全 文 ：·中药及天然药物·
旋覆花药材HPLC指纹图谱研究
侯艳鹏 ,王建华 ,尚明英 ,刘洪宇 ,王闽川 ,蔡少青＊(北京大学药学院天然药物学系 ,北京 100083)
摘要:目的　研究旋覆花药材的指纹图谱的测定方法 ,确定旋覆花 HPLC 指纹图谱。方法　采用 HPLC/ UV 测定旋覆花药材
甲醇提取液的指纹图谱 ,并与同属其他植物花序进行比较。结果　建立了旋覆花药材的 HPLC 指纹图谱 ,发现13 个色谱峰为
共有峰 ,确定了其相对保留时间和峰面积比值的范围。 结论　利用旋覆花指纹图谱可以对不同植物来源的旋覆花药材进行
鉴别 ,并可在一定程度上进行质量控制。
关键词:旋覆花;旋覆花属植物;指纹图谱;旋覆花素
中图分类号:R282.5 文献标识码:A 文章编号:1001-2494(2002)12-0894-06
Studies on HPLC fingerprint of Flos Inulae
HOU Yan-peng ,WANG Jian-hua ,SHANG Ming-ying ,LIU Hong-yu ,WANG Min-chuan ,CAI Shao-qing＊(De-
partment of Natural Medicines , School of Pharmaceutical Sciences , Peking University , Beijing 100083 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To study the determination method of the fingerprint of Flos Inulae and to establish the fingerprint of
Flos Inulae.METHODS　The HPLC/ UV assay was used to establish the fingerprint of Flos Inulae and it w as compared with the
HPLC spectra of several different species in I nula.RESULTS　The fingerprint of Flos Inulae with 13 common peaks was estab-
lished.The relative retention time and the ranges of relative area of the common peaks were determined.CONCLUSION　The estab-
lished fingerprint can be used for the identifica tion and quality control of Flos Inulae.
KEY　WORDS:Flos Inulae;Inula plants;HPLC fingerprint;inulicin
基金项目:国家重点科技项目(攻关)计划 ,专题合同编号 99-929-01-25 作者简介:侯艳鹏 ,男 ,硕士 Tel:(010)62091507
E-mail:yanpengh@yahoo.com .cn　　＊通讯作者:蔡少青 ,男 ,教授 ,博士生导师 T el:(010)62091693
　　旋覆花为常用中药 , 《神农本草经》列为下品 。
性微温 ,味苦 、辛 、咸 ,能降气 ,消痰 ,行水 ,止呕 。用
于风寒咳嗽 、痰饮蓄结 、胸膈痞满 、喘咳痰多 、呕吐噫
气 、心下痞硬。近年来临床应用研究表明 ,旋覆花宜
于治疗急 、慢性支气管炎的咳嗽痰多兼气喘等
症[ 1] 。中国药典规定的旋覆花为日本旋覆花(Inula
japonica Thunb.)及欧亚旋覆花(I .britannica L .)
的干燥头状花序[ 2] 。笔者 2000年 7月至 2001 年 5
月从全国 24个省 、市 、自治区收集到 27份旋覆花商
品药材 ,这些药材均由头状花序组成 ,经性状 、显微
鉴定 ,明确其中 18 份为日本旋覆花 , 5 份为线叶旋
覆花(I.linarii folia Turcz.), 2份为日本旋覆花和
线叶旋覆花的混合品 ,剩余 2 份分别为湖北旋覆花
[ I.hupehensis (Ling)Ling] 和水朝阳旋覆花(I .
helianthus-aquat ica C.Y.Wu ex Ling)。未见欧亚
旋覆花样品。另据笔者调查东北 、内蒙古 、新疆等有
欧亚旋覆花资源分布的省份 ,未发现欧亚旋覆花作
为旋覆花药材使用 。可见 ,目前市场旋覆花商品药
材主要来源于日本旋覆花 ,少量来源于线叶旋覆花 、
湖北旋覆花和水朝阳旋覆花 。为有效控制旋覆花药
材的品质 ,笔者用 HPLC 测定了 1份自采的日本旋
覆花药材和 10 份旋覆花商品药材(I .japonica)的
图谱 , 发现有 13 个色谱峰为各样品中均能检测到
的共有的峰 ,笔者确定了这 13 个峰为旋覆花共有
峰 ,计算了其相对保留时间和峰面积比值的范围 ,建
立了旋覆花药材的指纹图谱 。并利用所建立的指纹
图谱 ,区分了来源于日本旋覆花的样品与同属不同
种植物来源的旋覆花样品。
1　仪器与试药
1.1　仪器
HP1100型高效液相色谱仪 ,包括:HP G1312A
BinPump(二元泵), HP G1313A ALS(自动进样
器), HP G1316A COLCOM(柱温箱), HP G1315A
DAD(二极管阵列检测器), HP Chemstat ion for LC
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and LC/MS Systems(工作站)。
1.2　试剂
乙腈为色谱纯(美国 Feisher公司);水为超纯水
(北京大学药学院医药卫生分析中心),并经 0.45
μm 水系滤膜过滤 。
1.3　对照品旋覆花素(inulicin)及去乙酰旋覆花素
(deacetylinulicin)
自行提取精制 , 经 UV , IR , EI-MS , 1H-NMR ,
13C-NMR , 1H-1HNMR 等鉴定结构 , 纯度均大于
99.5%(归一化法计算)。
1.4　药材
实验中所用旋覆花药材均经本研究组鉴定 ,见
表 1。
表 1　旋覆花药材样品及鉴定结果
Tab 1　The co llected Flos Inulae samples and the identifica tion
results
实验编号 购入 、采集地点 时间 样品编号
I.japonica
1 山西平遥药材公司 2001.2 2488
2 云南昆明市菊花村药材市场 2001.3.3 2531
3 新疆乌鲁木齐市药店 2000.7 2492
4 黑龙江医药销售总公司 2001.2 2484
5 福建三明市三元区 2001.2 2509
6 山东郓城县中医院 2001.2 2515
7 天津中医学院门诊部 2001.2 2483
8 上海市蔡同德堂 2000.7 2491
9 河北安国市美达药材行 2001.5.17 2540
10 湖北医药物资供应公司黄冈分公司 2001.1 2486
11 河北香河县(自采) 2000.8 Hou Y.-P.20009
12 黑龙江肇东市五里木镇(自采) 2000.8 Hou Y.-P.20006
I.britannica
13 内蒙古牙可石市克一河镇(自采) 2000.8 Hou Y.-P.20004
I.huphensis
14 贵州同济堂药店 2001.2 2521
I.helianthus-aquatica
15 重庆长寿县中药材公司 2001.2 2487
I.li nari ifolia
16 河南周口市同和堂大药店 2001.2 2489
17 河南郑州千禧堂 2000.7.27 2519
18 安徽亳州药材交易中心志光药材行 2000.7.25 2525
2　方法与结果
2.1　供试品溶液的制备
精密称取旋覆花药材粉末(经 20目筛)2 g(表 1
的 11号样品),置具塞三角瓶中 ,精密量取甲醇 25
mL 加入三角瓶中 ,密塞 ,称重 ,冷浸 1 h ,超声振荡
20 min , 称重 ,补足失重 ,滤过 ,取续滤液为供试品
溶液 。供试品溶液进样 10 μL ,依上述条件测定 。
2.2　对照品溶液的制备
精密称取旋覆花素 、去乙酰旋覆花素 ,加甲醇制
成 1 mL 甲醇含旋覆花素 0.2 mg ,去乙酰旋覆花素
0.06 mg 的溶液作为对照品溶液 。
2.3　色谱条件
色谱柱 Beckman 公司 Ultrasphere ODS 5 μm ,
4.6 mm ×25 cm 分析柱及 ODS 5μm ,4.6 mm×4.5
cm 预备柱。色谱条件:流动相 0 ～ 35 min ,乙腈-水
=0∶100 ～ 30∶70 , 梯度洗脱;35 ～ 50 min ,乙腈-水=
30∶70 ～ 40∶60 , 梯度洗脱;50 ～ 90 min , 乙腈-水=
40∶60 ～ 100∶0 ,梯度洗脱 。柱温为 40℃,流速为 1
mL·min-1 ,检测波长为 210 nm 。
2.4　指纹峰的标定
采用相对保留时间标定指纹峰。以旋覆花素对
照品作为参照物 ,把各色谱峰保留时间与同一图谱
中旋覆花素保留时间的比值作为各色谱峰的相对保
留时间 。
2.5　指纹峰的峰面积比值
精密吸取对照品溶液 10 μL ,按上述液相色谱
条件测定 ,以所得的旋覆花素峰面积作为 1 ,计算各
样品图谱中色谱峰的峰面积比值 。
2.6　精密度和稳定性实验
取同一份旋覆花药材(样品编号 Hou Y.-P.
20009 , I.japonica)的供试液重复进样 5 次 ,比较不
同色谱峰的绝对保留时间 、相对保留时间及峰面积
比值。因进样间隔时间为 110 min , 故同时对该方
法进行了稳定性考察。结果表明所标定色谱峰的绝
对保留时间 、相对保留时间和峰面积比值基本一致
(RSD 分别为 0.01% ～ 0.75%, 0% ～ 0.7%,
0.16%～ 2.70%),符合指纹图谱的检测要求[ 3] 。
2.7　重现性实验
取旋覆花药材(样品编号 Hou Y.-P.20009)样
品 5份 ,分别精密称定 ,按供试品溶液制备方法制备
供试品溶液 ,并分别按上述液相色谱条件测定 ,计算
不同指纹峰的相对保留时间及峰面积比值 。结果表
明所标定指纹峰的绝对保留时间 、相对保留时间和
峰面积比值基本一致(RSD 分别为 0.01% ～
0.38%,0%～ 0.34%, 0.67%～ 2.60%),符合指纹
图谱的检测要求[ 3] 。
2.8　旋覆花药材样品的测定及指纹图谱的确立
按上述液相色谱条件测定了 10份旋覆花商品
药材(表 1中的 1 ～ 10 号样品),根据各样品图谱中
色谱峰相对保留时间 ,标定共有峰(扣除空白影响),
计算峰面积比值。建立旋覆花商品药材的指纹图
谱 。结果见图 1及表 2 ～ 4。各共有峰的紫外图谱
见图 2。
共有峰的峰号(相对保留时间):1(1.06), 2
(0.07),3(0.37 ～ 0.39),4(0.41 ～ 0.42), 5(0.53),6
(0.63), 7(0.69),8(0.77), 9(1.00),10(1.15), 11
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图 1　旋覆花的指纹图谱
1 ～ 13-共有峰;9-旋覆花素;6-去乙酰旋覆花素
Fig 1　The Fingerprinter o f Flos Inulae
1 ～ 13-common peaks;9-inulicin;6-deace tylinulicin
表 2　旋覆花商品药材测定结果(绝对保留时间).min
Tab 2　The re tention time of Flos Inulae samples.min
共有峰
峰号
样品编号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
RSD/ %
1 2.36 2.40 2.40 2.40 2.39 2.39 2.33 2.34 2.40 2.40 1.08
2 2.95 2.94 2.95 2.94 2.94 2.94 2.94 2.94 2.95 2.94 0.14
3 15.79 14.94 15.45 15.54 15.48 14.68 14.93 14.56 15.54 14.77 2.73
4 16.96 16.59 16.78 16.93 16.81 16.31 16.66 16.39 16.85 16.65 1.23
5 21.35 21.26 21.27 21.27 21.28 21.28 21.29 21.31 21.27 21.26 0.12
6 25.27 25.14 25.15 25.16 25.17 25.17 25.17 25.19 25.16 25.14 0.15
7 27.79 27.72 27.74 27.74 27.76 27.76 27.76 27.78 27.75 27.73 0.08
8 31.04 30.96 30.98 31.00 30.99 31.00 31.00 31.02 30.99 30.96 0.08
9 40.16 40.09 40.10 40.11 40.12 40.11 40.11 40.16 40.11 40.08 0.06
10 46.29 46.04 46.07 46.07 46.08 46.07 46.08 46.13 46.08 46.04 0.15
11 62.21 62.16 62.16 62.16 62.17 62.16 62.16 62.20 62.16 62.15 0.03
12 62.62 62.69 62.70 62.71 62.72 62.70 62.69 62.73 62.70 62.69 0.04
13 67.83 67.77 67.78 67.78 67.78 67.76 67.76 67.79 67.77 67.77 0.03
表 3　旋覆花商品药材测定结果(相对保留时间)
Tab 3　The determination results of Flos Inulae samples(show n the relative retention time)
共有峰
峰号
不同样品的保留时间/min
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
RSD/ %
1 0.06 0.06 0.06 0.06 0.06 0.06 0.06 0.06 0.06 0.06 1.13
2 0.07 0.07 0.07 0.07 0.07 0.07 0.07 0.07 0.07 0.07 0.13
3 0.39 0.37 0.39 0.39 0.39 0.37 0.37 0.36 0.39 0.37 2.72
4 0.42 0.41 0.42 0.42 0.42 0.41 0.42 0.41 0.42 0.42 1.23
5 0.53 0.53 0.53 0.53 0.53 0.53 0.53 0.53 0.53 0.53 0.07
6 0.63 0.63 0.63 0.63 0.63 0.63 0.63 0.63 0.63 0.63 0.09
7 0.69 0.69 0.69 0.69 0.69 0.69 0.69 0.69 0.69 0.69 0.03
8 0.77 0.77 0.77 0.77 0.77 0.77 0.77 0.77 0.77 0.77 0.03
9 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 0.00
10 1.15 1.15 1.15 1.15 1.15 1.15 1.15 1.15 1.15 1.15 0.10
11 1.55 1.55 1.55 1.55 1.55 1.55 1.55 1.55 1.55 1.55 0.04
12 1.56 1.56 1.56 1.56 1.56 1.56 1.56 1.56 1.56 1.56 0.08
13 1.69 1.69 1.69 1.69 1.69 1.69 1.69 1.69 1.69 1.69 0.05
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表 4　旋覆花商品药材测定结果(峰面积比值)
Tab 4　The determination results of Flos Inulae samples(show n the relative peak area ratio)
共有峰
峰号
样品编号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
平均值 峰面积比值范围
1 0.21 0.38 0.17 0.19 0.26 0.19 0.16 0.13 0.17 0.15 0.20 0.13～ 0.38
2 0.26 0.12 0.14 0.07 0.07 0.11 0.10 0.08 0.15 0.09 0.12 0.07～ 0.26
3 0.05 0.05 0.08 0.01 0.02 0.05 0.06 0.01 0.03 0.03 0.04 0.01～ 0.08
4 1.34 0.46 0.76 0.75 0.79 0.38 0.36 0.26 0.78 0.30 0.62 0.26～ 1.34
5 0.05 0.02 0.03 0.03 0.03 0.02 0.03 0.01 0.03 0.03 0.03 0.01～ 0.05
6 0.17 0.13 0.25 0.24 0.22 0.09 0.23 0.30 0.25 0.17 0.20 0.13～ 0.30
7 0.45 0.33 0.44 0.36 0.24 0.29 0.24 0.23 0.43 0.26 0.33 0.23～ 0.45
8 0.31 0.24 0.35 0.22 0.16 0.22 0.20 0.18 0.35 0.18 0.24 0.16～ 0.35
9 2.00 0.60 1.14 0.88 0.91 0.39 0.91 0.35 1.14 0.80 0.91 0.35～ 2.00
10 0.43 0.41 0.21 0.22 0.26 0.27 0.20 0.17 0.21 0.33 0.27 0.17～ 0.43
11 0.22 0.27 0.09 0.13 0.24 0.19 0.13 0.18 0.09 0.22 0.18 0.09～ 0.27
12 0.01 0.15 0.03 0.04 0.08 0.13 0.06 0.09 0.03 0.22 0.08 0.01～ 0.22
13 0.06 0.13 0.04 0.04 0.05 0.06 0.07 0.01 0.04 0.10 0.06 0.01～ 0.13
图 2　旋覆花中各共有峰(1 号～ 13 号峰)的紫外图谱(DAD检测)
Fig 2　The UV spectra of the common peaks(No.1～ 13)of Flos Inulae(detected on DAD)
(1.55),12(1.56),13(1.69)。
各共有峰紫外光谱图:3(UVmax 204 ,302 nm),4
[ UVmax 218 ,242(sh), 326 nm] , 5(UVmax 200 , 294
nm), 6(UVmax 200 nm), 7(UVmax 202 , 256 , 352
·897·中国药学杂志 2002年 12月第 37卷第 12期　　　　　　　　　　 Chin Pharm J , 2002 December , Vol.37 No.12
nm), 8(UVmax 202 , 254 , 352 nm), 9(UVmax 202
nm), 10(UVmax 226 ,298 nm), 1 ,2 ,11 , 12 , 13 等 5
个峰在 UV190 ～ 500 nm均无明显吸收。
峰面积比值:1(0.13 ～ 0.38), 2(0.07 ～ 0.26),
3(0.01 ～ 0.08), 4(0.26 ～ 1.34), 5(0.01 ～ 0.05),
6(0.13 ～ 0.30), 7(0.23 ～ 0.45), 8(0.16 ～ 0.35),
9(0.35 ～ 2.00), 10(0.17 ～ 0.43), 11(0.09 ～
0.27), 12(0.01 ～ 0.22), 13(0.01 ～ 0.13)。
部分共有峰的峰形描述:3号峰和 7号峰有时
可出现肩峰。
3　不同来源的样品 HPLC图谱的比较
笔者同时采用上述液相色谱条件测定了几种不
同植物来源的旋覆花样品(表 1 中的 12 ～ 18 号样
品),见图 3。经计算比较 ,发现 3 份线叶旋覆花样
品具有 27个共有峰 ,各样品HPLC图谱与所建立的
旋覆花指纹图谱比较结果见表 5。结果表明 ,其他
植物来源的各旋覆花样品的 HPLC 图谱与来源于
日本旋覆花的样品差别明显 ,对旋覆花药材的真伪
鉴别有重要的意义 。
4　讨　论
图 3　五种不同植物来源的旋覆花样品的 HPLC 图谱
A-日本旋覆花;B-欧亚旋覆花;C-线叶旋覆花;D-水朝阳旋覆花;E-湖北旋覆花
Fig 3　The fingerprinters of five different I nula species
A-I.japonica;B-I .britannica;C-I.linarii folia;D-I.helianthus-aquatica;E-I.hupehensis
4.1　笔者建立了旋覆花药材指纹图谱的 HPLC 测
定法 ,该方法能使旋覆花甲醇提取液中的大部分化
学成分得到较好分离 ,具有很好的稳定性 、重现性和
可行性。
4.2　在液相色谱条件建立的过程中 ,笔者比较了波
长 190 ～ 400 nm所测得的 HPLC 图谱(DAD检测器
检测),结果表明 ,波长 210 nm 检测时 ,其 HPLC 图
谱中可见比较多的色谱峰 ,同时各色谱峰分离较好;
并且该波长接近所选用对照品旋覆花素的最大吸收
波长;故确定波长 210 nm 为检测波长。
4.3　本实验所应用的峰面积比值计算方法不同于
文献[ 4] 。由于旋覆花不同样品 HPLC指纹图谱中 ,
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表 5　不同来源的样品 HPLC 图谱与所建立旋覆花指纹图
谱的比较
Tab 5　Comparison of the HPLC fingerprinters of different In-
ula species with the established HPLC fingerprinter of Flos Inu-
lae
样品 旋覆花指纹图谱共有峰峰号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
I.japonica + + + + + + + + + + + + +
I.britannica - + - + - - + + - + - - -
I.linarii folia + + + + - - + + - + - - -
I.helianthus-aquat ica + + - + - - - + - + - - -
I.hupehensis + + + + - - + + - + - - -
注:+表示具有该色谱峰 , -表示不具有该色谱峰
N otes:+the same peak can be de tec ted , -the peak can not be de tec ted
各共有峰的峰面积均有一定的波动 ,故笔者认为不
宜把各样品色谱图中某一共有峰峰面积均作为 1来
计算峰面积比值。因此 ,本实验以已知浓度的旋覆
花素对照品溶液 ,固定体积进样后 ,同样色谱条件所
得峰面积作为 1 ,计算峰面积比值 。这样既消除了
一定的系统误差 ,又能较客观地反映不同样品中各
共有峰所代表的化学成分的含量高低。通过旋覆花
指纹图谱主要特征峰的面积比例的制定 ,亦能有效
地控制中药旋覆花的质量 ,确保旋覆花样品质量的
相对稳定 。
4.4　利用所建立的旋覆花指纹图谱的特征性(如其
稳定的共有峰相对保留时间),有效地区分了所收集
的来源于日本旋覆花的样品和其他植物来源的样
品 ,对中药旋覆花的鉴别具有重要意义。
日本旋覆花 、欧亚旋覆花 、线叶旋覆花 、湖北旋
覆花和水朝阳旋覆花 ,这 5种植物花的 HPLC图谱
相互之间存在较大差别;而同一植物来源的不同样
品的HPLC 图谱基本一致 ,其差别明显小于不同植
物的样品 HPLC 图谱;鉴于几种旋覆花样品性状 、
显微特征及原植物形态较相近 ,故可以认为从化学
成分的角度进行区分应该是有效的途径 ,这也可从
化学分类上为旋覆花属这几种植物的分类提供佐
证 。
另外 ,本研究结果也提示 ,在制定指纹图谱的过
程中 ,对于多来源的中药材 ,应把不同植物分别进行
研究。
4.5　需要指出的是 ,在进行不同植物来源的旋覆花
HPLC图谱的比较时 ,应注意样品中的有些色谱峰
保留时间与旋覆花的峰非常接近 ,但通过紫外光谱
图的对照可发现并非同一物质。如欧亚旋覆花样品
HPLC图谱中有两个峰其保留时间与旋覆花指纹图
中 1 ,3号共有峰几乎相同 ,但其紫外光谱图与旋覆
花 1 , 3号峰差异明显;水朝阳旋覆花样品 HPLC 图
谱中有 1个峰其保留时间与旋覆花指纹图中 7号峰
几乎相同 ,但其紫外光谱图与旋覆花 7 号峰差异明
显 ,见图 4 。
以上情况说明进行指纹谱检测时 ,仅查对(比
图 4　不同植物花序相应保留时间位置上的色谱峰紫外光谱图的比较
1-日本旋覆花;2-欧亚旋覆花;3-水朝阳旋覆花
Fig 4　Comparison of the UV spectra of some peaks , w hich have almost same retention time in HPLC fingerprinters , of different I nu-
la species
1-I.japomica;2-I .brtannica;3-I.helianthus-aquat ica
较)色谱峰的保留时间是不够的 ,还应该校对峰的紫
外光谱图形是否一致 。
4.6　Inula japonica Thunb.的中文名 ,中国药典记
载为“旋覆花” ,为避免与中药名旋覆花混淆 ,笔者建
议改称“日本旋覆花” 。文中所提及的“日本旋覆花”
均为该植物。
参考文献
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(收稿日期:2002-06-06)
·899·中国药学杂志 2002年 12月第 37卷第 12期　　　　　　　　　　 Chin Pharm J , 2002 December , Vol.37 No.12