全 文 ：主要原因是超细粉碎中适当极性的分散剂可以提供合适的弱极
化环境 ,诱导药物与亲水性载体间相互作用 ,从而提高难溶性药
物溶出度。同时超细粉碎中添加水 、乙醇等分散剂 , 有助于药物
的微粉化 ,调节研磨物料的流变学性质和表面电性及促进颗粒的
分散 ,提高分级产量 [ 10] ;作者尝试在超细粉碎过程中添加水 、乙
醇等分散剂 ,由于 HPMC溶胀 , 混合物干燥后形成团状物不易破
碎 , 作者将寻找合适的分散剂 , 进行进一步研究。
4　结论
青黛脂溶性提取物与 PEG4000、HPMC(E6-Lv)超细共研磨
后形成的三元固体分散体能有效地增加靛玉红在水中的溶出。
共研磨技术相对其它固体分散技术操作简便 ,更有利于工业化大
生产。随着更多新型超细粉碎方式出现 ,共研磨技术将会作为改
善难溶性药物溶出度有效技术手段而得到应用。
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收稿日期:2007-01-23;　修订日期:2007-04-26
作者简介:万　祺(1982-),男(汉族),湖北武汉人 ,现任沈阳药科大学联合培
养硕士研究生,学士学位 ,主要从事中药治疗糖尿病及并发症的研究工作.
作者简介:单俊杰(1966-),女(汉族),黑龙江鸡西人 ,现任军事医学科学
院毒物药物研究所副研究员 ,博士学位 ,主要从事天然药物化学及抗糖尿
病方面的研究工作.
旋覆花中鞣质的含量测定
万　祺1, 2 , 龙凌云 1, 2 ,裴月湖2 , 单俊杰 1＊
(1.军事医学科学院毒物药物研究所 ,北京　100850;　2.沈阳药科大学中药学院 ,辽宁 沈阳　110016)
摘要:目的 测定旋覆花水提物中鞣质的含量。方法 采用干酪素法和络合滴定法进行鞣质含量测定。 结果 干酪素法
测定旋覆花中鞣质含量为 5.96%, RSD=1.68%(n=3);络合滴定法测得含量为 8.32%, RSD=2.09%(n=3)。结论 该
两种分析方法简便 、准确 , 可用于旋覆花中鞣质的含量测定。
关键词:旋覆花;　鞣质;　干酪素;　络合滴定
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2007)11-2758-02
ContentDeterminationofTanninsinAqueous-extractofInulajaponicaThunb.
WANQi1, 2 , LONGLing-yun1, 2 , PEIYue-hu2 , SHANJun-jie1＊
(1.InstituteofPharmacologyandToxicology, AcademyofMilitaryMedicalScience, Beijing100850, China;
2.SchoolofTraditionalChineseMateriaMedica, ShenyangPharmaceuticalUniversity, Shenyang, 110016,
China)Abstract:ObjectiveTodeterminethecontentoftanninsinaqueous-extractintheflowerofInulajaponicaThunb.Methods
Thecaseinmethodandcomplexometrictitrationwereusedtodeterminethecontentoftannins.ResultsTheactivetannininthe
flowerofInulajaponicawas5.96%bythecaseinmethod, andRSD=1.68% (n=3);thetotaltanninoftheflowerwas8.32%
bycomplexometrictitration, andRSD=2.09% (n=3).ConclusionThetwomethodsaresimpleandaccurate, andcanbeused
todeterminethecontentoftannininInulajaponicaThunb.
Keywords:InulajaponicaThunb.;　Tannin;　Casein;　Complexometrictitration
　　旋覆花为菊科植物旋覆花 InulajaponicaThunb.或欧亚旋覆
花 InulabritannicaL.的干燥头状花序 , 具有降气 、消痰 、行水 、止
呕等功效。中医临床多用于风寒咳嗽 、痰饮蓄结 、胸膈痞满 、喘咳
痰多 、呕吐噫气 、心下痞硬等症状 [ 1] 。旋覆花中主要有倍半萜内
酯 、三萜 、甾体 、黄酮和挥发油等成分 [ 2 ～ 4] , 目前尚无旋覆花中鞣
质方面的报道。本实验室研究发现旋覆花(InulajaponicaThunb)
水提物具有明显降血糖和降血脂作用 [ 5] , 检识反应表明水提物
中主要含有黄酮 、蒽醌 、糖类和鞣质等成分。其中用三氯化铁反
应鉴定旋覆花中鞣质 ,反应呈暗绿色 , 表明含有邻二酚羟基黄酮
和儿茶素类缩合鞣质。本实验拟采用干酪素法和络合滴定法测
定其中鞣质的含量。
鞣质含量测定方法有多种 ,其中最常用的有皮粉法 、高锰酸
钾法 、干酪素法 、络合滴定法 、比色法和分光光度法。本实验选择
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时珍国医国药 2007年第 18卷第 11期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2007VOL.18NO.11　
干酪素法是基于干酪素能选择性结合有生理活性的鞣质 , 从而测
定生理活性鞣质的含量 , 而无活性的鞣酐等鞣质不被测定 [ 6] 。
络合滴定法是利用鞣质分子中多个邻位酚羟基可作为多基配体
与一个中心离子络合 , 形成环状螯合物 , 在不同 pH值下发生沉
淀反应 ,通过用 EDTA反滴定过量金属离子来确定总鞣质的含
量。该法准确度和精确度高 [ 7] 。因此拟采用该两种方法对旋覆
花中鞣质进行定量分析。
1　器材
1.1　药材 旋覆花(InulajaponicaThub.)购于北京同仁堂药材
公司 ,产地河北省。
1.2　试剂 鞣酸(AR, 北京化学试剂公司), 干酪素(Sigma公
司),基准氧化锌(北京益利精细化学有限公司)。铬黑 T(北京
市旭东化工厂 ), EDTA-2Na(北京欣经科生物技术有限公司),
Folin试剂(钨酸钠 50 g, 加入 85%磷酸 40 ml和蒸馏水 375 ml,
混合 ,加热回流 3 h, 冷后加水稀释至 500 ml, 避光保存。), 0.1
mol/L醋酸 -醋酸钠缓冲液(pH =5.0),其他试剂均为分析纯。
1.3　仪器 紫外可见分光光度计 (上海尤尼柯公司 , 型号
2802PC),电子天平(十万分之一 ,赛多利斯 , BP211D)。
2　方法
2.1　旋覆花水提物的制备 旋覆花花序 1kg,加入 95%乙醇 8L室
温浸泡 48h。过滤 ,残渣再重复操作 1次。醇提后的残渣挥干乙醇
后 ,用 10 L蒸馏水室温浸泡 24h。过滤, 残渣再用水重复操作 1次。
合并水提液, 50℃减压浓缩 ,浓缩液冷冻干燥获得水提物。
2.2　干酪素法 [ 8]
2.2.1　标准曲线的绘制 精确称取鞣酸(真空干燥至恒重)
43.84mg置于 200 ml容量瓶中 , 加入 30%甲醇水溶液定容 , 摇
匀 , 得到溶液 I。精密吸取溶液 I1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0ml分别置
于 10ml容量瓶中 , 分别用 30%甲醇补齐至 5 ml。 然后再加入
0.1 mol/L醋酸 -醋酸钠缓冲液(pH=5.0)至刻度 ,摇匀。精密
吸取 5个不同浓度标准溶液 1ml分别置于 10 ml容量瓶中 , 加入
Folin试剂 0.5ml, 再加入 2%NaCO3溶液至刻度 , 混匀 。显色后
于 720 nm处测定吸光度 , 以蒸馏水作空白对照。计算回归方程。
2.2.2　样品鞣质的含量测定 精确称取样品 145.01 mg于 50 ml
容量瓶中 ,加蒸馏水溶解并定容。精密吸取样品溶液 2 ml于 25
ml棕色容量瓶中 , 加入 0.1 mol/L醋酸 -醋酸钠缓冲液(pH=
5.0)10 ml,再加 30%甲醇定容 , 得到溶液 II。精密吸取 II溶液
10 ml置于已盛有干酪素 500 mg的 50 ml棕色容量瓶中 ,振荡 1
h, 过滤 ,得溶液 III。分别吸取 II和 III溶液 1 ml, 置于 10ml棕色
容量瓶中 ,各加入 Folin试剂 0.5 ml, 再加 2%NaCO
3
溶液至刻
度 , 摇匀。室温放置 12 min后 , 以蒸馏水作空白对照 , 在波长 720
nm处测定吸光度 ,为 A1和 A2。由两吸光度之差(ΔA)代入回归
方程 ,计算活性鞣质的含量。
2.3　络合滴定法 [ 9]
2.3.1 　0.05 mol/LEDTA-2Na的标定 称取 18.6 gEDTA-
2Na于 1 000 ml锥形瓶中 , 加蒸馏水 1 000 ml溶解 ,摇匀 , 备用。
精密称取干燥至恒重的基准氧化锌 0.120 g, 加入 3 ml稀盐酸使
溶解 ,再加水 25 ml,滴入 1滴 0.025%甲基红乙醇溶液 , 再滴加
氨试液至溶液显微黄色。加水 25 ml, 氨 -氯化铵缓冲液(pH=
10)10ml, 铬黑 T指示剂少许 。用 EDTA-2Na滴定至溶液由紫
色变为纯蓝色 ,并将滴定结果用空白校正。每毫升 EDTA-2Na
标准液相当于 4.069 mg氧化锌。
2.3.2　样品鞣质的含量测定 精密称取旋覆花水提物粉末
130mg,用蒸馏水溶解并且稀释至 80 ml, 摇匀 , 置于水浴上温热
至(35±2)℃。精密吸取 1 mol/L醋酸锌液 4 ml于 100 ml容量
瓶中 ,加饱和氨水 2.8 ml, 摇匀 , 使白色沉淀溶解 , 将前液全量缓
缓注入容量瓶中 , 并不断振摇 , 加蒸馏水稀释至刻度 , 继续振摇
1min, 再置于(35 ±2)℃水浴中继续温热 30 min(间歇振摇数
次),取出 , 冷至室温。摇匀后过滤 ,弃去初滤液。精密吸取续滤
液 20ml, 置于 500 ml锥形瓶中 , 加蒸馏水 300 ml,氨 -氯化铵缓
冲液(pH=10)25 ml, 铬黑 T指示剂少许 , 摇匀 , 用 EDTA-2Na
标准溶液滴定至溶液由紫色变为蓝色 ,结果用空白校正。按下式
计算鞣质含量。
鞣质含量(%)= 0.156 5×(Vo-Vs)×M×20W ×100%
其中 Vo-空白对照消耗的 EDTA-2Na体积(ml);
Vs-样品消耗的 EDTA-2Na体积(ml);
M-EDTA-2Na的浓度(mol/L);
W-样品重量(g)
3　结果
3.1　干酪素法测定的鞣质含量 干酪素法测得鞣酸标准曲线的
回归方程:A=55.892C+0.013 7, r=0.998 8。鞣酸在 0.00 ～
10.96 μg/ml浓度范围内线性关系良好。旋覆花水提物平行取 3
份样品 ,用该法测得鞣质含量分别为:5.88%, 6.04%, 5.96%, 平
均含量为 5.96%, RSD=1.68%。
3.2 　络合滴定法测定的鞣质含量 取基准氧化锌标定液 3份 ,
用 EDTA-2Na标准液滴定至溶液由紫色变为蓝色。消耗 EDTA
-2Na标准液体积分别为 29.55, 29.53, 29.48 ml, 计算得到 ED-
TA-2Na滴定液浓度为 0.049 95 mol/L(n=3, RSD=1.22%)。
同时旋覆花水提物平行测定 3份样品 , 其中鞣质含量分别为
8.42%, 8.2%, 8.40%, 平均含量为 8.32%(n=3, RSD=
2.09%)。
4　讨论
鞣质具有较强极性和不稳定性 ,遇酸碱和高温不稳定。另外
高温也可能使多糖类成分发生改变 ,因此本实验旋覆花水提物的
制备是在室温条件下进行。先用 95%乙醇提取色素和极性较弱
的成分 ,然后再用水提取获得水提物 , 这样可以使鞣质类和糖类
的提取率和稳定性提高。
鞣质的生理活性除收敛作用之外 ,近年来研究发现其还具有
其它的药理作用, 如:①抗菌和抗病毒;②抑制肝脏线粒体和微粒
体的脂质过氧化;③抗诱变;④降低血中尿素氮浓度;⑤抑制纤维
蛋白溶酶活性;⑥抗肿瘤和抗癌变作用 [ 10] 。国外报道绿茶中鞣质
含量约 13%左右 ,其中茶多酚 100 mg/kg给予四氧嘧啶糖尿病大
鼠, 能显著降低糖尿病大鼠血糖 ,提高血浆中超氧化歧化酶和谷胱
甘肽水平 [ 11] 。本实验旋覆花水提物中鞣质含量约 8%,其是否是
降血糖和降血脂的有效成分尚待进一步分离和活性评价。
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