、
河南 。 经河北医科大学药学院生药教研室聂凤提教
授鉴定为菊科植物欧亚旋覆花 nI 碗 b谊 a lzn ica L . 的
(地上部分 )干燥头状花序 。
河北省自然科学基金资助项目 ,项目编号 : 303 47 0
通讯作者 ( c~ s po n id ng au ht o r )
一 2 06一 药物分析杂志 C i h nJ P har m A nal 2 005, 25 ( 2 )
图 1 1 一 口 一 A ce t y lb ir tan n i lac ot ne 的结构
iF g 1 hT
e
sutr
e t u r e Of l 一 O 一 A e e t y lb ir ant inl ac t
o n e
2 色谱条件及系统实用性试验
H yp
e r s i l C 18色谱柱 ( 2 5 0 m m x 4 . 6 nu
,
5 协m ) :
流动相 : 乙睛 一 水 ( 3 3 : 6 7 ) , 流速 : l mL · m i n 一 ’ , 柱
温为室温 ,检测波长 21 0 n m ;在上述实验条件下 , 对
照品及样品的色谱图见图 2 。 按 I 峰计算的理论塔
板数应不低于 10 0 。
- J es es es es es es es es J es es es es es es es J es es es es es es es es J es es es es es es es es
0 4 8 1 2 16
图 2 样品 ( A ) 、 对照品 ( B )的色谱图
F ig 2 C h r o ll 〕at o gr an l s of s田 n l〕 l e ( A ) an d r e fe r e n e e sub s tan e e
1
.
1 一 O 一 A e e yt lb ir tan i lac ot
n e
t / 一 i n
( B )
3
。
1
测定条件
检测波长 I 的乙醇溶液在紫外分光光度
计上扫描 , I 入m ax 为 2 10 n m , 以此波长为检测波
长 。
3
.
2 线性及线性范围 精密称取对照 品 I 约 5
m g
,加甲醇制备系列浓度溶液 ,分别取 20 林L 注人
液相色谱仪测定峰面积 , 以对照品的进样量 X ( 卜g )
对峰面积单位进行线性回归 ,结果表明 ,在 0 . 36 -
1
·
86 林g 范围内 ,进样量与峰面积单位之间呈 良好
的线性关系 , 1 一 O 一 A ce t y l b ir t~ il ac ton e 的线性回
归方程 ( n = 3) 为 :
Y = 7
.
9 6 2 x 10 2 + 1
.
3 9 1 x 1 0
5 X r = 0
.
9 9 9 5
3
.
3 溶液的制备 对照品溶液 :精密称取于 105 ℃
干燥至恒重的对照 品约 5 m g , 置 25 m L 量瓶中 , 加
甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀 , 即得 。 供试品溶液 :
取本品粉末 (过三号筛 )约 1 9 ,精密称定 , 置 50 mL
具塞锥形瓶中 , 加甲醇 20 m L ,精密称定 ,超声波提
取 (功率 15 0 W , 2 0 k H z ) 1 0 , 2 0 , 4 0 m i n ,放置室温 ,
用甲醇补加减失的重量 ,摇匀 ,用 0 . 45 林m 滤膜滤
过 ,精密量取 20 林L , 注人液相色谱仪 , 比较色谱峰
面积 ,结果表明超声提取 20 m in , 即提取完全 。
3
.
4 精密度试验 精密吸取同批供试品溶液 20
林 L ,注人液相色谱仪 , 重复进样 5 次 , 测定峰面积 ,
计算峰面积的 R S D 为 1 . 9% ( n = 5 ) 。
3
.
5 稳定性试验 精密吸取供试品溶液 20 林L ,
注人液相色谱仪 ,每隔 h1 时测定 1 次峰面积 ,共测
定 s h 。 平均峰面积为 1 . 5 14 x 10 , , R s D = 2 . 1% , 样
品在 s h 内无显著变化 。
3
.
6 重复性试验 精密取旋覆花粉末约 0 . 8 , 1 ,
1
·
2 9 各 3 份 ,照供试品溶液制备方法制备溶液 ,精
密吸取供试品溶液 20 林L ,注人液相色谱仪 ,测定峰
面积 ,计算旋覆花中 I 的平均含量为 0 . 578 % , R s D
< L g%
。
3
.
7 回收率试验 精密称取已测得含量的旋覆花
粉末约 0 . 5 9 , 9 份 ,分别加人对照品适量 (约相当于
样品中 I 含量的 80 % , 10 % , 12 0% ) , 照供试品溶
液制备项下制备溶液 , 取适量分别用 0 . 45 林m 滤膜
滤过 ,精密吸取此溶液及对照品溶液各 20 林L ,注入
液相色谱仪 ,测定 1 一 口 一 A ce yt 出irt an n ila ct on e 的峰
面积 ,外标法测定回收率 , 结果平均回收率 ( n = 3)
分别为 9 9 . 2 9% , 9 8 , 8 3 % , 9 9 . 6 1% : R SD 分别 为
0
.
3%
,
0
.
6%
,
1
.
0%
。
4 含量测定
取旋覆花不同部位粉末约 1 9 , 精密称定 , 照供
试品溶液的制备方法制备溶液 ,分别精密吸取对照
品溶液与供试品溶液各 20 林 L ,注人液相色谱仪 ,测
定含量 ,结果见表 1 。
表 1 1 一 O 一 A理勿libr at 吐面h c t o此 含t 测定结果《n 二 3)
aT b 1 T h
e 璐ult of l 一 O 一 A理灯肠 d细叨山 c ot . e de et r 苗如 ea t io n
产地 含量 SR D
( p l
a c e
of 帅 duc it o n ) ( e o n et n t ) / % / %
山西 、平陆 (花 ) ( S ha n , 1 Por v i n e e , Pi n砂u 0 . 57 8 3 . 9
co
IJ幻 ly 旧侧 e r )
山西 、平陆 (茎 ) ( S han 幼 P m 石n e e , Pi n g lu 0 . 294 2 . 1
c o ll l l
ty
, s te m )
山西 、平陆 (地上部分 ) ( S玩切加 P or 朽。 c e , 0 . 375 2 . 5
R n gl
u
co
u n
ty
,
~ al
p肚勺 )
河北 (花 ) ( H e be i P加 vi n e e , l
ower
) 0
.
3 4 1 3
.
3
河南 (花 ) ( H e ~ Pn 〕vmc e
,如we r ) 0 . 320 2 . 3
5 讨论
评价中草药及其制剂的质量 , 需要测定其主要
药物分析杂志 C hi n J Phmar A n al ZX() 5
,
25 ( 2) 一 20 7 一
活性成分或指标成分 ,本文首次以 1 一 o 一 cA e yt 巧 ir -
tan iln ac ot
n e 为指标 ,建立了评价旋覆花质量的 RP -
H P LC 法 ,并对不同产地旋覆花 、旋覆花不同部位进
行了含量测定和 比较 。 本法简便 、快速 、 准确 、重现
性好 ,可作为其质量的控制方法 。
参考文献
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(本文于 20 03 年 8 月 1 日修改回 )
药品检验用标准物质目录 ( + ) ( 2 0 4 年 12 月 20 日更新 )
1304 50 诺氟沙星 N o闭 ox ac in 化学对照品 含量测定
1304 5 1 环丙沙星 C i p or fl ox a e i n 化学对照品 含量测定
1304 5 2 洛美沙星 肠 m ief o x R o i n 化学对照品 含量测定
1304 53 依诺沙星 E n o x a e i n 化学对照品 含量测定
1304 54 氧氟沙星 o fl o xa e i n 化学对照品 含量测定
1304 55 左氧氟沙星 玩 v o fl o x a e i n 化学对照品 含量测定
1304 58 氟罗沙星 R e n 〕x a e in 化学对照品 含量测定
1304 59 培氟沙星 P e fl ox ac in 化学对照品 含量测定
1304 6 1 司帕沙星 印a田 o x ac in 化学对照品 含量测定
1304 80 头抱曲松 C e ft ir ax o n e 化学对照品 含量测定
13以 8 1 头抱克洛 C e af e l or 化学对照品 含量测定
1304 82 苯哩西林 xO a e il i n 化学对照品 含量测定
1304 83 头抱唾厉 C e of l a x im e 化学对照品 含量测定
1304 84 头抱他吮 C e ft a z l d im e 化学对照品 含量测定
1304 8 5 多西环素 D o ” e y e li n e 化学对照品 含量测定
1304 86 克林霉素磷酸醋 Cil n d a m y e in Ph o s p h a t e 化学对照品 含量测定
1304 87 土霉素 o xyt e atr e y e li n e 化学对照品 含量测定
13以8 8 盐酸四环素 eT atr e y e li n e Hydor e h l o ir d e 化学对照品 含量测定
1304 89 盐酸金霉素 Chl o rte t r a c y e li n e H yd ocr hl o ir d e 化学对照品 含量测定
1 304 90 青霉素 V 钾 hP e n o x y m e hty l P e n i e i l i n P o at s s ium 化学对照品 含量测定
1304 9 1 舒他西林 S ul t a n u e il i n 化学对照品 含量测定
1304 92 头抱吠辛酷 C e fu r o x im e A x e t i l 化学对照品 含量测定
13汉 93 头抱峡辛 C e fl ir o x im e 化学对照品 含量测定
1 304 94 头抱克洛 吕一 3 异构体 C e af e l o r I s o m e r oc h 一 3 化学对照品 H P LC 系统适应性
13 04 95 环抱素 C y e l o s p o ir n 化学对照品 含量测定
13汉 96 利福平 几伪m Pi n 化学对照品 含量测定
13《又 97 四环类杂质对照品 / 化学对照品 杂质检查
13砚又 98 青霉胺 P e n i e i l l , m i n e 化学对照品 含量测定
1 3以 99 美他环素 M e t a c yc il n e 化学对照品 含量测定