全 文 ：收稿日期:2008-06-22.
基金项目:湖北省科技厅科技计划资助项目(2006AA201C61).
作者简介:莫开菊(1965-),女(苗族),博士 ,教授 ,主要从事天然产物开发和食品加工的研究.
杨梅叶提取物抑菌作用研究
莫开菊 1, 2 ,秦恩华 2 ,王俊亮 2
(1.湖北省生物资源保护与利用重点实验室 ,湖北 恩施 445000;
2.湖北民族学院 生物科学与技术学院 ,湖北 恩施 445000)
摘要:为了拓展栽培杨梅的有效利用途径 , 采用测定菌悬液的吸光度值和抑菌圈试验 ,研究了杨梅叶水提取物
和 60%乙醇提取物的抑菌作用.结果说明:杨梅叶提取物对大肠杆菌(Escherichiacoli)、枯草芽孢杆菌(Bacillussub-
tilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、青霉(peniciliuncitrinum)、根霉(Rkizopusnigricans)、黑曲霉(Aspergil-
lusniger.)有抑制作用 ,其中 , 对金黄色葡萄球菌和黑曲霉的抑菌效果最显著.其乙醇提取物的抑菌作用较水提物
明显.表明杨梅叶有作为药品和天然食品杀菌剂开发的潜力.
关键词:杨梅叶;提取物;抑菌活性
中图分类号:TQ91 文献标识码:A 文章编号:1008-8423(2008)03-0269-04
StudyonAntimicrobialActivityofExtractfromMyricaRubraLeaves
MOKai-ju1, 2 , QINEn-hua2 , WANGJun-liang2
(1.KeyLaboratoryofBiologicalResourceProtectionandUtilizationofHubeiProvince, Enshi445000, China;
2.SchoolofBiologicalScienceandTechnology, HubeiUniversityforNationalities, Enshi445000, China)
Abstract:InordertoexpandtheefectiveuseofcultivationMyricarubra, theantibacterialactivityof
waterand60% ethanolextractfromMyricarubraleafwasstudiedwithtestingtheODofthemicro-bac-
terialsuspensionandtheantibacterialringinthispaper.TheresultsshowedthattheextractfromMyrica
rubraleafhasinhibitoryefectonEscherichiacoli, Bacilussubtilis, Staphylococcusaureus, peniciliuncit-
rinum, RkizopusnigricansandAspergilusniger.ThebestinhibitoryefectisontheStaphylococcusaureus
andRhizopusnigricans, soithasadevelopmentpotentialasdrugsandnaturalfoodmicrobicideswith
Myricarubraleaf.
Keywords:Myricarubraleaf;antimicrobialactivity;extract
杨梅(Myricarubra),属杨梅科 、杨梅属果树 ,多年生常绿乔木 ,是原产中国的亚热带果树.近些年来 ,我
国杨梅栽培迅速发展 ,现在长江流域以南均有栽培 ,主产浙江 、江苏 、福建 、江西 、湖南及广东.杨梅鲜果含丰
富的糖和果酸 ,并富含维生素 ,酸甜适口 ,风味独特 ,能生津止渴 ,助消化解暑热 [ 1] .果仁可榨油 ,果核中的黄
酮类成分具有抗氧化性能 [ 2] ;根为收敛剂 ,治下痢出血 ,跌打损伤及烫伤等 ,并富含单宁 [ 3, 4] ;叶含有黄酮类
化合物及酚类 ,可提取芳香油作食品 、化妆品及皂化香精的原料 [ 3] .且叶和果实是可以快速再生资源 ,是合
理利用的主要原料.目前以杨梅为材料的研究主要集中在杨梅的保鲜 、杨梅产品的开发以及杨梅中花色苷的
组分鉴定 、色泽稳定性以及抗氧化性等方面.对杨梅叶的研究主要基于杨梅生化成分研究 [ 3 ～ 6] ,陈蓉蓉等[ 7]
用矮杨梅叶水煎物作了抑菌试验 、沈建国等[ 8]用杨梅叶提取物进行了抗烟草花叶病毒的研究.为了拓展栽
培杨梅的有效利用途径 ,本文采用测定菌悬液的吸光度值和抑菌圈试验 ,研究了杨梅叶水提取物和 60%乙
第 26卷第 3期 湖北民族学院学报(自然科学版) Vol.26 No.3
2008年 9月 JournalofHubeiUniversityforNationalities(NaturalScienceEdition) Sep.2008
醇提取物的抑制细菌和霉菌的作用.
1 材料与方法
1.1 材料和仪器
1.1.1 杨梅叶提取物制备:杨梅叶 5月采自湖北民族学院果园 ,取两份 50g杨梅叶洗净晾干 ,用组织捣碎机
破碎 ,置于烧杯中分别加入 500mL60%乙醇和 500mL无菌水 ,常温超声 30min,浸泡 24h,待溶液颜色变为
黄棕色或棕色之后过滤.取全部滤液旋转蒸发除去乙醇浓缩至 20mL,用无菌水定容至 50mL,得到杨梅叶醇
提取液和水提取液原液 ,放冰箱中储藏备用.
1.1.2 供试菌种:大肠杆菌(Escherichiacoli)、枯草芽孢杆菌(Bacilussubtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococ-
cusaureus)、青霉(peniciliuncitrinum)、根霉(Rkizopusnigricans)、黑曲霉(Aspergilusniger.)由本院微生物实
验室提供.
1.1.3 主要仪器设备:DL6MBD大容量冷冻离心机(长沙科威实业有限公司), YXQ—LS30SI型立式压力
蒸汽灭菌器(上海博迅实业有限公司医疗设备厂), SW—CJ— 2F型双人双面净化工作台(苏州净化设备有限
公司), SHZ— 85D型恒温振荡器(金坛市富华仪器有限公司), SPX— 250B型生化培养箱(上海福玛实验设
备有限公司).
1.1.4 培养基的制备:细菌培养基牛肉膏蛋白胨固体培养基:牛肉膏 5g,蛋白胨 10g, NaCl5g,琼脂 15g,水
1 000mL调节 pH7.2 ～ 7.4.121℃下灭菌 15min备用.
细菌液体培养基(LB培养基):NaCl10g,蛋白胨 10g,酵母汁 5g,加水至 1 000mL,分装到 250ml三角瓶
中 ,每瓶 100ml, 121℃下灭菌 15min备用.
霉菌马铃薯培养基(PDA培养基):去皮马铃薯 200g,蔗糖(或葡萄糖)20g,琼脂 20g,水 1000ml.将马铃
薯去皮 ,切成小块 ,加水 1 000ml煮沸半小时 ,用双层纱布过滤 ,取其滤液加糖 ,加琼脂 ,并加水补足 1 000ml,
灭菌备用.
1.2 方法
1.2.1 测定杨梅叶提取物抑制细菌能力:采用梯度稀释法将原液稀释成 10-2 、10-3 、10-4、10-5 ,各取 25ml
分别加入到 100mlLB培养基中 ,对照加入 25ml无菌水 ,摇匀 ,然后各加入 10ml菌悬液 ,得到含不同浓度抑
菌物的菌悬培养液.各取 5ml菌悬培养液 3份 ,在 37℃摇床中培养 0、1.5、3、4.5、6、8、10、12、14、16、20h,用
UV-2100可见分光光度计测细菌培养液在 550nm处的 OD值.培养液 OD值与培养液内细菌繁殖速度呈正
相关 , OD值升高越快 ,表示培养液内细菌繁殖速度越快 [ 9] .
1.2.2 滤纸片扩散法鉴定杨梅叶提取物抑制细菌和霉菌的能力 [ 10] :预先将供试菌种用适应的固体斜面培
养基活化 ,然后每菌种分别挑取两环菌苔 ,用无菌水稀释 ,用血小板计数法计数 ,制成菌数为 109cfu/ml的菌
悬液 ,备用.
将前述固体培养基熔化后倒入培养皿中 ,每皿约 20ml,待冷却 、凝固后 ,用无菌吸管分别加入 0.2ml相
应的待试菌悬液 ,用无菌涂抹棒将菌液涂布均匀 ,制成含菌平板.
选择吸水性强的新华一号定性滤纸 ,用打孔器打成若干直径为 6mm的圆形滤纸片 ,分装于洁净干燥的
小培养皿内 , 50张 /皿 ,干热灭菌后 ,浸在提取液中 ,备用.用无菌镊子镊取浸有提取液的滤纸片贴在含菌平
板上 ,每只含菌平板上间隔一定距离贴 3片 ,并用浸有无菌水的滤纸片作对照.每菌种作 6次重复 ,放入培养
箱恒温倒置培养 ,细菌置 37℃培养 24h,真菌置于 28℃培养 48h,取出后测出滤纸片抑菌圈直径大小 ,取其平
均值 ,比较抑菌效果.
2 结果与分析
2.1 杨梅叶提取物抑制细菌能力测定结果
图 1 ～ 3为杨梅叶水提取物分别抑制大肠杆菌 、枯草芽孢杆菌 、金黄色葡萄球菌的生长曲线.图 4 ～ 6为
杨梅叶醇提取物分别抑制大肠杆菌 、枯草芽孢杆菌 、金黄色葡萄球菌的生长曲线.
从图 1 ～ 3可看出 ,各组均随时间增加 ,吸光度值增加较快.但是抑菌组比对照组增加慢 ,说明杨梅叶水
提取物对大肠杆菌 、枯草杆菌 、金黄色葡萄球菌有一定抑菌效果 ,尤其以百分之一的效果明显.
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湖北民族学院学报(自然科学版) 第 26卷
从图 4 ～ 6可以看出加了杨梅叶醇提取物的吸光度值都较对照的小 ,且随浓度增加 ,吸光度值越低 ,即
证明杨梅叶醇提取物对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌效果 ,且随浓度增加 ,抑
菌效果越强.
2.2 抑菌圈试验测定杨梅叶乙醇提取物的抑菌能力
比较杨梅叶水提物和醇提物的抑菌效果 ,可见后者的抑菌效果更显著.因此进一步做了抑菌圈试验进行
验证 ,并且增加了几种霉菌作为供试菌种.结果表明杨梅叶提取液对大肠杆菌 、金黄色葡萄球菌 、枯草芽孢杆
菌都有较好的抑制效果 ,对食品中常见的根霉 、青霉 、黑曲霉也有较好的抑制作用.但是对这些菌的抑菌效果
存在差异 ,尤其值得关注的是对金黄色葡萄球菌和根霉的显著抑制作用.
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第 3期 莫开菊等:杨梅叶提取物抑菌作用研究
表 1 杨梅叶提取物对供试菌的抑菌效果(n=6)
Tab.1 ThebacteriostaticefectoftheextractfromMyricarubraonthetestedmicrobacteria
供试菌 抑菌圈直径 /nm 供试菌 抑菌圈直径 /nm
大肠杆菌(Escherichiacoli) 7.6 枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis) 10.5
金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus) 12.5 青霉 (peniciliuncitrinum) 7.5
黑曲霉(Aspergilusniger.) 8.0 根霉(Rhizopusnigricans) 13.0
3 结论与讨论
3.1 杨梅叶提取物具有广谱的杀菌效果
杨梅叶的水提取物和 60%乙醇提取物对几种常见致病细菌均有一定的抑菌效果 ,而且乙醇提取物效果
更好.同时 60%乙醇提取物对几种常见的霉菌也有较好的抑菌效果.这说明杨梅叶中可能含有值得关注的
广谱天然杀菌成分 ,同时乙醇可能是适宜的提取溶剂.
3.2 不同种类杨梅叶提取物的杀菌谱存在差异
陈蓉蓉等[ 7]以大肠杆菌 、金黄色葡萄球菌 、霍乱弧菌 、福氏痢疾杆菌 、伤寒杆菌为试验菌种 ,研究了矮杨
梅叶水煎液的杀菌效果 ,发现仅对金黄色葡萄球菌有抑制作用 ,而且不同类型矮杨梅叶对细菌具选择性抑制
作用 ,不同类型矮杨梅叶对同一细菌抑菌能力不同.我们用栽培种杨梅叶作抑菌试验 ,提取物呈现出较宽的
抑菌谱.这再次证明 ,不同种类的杨梅叶对不同菌种有选择性的抑制作用 ,其杀菌成分可能存在差异.
3.3 杨梅叶提取物对金黄色葡萄球菌和根霉有显著抑制作用
实验证明杨梅叶抑菌效果很好 ,尤其是对金黄色葡萄球菌的抑制效果十分明显.这不仅可以用于食品的
抑菌 ,也可能开发成治疗药物.众所周知 ,金黄色葡萄球菌感染后 ,需要长时间 、大剂量 、多种抗生素交替使
用 ,才能彻底治愈.如果进一步研究 ,杨梅叶提取物对金黄色葡萄球菌有特效 ,这无疑是对人类的重要贡献 ,
值得深入研究.
根霉是许多作物采后真菌病害的病原菌也是许多食品霉变的主要菌种.杨梅叶显著的杀菌效果 ,可以进
一步作为天然食品杀菌剂加以开发.
参考文献:
[ 1] 李兴军 ,吕均良 ,李三玉.中国杨梅研究进展 [ J].四川农业大学学报 , 1999, 17(2):224-229.
[ 2] 邹耀洪.杨梅果核中油脂抗氧化成分研究 [ J] .林产化学与工业 , 1995, 12(2):13-17.
[ 3] 刘宁 ,李正芬 ,林铁 ,等.矮杨梅根皮 ,茎皮 ,叶蹂质含量的测定 [ J] .贵阳中医学院学报 , 1995, 17(4):64-67.
[ 4] 周志宏 ,杨崇仁.矮杨梅鲜叶的酚性化学成分 [ J].云南植物研究 , 2000, 22(2):219-224.
[ 5] 刘宁 ,李正芬 ,林铁 ,等.矮杨梅叶精油化学成分分析 [ J].贵州师范大学学报:自然科学版 , 1996, 14(2):1-4.
[ 6] 钟瑞敏 ,张振明 ,王羽梅 ,等.杨梅树叶 、皮 、根部精油成分及其抗氧化活性物质 [ J] .林产化学与工业 , 2006, 26(1):1-5.
[ 7] 陈蓉蓉 ,刘宁.贵州民族药杨梅叶抗菌作用的实验研究 [ J].贵州师范大学学报:自然科学版 , 1999, 17(3):30-32.
[ 8] 沈建国 ,谢荔岩 , 翟梅枝 ,等.杨梅叶提取物抗烟草花叶病毒活性及其化学成分初步研究 [ J] .福建农林大学学报:自然科学版 , 2004, 33
(4):441-443.
[ 9] 张雅利 ,梅建生 ,岳杰 ,等.柿提取物对枯草芽孢杆菌的抑制作用[ J] .食品工业科技 2007, 28(2):133-136.
[ 10] 莫开菊 ,张中利.竹叶提取物对微生物抑制作用研究 [ J] .湖北民族学院学报:自然科学版 , 2000, 18(4):16-18.
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湖北民族学院学报(自然科学版) 第 26卷