全 文 ：食用菌学报２０１１．１８（４）：７８～８１
收稿日期：２０１１－０５－１２原稿；２０１１－０８－０７修改稿
基金项目：教育部科学技术研究重点项目（编号：２０９１１８）、云南省自然科学基金项目（编号：２００７Ｃ０８３Ｍ、
２００８ＣＤ１２８）的部分研究内容
作者简介：李　涛（１９７６－），男，２００８年毕业于云南农业大学农学与生物技术学院，硕士，副教授，主要从事食用菌
教学与研究工作。
＊本文通讯作者　Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｏｎｇｇａｏｌｉｕ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
文章编号：１００５－９８７３（２０１１）０４－００７８－０４
ＩＣ法快速测定皱盖疣柄牛肝菌中５种阴离子含量
李　涛１，王元忠２，袁天军２，３，刘鸿高４＊
（１玉溪师范学院，云南玉溪６５３１００；２云南省农业科学院药用植物研究所，云南昆明６５０２２３；
３云南民族大学化学与生物技术学院，云南昆明６５００３１；４云南农业大学，云南昆明６５０２０１）
摘　要：利用超声波（ＵＡＥ）辅助提取－离子色谱（ＩＣ）法检测皱盖疣柄牛肝菌（Ｌｅｃｃｉｎｕｍ　ｒｕｇｏｓｉｃｅｐｓ）中Ｆ－、
Ｃｌ－、ＮＯ－２ 、ＮＯ－３ 、ＰＯ３－４ ５种阴离子。采用ＮａＯＨ溶液（３．０ｍｍｏｌ／Ｌ）超声渗提３０ｍｉｎ后进样１００μＬ，通过流
速为１．２ｍＬ／ｍｉｎ的淋洗液 Ｎａ２ＣＯ３＋ ＮａＨＣＯ３（３．５ｍｍｏｌ／Ｌ＋１．０ｍｍｏｌ／Ｌ）洗脱。结果表明，Ｆ－、Ｃｌ－、
ＮＯ－２ 、ＮＯ－３ 、ＰＯ３－４ ５种离子线性范围分别为２～２５、２～２０、２～１００、１０～５５、１０～１００ｍｇ／Ｌ，峰面积ＲＳＤ分别为
０．５８％、１．２７％、０．７３％、０．９２％、２．３３％，检出限在０．０９７６～１．０９８４ｍｇ／Ｌ之间，加标回收率在８７．５０％～
１１０％之间。皱盖疣柄牛肝菌样品中未检出ＮＯ－２ 。该方法简单快捷、精密度好、准确度高，可用于测定皱盖疣
柄牛肝菌中５种阴离子含量。
关键词：皱盖疣柄牛肝菌；离子色谱；阴离子
　　食品中阴离子含量的测定对于营养指标的
评价及产品质量的控制非常重要［１］。其中，氟是
牙齿及骨骼不可缺少的成分，少量氟可以促进牙
齿珐琅质对细菌酸性腐蚀的抵抗力，防止龋齿；
但若长期摄取过量的氟，会引起慢性疾病，轻则
表现为氟斑牙等症，重则导致氟骨症等疾病［２，３］。
氯在食品中是一种较常见的元素，含量的高低直
接与钠离子含量有关，对机体酸碱平衡起着调节
作用，对中枢神经系统具有重要的生理作用，但
吸收过量的氯离子对人体会产生一系列不良反
应［４］。磷是人体骨骼形成中必不可少的元素，它
与钙、镁离子的比例直接影响骨骼形成，过多吸
收磷元素会导致骨骼硬化［５］。硝酸盐在动物体
内被还原为亚硝酸盐，直接使动物缺氧中毒，引
起高铁血红蛋白症，也可间接与次级胺结合形成
强致癌物质亚硝胺，诱发动物的消化道系统癌
变［６，７］。我国２００１年已对无公害蔬菜中亚硝酸
盐和硝酸盐等含量作了限量标准［８］，但目前对于
食用菌阴离子的限量标准尚未见报道。
皱盖疣柄牛肝菌（Ｌｅｃｃｉｎｕｍ　ｒｕｇｏｓｉｃｅｐｓ）又名
虎皮牛肝菌，隶属于牛肝菌科（Ｂｏｌｅｔａｌｅｓ）、疣柄牛
肝菌属（Ｌｅｃｃｉｎｕｍ）［９］，是一种丛生的大型食、药
两用菌根菌类，具有很好的应用前景和开发价
值。常发生于夏秋季杂木林中地上，我国主要分
布在广西、云南、四川和西藏地区［１０］，其外形美
观、肉质细腻，口感鲜美，是广受人们喜爱的珍稀
食用菌。因生长习性和生长环境差异很大，对其
各阴离子含量的测定，不仅可以帮助对其品质进
行评价，而且可为食用安全提供依据。
１　材料与试剂
１．１ 材料
　　野生子实体样品采自普洱市安嘎寨，经云南
农业大学张振富教授鉴定为皱盖疣柄牛肝菌（Ｌ．
ｒｕｇｏｓｉｃｅｐｓ）。
１．２ 仪器及试剂
　　ＷＫ－Ⅱ型离子色谱仪（江苏江分电分析仪
器有限公司）配有自动再生抑制电导检测器、
ＣＤＭＣ－２１Ｖ３．０色谱工作站、阴离子交换柱；
ＹＳＢ－２型往复平流泵（中科院上海原子核研究
所实验工厂）；ＳＹ３２００－Ｔ型超声波清洗机（上海
声源超声仪器设备有限公司）；ＴＧＬ－１６Ｂ型高
DOI:10.16488/j.cnki.1005-9873.2011.04.026
第４期 李　涛，等：ＩＣ法快速测定皱盖疣柄牛肝菌中５种阴离子含量
速离心机（上海安亭科学仪器厂）。
ＮａＦ、ＮａＣｌ、ＮａＮＯ２、ＮａＮＯ３、ＮａＨ２ ＰＯ４、
ＮａＯＨ、Ｎａ２ＣＯ３、ＮａＨＣＯ３（天津市风船化学科技
有限公司）均为分析纯，所用溶剂均为电阻率
１８．２５ΩＭｃｍ的去离子水。
１．３ 色谱条件
　　色谱柱为ＰＡＣＫＩＮＧ　ＮＪ－ＳＡ－４Ａ（２５０ｍｍ×
４．６ｍｍ），淋洗液为Ｎａ２ＣＯ３－ＮａＨＣＯ３（３．５０～
１．００ｍｍｏｌ，流速为０．１～１０ｍＬ／ｍｉｎ），柱温为
３０℃，电导检测器量程为１．０×１０４μＳ，进样体积
为１００μＬ，柱压＜５　ＭＰａ。
１．４ 标准储备液制备
　　精密称取１２０℃下干燥至恒重的ＮａＦ、ＮａＣｌ、
ＮａＮＯ２、ＮａＮＯ３、ＮａＨ２ＰＯ４标准样品分别配制成
１０００ｍｇ／Ｌ的Ｆ－、Ｃｌ－、ＮＯ－２ 、ＮＯ－３ 、ＰＯ３－４ 的标准
储备液；ＮａＯＨ配制为０．３０ｍｏｌ／Ｌ的标准储备液，
使用时按需要配制成不同浓度的混合液。
精密称取１２０℃下干燥至恒重的 Ｎａ２ＣＯ３
２５．４４ｇ 和 ＮａＨＣＯ３２５．２０ｇ 配制成浓度为
０．３５ｍｏｌ／Ｌ和 ０．１０ ｍｏｌ／Ｌ 的 淋 洗 液 储 备
液１０００ｍＬ。
１．５ 样品液制备
　　皱盖疣柄牛肝菌（Ｌ．ｒｕｇｏｓｉｃｅｐｓ）子实体样
品于６０℃烘干、粉碎、过１００目筛，准确称取２份
０．５０００ｇ粉末样品，加至装有５０ｍＬ的 ＮａＯＨ
（３．０ｍｍｏｌ／Ｌ）的１００ｍＬ容量瓶中，超声提取
３０ｍｉｎ，离心２０ｍｉｎ，取其上清部分５ｍＬ 于
５０ｍＬ容量瓶中定容，过０．４５μｍ微孔滤膜过滤，
滤液备用。
２　方法与结果
２．１ 线性关系、精密度和检出限
　　混合１．４的标准溶液使Ｆ－∶Ｃｌ－∶ＮＯ－２∶ＰＯ３－４ ∶
ＮＯ－３ 浓度比为（１．５∶２．０∶２０．０∶３０．０∶１０．０）的系列，
上样进行色谱分析（７次重复），以峰面积Ｓ为纵坐
标（Ｙ）、浓度Ｃｍ为横坐标（Ｘ）作标准曲线，得各离
子线性回归方程；不同重复数据计算精密度
（ＲＳＤ％）；将标准混合溶液逐渐稀释至ＲＳＮ＝３时，
调高仪器灵敏度，以所测得的各离子峰高与噪音峰
高计算检出限。结果见表１。
表１　线性范围和精密度
Ｔａｂｌｅ　１　Ｌｉｎｅａｒｉｔｙ　ｒａｎｇｅ　ａｎｄ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｌｉｍｉｔｓ
阴离子
Ａｎｉｏｎ
检出限
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｌｉｍｉｔ（μｇ／Ｌ）
线性方程
Ｌｉｎｅａｒ　ｅｑｕａｔｉｏｎ
相关系数
Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ
线性范围
Ｌｉｎｅａｒｉｔｙ　ｒａｎｇｅ（ｍｇ／Ｌ）
ＲＳＤ
（％）
Ｆ－ ９７．６　 Ｙ＝７．２２６８ｘ－７．７３１８ Ｒ２＝０．９９１６　 ２～２５　 ０．８５
Ｃｌ－ １３６．５　 Ｙ＝５．２０１６ｘ＋６．０２９６ Ｒ２＝０．９９５０　 ２～２０　 １．２７
ＮＯ－２ １０９８．４　 Ｙ＝３．３１３３ｘ－４．７８５７ Ｒ２＝０．９９６１　 ２～１００　 ０．７３
ＰＯ３－４ １４１．５　 Ｙ＝３．２３８８ｘ－１３．２４５ Ｒ２＝０．９９５２　 １０～５５　 ０．９２
ＮＯ－３ ５０７．６　 Ｙ＝１．３４９３ｘ＋７４．６１１ Ｒ２＝０．９９５０　 １０～１００　 ２．３３
２．２ 准确性
　　１３次平行色谱结果如图１所示，可见各离子
分离效果较好，各离子峰面积相对标准偏差ＲＳＤ
＜２．５０％，准确性较高。
２．３ 回收率实验
　　将皱盖疣柄牛肝菌样品加入标准混合系列溶
液，按上述色谱条件平行测定６次，除ＮＯ－２ 离子
未测出外，各离子加标回收率如表２所示。
结果表明，Ｆ－、Ｃｌ－、ＮＯ－２ 、ＮＯ－３ 、ＰＯ３－４ 等离
子加 标 回 收 率 分 别 为 １０８．３０％、１０６．３０％、
８７．５０％、９６．４７％、１０１．４８％，样品中 ＮＯ－２ 未检
出，测定结果较为准确。
Ｔｒａｃｅｓ　ｓｈｏｗｎ　ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ　ｔｈｅ　ｄａｔａ　ｆｒｏｍ　１３ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｓ
图１　Ｆ－、Ｃｌ－、ＮＯ－２ 、ＰＯ３－４ 、ＮＯ－３ ５种离子准确性
Ｆｉｇ．１　Ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ａｎｉｏｎ（Ｆ－、Ｃｌ－、ＮＯ－２ 、ＰＯ３－４ 、
ＮＯ－３ ）ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
９７
食　用　菌　学　报 第１８卷
表２　加标回收率
Ｔａｂｌｅ　２　Ａｎｉｏｎ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅｓ
阴离子
Ａｎｉｏｎ
子实体含量
＊Ｂａｓａｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
（ｍｇ／Ｌ）
加标量
Ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ　ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ　ａｎｉｏｎ
ａｄｄｅｄ（ｍｇ／Ｌ）
加标后测定值
Ｔｏｔａｌ　ａｎｉｏｎ　ｒｅｃｏｖｅｒｅｄ
（ｍｇ／Ｌ）
回收率
Ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ
（％）
ＲＳＤ
（％）
Ｆ－ ２０．２４５　 １．２　 ２１．５４５　 １０８．３０　 ２．５７
Ｃｌ－ １１．７０８　 １．４　 １３．１９７　 １０６．３０　 １．８８
ＮＯ－２ ０．０００　 ２．４　 ２．１００　 ８７．５０　 １．４２
ＰＯ３－４ １２．５０６　 ３．５　 １５．８８３　 ９６．４７　 ２．５４
ＮＯ－３ ３４３．７６８　 ５０．０　 ３９４．５１０　 １０１．４８　 １．９６
数据为六次实验的平均值
＊Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｉｏｎ　ｉｎ　ｍｕｓｈｒｏｏｍ　ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｙ；ｖａｌｕｅｓ　ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ　ｔｈｅ　ｍｅａｎｓ　ｏｆ　ｓｉｘ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｓ
２．４ 供试样品测定
　　供试样品按同样色谱条件检测，平行测定６
次，见图２，求其峰面积的平均值，以各离子峰面
积对样品质量浓度进行回归测定。
（１：Ｆ－；２：Ｃｌ－；３：ＮＯ－２ ；４：ＰＯ３－４ ；５：ＮＯ－３ ；ａ－标准品；ｂ－样品）
ａ：ｓｔａｎｄａｒｄ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ；ｂ：Ｌ．ｒｕｇｏｓｉｃｅｐｓ
图２　Ｆ－、Ｃｌ－、ＮＯ－２ 、ＰＯ３－４ 、ＮＯ－３ 离子色谱图
Ｆｉｇ．２　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｐｒｏｆｉｌｅｓ　ｏｆ　ａ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｉｏｎ
ｓｔａｎｄａｒｄｓ　ａｎｄ　ａｎ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　ａ　Ｌ．ｒｕｇｏｓｉｃｅｐｓ　ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｙ
　　结果表明，皱盖疣柄牛肝菌样品各离子含量
ＮＯ－３ ＞ＰＯ３－４ ＞Ｆ－＞Ｃｌ－，供试样品皱盖疣柄牛
肝菌中除ＮＯ－２ 离子含量未检测出外，其余Ｆ－、
Ｃｌ－、ＰＯ３－４ 、ＮＯ－３ ４ 种 离 子 平 均 含 量 分 别 为
０．９３６、０．３１９、３．４５１、７．９０３ｍｇ／ｇ。
３　讨论
　　采用ＮａＯＨ（３．０ｍｍｏｌ·Ｌ－１）为浸提液，超
声波辅助提取，离子色谱检测皱盖疣柄牛肝菌中
Ｆ－、Ｃｌ－、ＮＯ－２ 、ＰＯ３－４ 、ＮＯ－３ ５种离子含量。除
ＮＯ－２ 未检出外，其余Ｆ－、Ｃｌ－、ＮＯ－３ 、ＰＯ３－４ ４种离
子平 均 含 量 分 别 为 ０．９３６、０．３１９、３．４５１、
７．９０３ｍｇ／ｇ。５ 种 离 子 加 标 回 收 率 分 别 为
１０８．３０％、１０６．３０％、８７．５０％、９６．４７％、１０１．４８％，
测定结果令人满意。
测定结果与我国制定的无公害蔬菜中亚硝
酸盐和硝酸盐等含量标准限量中［３］叶菜类亚硝
酸盐≤４．０ｍｇ／ｋｇ、硝酸盐≤３０００ｍｇ／ｋｇ相比，
皱盖 疣 柄 牛 肝 菌 食 用 菌 中 ＮＯ－３ 含 量 为
７９０３ｍｇ／ｋｇ，稍微偏高；ＮＯ－２ 含量未检测出。许
多药理研究表明ＮＯ－２ 离子对人体具有强致癌作
用，而ＮＯ－３ 离子对人体几乎没有副作用［１１］，皱盖
疣柄牛肝菌经过烘干处理后不含ＮＯ－２ ，可能对人
体没有此类的毒性作用。按此条件进行离子色
谱检测对其它食用菌的同类检测具有指导意义。
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Ｆｒｕｉｔ　Ｂｏｄｉｅｓ　ＵｓｉｎｇＩｏｎ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
ＬＩ　Ｔａｏ１，ＷＡＮＧ　Ｙｕａｎｚｈｏｎｇ２，ＹＵＡＮ　Ｔｉａｎｊｕｎ２，３，ＬＩＵ　Ｈｏｎｇｇａｏ４＊
（１　Ｙｕｘｉ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙｕｘｉ，Ｙｕｎｎａｎ　６５３１００，Ｃｈｉｎａ；２Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｐｌａｎｔｓ，Ｙｕｎｎａｎ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｋｕｎｍｉｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ　６５０２２３，Ｃｈｉｎａ；３　Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｙｕｎｎａｎ　Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ　６５００３１，Ｃｈｉｎａ；４　Ｙｕｎｎａｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ　６５０２０１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｆｉｖｅ　ａｎｉｏｎｓ（Ｆ－，Ｃｌ－，ＮＯ－２ ，ＮＯ－３ ，ａｎｄ　ＰＯ３－４ ）ｉｎ　Ｌｅｃｃｉｎｕｍ　ｒｕｇｏｓｉｃｅｐｓ　ｆｒｕｉｔ
ｂｏｄｉｅｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ－ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ（ＵＡＥ）ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　ｉｏｎ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
（ＩＣ）．Ｍｉｎｉｍｕｍ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｌｉｍｉｔｓ　ｗｅｒｅ　９７．６，１３６．５，１０９８．４，１４１．５ａｎｄ　５０７．６μｇ／Ｌ　ｆｏｒ　Ｆ
－，Ｃｌ－，ＮＯ－２ ，
ＰＯ３－４ ａｎｄ　ＮＯ－３ ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ａｎｄ　ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅｓ　ｆｏｒ　Ｆ－，Ｃｌ－，ＮＯ－２ ，ＮＯ－３ ，ａｎｄ　ＰＯ３－４ ｗｅｒｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｏｖｅｒ　ｔｈｅ
ｒａｎｇｅｓ　２～２５，２～２０，２～１００，１０～５５ａｎｄ　１０～１００ｍｇ／Ｌ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｄｅｖｉａｔｉｏｎｓ
（ＲＳＤ）ｏｆ　ｔｈｅ　Ｆ－，Ｃｌ－，ＮＯ－２ ，ＮＯ－３ ａｎｄ　ＰＯ３－４ ｐｅａｋ　ａｒｅａｓ　ｗｅｒｅ　０．５８％，１．２７％，０．７３％，０．９２％ ａｎｄ
２．２３％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｆｉｖｅ　ａｎｉｏｎｓ　ｒａｎｇｅｄ　ｂｅｔｗｅｅｎ　８７．５０％ ～１１０％ ａｌｔｈｏｕｇｈ　ｎｏ
ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ　ＮＯ２－ ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｌ．ｒｕｇｏｓｉｃｅｐｓ　ｓａｍｐｌｅ．Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ　ｄｅｓｃｒｉｂｅｄ　ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ　ａ
ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ，ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ａｎｉｏｎｓ　ｉｎ
Ｌ．ｒｕｇｏｓｉｃｅｐｓｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｉｅｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｌｅｃｃｉｎｕｍ　ｒｕｇｏｓｉｃｅｐｓ，ｉｏｎ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ａｎｉｏｎ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
［本文编辑］　曹　晖
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