全 文 ：文章编号:1001 － 4829(2013)05 － 1984 － 04
收稿日期:2012 － 08 － 03
基金项目:云南省应用基础研究(2008CD193);国家自然科学基
金资助项目 (31060271);农业科技成果转化资金项目
(2011GB2F300004);西双版纳州科技局项目
作者简介:伍 英(1964 －)，女，高级工程师，主要从事食品加工
及微生物研究，E-mail:ljxsbn@ yahoo． com． cn，* 为通讯作者。
有益细菌及放线菌复合对暗褐
网柄牛肝菌子实体生长的影响
伍 英，刘 静，曹 旸，何明霞，张春霞，王文兵，纪开萍*
(云南省热带作物科学研究所，云南 景洪 666100)
摘 要:将已报道的 3 株细菌 C1、T24、T34，8 株放线菌 14、36、T21、34、9、C20、T5、21 以及引进的 4 株细菌 1A03263、1A01082、
1A00081、1B00263 选用 L16(215)正交试验设计进行复合，添加到覆土中，研究其对暗褐网柄牛肝菌菌丝及子实体生长的影响。
结果表明，处理 2 由菌株 1A00081、T21、1B00263、34、9、C20、T5、21 复合、处理 3 由菌株 C1、14、36、T24、9、C20、T5、21 复合、处理 7
由菌株 T34、1A01082、C1、14、1B00263、34、9、C20 复合对暗褐网柄牛肝菌菌丝的生长有显著的促进作用;处理 15 由菌株 1A03263、
T34、C1、T24、T21、1B00263、9、21 复合对暗褐网柄牛肝菌子实体的生长有极显著的促进作用，是复合菌的最佳组合。
关键词:暗褐网柄牛肝菌;覆土;细菌;放线菌
中图分类号:S567． 3 + 9 文献标识码:A
Effect of Adding Compound Strains of Bacteria and Actinomycetes
on Fruit Body Growth of Phlebopus portentosus
WU Ying，LIU Jing，CAO Yang，HE Ming-xia，ZHANG Chun-xia，WANG Wen-bing，JI Kai-ping*
(Yunnan Tropical Crops Ｒesearch Institute，Yunnan Jinghong 666100，China)
Abstract:Three reported bacterial strains C1，T24 and T34，eight actinomycetes 14，36，T21，34，9，C20，T5 and 21 and four introduced
bacterial strains 1A03263，1A01082，1A00081，1B00263 were mixed by orthogonal test design L16(215)and added to the casing soil． The
effect of the combination of bacteria and actinomycetes on mycelia and fruit body growth of Phlebopus portentosus was researched． The results
showed that the combination of 1A00081，T21，1B00263，34，9，C20，T5 and 21，the combination of C1，14，36，T24，9，C20，T5 and
21，and the combination of T34，1A01082，C1，14，1B00263，34，9 and C20 played an important role in promoting the growth of mycelia．
The combination of 1A03263，T34，C1，T24，T21，1B00263，9 and 21 had a significant positive effect on fruit body growth，which was the
best combination of bacteria and actinomycetes．
Key words:Phlebopus portentosus;Casing soil;Bacteria;Actinomycetes
暗褐网柄牛肝菌［Phlebopus portentosus (Berk．
＆ Broome)Boedijn］，又名巨型牛肝菌，属于牛肝
菌目小牛肝菌科脉柄牛肝菌属［1］，其在国外主要分
布于斯里兰卡、越南、印度尼西亚、泰国、巴西、墨西
哥、澳大利亚，新西兰等热带地区，在国内广西、海
南、云南也有分布［2 ～ 8］。在云南省西双版纳州，每
年 7 ～ 9 月的雨季暗褐网柄牛肝菌是农贸市场上常
见的一种肝褐色食用菌，其味道鲜美，深受当地消
费者的青睐。暗褐网柄牛肝菌营养价值丰富，富含
蛋白质和钾、钙、镁、铁、锌等多种人体所需的矿质元
素。作为重要的食用真菌，覆土是人工栽培过程中
的必要环节，也是子实体形成的必要条件。曹旸
等［9］的研究表明，暗褐网柄牛肝菌瓶栽条件下出菇
必须经过覆土，覆土中的微生物能抵抗外界微生物
的污染，并对暗褐网柄牛肝菌子实体的形成有促进
作用。刘静等［10］的研究表明，经液体发酵和平板
试验筛选出的 3 株细菌 C1、T34、T24，对暗褐网柄
牛肝菌的菌丝生长有促进作用。不同微生物对蘑菇
子实体生长的作用不一样，一些微生物可能存在某
些特殊物质(微生物菌体或代谢产物)，这些物质可
能是蘑菇生长发育必需的营养物质或是激素物质，
对蘑菇生长有好处。单一微生物对蘑菇影响的研究
较多。Ahlawat［11］的研究表明，巨大芽孢杆菌 Bacil-
4891
西 南 农 业 学 报
Southwest China Journal of Agricultural Sciences
2013 年 26 卷 5 期
Vol. 26 No. 5
lus megaterium、粪产碱杆菌 Alcaligenes faecalis、环状
假单孢杆菌 Bacillus circulans、恶臭假单孢菌 Pseudo-
monas putida 对双孢菇［Agaricus bisporus (J． E．
Lange)Imbach］生长有促进作用。Hayes et al．［12］报
道从覆土层中分离出臭味假单孢杆菌(Pseudomonas
putida)并在洋菜培养基上诱导出了双孢蘑菇子实
体，认为臭味假单孢杆菌在其子实体发生过程中起
着重要作用;Ｒainey［13］研究认为，臭味假单孢杆菌
(Pseudomonas putida)能促进双孢蘑菇菌丝体生长
的速度;杜爱玲等［14］研究认为链霉菌属、固氮菌
属、芽孢杆菌属和假单孢菌属对蘑菇菌丝体生长有
促进作用。刘静等［15］筛选到 1 株细菌菌株 T34(芽
孢杆菌属 Bacillus sp．)对暗褐网柄牛肝菌菌丝及子
实体的生长均有显著的促进作用。
以上报道的均是研究单菌株对蘑菇生长的影
响，复合菌对暗褐网柄牛肝菌菌丝及子实体生长影
响的研究未见报道。因此文章结合前面的研究，进
一步研究复合菌对暗褐网柄牛肝菌菌丝及子实体生
长的影响。本研究将已报道的有益细菌 C1、T24、
T34，放线菌 14、36、T21、34、9、C20、T5、21 及引进菌
株 1A03263、1A01082、1A00081、1B00263 选用 L16
(215)正交试验设计复合，添加到覆土中，研究对暗
褐网柄牛肝菌菌丝、子实体生长的影响，以期筛选
出对暗褐网柄牛肝菌菌丝、子实体生长有促进作用
的复合菌的最佳组合。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 供试菌株 暗褐网柄牛肝菌菌种:菌株编
号为 B-01-3-1，由云南省热带作物科学研究所植物
保护与微生物利用研究室提供。
细菌菌株:C1 为短杆菌属(Brevibacterium)、
T34 为芽孢杆菌属(Bacillus)、T24 菌株(其种属关系
还有待进一步确定)，刘静等［14］的研究已报道，由
云南省热带作物科学研究所植物保护与微生物利用
研究室提供。巨大芽孢杆菌 Bacillus megaterium(编
号:1B00263)，粪产碱杆菌 Alcaligenes faecalis(编
号:1A0081)，环状假单孢杆菌 Bacillus circulans(编
号:1A03263)，恶臭假单孢菌 Pseudomonas putida
(编号:1A01082)，Ahlawat［15］的研究已报道，由中
国海洋微生物菌种保藏管理中心提供。
放线菌菌株:14、36、T21、34、9、C20、T5、21 均
从覆土材料中分离筛选得到，其中 14 为游动放线
菌属，其余均为链霉菌属，由云南省热带作物科学
研究所植物保护与微生物利用研究室提供。
1． 1． 2 培养基 基础培养基:去皮马铃薯 200． 0
g /L，葡萄糖 20． 0 g /L，酵母膏 1． 0 g /L，KH2PO4 1．
0 g /L，MgSO4 ． 7H2O 1． 0 g /L，pH自然。
1． 2 方法
细菌菌株、放线菌活化培养后，将各活化菌株
表 1 L16(2
15)正交试验设计表
Table 1 Orthogonal test design L16(215)
处理 Treatments A B C D E F G H I J K L M N O
1(CK) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 2 2
3 1 1 1 2 2 2 2 1 1 1 1 2 2 2 2
4 1 1 1 2 2 2 2 2 2 2 2 1 1 1 1
5 1 2 2 1 1 2 2 1 1 2 2 1 1 2 2
6 1 2 2 1 1 2 2 2 2 1 1 2 2 1 1
7 1 2 2 2 2 1 1 1 1 2 2 2 2 1 1
8 1 2 2 2 2 1 1 2 2 1 1 1 1 2 2
9 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2
10 2 1 2 1 2 1 2 2 1 2 1 2 1 2 1
11 2 1 2 2 1 2 1 1 2 1 2 2 1 2 1
12 2 1 2 2 1 2 1 2 1 2 1 1 2 1 2
13 2 2 1 1 2 2 1 1 2 2 1 1 2 2 1
14 2 2 1 1 2 2 1 2 1 1 2 2 1 1 2
15 2 2 1 2 1 1 2 1 2 2 1 2 1 1 2
16 2 2 1 2 1 1 2 2 1 1 2 1 2 2 1
注:表中处理 1 为空白对照，处理 2 ～ 16 为不同单菌的复合处理，如:处理 2 为 H、I、J、K、L、M、N、O单菌的复合。
Note:Treatment 1 is blank control． Treatment 2 to 16 are compound strains of including different bacteria and actinomycetes，such as treatment 2 is
compound of H，I，J，K，L，M，N，O．
58915 期 伍 英等:有益细菌及放线菌复合对暗褐网柄牛肝菌子实体生长的影响
接种于装有 150 mL 液体培养液的三角瓶中，放线
菌 28 ℃摇床培养 5 d，细菌菌株 30 ℃摇床培养 48
h。选用 L16(2
15)正交表，2 个水平为“1”不加菌和
“2”加菌，以细菌和放线菌共 15 个菌株为直接因素
进行正交试验。无菌操作条件下按正交表设计取各
菌液，每个处理混合菌液总体积为 60 mL，添加于
750 g灭菌的覆土材料中并与之混匀，每个处理 10
次重复(每个重复 10 瓶)，以纯灭菌土覆土(CK)为
对照。覆土后的菌瓶放于出菇房中，保持菇房温度 28
～30 ℃，湿度 80 %培养覆土层菌丝生长及出菇。当
菌丝长满覆土层后，揭去瓶口覆盖的薄膜、喷无菌水保
湿覆土层湿润培养出菇。定期测覆土层菌丝生长量、
原基形成时间、原基数目及平均单菇重量，考查各处理
对暗褐网柄牛肝菌菌丝及子实体生长的作用。
试验设计:按 L16(2
15)正交表设计表头，以菌
株 1A03263(A)、T34(B)、1A01082(C)、C1(D)、14
(E)、36 (F)、T24 (G)、1A00081 (H)、T21 (I)、
1B00263(J)、34(K)、9(L)、C20(M)、T5(N)、21
(O)为指标进行正交试验(表 1)。
2 结果与分析
2． 1 复合菌对覆土层暗褐网柄牛肝菌菌丝生长、出
菇时间影响
由表 2 可以看出，处理 2(由菌株 H、I、J、K、L、
M、N、O复合)、处理 3(由菌株 D、E、F、G、L、M、N、O
复合)有极显著促进菌丝生长的作用，覆土中添加
这 2 个处理的菌液，覆土 10 d 菌丝生长长度(4． 0
cm)极显著高于对照(3． 0 cm)，与对照相比达到极
显著差异水平;处理 7(由菌株 B、C、D、E、J、K、L、M
复合)菌丝生长长度(3． 5 cm)显著高于对照(3． 0
cm)。说明处理 2、处理 3、处理 7 对暗褐网柄牛肝
菌菌丝生长有显著的促进作用。
处理 15(由菌株 A、B、D、G、I、J、L、O复合)有极
显著促进出菇的作用，覆土中加入处理 15 的菌液，
原基形成的时间(16． 9 d)极显著低于对照(22． 0
d)，比对照提前 5 d。
2． 2 复合菌对覆土暗褐网柄牛肝菌菇蕾数、平均单
菇重的影响
处理 15(由菌株 A、B、D、G、I、J、L、O复合)的原
基数目(8． 2 个)明显高于对照(1． 4 个)，达到极显
著差异水平，说明处理 15 对暗褐网柄牛肝菌原基
的形成有极显著的促进作用。
在平均单菇重量上，处理 15(由菌株 A、B、D、
G、I、J、L、O复合)平均单菇重 47． 8 g高于对照 42． 8
g，其余 14 个处理平均单菇重与对照相比均没有显
著差异，说明这 14 个处理复合菌对子实体增重没
有明显的促进作用。
表 2 覆土中添加复合菌对暗褐网柄牛肝菌菌丝生长、原基形成的影响
Table 2 Effect of adding compound strains in the casing soil on the mycelial growth and forming primodia of P． portentosus
处 理
Treatments
培养 10 d的菌丝长度(cm)
The length of mycelia growth
for 10 d
处 理
Treatments
原基形成的时间(d)
Time of forming primodia
2 4． 00 Aa 2 23． 1 Aa
3 4． 00 Aa 11 22． 9 Aa
7 3． 50 ABb 5 22． 8 Aab
6 3． 30 BCbc 10 22． 4 Aabc
1(CK) 3． 00 BCc 1(CK) 22． 0 Aabc
9 3． 00 BCc 7 21． 5 Aabc
10 3． 00 BCc 8 21． 5 Aabc
11 3． 00 BCc 12 21． 2 ABabc
14 3． 00 BCc 16 21． 0 ABabc
8 2． 98 BCc 14 20． 9 ABabc
5 2． 98 BCc 13 20． 8 ABabc
13 2． 98 BCc 6 20． 7 ABabc
15 2． 96 BCc 4 20． 7 ABabc
12 2． 94 Cc 9 19． 5 ABbcd
4 2． 89 CDc 3 19． 4 ABcd
16 2． 35 Dd 15 16． 9 Bd
注:表中数据为 10 个重复的平均值，不同大小写字母分别代表在 0． 01 和 0． 05 水平差异显著。
Note:In the table，each data is the average of 10 repeat，different capital and small letter represent significance difference levels at P ＜ 0． 01 and P
＜ 0． 05，respectively． The same as below．
6891 西 南 农 业 学 报 26 卷
表 3 覆土中添加复合菌对对暗褐网柄牛肝菌出菇情况的影响
Table 3 Effect of adding compound strains in the casing soil for vegetative and fruiting characteristics P． portentosus
处 理
Treatments
原基数目
Number of primodia
处 理
Treatments
平均单菇重(g)
Weight of individual fruit bodies
15 8． 2 Aa 15 47． 8 Aa
6 4． 5 ABb 1(CK) 42． 8 ABa
4 4． 0 ABb 8 36． 3 ABab
2 2． 7 Bbc 13 33． 3 ABCabc
12 2． 7 Bbc 14 33． 2 ABCabc
9 2． 6 Bbc 7 29． 7 ABCabc
13 2． 6 Bbc 3 29． 3 ABCabc
16 2． 5 Bbc 16 28． 8 ABCabc
8 2． 4 Bbc 4 28． 7 ABCabc
3 2． 3 Bbc 9 26． 6 ABCabcd
7 1． 7 Bbc 6 25． 6 ABCabcd
14 1． 5 B 12 19． 2 ABCbcd
1(CK) 1． 4 Bbc 5 17． 7 ABCbcd
10 1． 3 Bbc 2 17． 1 ABCbcd
11 1． 2 Bbc 10 12． 7 BCcd
5 0． 5 Bc 11 5． 0 Cd
3 讨 论
研究表明，在覆土中添加复合菌，处理 2 由菌
株 1A00081、T21、1B00263、34、9、C20、T5、21 复合、
处理 3 由菌株 C1、14、36、T24、9、C20、T5、21 复合有
极显著促进菌丝生长的作用，处理 7 由菌株 T34、
1A01082、C1、14、1B00263、34、9、C20 复合也有显著
促进菌丝生长的作用;处理 15 由菌株 1A03263、
T34、C1、T24、T21、1B00263、9、21 复合原基形成时
间 16． 9 d极显著短于对照 22． 0 d，比对照提前 5 d，
原基数 8． 2 个极显著高于对照 1． 4 个，平均单菇重
47． 8 g 高于对照 42． 8 g，说明处理 15 由菌株
1A03263、T34、C1、T24、T21、1B00263、9、21 复合对
暗褐网柄牛肝菌子实体的生长有极显著的促进作
用，是最佳的复合菌组合。
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(责任编辑 王家银)
78915 期 伍 英等:有益细菌及放线菌复合对暗褐网柄牛肝菌子实体生长的影响