全 文 ：* 中捷国际合作:杨梅叶提取物的制备与应用研究(40－16)
＊＊ 通信作者 Tel:(0571)86835703;E－mail:zly@ cjlu． edu． cn
第一作者 Tel:(0571)86835703;E－mail:526301413@ qq． com
杨梅叶挥发油的季节变化规律及其药用价值分析*
吴俊清1，朱丽云1＊＊，尹洁2，杨君2，高永生1，张拥军1，
张春苗1，Lenka Langhansova3，Tomas Vanek3，楼纪东1
(1．中国计量学院海洋食品加工质量控制技术与仪器国家地方联合工程实验室，杭州 310018;
2．浙江中烟工业有限责任公司，杭州 310012;3．捷克科学研究院实验植物研究所，捷克 布拉格 999036)
摘要 目的:分析不同季节杨梅叶挥发油(Myrica rubra leaves volatile oils，MVO)的化学成分变化规律，探讨其抗癌抑菌等生物
活性及药用价值。方法:通过水蒸气蒸馏法提取挥发油，利用 GC－MS技术表征挥发油的季节差异性，并通过 MTT法分析对人
肺癌细胞 A549 增殖抑制作用，琼脂扩散法分析对 6 种细菌的抑菌活性。结果:春、夏、秋和冬四季杨梅叶挥发油提取得率为
每 100 g 0． 09 ～ 0． 13 mL，分别鉴定出 39、30、28 和 41 种成分，其中有 16 种萜烯、醇、醛、酮、酸和酯类物质存在于所有的叶片
中。β－石竹烯和 α－葎草烯是杨梅叶挥发油的主要成分，β－石竹烯含量的季节变化规律为冬季(43%)＞春季(28． 9%)＞秋季
(22． 9%)＞夏季(19． 02%)，α－葎草烯含量的季节变化规律为秋季(39． 8%)＞春季(31． 5%)＞冬季(26． 02%)＞夏季(25．
1%)。另外挥发油中含量超过 15%的成分有秋季挥发油中的 γ－雪松烯和夏季挥发油中的喇叭烯氧化物－(Ⅱ)，此 2 种成分
在不同的季节中含量变化差异显著，氧化石竹烯含量在春冬两季含量大于 4%，秋季未检出，除此以外其他成分含量均较低。
MTT实验结果表明，杨梅叶挥发油对细胞 A549 增殖的抑制随作用时间增加而增强，且冬季挥发油对肿瘤细胞具有较强的细
胞毒活性。抑菌实验表明杨梅叶挥发油对革兰氏阳性菌的抑制作用强于对革兰氏阴性菌，而冬季挥发油抑菌效果强于其他 3
个季节，对变形杆菌和沙门氏菌的抑制能力较弱。结论:杨梅叶挥发油具有抑菌、抗癌等药物开发前景，且在冬季杨梅叶挥发
油作用最为显著。
关键词:杨梅叶挥发油;气相色谱－质谱联用;β－石竹烯;α－葎草烯;γ－雪松烯;喇叭烯氧化物－(Ⅱ);肺癌细胞;MTT法;抑菌活
性;药用资源开发
中图分类号:Ｒ 917 文献标识码:A 文章编号:0254－1793(2015)07－1145－08
doi:10. 16155 / j. 0254－1793. 2015. 07. 04
Seasonal variations and pharmaceutical prospects of the
chemical compositions in volatile oils of Myrica rubra leaves*
WU Jun－qing1，ZHU Li－yun1＊＊，YIN Jie2，YANG Jun2，
GAO Yong－sheng1，ZHANG Yong－jun1，ZHANG Chun－miao1，
Lenka Langhansova3，Tomas Vanek3，LOU Ji－dong1
(1． National ＆ Local United Engineering Lab of Quality Controlling Technology and Instrumentation for Marine Food，China Jiliang University，
Hangzhou 310018，China;2． China Tobacco Zhejiang Industrial Co．，Ltd．，Hangzhou 310012，China;
3． Laboratory of Plant Biotechnologies，Institute of Experimental Botany，Czech Academy of Sciences，999036，Praha，Czech Ｒepublic)
Abstract Objective:To determine the variability of chemical compositions in volatile oils of Myrica rubra leaves
(MVO)collected over an annual cycle (spring，summer，autumn，and winter)，and evaluate the bacteriostatic ＆ an-
ticancer bioactivities and medicinal value．Methods:The volatile oils were extracted from leaves of Myrica rubra by
the steam distillation，and analyzed by GC－MS． Meanwhile，its inhibitory effects on the proliferation of human lung
cancer cell line A549 and growth of six kinds of bacteria (Staphylococcus aureus，Bacillus subtilis，and so on)were
—5411—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2015，35(7)
detected by MTT assay and agar diffusion method． Ｒesults:The extraction rate of MVO in spring，summer，autumn
and winter was in the range of 0． 09－0． 13 mL per 100 g． 39，30，28 and 41 volatile compounds of MVO were identi-
fied in samples of spring，summer，autumn and winter，respectively． Sixteen compounds of these including terpenes，
alcohols，aldehydes，ketones，acids and esters were found in all leave samples regardless of the season． Among all
seasonal volatiles，β－caryophyllene and α－humulene predominated in MVO． Specifically，the concentrations of β－
caryophyllene and α－humulene were in the following order from the highest to the lowest:winter (43%)＞ spring
(28． 9%)＞ autumn (22． 9%)＞ summer (19． 02%)，and autumn (39． 8%)＞ spring (31． 5%)＞ winter
(26． 02%)＞ summer (25． 1%) ，respectively． The contents of γ－cedrene and hornene oxide－(Ⅱ)were more
than 15% in both winter and summer MVO． However，caryophyllene oxide was only found in spring and winter
MVO，and its content was more than 4% ． Other components were all found in low levels． The results of MTT assay
showed that MVO displayed significant inhibitory effects on A549 cell proliferation with the increase of processing
time． Furthermore，the winter MVO exhibited strong anticancer and antibacterial effects． Conclusion:Myrica rubra
leaves volatile oils displayed remarkable application prospect as potential anticancer drugs and antimicrobial agents．
In addition，the performance of winter MVO is the most effective．
Keywords:Myrica rubra leaves volatile oils(MVO) ;GC－MS;β－caryophyllene;α－humulene;γ－cedrene;hornene
oxide－(Ⅱ) ;lung cancer cell;MTT test;antibacterial activity;medicinal resource development
杨梅(Myrica rubra Sieb． et Zucc．)是杨梅科多
年生常绿乔木，其果实作为药食两用的常见水果，具
有消食、御寒、消暑、止泻、利尿、治痢疾以及生津止
渴、清肠胃、除烦愤恶气等多种药用价值。而杨梅枝
叶在中国、日本等地常用作收敛剂、解毒剂和肠胃止
泻剂等传统中药成分［1］。近年来，杨梅叶提取物的
解毒止痛、其含有的黄酮类物质的抗肿瘤活性等研
究得到广泛的关注［2 － 3］，笔者所在研究团队前期研
究发现杨梅叶挥发油具有显著抑制肠系肿瘤细胞活
性和生长的作用［4］。因此，本论文采用 GC－MS 技
术，对不同季节获得的杨梅叶挥发油进行差异性分
析，并根据其活性成分含量的变化及抗癌抑菌实验
探讨杨梅叶收集与精油提取的最佳季节，为合理开
发杨梅植物资源，获取新的天然来源抗癌、抑菌药物
提供理论基础。
1 材料与方法
1． 1 实验材料
1． 1． 1 原料与细胞
东魁杨梅叶，采自浙江省台州市平桥镇，经中国计
量学院植物学教研室李素芳教授鉴定为东魁杨梅品
种，春夏秋冬四季杨梅叶标本号分别为 TD20130408、
TD20130727、TD20131009 和 TD20130117;人肺癌细胞
A549，购自上海生化与细胞所细胞库;金黄色葡萄球
菌、蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、变形杆
菌、沙门氏菌，均来自本实验室保藏菌种。
1． 1． 2 试剂材料
标准胎牛血清，购自上海慧人生物科技工程研
究所;二氯甲烷、无水硫酸钠、PBS缓冲液、二甲基亚
砜(DMSO)、3－(4，5－二甲基－2－噻唑)－2，5－苯基溴
化四唑(MTT)、DMEM 培养基、营养琼脂培养基等，
均购自杭州米克化工有限责任公司。
1． 1． 3 仪器与设备
Agilent 6890 /5973 气相色谱－质谱联用仪(美国
安捷伦)，DKU－250B 电热恒温油槽(浙江纳德科学
仪器有限公司)，挥发油提取仪(天宫玻璃仪器厂)，
BBD6220 二氧化碳培养箱(Thermo 公司)，KYZ－
1102 恒温气浴摇床(上海沪粤明科学仪器有限公
司)，Multiskan GO全波长酶标仪(Thermo公司)。
1． 2 实验方法
1． 2． 1 水蒸气蒸馏法提取杨梅叶挥发油
将新鲜杨梅叶阴干，粉碎，称取 600 g，按料水
1∶ 6装入 5 L 圆底蒸馏瓶中，连接挥发油提取器装
置，于油浴锅中 160 ℃回流提取 6 h，收集挥发油，加
无水硫酸钠脱水，记体积，换算每 100 g 杨梅叶中挥
发油含量。
1． 2． 2 GC－MS分析
夏秋季节杨梅叶挥发油色谱条件:HP－5 色谱
柱(30 m ×0． 25 mm × 0． 25 μm);氦气为载气，流速
1 mL·min －1;柱温 50 ℃保持 1 min，以 5 ℃·min －1
升温至 250 ℃，保持 2 min;气化室温度为 220 ℃;进
样量 1 μL，分流比 40∶ 1。春冬季节杨梅叶挥发油程
序升温条件为柱温 50 ℃保持 1 min，以 8 ℃·min －1
升温至 250 ℃，保持 2 min，其他条件同夏秋季节挥
发油的色谱条件。
—6411— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2015，35(7)
质谱条件:离子源为 EI 源，离子源温度为 200
℃;溶剂延迟 2 min，质量范围为 50 ～ 500 u。采用美
国 NIST98 数据库和挥发性成分的 GC－MS 定性谱
库对其进行定性定量分析。挥发油成分 GC 含量的
确定为面积归一化法。
1． 2． 3 杨梅叶挥发油的抗肿瘤活性分析
1． 2． 3． 1 肺癌细胞 A549 培养与铺板 将冻存的
肺癌细胞 A549 复苏，于 37 ℃、5%二氧化碳及饱和
湿度环境下培养。收集对数生长期的 A549 肿瘤细
胞，用血细胞计数板计算细胞数目，并将细胞浓度调
整为 3 000 个·mL －1接种于 96 孔板中，每孔体积为
90 μL，实验组加 200 μg·mL －1杨梅叶挥发油 10
μL，对照组加培养液 10 μL。
1． 2． 3． 2 MTT实验 在 24、48、72、96 h 4 个时间
点培养结束前 4 h，向每孔加入 10 μL(5 mg·mL －1)
MTT，培养 4 h后吸掉上层液体，向每孔加入 150 μL
DMSO溶解紫色结晶，用摇床振荡 10 min 使结晶物
充分溶解，用酶标仪检测各孔的吸光度(OD570 nm)
值。以抑制率 =(加药组 OD 值－对照组 OD 值)/对
照组 OD 值 × 100%计算杨梅叶挥发油对肺癌细胞
A549 的抑制率。
1． 2． 4 杨梅叶挥发油的抑菌活性分析
杨梅叶挥发油以 1∶ 10 用二甲基亚砜稀释，取直
径 6． 0 mm 的滤纸片浸于其中，备用。将金黄色葡
萄球菌、蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、沙
门氏菌和变形杆菌 6 种菌种转接于营养琼脂斜面进
行活化，将活化后菌株分别接种于营养肉汤中，37
℃培养 12 h 后，用无菌生理盐水稀释 100 倍，分别
取 200 μL稀释液涂布于营养琼脂培养基上，将浸透
杨梅叶挥发油的滤纸片贴于培养基上，37 ℃下培养
12 h，观察并测量抑菌圈直径，实验设 3 个平行。
2 结果与分析
2． 1 不同季节杨梅叶挥发油含量变化
从不同季节采集的杨梅叶提取的挥发油均为淡
黄色，带有浓郁的特有气味，春季(4 月)、夏季(7
月)、秋季(10 月)、冬季(1 月)含量测定结果分别为
每 100 g杨梅叶含挥发油 0． 09、0． 13、0． 12 和 0． 12
mL，4 个季节杨梅叶挥发油提取得率在每 100 g 0．
09 ～ 0． 13 mL范围内。测定结果表明以夏季样品中
挥发油含量最高，其次为秋、冬季样品，春季样品中
挥发油含量最低。
2． 2 不同季节杨梅叶挥发油的成分分析
将不同季节杨梅叶挥发油经 GC－MS 分析，主
要为萜类、倍半萜类化合物。从春季、夏季、秋季
和冬季杨梅叶挥发油中分别鉴定出 39、30、28 和
41 种成分，每种成分 GC 相对含量均高于 0． 02%，
被鉴定成分的含量分别占各自挥发油总量的 93．
135%、98． 456%、99． 675%和 99． 069%，其色谱－
质谱总离子流图见图 1－A、B、C、D。从图 1 中可以
看出秋季挥发油中与另 3 个季节差异较大，秋季
有 3 种成分占主导地位且种类较少，另 3 个季节挥
发油主导成分为 2 种且种类较多，各季节挥发油
成分的相对百分含量按峰面积归一化法计算得
到，结果见表 1。
—7411—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2015，35(7)
图 1 杨梅叶挥发油色谱－质谱总离子流图
Fig． 1 GC－MS total ion current of MVO
A．春季(spring) B．夏季(summer) C．秋季(autumn) D．冬季(winter)
—8411— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2015，35(7)
表 1 不同季节杨梅叶挥发油组分分析
Tab． 1 Chemical compositions of MVO in different seasons
序号
(No．)
化合物
(compound)
分子式
(formula)
含量(relative mass fraction)/%
春季(4 月)
［spring
(April)］
夏季(7 月)
［summer
(July)］
秋季(10 月)
［autumn
(October)］
冬季(1 月)
［winter
(January)］
1 愈创奥(guaiazulene) C15H18 0． 154 — — —
2 1，6－二甲基－4－异丙基萘(1，6－dimethyl－4－(1－methylethyl)－naphthalene) C15H18 — 0． 838 0． 067 —
3 α－二去氢菖蒲烯(α－calacorene) C15H20 0． 284 — — 0． 243
4 4，4－二甲基－3－(3－甲基丁－3－烯亚基)－2－亚甲基双环［4． 1． 0］庚烷(4，
4－dimethyl－3－(3－methylbut－3－enylidene)－2－methylenebicyclo［4． 1． 0］
heptane)
C15H22 — 10． 433 1． 696 —
5 去氢白菖烯(calamenene) C15H22 0． 661 — — 0． 582
6 β－朱栾(β－vatirenene) C15H22 — — 0． 803 —
7 α－荜澄茄油烯(α－cubebene) C15H24 0． 078 0． 027 0． 043 0． 133
8 衣兰烯(ylangene) C15H24 0． 25 — — 0． 276
9 α－玷王巴烯(α－copaene) C15H24 0． 392 0． 134 0． 11 0． 796
10 β－榄香烯((－)－β－elemene) C15H24 0． 263 — — —
11 (－)－异石竹烯((－)－isocaryophyllene) C15H24 0． 39 0． 024 0． 057 0． 649
12 α－古芸烯(α－curjunene) C15H24 0． 12 — — 0． 225
13 β－石竹烯(β－caryophyllene) C15H24 28． 903 19． 022 22． 919 43． 02
14 未鉴定(not identified) C15H24 0． 381 — — 0． 353
15 香橙烯(aromandendrene) C15H24 1． 234 0． 741 0． 445 1． 676
16 古芸烯(curjunene) C15H24 0． 443 — — 0． 102
17 葎草烯(humulene) C15H24 31． 527 25． 138 39． 776 26． 023
18 γ－衣兰油烯(γ－muurolene) C15H24 2． 463 1． 616 0． 997 2． 209
19 α－衣兰油烯(α－muurolene) C15H24 0． 406 0． 19 0． 182 0． 310
20 大牻牛儿烯 D(germacrene D) C15H24 0． 18 — — 0． 202
21 β－芹子烯(β－selinene) C15H24 4． 67 — — —
22 α－芹子烯(α－selinene) C15H24 5． 759 2． 409 2． 058 1． 877
23 α－法呢烯(α－farnesene) C15H24 1． 14 — — 0． 537
24 γ－杜松烯(γ－cadinene) C15H24 1． 084 1． 558 0． 543 1． 436
25 1，2，3，4，4a，7－六氢－1，6－二甲基－4－(1－甲基乙基)萘(1，2，3，4，4a，7－
hexahydro－1，6－dimethyl－4－(1－methylethyl)－naphthalene)
C15H24 0． 114 0． 087 0． 042 0． 115
26 δ－杜松烯(δ－cadinene) C15H24 2． 314 3． 027 1． 698 3． 07
27 α－杜松烯(α－cadinene) C15H24 0． 225 — — —
28 7－表－α－芹子烯(7－epi－α－selinene) C15H24 — 0． 018 0． 021 —
29 荒漠木烯(eremophilene) C15H24 — 1． 216 1． 094 1． 532
30 α－布藜烯(α－bulnesene) C15H24 — 0． 073 — —
31 γ－雪松烯(γ－himachalene) C15H24 0． 187 9． 758 15． 706 —
32 β－愈创木烯(β－Guaiene) C15H24 0． 372 2． 529 0． 817 0． 5
33 (－)－β －波旁烯((－)－β－bourbonene) C15H24 — — — 0． 035
34 β－杜松烯(β－cadinene) C15H24 — — — 0． 209
35 顺－1－亚乙烯基八氢－7a－甲基－1H－茚(cis－1－ethylideneoctahydro－7a－
methyl－1H－indene)
C15H24 — — — 0． 041
36 (+)－喇叭烯((+)－ledene) C15H24 0． 52 — — 0． 689
37 3，7－二甲基－(E，E)－2，4，6－辛二烯－1－醇(3，7－dimethyl－(E，E)－2，4，6－
octatrien－1－ol)
C10H16O — — 0． 024 —
—9411—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2015，35(7)
表 1(续)
序号
(No．)
化合物
(compound)
分子式
(formula)
含量(relative mass fraction)/%
春季(4 月)
［spring
(April)］
夏季(7 月)
［summer
(July)］
秋季(10 月)
［autumn
(October)］
冬季(1 月)
［winter
(January)］
38 (2 ，2，6－三甲基－二环［4． 1． 0］庚－1－基)－甲醇((2，2，6－Trimethyl－bicy-
clo［4． 1． 0］hept－1－yl)－methanol)
C11H20O — 0． 063 — —
39 十一烷酸(undecanoic acid) C11H22O2 — 0． 031 — —
40 顺式－1－亚乙基八氢－7a－甲基－1H－茚(cis－1－ethylideneoctahydro－7a－
methyl－1H－indene)
C12H20 — 0． 086 — —
41 (+)－匙叶桉油烯醇((+)－spaihulenol) C15H24O 0． 5 — 0． 156 0． 669
42 喇叭烯氧化物－(Ⅱ)(ledene oxide－(Ⅱ) ) C15H24O 0． 192 16． 695 9． 027 0． 156
43 石竹烯氧化物(caryophyllene oxide) C15H24O 5． 959 0． 095 — 4． 446
44 香橙烯氧化物－(2)(aromadendrene oxide－(2) ) C15H24O 1． 678 — — —
45 4，4－二甲基四环［6． 3． 2． 0(2，5)． 0(1，8)］十三烷－9－醇(4，4－dimethyl－
tetracyclo［6． 3． 2． 0(2，5)． 0(1，8)］tridecan－9－ol)
C15H24O 0． 543 — — 0． 771
46 反式－橙花叔醇((E)－3，7，11－trimethyl－1，6，10－dodecatrien－3－ol) C15H26O 1． 408 — — —
47 蓝桉醇(globulol) C15H26O 0． 793 — — 0． 113
48 表蓝桉醇(epiglobulol) C15H26O — — — 0． 098
49 β－桉叶醇(β－eudesmol) C15H26O — — — 1． 716
50 荜澄茄油烯醇(cubedol) C15H26O — — — 1． 39
51 α－菖蒲醇(α－acorenol) C15H26O 0． 406 — — —
52 τ－杜松醇(tau－cadinol) C15H26O 0． 415 — — 2． 225
53 香榧醇(nuciferol) C15H26O 0． 307 — — 0． 292
54 1－亚甲基－2b－羟甲基－3，3－二甲基－4b－(3－甲基丁－2－烯基)环己烷(1－
methylene－2b－hydroxymethyl－3，3－dimethyl－4b－(3－methylbut－2－enyl)－
cyclohexane)
C15H26O — 0． 107 0． 014 —
55 1β－(3－甲基－1，3－丁二烯基)－2α，6β－二甲基－3β－乙酰氧基－双环［4． 1．
0］庚烷－2－醇
(1β－(3－methyl－1，3－butadienyl)－2α，6β－dimethyl－3β－acetoxy－Bicyclo［4．
1． 0］heptan－2－ol)
C16H24O3 — 0． 214 — —
56 十四烷基环氧乙烷(tetradecyl－oxirane) C16H32O — 0． 026 — —
57 6，10，14－三甲基－2－十五烷酮(6，10，14－trimethyl－2 －pentadecanone) C18H36O 0． 087 1． 365 0． 039 0． 069
58 未鉴定(not identified) C20H30O2 — 0． 18 0． 074 —
59 3，7，11，15－四甲基－2－十六碳烯－1－醇(3，7，11，15－tetramethyl－2－hexade-
cen－1－ol)
C20H40O 1． 149 0． 756 0． 778 0． 598
60 草酸烯丙基十六烷酯(oxalic acid allyl hexadecyl ester) C21H38O4 — — 0． 032 —
61 25－甲基十七烷酸甲酯(25－methyl－heptacosanoic acid methyl ester) C29H58O2 — — 0． 02 —
4 个季节杨梅叶挥发油成分中共有组分 16 种，
其含量变化范围分别为 β －石竹烯(19． 02% ～
43． 02%)、α－葎草烯(25． 138% ～ 39． 776%)、α－芹
子烯(1． 877% ～ 5． 759%)、喇叭烯氧化物 －(Ⅱ)
(0． 192% ～16． 695%)、α－荜澄茄油烯(0． 027% ～
0． 133%)、α－玷王巴烯(0． 11% ～ 0． 796%)、(－)－异
石竹烯(0． 024% ～ 0． 649%)、香橙烯(0． 741% ～
1． 676%)、γ－衣兰油烯(0． 997% ～ 2． 463%)、α－衣
兰油烯(0． 182% ～ 0． 406%)、δ－杜松烯(1． 698% ～
3． 07%)、1，2，3，4a，7－六氢－1，6－二甲基－4－(1－甲
基乙基)萘(0． 042% ～ 0． 115%)、β －愈创木烯
(0． 372% ～ 2． 529%)、植酮(0． 039% ～ 1． 365%)、
植醇(0． 598% ～ 1． 149%)，体现了各组分相对含量
在不同季节上的显著差异性。其中 β－石竹烯与 α－
葎草烯含量最高，是精油中的重要组成成分。根据
表 2 统计 4 种杨梅叶精油特有组分，春季杨梅叶精
油中，特有组分有烯类 5 种(6． 99%)，醇类 2 种
(1． 814%);夏季杨梅叶精油中，特有组分有烯类 3
种(0． 185%)，醇类 2 种(0． 277%)，有机酸类 1 种
(0． 031%);秋季杨梅叶精油中特有组分有烯类 1
—0511— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2015，35(7)
种(0． 803%)，醇类 1 种(0． 024%)，酯类 2 种
(0． 052%);冬季杨梅叶精油中，特有组分有烯类 4
种(0． 638%)，醇类 3 种(1． 814%)。从以上数据可
得，春季精油中，特有的烯类含量较高，而酯类化合
物只出现在秋季精油中，冬季和春季精油中特有的
醇类含量较其他 2 个季节高。这些主要成分的含量
不同和特有组分的存在是造成不同季节杨梅叶精油
香气和药用价值不同的原因之一。
2． 3 MTT检测杨梅叶精油对人肺癌细胞 A549 的
作用
MTT可以与活细胞体内的琥珀酸脱氢酶结合形
成不溶性的蓝紫色甲瓒，在加入 DMSO后蓝紫色结晶
溶解。由于死细胞体内琥珀酸脱氢酶活性降低数量
减少，因此可以通过检测紫色结晶的数量多少检测出
细胞活性的大小，MTT实验结果如图 2所示。
图 2 不同季节杨梅叶挥发油对肺癌细胞 A549 增值的抑制作用
Fig． 2 The proliferation inhibitory effect on the lung cancer cell line
A549 of MVO from different seasons
从图 2中可知，不同季节杨梅叶挥发油(200 μg·
mL －1)对 A549 细胞增殖的抑制基本随时间的增加
而增强，在 48 h内 A549 细胞存活率下降迅速，之后
趋于缓和。4 个季节中秋冬季杨梅叶挥发油对
A549 细胞的增殖抑制作用显著高于春夏两季杨梅
叶挥发油，结果可能与秋冬挥发油中比春夏挥发油
具有更高含量的石竹烯和葎草烯等成分有关。
2． 4 琼脂扩散法测定杨梅叶挥发油的抑菌作用
通过琼脂扩散法，测得不同季节杨梅叶挥发油
对枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、
变形杆菌、沙门氏菌和大肠杆菌的抑菌结果如表 2，
从表中可看出，杨梅叶挥发油对革兰氏阳性菌的抑
制作用强于对革兰氏阴性菌，而冬季挥发油抑菌效
果强于其他 3 个季节，对变形杆菌和沙门氏菌的抑
制能力较弱。
3 讨论
3． 1 杨梅叶挥发油主要成分的活性与季节变化
春、夏、秋、冬 4 个季节的杨梅叶挥发油主要成
表 2 不同季节杨梅叶挥发油的抑菌作用
Tab． 2 The antibacterial effect of MVO in different seasons
细菌类别
(Bact． category)
抑菌圈直径(inhibition zone diameter)/mm
春季
(4 月)
［spring
(April)］
夏季
(7 月)
［summer
(July)］
秋季
(10 月)
［autumn
(October)］
冬季
(1 月)
［winter
(January)］
G + 枯草芽孢杆菌
(B． subtilis)
8． 5 ± 0． 3 9． 0 ± 0． 2 11． 0 ± 0． 3 12． 3 ± 0． 4
金黄色葡萄球菌
(Staphylococcus aureus)
10． 0 ± 0． 3 9． 5 ± 0． 2 11． 5 ± 0． 1 12． 0 ± 0． 2
蜡样芽孢杆菌
(B． cereus)
7． 5 ± 0． 1 7． 9 ± 0． 0 9． 3 ± 0． 0 9． 5 ± 0． 0
G － 变形杆菌
(P． vulgaris)
6． 5 ± 0． 0 7． 0 ± 0． 0 6． 5 ± 0． 1 8． 3 ± 0． 3
沙门氏菌
(S． typhimurium)
9． 5 ± 0． 0 7． 0 ± 0． 0 8． 9 ± 0． 1 10． 0 ± 0． 2
大肠杆菌
(E． coli)
9． 0 ± 0． 1 10． 0 ± 0． 1 9． 0 ± 0． 0 10． 5 ± 0． 0
分在组成及其含量上都有所不同，这可能是由于 4
个季节的温度、湿度和降水量等环境因素的不同造
成的。杨梅叶挥发油中含量最高的 2 种组分为同分
异构体的 β－石竹烯和 α－葎草烯，两者含量除夏季
仅为 43%以外，其他 3 个季节中均占杨梅叶挥发油
的 60%以上，冬季含量为 69%以上。β－石竹烯在杨
梅叶挥发油中冬季含量最高达到 43%，继而降低，
夏季达到最低，然后逐渐升高，其活性在国外研究较
多，主要集中在 β－石竹烯的抗焦虑［5］、抗菌［6 － 7］、抗
炎［8 － 10］和抗肿瘤［11 － 14］作用等 4 个方面。根据前人
研究的功效，利用主要成分为 β－石竹烯的杨梅叶精
油可考虑以冬季材料为佳。α－葎草烯在春秋两季
含量较高，而在炎热的夏季和寒冷的冬季其含量均
较低，在 25%左右。α－葎草烯对小鼠实验性气道过
敏性炎症的预防与治疗［15］和小鼠爪水肿炎症模
型［16］实验中均能有效抗炎。γ－雪松烯和喇叭烯氧
化物－(Ⅱ)，这 2 种成分的活性在国内外尚未见报
道。γ－雪松烯和喇叭烯氧化物－(Ⅱ)在不同季节中
变化显著，春季和冬季含量几乎为 0，而在夏秋两季
含量陡增，γ－雪松烯在夏季达到 16%以上，而喇叭
烯氧化物－(Ⅱ)在秋季达到 15%以上，由此可见，这
2 种成分的显著变化与季节温度可能存在较大的关
系。石竹烯氧化物在春冬两季含量明显较高，在
4． 4% ～5． 9%之间，而夏季含量极低，秋季未测出。
Park等人(2011)［17］报道了 β－石竹烯氧化物对人类
前列腺癌和乳腺癌细胞具显著的细胞增殖抑制和诱
—1511—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2015，35(7)
导凋亡的作用。
3． 2 杨梅叶挥发油的抗癌活性
富含 α－葎草烯、β－石竹烯、β－石竹烯氧化物的
植物挥发油抑制癌细胞生长的报道很多［18 － 19］。笔
者所在团队在研究杨梅叶挥发油(冬季获得)对人
结肠肿瘤细胞系的作用中［4］，发现杨梅叶挥发油在
0． 1 ～ 100 μg·mL －1浓度下均能显著抑制人结肠和
回盲肠腺细胞系非转移性 SW480 细胞、转移性衍生
SW620 细胞、大肠腺癌 HT29 细胞、上皮大肠腺癌
CACO2 和回盲部腺癌细胞系 HCT8 细胞等的增殖，
在不同细胞系中的活性强度各不相同，其中上皮大
肠腺癌 CACO2 细胞最敏感，在肿瘤细胞中，杨梅叶
挥发油促使引发剂活动，使半胱氨酸蛋白酶显著增
加，从而诱导细胞凋亡。为排除杨梅叶挥发油在正
常非癌细胞中潜在毒性，在大鼠肝细胞原代培养物
进行杨梅叶挥发油细胞毒性测试，结果发现杨梅叶
挥发油没有影响分离肝细胞(正常非癌细胞)的活
力，后期本团队开展杨梅叶挥发油对抗人肺癌细胞
A549 增殖的实验，发现在 100 ～ 250 μg·mL －1浓度
下杨梅叶挥发油对肺癌细胞 A549 具有较强的增殖
抑制活性，且存在时间和剂量依赖性。
根据本团队前期研究成果以及前人的报道，杨
梅叶精油具有潜在的抗癌、抑菌药物开发前景，且以
冬季收集杨梅叶精油为最佳时期。
参考文献
［1］ MATSUDA H，MOＲIKAWA T，TAO J，et al． Bioactive constitu-
ents of Chinese natural medicine． Ⅶ:inhibitors of degranulation
in ＲBL － 2H3 cells and absolute sterostructures of three new dia-
rylheptanoid glycosides from the bark of Myrica rubra［J］． Chem
Pharm Bull，2002，50(2):208
［2］ TONG Y，ZHOU XM，WANG SJ，et al． Analgesic activity ofmyr-
icetin isolated fromMyrica rubra Sieb． et Zucc leaves［J］． Arch
Pharm Ｒes，2009，32(4) :527
［3］ YANG LL，CHANG CC，CHEN LG，et al． Antitumor principle
constituentsof Myrica rubra Var． acuminata． J． Agr［J］． Food
Chem，2003，5:2974
［4］ LENKA L，VEＲONIKA H，JAN Ｒ，et al． Essential oil from Myrica
rubra leaves inhibits cancer cell proliferation and induces apopto-
sis in several human intestinal lines［J］． Ind Crops Product，
2014，59:20
［5］ GALDINO PM，NASCIMENTO MVM，FLOＲENTINO IF，et al．
The anxiolytic－like effect of an essential oil derived from Spiran-
thera odoratissima A． St． Hil． leaves and its major component，β－
caryophyllene，in male mice［J］． Prog Neuro－ Psychopharmacol
Biol Psychiatry，2012，38(2) :276
［6］ BABY S，MATHEW D，JOHN A，et al． Nediyamparambu Suku-
maran Pradeep c，Ｒenju Krishna Valsamma c，Varughese George．
Caryophyllene－rich rhizome oil of Zingiber nimmonii from South
India:Chemical characterization and antimicrobial activity［J］．
Phytochemistry，2006，67(22) :2469
［7］ HUANG MS，SANCHEZ－MOＲEIＲAS AM，ABEL C，et al． The
major volatile organic compound emitted from Arabidopsis thali-
ana flowers，the sesquiterpene (E)－β－caryophyllene，is a defense
against a bacterial pathogen［J］． New Phytol，2012，193(4) :997
［8］ MEDEIＲOS Ｒ，PASSOS GF，VITOＲ CE，et al． Effect of two ac-
tive compounds obtained from the essential oil of Cordia verbena-
cea on the acute inflammatory responses elicited by LPS in the rat
paw［J］． Br J Pharmacol，2007，151(5) :618
［9］ AL－ＲEZA SM，YOON JI，KIM HJ，et al． Anti－inflammatory ac-
tivity of seed essential oil from Zizyphus jujuba［J］． Food Chem
Toxicol，2010，48(2) :639
［10］ BENTO AF，MAＲCON Ｒ，DUTＲA ＲC，et al． β－caryophyllene in-
hibits dextran sulfate sodium－induced colitis in mice through CB2
receptor activation and PPAＲγ pathway［J］． Am J Pathol，2011，
178(3) :1153
［11］ AMIEL E，OFIＲ Ｒ，DUDAI N，et al． β－ caryophyllene，a com-
pound isolated from the biblical balm of gilead (Commiphora
gileadensis) ，Is a selective apoptosis inducer for tumor cell lines
［J］． Evid Based Complement Alternat Med，2012:872394． doi:
10． 1155 /2012 /872394
［12］ GHELAＲDINI C，GALEOTTI N，DI CESAＲE MANNELLI L，et
al． Local anaesthetic activity of β－caryophyllene［J］，Farmaco，
2001，56(5－7) :387
［13］ KUBO I，CHAUDHUＲI SK，KUBO Y，et al． Cytotoxic and antiox-
idative sesquiterpenoids from Heterotheca nuloides［J］． Planta
Med，1996，62(5) :427
［14］ GEＲTSCH J，LEONTI M，ＲADUNEＲ S，et al． Beta － caryo-
phyllene is a dietary cannabinoid［J］． Proc Natl Acad Sci U S A，
2008，105(26) :9099
［15］ ＲOGEＲIO AP，ANDＲADE EL，LEITE DFP，et al． Preventive and
therapeutic anti－inflammatory properties of the sesquiterpene α－
humulene in experimental airways allergic inflammation［J］． Br J
Pharmacol，2009，158(4) :1074
［16］ FEＲNANDES ES，PASSOS GF，MEDEIＲOS Ｒ，et al． Anti－ in-
flammatory effects of compounds alpha－humulene and (－)－trans
－caryophyllene isolated from the essential oil of Cordia verbenacea
［J］． Eur J Pharmacol，2007，569(3) :228
［17］ PAＲK KＲ，NAM D，YUN HM，et al． Beta－caryophyllene oxide
inhibits growth and induces apoptosis through the suppression of
PI3K /AKT /mTOＲ /S6K1 pathways and ＲOS－mediated MAPKs
activation［J］． Cancer Lett，2011，312(2) :178
［18］ NOUDOGBESSI JP，DELOＲT L，CHALAＲD P，et al． Antiprolif-
erative activity of four aromaticplants of Benin［J］． J Nat Prod，
2013，76(6) :123
［19］ KEAWSAAＲD S，KONGTAWEELEＲT S． Antioxidant，antibacterial，
anticancer activities and chemical constituents of the essential oil
from Mesua ferrea leaves［J］． Chiang Mai J Sci，2012，39(3):455
(本文于 2014 年 10 月 27 日收到)
—2511— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2015，35(7)