全 文 ：中国药房 2016年第27卷第3期 China Pharmacy 2016 Vol. 27 No. 3
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（收稿日期：2015-10-19 修回日期：2015-11-20）
（编辑：张 静）
Δ基金项目：国家药品标准提高暨 2015年版《中国药典》科研任
务项目
＊硕士研究生。研究方向：天然药物化学。E-mail：maliman88@
163.com
# 通信作者：副教授，博士。研究方向：生药学。电话：010-
82802534。E-mail：myshang@bjmu.edu.cn
HPLC法测定旋覆花药材中旋覆花素和去乙酰旋覆花素的含量Δ
马立满＊，刘 震，尚明英#，刘广学，徐 风，蔡少青（北京大学药学院生药学研究室，北京 100191）
中图分类号 R284.1 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2016）03-0369-03
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.03.28
摘 要 目的：建立测定旋覆花药材中旋覆花素和去乙酰旋覆花素含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Zorbax
SB-C18，流动相为乙腈-水（梯度洗脱），流速为1.0 ml/min，柱温为25℃，检测波长为210 nm，进样量为10 μl。结果：旋覆花素和去
乙酰旋覆花素的检测质量浓度线性范围分别为0.000 2～0.005、0.000 1～0.001 7 μg/ml（r＝0.999 8、0.999 4）；精密度、稳定性、重
复性试验的RSD＜2％；加样回收率分别为99.63％～103.56％、95.98％～101.21％，RSD分别为1.26％、1.84％（n＝9）。结论：该方
法操作简便，结果准确、可靠，可用于评价旋覆花药材的质量。
关键词 旋覆花；旋覆花素；去乙酰旋覆花素；含量测定；高效液相色谱法
Simultaneous Determination of Inulicin and Deacetylinulicin in Inulae Flos by HPLC
MA Liman，LIU Zhen，SHANG Mingying，LIU Guangxue，XU Feng，CAI Shaoqing（Division of Pharmacognosy，
School of Pharmacy，Peking University，Beijing 100191，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish a method of simultaneous determination of inulicin and deacetylinulicin in Inulae Flos.
METHODS：HPLC was performed on the column of Zorbax SB-C18 with mobile phase of acetonitrile-water（gradient elution）at a
flow rate of 1.0 ml/min，the column temperature was 25 ℃，the detection wavelength was 210 nm，and the injection volume was
10 μl. RESULTS：The linear range was 0.000 2-0.005 μg/ml（r＝0.999 8）for inulicin and 0.000 1-0.001 7 μg/ml（r＝0.999 4）for
deacetylinulicin；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were lower than 2.0％；recoveries were 99.63％ -103.56％
（RSD＝1.26％，n＝9）and 95.98％-101.21％（RSD＝1.84％，n＝9），respectively. CONCLUSIONS：The method is simple，accurate
and reliable，and can be used for the quality evaluation of Inulae Flos.
KEYWORDS Inulae Flos；Inulicin；Deacetylinulicin；Content determination；HPLC
􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊􀤊
旋覆花为菊科植物日本旋覆花（Inula japonica Thunb.）或
欧亚旋覆花（I. britannica L.）的干燥头状花序，具有降气、消
痰、止呕、行水的功效，主要用于风寒咳嗽、痰饮蓄结、喘咳痰
多、心下痞硬等证[1]。旋覆花素为旋覆花的特征性有效成分，
具有明显的抗肿瘤、抗炎、抗溃疡、利尿、镇咳等作用[2-5]；另有
文献报道，去乙酰旋覆花素也具有抗炎活性[6]。欧亚旋覆花、
湖北旋覆花、线叶旋覆花等旋覆花属植物中旋覆花素、槲皮
素、1β-羟基-土木香内酯等成分的含量测定已有研究[7-13]，然而
旋覆花商品药材的质量评价仅见本课题组前期发表的一篇高
效液相色谱（HPLC）指纹图谱研究[14]，未见其有效成分的含量
测定报道。因此，笔者建立HPLC法测定旋覆花药材中旋覆花
素和去乙酰旋覆花素的含量，旨在为旋覆花药材的质量评价
提供更为合理、可靠的方法。
1 材料
1.1 仪器
1100 型 HPLC 仪，包括 G1379A 型在线真空脱气机、
G1312A型二元梯度泵、G1313A型自动进样器、G1316A型柱
温箱、G1315B 型二极管阵列检测器（美国 Agilent 公司）；
CP225D型十万分之一电子天平（德国 Sartorius公司）；CP114
型万分之一电子天平（美国Ohaus公司）；KQ-500DE型超声波
清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；RT-02A型小型粉碎机（北
京弘荃翔和机械技术有限公司）；Milli-Q型超纯水制备仪（美
国Millipore公司）。
1.2 药品与试剂
收集全国范围内的旋覆花药材 12批（批号：7178、7197、
7204、7218、7219、7220、7221、7222、7223、7224、7367、7368，经
尚明英副教授鉴定为菊科植物日本旋覆花的干燥头状花序），
同批号样品保存在北京大学药学院生药学标本室。旋覆花素
和去乙酰旋覆花素对照品为本课题组从日本旋覆花的干燥头
状花序中分离得到，其结构通过核磁共振氢谱（1H NMR）、核
··369
China Pharmacy 2016 Vol. 27 No. 3 中国药房 2016年第27卷第3期
磁共振碳谱（13C NMR）进行鉴定，纯度经二极管阵列检测器检
测，并采用面积归一化法计算，均在 98％以上。乙腈、甲醇为
色谱纯，其余试剂为分析纯，水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件和系统适用性试验
色谱柱：Zorbax SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：
乙腈（A）-水（B），梯度洗脱（洗脱程序见表1）；流速：1.0 ml/min；柱
温：25℃；检测波长：210 nm；进样量：10 μl。在上述色谱条件
下，旋覆花素和去乙酰旋覆花素的理论板数均＞3 000，分离
度均＞1.5，各成分基线分离良好。色谱见图1。
表1 梯度洗脱程序
Tab 1 Procedures of gradient elution
t，min
0～15
15～16
16～60
A，％
15
30
30
B，％
85
70
70
2.2 溶液的制备
2.2.1 混合对照品溶液 精密称取旋覆花素和去乙酰旋覆花
素对照品各适量，分别置于25 ml量瓶中，加甲醇溶解并定容，
摇匀，即得旋覆花素和去乙酰旋覆花素对照品贮备液。分别
精密量取上述贮备液适量，置于同一 25 ml量瓶中，加甲醇制
成每1 ml含旋覆花素0.200 mg、去乙酰旋覆花素0.066 0 mg的
溶液，即得。
2.2.2 供试品溶液 取样品粉末（过40目筛）2.0 g，精密称定，
置于 50 ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25 ml，密塞，称定质
量，冷浸1 h后，超声（功率：500 W，频率：40 kHz）处理20 min，
取出放冷后再次称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，用
0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.3 线性关系考察
分别精密吸取“2.2.1”项下混合对照品溶液 1、2、3、5、7、
10、13、15、17、20、25 µl，置于 1 ml量瓶中，加甲醇定容，摇匀，
制成系列对照溶液。分别精密吸取上述对照溶液适量，按
“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以旋覆花素和去
乙酰旋覆花素色谱峰峰面积为纵坐标（y）、质量浓度（x，μg/ml）
为横坐标进行线性回归，得旋覆花素的回归方程为y＝20 104.5x+
67.195 1（r＝0.999 8）、去乙酰旋覆花素的回归方程为 y＝
24 586.6x+48.384 7（r＝0.999 4）。结果表明，旋覆花素和去乙
酰旋覆花素的检测质量浓度线性范围分别为 0.000 2～0.005、
0.000 1～0.001 7 μg/ml。
2.4 定量限与检测限
以信噪比 10 ∶ 1计算旋覆花素和去乙酰旋覆花素的定量
限，以信噪比3 ∶ 1计算旋覆花素和去乙酰旋覆花素的检测限。
结果，旋覆花素和去乙酰旋覆花素的定量限分别为 1.60、
1.46 μg/ml，检测限分别为0.40、0.40 μg/ml。
2.5 精密度试验
取同一份供试品溶液（批号：7367）适量，按“2.1”项下色谱
条件进样测定，记录峰面积。结果，旋覆花素和去乙酰旋覆花
素峰面积的RSD分别为 0.94％、1.70％（n＝6），表明仪器精密
度良好。
2.6 稳定性试验
取样品（批号：7367）粉末适量，按“2.2.2”项下方法制备供
试品溶液，分别于放置 0、4、8、12、16、24 h时按“2.1”项下色谱
条件进样测定，记录峰面积。结果，旋覆花素和去乙酰旋覆花
素峰面积的RSD分别为0.65％、0.46％（n＝6），表明供试品溶
液在24 h内稳定性良好。
2.7 重复性试验
取样品（批号：7367）粉末适量，按“2.2.2”项下方法平行制
备6份供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰
面积。结果，旋覆花素和去乙酰旋覆花素峰面积的RSD分别
为1.8％、4.4％（n＝6），表明本方法重复性良好。
2.8 加样回收率试验
取已知含量的样品（批号：7367）粉末适量，平行称取9份，
每份 2.0 g，精密称定，平均分为 3组，按样品含量的 80％、
100％和120％分别精密加入旋覆花素（1.997、2.497、2.996 mg）
和去乙酰旋覆花素（0.329 6、0.412 0、0.520 3 mg）对照品，按
“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进
样测定，记录峰面积并计算旋覆花素和去乙酰旋覆花素的加
样回收率，结果见表2。
表2 加样回收率试验结果（n＝9）
Tab 2 Results of recovery of inulicin and deacetylinulicin
（n＝9）
待测成分
旋覆花素
去乙酰旋覆花素
称样量，
g
2.003
2.004
2.001
2.005
1.997
1.998
2.006
1.999
1.998
2.003
2.004
2.001
2.005
1.997
1.998
2.006
1.999
1.998
样品含
量，mg
2.686 0
2.687 0
2.683 0
2.689 0
2.678 0
2.679 0
2.690 0
2.681 0
2.679 0
0.437 1
0.437 3
0.436 6
0.437 5
0.435 7
0.436 0
0.437 7
0.436 2
0.436 0
加入量，
mg
1.997 0
1.997 0
1.997 0
2.497 0
2.497 0
2.497 0
2.996 0
2.996 0
2.996 0
0.329 6
0.329 6
0.329 6
0.412 0
0.412 0
0.412 0
0.520 3
0.520 3
0.520 3
测得量，
mg
4.748
4.755
4.741
5.250
5.194
5.218
5.675
5.717
5.737
0.759 4
0.762 4
0.768 4
0.846 4
0.836 5
0.852 8
0.937 1
0.962 8
0.955 2
加样回收
率，％
103.25
103.56
103.05
102.56
100.76
101.68
99.63
101.34
102.07
97.79
98.63
100.68
99.25
97.28
101.17
95.98
101.21
99.08
平均加样回
收率，％
101.99
99.08
RSD，
％
1.26
1.84
2.9 样品含量测定
称取不同来源的旋覆花样品粉末各 2.0 g，精密称定，按
300
250
200
150
100
50
0
0 10 20 30 40 50 60
t，min
A
mA
U
1
2
0 10 20 30 40 50 60
t，min
B
300
250
200
150
100
50
0
mA
U
2
1
图1 高效液相色谱图
A.混合对照品溶液；B.供试品溶液；1.去乙酰旋覆花素；2.旋覆花素
Fig 1 HPLC chromatograms
A.mixed control；B.test sample；1.deacetylinulicin；2.inulicin
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中国药房 2016年第27卷第3期 China Pharmacy 2016 Vol. 27 No. 3
“2.2.2”项下方法平行制备 3份供试品溶液，再按“2.1”项下色
谱条件进样测定，记录峰面积并计算样品中旋覆花素和去乙
酰旋覆花素的含量，结果见表3。
表3 样品含量测定结果（n＝3）
Tab 4 Results of determination of inulicin and deacetylinuli-
cin（n＝3）
批号
7178
7197
7204
7218
7219
7220
7221
7222
7223
7224
7367
7368
收集时间（年.月）
2012.06
2013.04
2013.06
2013.02
2013.02
2013.02
2013.02
2013.02
2013.02
2013.02
2013.01
2013.01
平均含量，mg/g
收集地/产地
广西玉林/湖北
河北安国/河南
安徽亳州/不详
安徽/安徽
安徽晋阳/安徽
河北安国/安徽
河南安阳/山东
河南安阳/河南
河南安阳/河南
湖北武汉/湖北
河北安国/河南
河北安国/不详
旋覆花素，mg/g
1.367 0
1.578 0
1.396 0
1.937 0
0.619 9
1.626 0
2.439 0
2.406 0
0.255 2
0.530 4
1.176 0
1.341 0
1.399 7
去乙酰旋覆花素，mg/g
0.114 9
0.181 0
0.252 0
0.338 7
0.128 7
0.298 1
0.482 8
0.404 0
0.074 9
0.228 5
0.276 1
0.218 2
0.244 8
总含量，mg/g
1.481 9
1.759 0
1.648 0
2.275 7
0.748 6
1.924 1
2.921 8
2.810 0
0.330 1
0.758 9
1.452 1
1.559 2
1.639 1
3 讨论
本研究所测 12批不同产地的旋覆花药材样品，除 7219、
7223、7224这3批样品中旋覆花素和去乙酰族覆花素两种成分
的含量均较低外，其余9批样品中旋覆花素和去乙酰旋覆花素
的含量分别在 1.176 0～2.439 0 mg/g和 0.114 9～0.482 8 mg/g
范围内。观察 7219、7223、7224这 3批样品的性状，发现其颜
色暗黄，推测其可能存放时间过久，导致旋覆花素含量明显降
低。提示在使用旋覆花药材时，应注意药材存放时间，以保证
其药效。
综上所述，本方法操作简便，结果准确、可靠，可用于评价
旋覆花药材的质量。
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（收稿日期：2015-06-13 修回日期：2015-10-24）
（编辑：刘 柳）
国家卫生计生委副主任王国强赴科研所和中国疾控中心妇幼中心调研
本刊讯 2015年12月17日，国家卫生计生委副主任王国
强轻车简从，到国家卫生计生委科学技术研究所和中国疾病
预防控制中心妇幼保健中心进行调研。王国强副主任深入到
每个科室，详细了解部门情况，召开座谈会，全面听取科研所
和妇幼中心的工作汇报。
王国强充分肯定科研所和妇幼中心的工作。他指出，科
研所和妇幼中心的工作要进一步服务于国家发展的大局，更
加符合国家长期发展趋势和战略需求。科研所和妇幼中心要
进一步深入学习十八届三中、四中、五中全会精神，进一步深
入学习习近平总书记的系列重要讲话精神，学习“四个全面”
战略布局，学习“创新、协调、绿色、开放、共享”五大发展理
念。要深入研究完善计划生育政策重大战略调整带来的机遇
和挑战。要将政策转化为措施，措施转化为服务，为人民群众
切实带来实实在在的幸福感。
王国强强调，要深入学习研究健康中国战略，认真研究新
时期新要求。妇幼健康和计划生育/生殖健康工作服务对象首
先是健康人群，要以预防为主，重在预防，关口前移。在新时
期，避孕节育的内在需求更加突出。科研所和妇幼中心要根
据社会发展的新形势，确定工作的新方向。
王国强要求，科研所和妇幼中心工作要瞄准国际。人均
期望寿命、孕产妇死亡率、五岁以下儿童死亡率是国际上衡量
一个国家健康水平的主要指标，充分说明科研所和妇幼中心
工作的重要性。要学习国际先进经验，逐步理顺体制机制，构
建预防、科研、保健、医疗、管理、服务于一体的体系，为提升出
生人口素质和健康中国战略做出更大的贡献。
··371