全 文 ：收稿日期:2008-06-02;　修订日期:2008-10-17
基金项目:赣南医学院人才引进科研项目(No.2006069);
赣南医学院人才引进科研项目(No.2006064)
作者简介:李加林(1971-),男(汉族),安徽和县人 ,现任赣南医学院药学
院讲师 ,硕士学位 ,主要从事药用植物资源及活性成分研究工作.
盐肤木总黄酮提取工艺研究
李加林 1 ,吴素珍2 ,卑占宇 1
(1.赣南医学院 ·药学院 ,江西 赣州　341000;　2.赣南医学院 ·基础医学院 ,江西 赣州　341000)
摘要:目的 探讨盐肤木总黄酮最佳微波提取工艺。方法 通过正交实验探讨了提取温度 、提取时间 、料液比及乙醇浓度
对盐肤木总黄酮提取率的影响。结果 提取时间为 10 min, 温度为 60℃,料液比为 1∶60,乙醇浓度为 70%时提取效率最
佳。 4因素对总黄酮提取率的影响顺序为乙醇浓度﹥提取温度﹥料液比﹥提取时间。结论 在最佳条件下总黄酮提取率
达到 6.65%。
关键词:盐肤木;　总黄酮;　正交实验
中图分类号:R284.2　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2009)05-1116-01
　　盐肤木 RhuschinensisM.为漆树科盐肤木属植物 , 入药首见
于《本草拾遗》, 植物全体均可入药 , 有祛风化湿 、消肿软坚 、收敛
解毒 、生津润肺 、降火化痰等功效。目前临床上大多用盐肤木根
的水煎剂 , 用于治疗冠心病 、心绞痛 、胸闷 、憋气 、肺脓疡 、小儿久
泻等 , 显效率高 ,副作用少 [ 1] , 但盐肤木中黄酮类化合物的研究
还较少。
微波是一种高频电磁波 , 具有很强的热效应。近年来 , 微波
用于天然成分的提取 , 具有选择性强 、操作时间短 、溶剂耗量小 、
目标组分得率高且能极大限度地保留分离组分的天然活性等优
点 [ 2, 3] 。本实验以盐肤木为原料 , 探讨用微波法从盐肤木中提取
总黄酮的最佳工艺 , 期望为盐肤木的开发利用提供基础依据。
1 　器材与方法
1.1　材料与设备 WF-4000微波快速反应系统(上海屹尧分析
仪器有限公司);UV1900PPC紫外可见分光光度计(上海亚研电
子科技有限公司);电子天平(北京赛多利斯天平仪器厂);芦丁
标准品(成都曼思特生物科技有限公司);NaNO2 、A1(NO3)3、
NaOH、无水乙醇均为分析纯。盐肤木采自赣州市水东镇。
1.2 　方法
1.2.1　标准方程的建立 精密称取干燥恒重的芦丁标准品 10
mg,加 95%乙醇溶解 ,定容至 50 ml容量瓶中 , 摇匀 , 得 0.2 g/L
的标准液 , 分别取 0, 0.2, 0.5, 1, 2, 3, 4 ml标准液于 10 ml容量瓶
中 , 加 5%NaNO
2
溶液 0.4 ml, 放置 6min后 ,加 5%Al(NO
3
)
3
0.4
ml, 放置 6min,加 4%NaOH溶液 4 ml, 用蒸馏水定容至刻度 ,摇
匀 , 进行全波长扫描 ,在 510 nm处有最大光吸收。以吸光度为 Y
轴 , 芦丁浓度为 X轴 , 作标准曲线得方程:Y=5.371 06X+
0.007 88, R=0.999 16。
1.2.2　总黄酮的提取 准确称取盐肤木干燥粉末 5 g置于微波
反应釜中 , 微波功率为 700 W, 按正交表的设计条件进行微波提
取后 , 提取液 4 000 r/min离心 , 将离心后的上清液浓缩 , 浓缩液
定容至 50 ml, 从 50 ml中取 1 ml至 50 ml的容量瓶中 , 加 5%
NaNO2溶液 0.4 ml, 放置 6 min后 ,加 5%Al(NO3)3 0.4 ml,放置
6 min,加 4%NaOH溶液 4 ml, 用蒸馏水定容至刻度摇匀静置 15
min,于 510nm波长处测定吸收度 ,按标准方程求得总黄酮的提
取率。总黄酮得率(%)=(黄酮类化合物质量 /干物料质量)×
100%。
1.2.3　微波提取工艺的正交设计 对影响盐肤木总黄酮微波提
取率的主要因素微波提取温度 、时间 、乙醇浓度以及料液比以
L
9
(34)正交表进行实验设计 , 正交实验中因素与水平设计见表
1。以盐肤木中总黄酮的提取率作为评价的标准。
表 1　微波提取因素水平
水平 A温度 T/℃ B时间t/min C料液比 g∶ml D乙醇浓度(%)
1 40 5 1∶20 30
2 60 10 1∶40 50
3 80 15 1∶60 70
2 　结果
2.1　正交实验结果 极差越大 ,因素影响越大。由表 2可知 , 影
响提取效果的各因素主次顺序为:D>A>C >B, 即:乙醇浓
度 >提取温度 >料液比 >提取时间。结果表明 , 提取工艺的最
佳工艺条件为:A2B2C3D3 , 即:提取温度 60℃,提取时间 10 min,
料液比为 1∶60(g/ml), 乙醇浓度 70%。
2.2 　正交实验数据方差分析结果 方差分析结果见表 3。由表
3可知乙醇浓度对总黄酮提取率的影响显著。
表 2　正交实验测定结果
实验
号
A
提取温度 T/℃ B提取时间t/min C料液比 g∶ml D乙醇浓度(%)
提取率
(%)
1 1 1 1 1 3.05
2 1 2 2 2 3.25
3 1 3 3 3 5.86
4 2 1 2 3 6.34
5 2 2 3 1 5.62
6 2 3 1 2 4.28
7 3 1 3 2 4.56
8 3 2 1 3 6.12
9 3 3 2 1 3.25k1 4.053 4.650 4.483 3.973
k2 5.413 4.997 4.280 4.030
k3 4.643 4.463 5.347 6.107R 1.360 0.534 1.067 2.134
表 3　方差分析结果
因素 平方和 自由度 均方 F值 F临界值 显著性
A 2.791 2 1.396 6.358 19.000B 0.439 2 0.220 1.000 19.000
C 1.924 2 0.962 4.383 19.000
D 8.867 2 4.434 20.198 19.000 ＊
误差 0.44 2
　　a=0.05
3 　结论
微波辅助提取技术是近年来发展起来的一种新方法 ,具有选
择性好 、快速 、高效 、安全 、节能等优点 [ 4] 。本文首次报道了微波
辅助技术在盐肤木总黄酮提取中的应用 , 通过正交实验 , 优选了
盐肤木总黄酮的提取工艺 ,正交实验结果的直观分析表明盐肤木
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 5期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.5
总黄酮最佳微波提取工艺条件为温度为 60℃, 提取时间为 10
min,料液比为 1∶60, 乙醇浓度为 70%。 4种因素对总黄酮提取
率的影响顺序为乙醇浓度﹥提取温度﹥料液比﹥提取时间 ,在该
最佳微波提取工艺条件下 ,总黄酮含量达到 6.65%。
参考文献:
[ 1] 　江苏新医学院.中药大辞典 [ M].上海:上海人民出版社 , 1997:
1817.
[ 2] 　YueME, JiangTF, ShiYP.FastdeterminationofflavonoidsinHip-
pophaerhamnoidesanditsmedicinalpreparationbycapilaryzoneelec-
trophoresisusingdimethyl- 13 -eyclodextrinasmodifier[ J] .Ta-
lanta, 2004:62695.
[ 3 ] 　许晓菁 ,闻建平 ,毛国柱 ,等.微波协助萃取技术在现代中草药生产
中的应用 [ J] .中草药 , 2002, 33(12):1141.
[ 4 ] 　刘　俊 ,黄少伟 ,张越非 ,等.微波辅助提取土茯苓总黄酮 [ J].中药
材 , 2007, 30(12):1595.
收稿日期:2008-04-30;　修订日期:2008-12-10
基金项目:江西省教育厅科技计划项目(赣教技字 [ 2006] 48)
作者简介:余淑娴(1958-),女(汉族),江西九江人 ,现任南昌大学教授 ,学
士学位 ,主要从事药提取分离及化学热力学方向研究工作.
正交优选连翘中齐墩果酸的提取工艺
余淑娴 ,熊世权
(南昌大学 ,江西 南昌　330031)
摘要:目的 优选连翘中齐墩果酸的提取工艺。方法 以齐墩果酸含量为指标 ,采用 L9(34)正交设计实验 , 考察了提取时
间 、乙醇浓度 、料液比对提取率的影响 , 优选出合理的提取工艺。用高效液相测定齐墩果酸的含量。结果 优选出齐墩果
酸的最佳提取工艺条件是:超声提取 3次 , 40 min/次 , 90%乙醇溶液 , 料液比 1∶12。结论 采用此工艺提取方法快速 、简
单 , 可以为进一步研究连翘提供参考。
关键词:正交实验;　齐墩果酸;　连翘
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)05-1117-02
OptimizationoftheExtractionProcessofOleanolicAcidfromFructusForsythiaebyOr-
thogonalDesign
YUShu-xian, XIONGShi-quan
(DepartmentofChemistry, NanchangUniversity, Nanchang, Jiangxi330031China)
Abstract:ObjectiveTooptimizetheextractionconditionofoleanolicacidfromFructusForsythiae.MethodsWitholeanolic
acidasindex, extractiontime、concentrationofalcoholandamountofalcoholandwereevaluatedbyL9(34)orthogonaldesignmethod.HPLCwasusedtoanalyzethecontentofoleanolicacid.ResultsTheoptimumextractionconditionwasdescribedasfol-
low:ultrasonicextraction3 times(once40min), 90% ethanolsolution, and12-foldsolvent.ConclusionTheoptimizedtechnol-
ogyisquickandsimple, andcanbeusedfortheoreticalbasic.
Keywords:Orthogonaldesign;　Oleanolicacid;　FructusForsythiae
　　中药连翘是木犀科连翘属植物的干燥果实 ,主产山西 、河南 、
陕西 , 有广谱的抗菌作用 ,如对金黄色葡萄球菌 、溶血性链球菌 、
肺炎双球菌 、绿脓杆菌等有不同程度的抑制作用 ,有镇吐 、解热 、
抗炎以及保肝作用 , 含有连翘苷 、牛蒡子苷 、齐墩果酸等 [ 1] 。齐
墩果酸具有降低谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性 、促进细胞再
生 、防止肝硬化 、抗炎等作用 , 是治疗肝炎的有效成分。近年有关
研究证明其有抗癌活性。
《中国药典》[ 2]对连翘中的连翘苷进行了测定;孙国祥等 [ 3]
对连翘的 HPLC指纹图谱进行了研究;张杲等 [ 4]对不同采收期连
翘进行了 HPLC指纹图谱研究;邹盛勤 [ 5]对不同采收期连翘中的
熊果酸和齐墩果酸含量进行了测定;张涛等 [ 6]对连翘不同炮制
品中连翘苷进行了 HPLC测定。
本工艺以齐墩果酸的含量作为考察指标 ,采用单因素实验设
计与正交实验设计相结合 , 用 HPLC测定 , 优选连翘中齐墩果酸
的提取工艺 , 以期为进一步研究连翘奠定基础。
1　仪器与试药
1.1 　仪器 日本 Hitach公司高效液相色谱仪;L-2400型紫外
检测器;GoldSpectrumlab54紫外可见分光光度计(上海棱光技
术有限公司);KQ2200E型超声仪(昆山市超声仪器有限公司);
PH-030干培两用箱(上海一恒科技有限公司);RE- 52AA型
旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);Sartorius十万分之一电子
天平(德国)。
1.2　试药 药材连翘购自江西省药材公司(产地山西),经江西
医学院冯江教授鉴定为正品连翘;齐墩果酸对照品由中国药品生
物制品检验所提供;甲醇为色谱纯 , 超纯水;其他试剂均为分析
纯。
2　方法与结果
2.1 　色谱条件 KromasilC18柱(250 mm×4.6 mm, 5μm);流动
相为甲醇 -水 -0.1%冰醋酸(92∶8∶0.1, V/V/V);柱温:30℃;
流速 1 mL/min;检测波长 215 nm。
2.2 　检测波长的确定 取对照品溶液 , 经紫外分光光度计在
200 ～ 500 nm范围内扫描得知 ,对照品溶液在 203, 207, 210 nm等
处有吸收 ,但由于流动相在短波长处有末端吸收 , 为了减少干扰 ,
因此选择最大的 215 nm作为测定含量的吸收波长。
2.3　对照品溶液的制备 取对照品 105℃恒温干燥至恒重 ,精密
称取 10.3 mg齐墩果酸对照品 , 置 10 ml容量瓶中 , 用流动相溶
解 , 超声 5 min,定容至 10ml, 得到 1.03 mg/ml的对照品溶液。
2.4　标准曲线和线性范围的考察 依次精密吸取对照品溶液
0.1, 0.5, 2, 3, 4 ml后 ,置 10ml容量瓶中 ,再加 10 ml流动相溶解
稀释 , 分别取 10 μl进样 3次 , 记录峰面积 , 以峰面积值(Y)对齐
墩果酸的浓度(X)进行线性回归 ,得回归方程为 Y=3 980 023X
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.5 时珍国医国药 2009年第 20卷第 5期