全 文 ：【论著】
野生牛肝菌保健功能研究
刘佳 ,高敏 ,吴克枫 ,阮海星 ,王雨 ,俞红　(贵州省疾病预防控制中心 ,贵州　贵阳　550004)
【摘　要】　目的　观察野生牛肝菌对昆明种小鼠免疫功能的影响和对 SD大鼠的降血脂作用。方法　(1)免
疫功能实验:实验设野生牛肝菌组 9.0g/(kgbw)+环磷酰胺(CP)、CP组 、正常对照组。 灌胃小鼠牛肝菌提取液
35 d, CP腹腔注射造成小鼠免疫损伤。观察小鼠胸腺脏器系数 、血清溶血素 、小鼠足趾 DTH、碳粒廓清指数 α等指
标。 (2)降血脂实验:设 3个野生牛肝菌剂量组 4.0、8.0、16.0 g/(kgbw)、阴性对照组和高脂模型对照组。各剂量
组大鼠灌胃牛肝菌提取液 30 d, 对照组灌胃等量蒸馏水 , 在试验结束时取大鼠血清测定 TG、CHO、LDH 3个指标。
结果　(1)免疫功能试验中免疫损伤的小鼠血清溶血素(HC50)、小鼠足趾 DTH、碳粒廓清指数 α明显高于 CP组 ,
差异有统计学意义(P<0.01), 其中小鼠足趾 DTH恢复至正常对照组水平。 (2)各剂量组的血脂指标与高脂对照
组差异无统计学意义(P>0.01)。结论　在本实验条件下 , 野生牛肝菌对 CP所致的免疫损伤小鼠细胞免疫 、体液
免疫 、非特异性免疫功能有明显改善作用 , 但不能预防大鼠的高脂血症。
【关键词】　野生牛肝菌;小鼠;SD大鼠;保健功能
〔中图分类号〕　R282.7　　〔文献标识码〕　A　　〔文章编号〕　1671-4199(2011)03-0224-03
StudyonHealthFunctionofNaturalBoletus
LIUJia, GAOMin, WUKe-feng, etal.GuizhouCenterforDiseaseControlandPrevention, GuiyangGuizhou550004,
China
【Abstract】Objective　TostudytheimmuneregulationofnaturalBoletusonthecyclophosphamide(CP)-induced
mouseimmuneinjuryandtheefectofthebloodlipidsreductionfunctionofSDratsofnaturalBoletus.Methods　(1)The
immuneregulationtests:Micewererandomlydividedintothreegroups:thenormalcontrol, 9g/kg.bwBoletus+ 50 mg/
kg.bwCP, and50mg/kg.bwCP.Theywereadministeredbyoralgavagefor35days, thenCPwasinjectedintotheirab-
dominalcavity, inducedtheirimmuneinjury.Therelativeimmuneindexessuchasclinicsymptom, organicindex, hemoly-
sin(HC50), footpaddelayedtypehypersensitivity(DTH), andα-indexofcarboncleartestwereobserved.(2)Theblood
lipidsreductionfunctiontests:Ratswererandomlydividedinto5 groups:3 testgroupsadministeredwithnaturalBoletus
(4.0 g/kg.bw, 8.0g/kg.bw, 16.0g/kg.bwrespectively), negativecontrolgroup, andpositivecontrolgroup.Theindi-
cesweredetectedincludingTG, CHOandLDH.Results　(1)Thymusindexofmice, HC50 inserum, delayedtypehyper-
sensitivity(DTH), andthecarbonclearanceindex(α)ofcarbonclearancetestinnaturalBoletus(9.0 g/kg.bw)+CP
groupsweresignificantlymorethanthatinpositivecontrolgroup(CP)(P<0.01).Thedelayedtypehypersensitivity
(DTH)haverestoredthenormaltestgrouplevel.(2)TherewerenosignificantdifferenceinTG, CHOandLDHbetween
thetestgroupsandpositivecontrolgroup.Conclusion　Inourlaboratory, theresultsdemonstratethatnaturalBoletushas
significantmeliorationinmousehumoral, celularandinnateimmuneinjuryinducedbyCP.Butthisstudyalsoshowsthat
naturalBoletusdoesnotprotecttheratsfromthehighbloodlipids.
【Keywords】　NaturalBoletus;Mouse;SDrats;Healthfunction
作者简介:刘佳 (1964-),女,贵州贵阳人 , 本科 ,主任技师 ,研究方
向:保健食品毒理学研究。
　　野生牛肝菌(Boletussp)又名大脚菇 ,于每年夏
秋季收成。子实体粘软多汁 ,香滑可口 ,盛产在云贵
高原。是人们喜食且产量较高的野生食用菌。蘑菇
类物质富含蛋白质 、维生素 、氨基酸和各种矿物元
素 〔1, 2〕 ,具有提高机体免疫能力 、抗辐射 、抗疲劳 、抗
突变 、抗肿瘤等功能 〔3-7〕。野生牛肝菌是贵州山区
的一种特产 ,富含氨基酸和多种矿物质 〔8, 9〕 ,作为一
种经济资源亟待开发 。本研究对野生牛肝菌进行保
健功能(免疫功能 、降血脂功能)的实验研究 ,旨在
为下一步研究野生牛肝菌的保健功能和开发利用提
供科学依据。
1　材料与方法
1.1　主要仪器和试剂 　全自动生化分析仪 ,型号
AMS-AUTOLAB18(意大利);甘油三酯(TG)、总胆
固醇(CHO)、高密度脂蛋白(LDH)试剂盒由中生北
控生物科技有限公司和浙江东瓯生物工程有限公司
提供;Hank s液 常规配制 pH7.2。
1.2　试验动物及饲料
·224· 中国卫生工程学 2011年 6月第 10卷第 3期　ChineseJournalofPublicHealthEngineeringJun.2011, Vol.10No.3
1.2.1　实验动物　雄性 SD大鼠 (体重 150 ～ 200
g)、雌性昆明种小鼠(18 ～ 22 g)、抽取制备绵羊红
细胞(SRBC)的绵羊及制备补体用的豚鼠均由贵阳
医学院实验动物中心提供 〔动物合格证号:SCXK
(黔)2002-0001〕。
1.2.2　动物饲料 　小鼠 、大鼠饲料为江苏生产的
《双狮牌 》全价灭菌饲料;高脂饲料的配制为:10%
猪油 、10%蛋黄粉 、1%胆固醇 、0.2%牛胆盐 、78.8%
基础饲料(《双狮牌》全价灭菌饲料)。其中胆固醇
和牛胆盐为分析纯。
1.2.3　动物饲养环境　贵州省疾病预防控制中心
SPF动物实验室 ,实验动物使用许可证:SYXK(黔)
2008-0012。
1.3　样品收集和处理　在贵阳市超市购买贵州里
海土特产食品有限公司出品的野生牛肝菌(干品)。
将牛肝菌干品置 50℃烘 2 h,粉碎;定量称取牛肝菌
粉 ,用蒸馏水浸泡 2h,加热煮沸;控制温度继续煮沸
30 min,冷却后用双层纱布挤压过滤。同法提取 3
次 ,合并滤液 , 80℃水浴浓缩 、定容备用。
1.4　试验方法
1.4.1　免疫功能的测定
1.4.1.1　动物分组与方法　用雌性小鼠 60只 ,在试
验环境中适应性喂养 3d后 ,据动物体重随机分为 3
组 ,每组动物 20只。设为①正常对照组;②野生牛肝
菌 9.0g/kgbw+环磷酰胺(CP)50 mg/kgbw组;③
CP50mg/kgbw组。每日 9∶00(AM)灌胃 1次。 ②
组灌胃野生牛肝菌提取物 , ①、③组灌胃等容积的蒸
馏水 ,连续 35d。②、③组在开始实验时 ,每天腹腔注
射 CP50 mg/kgbw,连续 7d;实验结束前 5 d, ②、③
组小鼠再腹腔注射 CP100mg/kgbw1次。
1.4.1.2　测定指标　①免疫器官脏体系数:试验结
束称体重后 ,处死小鼠 ,摘取胸腺 ,称重 ,计算脏体系
数(胸腺 /体重)。 ②碳粒廓清试验:试验结束时 ,小
鼠左内眦静脉丛注射 33%的印度墨水 20ml/kgbw,
于注射后 1 min、10 min分别从右内眦静脉丛取血
20 μl,放入 2%Na2CO3 2ml溶液中 ,测定两次的 OD
值 ,用吞噬指数 α(α代表小鼠碳廓清的能力)表
示 。α=体重 /(肝重 +脾重)×3 K, K=(lgOD1 -
lgOD2)/(t2-t1), t1、t2代表注射墨汁后的两次取血
时间。 ③血清抗 SRBC抗体测定(HC50):用 2%SR-
BC腹腔免疫小鼠 , 4日后 ,眼内眦静脉取血 ,分离血
清 ,测定血清抗体水平 , 以半数溶血值 HC50表示 ,
HC50 =样品光密度值 /SRBC半数溶血时的光密度
值 ×稀释倍数 。 ④迟发型变态反应(DTH):用 2%
SRBC腹腔免疫小鼠后第 4天 ,在其左后趾部皮内
注射 20%SRBC,注射后 24h测定足趾部厚度 ,以攻
击前后足趾厚度差值(mm)表示 。
1.4.2　降血脂试验的测定
1.4.2.1　动物剂量与分组　雄性 SD大鼠 50只 ,在
试验环境中适应性喂养 5 d后 ,取尾血测定 TC。根
据 TC水平随机分为 5组 ,每组 10只。设为阴性对
照组 、高脂模型对照组 、野生牛肝菌组:4.0、 8.0、
16.0 g/kgbw,每日 9∶00(AM)灌胃 ,各剂量组大鼠
灌胃野生牛肝菌提取液 ,对照组灌胃同体积的蒸馏
水。剂量组和高脂模型对照组动物自由进食高脂饲
料 ,阴性对照组自由进食基础饲料 。
1.4.2.2　测定指标　剂量组和对照组大鼠灌胃 30
d后 ,禁食 16 h,在第 31天大鼠股动脉放血分离血
清 ,分别测定 TG、CHO、LDH3个指标 。
1.5　统计分析　用 SPSS11.0软件进行统计学处理
数据 。
2　结果
2.1　免疫功能的测定试验结果　见表 1。
2.1.1　对小鼠胸腺重量的影响　胸腺指数(胸腺 /
体)是衡量机体免疫功能的指标之一。 CP组的胸腺
指数较正常对照组明显降低(P<0.01),在给 CP同
时给 9.0 g/kgbw野生牛肝菌提取液后 ,胸腺指数
与 CP组比较 ,未见明显改变。
2.1.2　对小鼠血清溶血素的影响　利用 SRBC免
疫小鼠后 ,产生抗 SRBC抗体(溶血体),与 SRBC一
起孵育 ,在补体参与下可发生溶血反应 ,通过测定血
红蛋白(Hb)含量反映血清溶血素的含量。本实验
以血清半数溶血值 HC50表示。小鼠在受 CP损伤
后 ,血清 HC50明显下降 (P<0.01)。但在同时给
9.0 g/kgbw的野生牛肝菌提取液后 , HC50非常显著
升高(P<0.01),但仍低于正常对照组(P<0.01)。
提示野生牛肝菌能增强免疫损伤小鼠的体液免疫功
能 ,但不能使之恢复至正常水平。
2.1.3　对小鼠迟发性变态反应(DTH)的影响　CP
模型组的迟发型变态反应足趾厚度差明显低于正常
对照组(P<0.01),而同时给 9.0 g/kgbw的野生牛
肝菌提取液组小鼠足趾厚度差值提高显著 (P<
0.01),且与正常对照组无差别(P>0.05)。这提示
野生牛肝菌能增强免疫损伤小鼠的细胞免疫功能 ,
并使之恢复到正常水平 。
2.1.4　对小鼠吞噬功能碳粒廓清指数的影响　碳
粒廓清指数表示在一定范围内 ,小鼠清除进入机体
碳粒的速率 ,是非特异性免疫功能的一个指标。 CP
模型组的碳粒廓清指数明显低于正常对照组(P<
0.01),同时给 9.0 g/kgbw的野生牛肝菌提取液组
可非常显著地提高小鼠的碳粒廓清速率 (P<
·225·中国卫生工程学 2011年 6月第 10卷第 3期　ChineseJournalofPublicHealthEngineeringJun.2011, Vol.10No.3
0.01),但仍明显低于正常对照组(P<0.01)。这提
示牛肝菌能明显改善免疫损伤小鼠的非特异免疫功
能 ,但不能使之恢复到正常 。
2.2　野生牛肝菌降血脂试验结果　表 2可见 ,高脂
对照组的 TG、CHO明显高于阴性对照组 , LDH明显
低于阴性对照组(P<0.01);各剂量组 TG、CHO、
LDH与高脂对照组比较 ,无显著性差异(P>0.05)。
表 1　各实验组小鼠的免疫指标(x±s, n=10)
组别 n HC50 DTH(24h, mm) α 胸腺 /体重(mg/g)
正常对照 10 250.66±34.84 0.51±0.16 6.21±0.65 3.00±0.40
牛肝菌 +CP 10 134.84±34.711)2) 0.62±0.192) 4.90±0.211)2) 1.68±0.331)
CP 10 66.53±28.741) 0.29±0.111) 3.05±0.541) 1.78±0.571)
　　注:1)与正常对照组比较 P<0.01;2)与 CP组比较 P<0.01。
表 2　野生牛肝菌对 SD大鼠血脂的影响(mmol/L, x±s)
组别 n TG CHO LDH
阴性对照 10 0.66±0.21 1.92±0.13 1.06±0.14
高脂对照 10 1.30±0.281) 2.83±0.551) 0.70±0.191)
牛肝菌 〗4.0 10 1.22±0.14 2.84±0.45 0.74±0.24
(g/kgbw) 8.0 10 1.21±0.19 2.86±0.60 0.64±0.17
16.0 10 1.23±0.16 2.76±0.68 0.69±0.16
　　注:1)与阴性对照组比较 P<0.01。
3　讨论
　　机体免疫系统包括体液免疫 、细胞免疫和非特
异性免疫。本研究中的实验指标:血清溶血素代表
体液免疫水平;迟发型变态反应代表细胞免疫水平;
脏器系数 、巨噬细胞系统吞噬功能代表非特异性免
疫水平 。CP是一种已知的免疫损伤药物 ,本实验小
鼠在开始实验时腹腔注射 CP50 mg/kgbw1 w;实
验结束前 5 d,再腹腔注射一次 CP100 mg/kgbw
后 ,小鼠的体液免疫 、细胞免疫和非特异性免疫功能
指标均比正常对照组明显降低(P<0.01),说明免
疫受损模型成功 。在机体免疫系统受损的同时给野
生牛肝菌提取液 9.0g/kgbw35 d后 ,血清溶血素 、
DTH、碳粒廓清指数较 CP组都有明显提高 ,其中
DTH恢复至正常水平 ,提示野生牛肝菌能增强小鼠
的免疫功能 ,尤其对小鼠的细胞免疫功能有较强的
保护作用。血清溶血素水平野生牛肝菌 +CP组明
显高于 CP组 ,但没有恢复至正常水平 ,这可能是因
为体液免疫功能对免疫损伤较敏感 ,它的恢复需要
B淋巴细胞分泌抗体能力的恢复才能体现 ,致使小
鼠体液免疫系统的免疫损伤恢复时间较长 。
　　此次预防性给野生牛肝菌降血脂试验结果表
明:高脂对照组 SD大鼠的 TG、CHO明显高于阴性
对照组 , LDH明显低于阴性对照组 ,说明高脂动物
模型的建立是成功的;但野生牛肝菌各剂量组的血
脂指标与高脂对照组无显著差异或明显的改善趋
势。文献报道香菇汁具有明显改善大鼠高脂血症的
作用 〔10〕 ,但本试验结果表明野生牛肝菌在此试验剂
量范围内 ,不能预防大鼠的高脂血症。
　　综上表明 ,野生牛肝菌对免疫功能受损小鼠有
一定的保护作用 ,但其具体的功效成分 、作用强度 、
以及剂量效应关系还有待进一步研究。在预防大鼠
高脂血症试验的研究中 ,未发现明显作用 ,是否与试
验剂量和试验时间有关 ,也有待进一步探讨 。
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〔收稿日期　2011-04-22〕
(编校　曲莉)
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