全 文 ：新疆中医药 2008年 第26卷 第1期(总第113期)
旋覆花苦豆子合剂应用于抗免疫性肝损伤的实验研究
杨舒淳 1,刘姝君 2,钟晓玲 1,导师:王存芬 1
(1.新疆医科大学,新疆 乌鲁木齐 830054; 2.新疆昌吉市六工镇卫生院,新疆 昌吉 831101)
实 验
研 究
!!!!
!
!

!!!
!
!
!

摘 要 “旋覆花汤”出自张仲景《金匮要略》,由旋覆花、新绛(茜草)、葱茎组成。医学文献报道方中的旋覆花提
取物,具有抗炎、抗肝炎、抗肝损伤、抗肿瘤和细胞毒等作用。苦豆子是新疆地产药材。始载于《新疆中草药手册》,为豆
科植物苦豆子全草及种子,属于维药范畴。当代医家已从苦豆子中科学提取生物碱,制成药品,用于肝病治疗。本研究
从经方“旋覆花汤”及苦豆子基本作用及应用研究出发,结合王存芬主任医师多年临床经验总结的肝病从气、血、瘀、
湿、毒论治的体会,以经方“旋覆花汤”为基础方,加入苦豆子,拟以行气、疏肝、活血、解毒之剂——旋覆花苦豆子合
剂。利用现代医学技术,借助小鼠免疫性肝损伤模型,以实验室检测指标为依据,实验结果初步显示:旋覆花苦豆子合
剂、“旋覆花汤”、苦豆子煎剂对动物免疫性肝损伤的治疗或预防均有一定的疗效,且组间疗效有差异。
关键词 旋覆花;苦豆子;免疫性肝损伤
“旋覆花汤”出自张仲景《金匮要略》,由旋覆
花、新绛(茜草)、葱茎组成,见于《五脏风寒积聚病
脉证并治第十一》和《妇人杂病脉证并治第二十二》
两篇,主治“肝着”及“妇人半产漏下”。张仲景曰:
“肝着,其人常欲蹈其胸上,先未苦时,但欲饮热,旋
覆花汤主之”;“寸口脉弦而大,弦则为减,大则为
芤,减则为寒,芤则为虚,寒虚相搏,此名曰革。妇人
则半产漏下,旋覆花汤主之。”
据《本经》记载方中旋覆花咸温,有小毒,主结
气,胁下满,惊悸,除水,去五脏间寒热,补中益气。新
绛(茜草)味苦寒,无毒,主寒湿风痹,黄疸,补中[1]。据
汪昂《本草备要》记载:葱管(葱茎),生者辛散,发表,
和里,宣、通阳,活血[2]。三药共煎,使肝经气行血畅,
阳气通而瘀血化,则肝着自愈。历代[3]及当代[4-10]医家
对“肝着”病的病因病机的理论认识及“旋覆花汤”的
临床应用经验均有大量的文献记载。目前医学文献
报道的欧亚旋覆花[11]的化学成份约有四十多种,主要
有黄酮类、倍半萜内酯类和萜类化合物,其中证明有
药理活性的成份大多数为倍半萜内酯类化合物,约
有8种,多为氯仿提取物,具有抗炎、抗肝炎、抗肝损
伤、抗肿瘤和细胞毒等作用。
苦豆子是新疆地产药材,资源丰富。始载于《新
疆中草药手册》[12],为豆科植物苦豆子全草及种子。
属于维药范畴,别名:布亚(维名)。性味苦寒,有毒,
入心、肺经。功效:清热燥湿,止痛,杀虫等。据《维吾
尔药志》[13]上册记载[5]:苦豆子具有清热解毒,消炎止
痢之功;用于咽喉肿痛,肠炎痢疾,疮疖肿毒,皮肤
瘙痒。用量3~10g,外用适量。当代研究证明其具有
清热解毒、止痛、杀虫、抑菌、镇咳、免疫调节、平喘、
抗癌、抗病毒的功效[14]。化学成份主要为:蛋白质、糖
类、有机酸、黄酮类、色素和生物碱等。当代医家已
从苦豆子中科学提取生物碱,制成药品[15-16],用于肝
病治疗。苦豆子中提取的生物碱,据研究报道有抗
动物免疫性肝损伤的作用[17]。但“旋覆花汤”和苦豆
子原药分用或合用,用于抗乙肝病毒及抗免疫性肝
损伤的临床实验研究未见报道。
本研究从经方旋覆花汤及苦豆子基本作用及
应用研究出发,结合王存芬主任医师多年临床经验
[18]治疗肝病从气、血、瘀、湿、毒论治的体会,以经方
旋覆花汤为基础方,加入新疆资源丰富的地产药材
苦豆子,拟以行气、疏肝、活血、解毒之剂——旋覆
花苦豆子合剂。利用现代医学技术,借助小鼠免疫
参考文献
[1] 马宝璋.中医妇科学[M].上海:上海科学技术出版社,1998:107.
[2]LeonSperof,RobertHGlass,NathanGKase.临床妇科内分泌学与
不孕[M].济南:山东科学技术出版社,2003:121.
[3] 程泾.月经失调与中医周期疗法[M].杭州:浙江科学技术出版社,
1985:49.
[4] 章巧萍.调经重在补肾活血[J].中国中医基础医学杂志,2003,(12):60.
[5] 方肇勤.二仙汤及其拆方对老年龄大鼠血浆性激素和促性腺激
素含量的影响[J].中国医药学报,1992,7(5):24-26.
[6] 束兰娣.右归四物汤治疗月经后期的临床观察[J].上海中医药杂
志,2005,11(39):38.
(收稿日期:2007-09-10;修回日期:2007-10-30)
####################
7
新疆中医药 2008年 第26卷 第1期(总第113期)
性肝损伤模型,以实验室检测指标为依据,在前人
研究的基础上,探索旋覆花苦豆子合剂对动物免疫
性肝损伤的治疗的有效性。目的是探索新疆地区治
疗肝病的中药新药。
1 材 料
1.1 动物选择
本课题选用健康成年昆明小鼠60只,体重(20±
2)g/个(动物及饲料均由新疆医科大学实验动物中
心提供),同一窝别,雌性。动物在实验前适应性驯养
1周,动物房温度、湿度分别控制在20℃、70%左右。
1.2 主要试剂与仪器
主要试剂:联苯双脂,北京协和药厂;卡介苗
(BCG),北京生物制品厂;细菌脂多糖(LPS),Sigma
公司出品;小鼠血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶
(ALT)均购自南京建成生物工程研究所。
实验仪器:全自动生化仪美国贝克曼公司生
产;高速冷冻离心机 Auegra64R美国贝克曼公司生
产。
1.3 药物
1.3.1 药物剂量确定 根据动物药理学实验方法[19],
实验各组均采用中剂量给药,小鼠是成人用药量的9
倍/kg。拟给药剂量分别以健康成年小鼠体重20g与
成人体(50±5)kg常规中西药用药剂量进行换算。
自拟本实验中西药各组中剂量给药剂量计算
公式:某药成人量 g/kg×0.02kg(小鼠平均体重)×9×
10(组内小鼠数)。拟各药成人量:旋覆花10g、新绛
(用茜草代替)10g、青葱管 10g、生苦豆子 10g、联苯
双脂22.5mg。
1.3.2 本实验中西药各组每剂药味组成及给药剂量
(1)“旋覆花汤”组:旋覆花 3.6g、新绛(用茜草代替)
3.6g、鲜葱管 3.6g;相当于该组总生药量 0.504g/10g/
只/天。(2)苦豆子煎剂组:生苦豆子3.6g;相当于该
组总生药量0.18g/10g/只/天。(3)旋覆花苦豆子合剂
组:旋覆花3.6g、新绛(用茜草代替)3.6g、鲜葱管
3.6g;相当于该组总生药量0.72g/10g/只/天。(4)标准
对照组:联苯双脂0.0405mg/10g/只/天。以上药物均
购自新疆医科大学第一附属医院中西药房。
以上 3方中药分别扩大 100倍量加自来水
1000mL浸泡30分钟,常规中药煎煮法煎煮2遍。两煎
混匀,加热浓缩至含原生药浓度1g/mL,4℃保存备用。
2 方 法
2.1 造模及给药方法
实验开始时,将筛选后符合纳入标准的 60只
健康昆明小鼠称重编号后,分为6组(1组空白对照
组、2组模型组、3组标准对照组、4组苦豆子煎剂
组、5组“旋覆花汤”组、6组旋覆花苦豆子合剂组),
每组10只。于实验开始第1天造模起,给予分组治
疗,连续治疗用药12天。处死前12小时禁食。
1组:于实验的第 1天上午 10点开始,每只
0.8mL生理盐水分别尾静脉注射,每只每天1次蒸
馏水0.8mL灌胃模拟治疗,不造模,不施治。
2组:参照文献[19-20],于实验的第1天上午10点
开始,每只以BCG5×107个活菌溶于0.8mL生理盐
水分别尾静脉注射,第 12天上午 10点开始,每只
以 LPS7.5微克溶于 0.8mL生理盐水分别尾静脉注
射,制造免疫性肝损伤模型。并从实验开始第 1天
起,定时每天1次蒸馏水0.8mL/只灌胃模拟治疗。
3组:于实验开始第1天先造模,其方法同模型
组。并从实验开始第1天起,定时每天1次采用联
苯双脂 0.0405mg/10g/只,溶于 0.8mL/只,蒸馏水稀
灌胃治疗。
4组:于实验开始第1天先造模,其方法同模型
组。并从实验开始第1天起,定时每天一次给服苦
豆子煎剂0.18mg/10g/只,用蒸馏水稀释至0.8mL/只
灌胃治疗。
5组:于实验开始第1天先造模,其方法同模型
组。并从实验开始第1天起,定时每天1次给服“旋
覆花汤”煎剂 0.504g/10g/只,用蒸馏水稀释至
0.8mL/只灌胃治疗。
6组:于实验开始第1天先造模,其方法同模型
组。并从实验开始第1天起,定时每天1次给服旋
覆花苦豆子合剂煎剂 0.72g/10g/只,用蒸馏水稀释
至0.8mL/只,灌胃治疗。
2.2 实验室指标检测方法
各组小鼠LPS尾静脉注射24小时后摘眼球取
血1mL并处死取肝脏。离心血清,检测 ALT、AST,
测定方法均根据仪器操作和测定试剂盒说明进行;
剖腹取相同部位3小叶肝脏组织,做肝组织病理切
片,3片/只、1片/小叶相同部位/只,常规HE染色,
检测造模及用药后各组肝组织病理损害程度。
参照文献[20-25],根据肝组织炎症、坏死及出血程
度,将肝组织病理改变分五级(0-Ⅳ):“0”无损害;
“Ⅰ”肝小叶中央静脉周围有坏死,散在炎细胞浸润
及嗜酸小体形成;“Ⅱ”肝细胞坏死呈灶状或片状,
占小叶1/3以内,炎细胞浸润呈灶状;“Ⅲ”肝细胞坏
死呈广泛坏死伴出血,占小叶 1/3~2/3,炎细胞浸润
8
新疆中医药 2008年 第26卷 第1期(总第113期)
组 别 例数 ALT AST
第1组 10 27.4±6.4 59.5±18.8
第2组 10 288.0±33.3 552.5±44.0
第3组 10 38.0±10.6 552.5±10.2
第4组 10 103.2±90.3 196.2±92.1
第5组 10 82.5±24.6 199.2±28.9
第6组 10 32.9±9.1 95.1±29.7
合计 60 95.3±16.3 198.7±24.4
病 理 分 级
Ⅳ Ⅲ Ⅱ Ⅰ 0
组别 例数 切片数
第1组 10 30 0 0 0 0 30
第2组 10 30 6 9 11 4 0
第3组 10 30 0 0 0 7 23
第4组 10 30 0 0 0 23 7
第5组 10 30 0 0 0 16 14
第6组 10 30 0 0 0 19 11
合计 60 180 6 9 11 69 85
呈片状;“Ⅳ”肝细胞坏死占小叶2/3以上伴严重出
血,大量炎细胞浸润。
2.3 实验数据统计分析方法
参照卫生统计学[26],采用PENS3.1软件[27],多个
样本均数的比较和多个样本比较及两两比较的秩
和检验。
3 结 果
3.1 各实验组小鼠ALT、AST值比较
(均数±标准差)见表1。
3.2 各实验组小鼠肝组织病理学分级见表2
表1 各实验组小鼠ALT、AST值比较(均数±标准差;U/L)
注:空白对照组和模型组比较P<0.05
表2 各实验组小鼠肝组织病理学分级(HE染色;单位:切片数)
注:空白对照组和模型组比较P<0.01
从以上结果统计学分析 P<0.05,我们可以认
为,旋覆花苦豆子合剂等对抗免疫性肝损伤的治疗
或预防有统计学意义。ALT、AST值均数比较排序从
大到小依次为第2组、第4组、第5组、第3组、第6
组、第1组;各实验组小鼠肝组织病理切片Kruskal-
walis秩和检验:P<0.01,样本间两两比较秩和检验
(Nemenyi):第1组与第2组、第l组与第 4组、第 2
组与第3组、第2组与第4组、第2组与第5组、第
2组与第6组均得出P<0.01;第1组与第5组、第3
组与第4组均得出P<0.05;第1组与第6组、第3
组与第5组、第3组与第6组、第4组与第5组、第
4组与第6组、第5组与第6组P>0.05。可以认为,
旋覆花苦豆子合剂等对抗免疫性肝损伤的治疗或
预防有一定疗效,且组间疗效有差异,组间疗效初
步分析,有高到低依次为:第3组、第6组、第5组、
第4组。
4 讨 论
通过实验结果初步推断,旋覆花苦豆子合剂、
“旋覆花汤”、苦豆子煎剂均对抗小鼠免疫性肝损伤
的治疗或预防有效,三者相比旋覆花苦豆子合剂疗
效较好,“旋覆花汤”疗效次之,苦豆子煎剂排第三。
必须进一步进行各组药物动物实验和药理学机制
研究,才能得出可靠的各组药物抗小鼠免疫性肝损
伤的疗效评价。
参考文献
[1] 陶弘景,考异:日本森立之.神农本草经[M].上海:上海人民出版
社,1957:42-88.
[2] 汪昂.本草备要[M].北京:人民卫生出版社,1966:202.
[3] 陈纪藩.金匮要略[M].北京:人民卫生出版社,2005:347-349.
[4] 孙忠年.孙忠年医案[J].陕西中医杂志,1985,1:27.
[5] 李 波,邢红梅,江立军.旋覆花汤新解[J].新中医,2002,12(12):60.
[6] 陈维琴.中西医结合治疗肋间神经痛40例[J].湖北中医杂志,2:21.
[7] 夏晓芳,程文江,徐珊.《金匮要略》旋覆花汤新解[J].浙江中医学
院学报,2004,1(1):1819.
[8] 何若苹.浅谈旋覆花汤的临床运用[J].浙江中医杂志,1989,5:
222-223.
[9] 张寿华.旋覆花汤在内科中的运用.湖南中医药导报,2003,10
(10):1920.
[10] 金先融.旋覆花汤加味治疗肝着.浙江中医杂志,1983,10:445.
[11] 吴一兵.欧亚旋覆花化学成份研究进展.天然产物研究与开发
杂志,2006,18:503-507.
[12] 新疆部队后勤部卫生部.新疆中草药手册[M].乌鲁木齐:新疆人
民出版社,1970:228.
[13] 刘勇民,沙吾提·伊克木.维吾尔药志(上册)[M].乌鲁木齐:新疆
人民出版社,1986:237-240.
[14] 张琳娜,白洁.苦豆子药理作用的研究进展[J].宁夏医学院学
报,2004,6:214-217.
[15] 彭建华,于华.博尔泰力治疗慢性乙型肝炎的临床疗效观察[J].
中国城乡企业卫生,2001,6(3):30.
[16] 李葳,等.博尔泰力(苦参素)治疗慢性乙型肝炎临床疗效观察
[J].宁夏医学杂志,2001,12:715-717.
[17] 梁萍,薄爱华,薛贵平,等.苦参碱抗免疫性肝损伤机制的研究
[J].世界华人消化杂志,1999,7(2):104-108.
[18] 王存芬.浅论《金匮要略》治疗肝病的特点[J].上海中医药杂
志,2003,37(8):21-22.
[19] 徐叔云,等.药物试验方法学[M].第 3版.北京:人民卫生出版
社,2005:200-1349.
[20] 邱英峰,缪晓辉,王俊学,等.卡介苗加脂多糖建立大鼠急性免
性肝损伤模型的研究[J].实验动物科学与管理杂志,2004,9
(3):17-19.
[21]JuanRoSa,主译回允中.外科病理学(上卷)[M].北京:北京大学
医学出版社,2006:917-943.
[22] 刘平.现代中医肝脏病学[M].北京:人民卫生出版社,2002:310.
9
新疆中医药 2008年 第26卷 第1期(总第113期)
[23] 张赤志.中西医结合肝脏病[M].北京:人民军医出版社,2002:
110.
[24] 胡达荣,谢青.几种治疗重型肝炎药物对急性肝损害动物存活
率的影响[J].中华传染病杂志,1993,11(2):104-105.
[25] 中华医学会,传染病与寄生虫学分会,肝病学分会联合修订.病
毒性肝炎防治方案[J].传染病信息杂志,2000,13(4):114-150.
[26] 方积乾.卫生统计学[M].第 5版,北京:人民卫生出版社.2003:
151-198.
[27] 黄志勇.PENS3.1软件使用说明 [M].北京:人民卫生出版社,
2003:56-126.
(收稿日期:2007-10-24)
雪莲注射液特殊安全性实验研究
陶海英 1,王雪莲 2,刘 燕 3,王 雪 3,黄 华 3
(1.新疆西域药业有限公司,新疆 乌鲁木齐 830011; 2.新疆科丽生物技术有限公司,新疆 乌鲁木齐 830011;
3.新疆维吾尔自治区药物研究所药理室,新疆 乌鲁木齐 830004)
摘 要 目的:通过雪莲注射液特殊安全性实验研究,评价其用药的安全性。方法:分别进行豚鼠主动全
身过敏实验、大鼠被动皮肤过敏实验、家兔肌肉刺激性实验及溶血性实验,观察雪莲注射液是否可引起过敏
和肌肉刺激性,是否有溶血作用。结果:雪莲注射液在豚鼠及大鼠给药后未出现过敏反应,肌肉注射未见明显
刺激性,且无明显溶血性。结论:雪莲注射液的特殊安全性实验结果表明其用药安全可靠。
关键词 雪莲注射液;安全性实验
雪莲注射液是以新疆雪莲Saussureainvolucrata
kar.etkir.exMaxim.为药材,经现代工艺提取精制而
成的中药注射液,临床主要用于治疗急慢性、风湿性
关节炎及类风湿性关节炎等。我们依照《中药、天然
药物免疫毒性(过敏性)研究技术指导原则》、《中药、
天然药物刺激性和溶血性研究技术指导原则》,对其
过敏性、肌肉刺激性和溶血性进行实验研究,为其临
床用药的安全性提供依据。
1 材 料
1.1 药品及试剂
雪莲注射液,橙黄色针剂,2.0mL支,肌肉注射
成人每日2mL每日1次,新疆西域药业有限公司提
供,批号 05060101;卵白蛋白,美国 Sigma公司;依
文思蓝,西安化学试剂厂,批号010613。
1.2 动 物
Wistar大鼠、豚鼠、新西兰大白兔,均由新疆医
科大学实验动物中心提供,动物合格证号:新医动字
SYXK(新)2003-0001。
1.3 仪 器
722分光光度计,上海第三分析仪器厂出品。
2 方法和结果
2.1 主动全身过敏实验(ASA)
选取健康豚鼠30只,体重300~400g,随机分为
5组,每组6只。分别为生理盐水对照组(注射同体
积的生理盐水)、阳性对照组(注射 2mg/只卵白蛋
白)、雪莲注射液三个剂量给药组(0.3、0.6、1.2mL/
kg)。腹腔给药,隔日1次,共3次。于末次给药后第
14天,每组一次性静脉注射原剂量3倍的药量。逐
日观察每只动物的症状,初次和末次致敏和激发当
日测定各组每只动物的体重。静脉注射激发后立即
至 3小时,详细观察每只动物的反应,症状的出现
及消失时间,按下表判断过敏反应发生率,根据过
敏反应发生率和发生过程进行综合判断。
表1 过敏反应症状
表2 全身致敏性评价标准
结果:阳性对照组在激发后15~120分钟内发
生不同程度(反应症状 4~8)的过敏反应,生理盐水
组与雪莲注射液组注射后 180分钟内均未出现过
敏反应,表明雪莲注射液在规定剂量下不会引起豚
鼠主动全身过敏反应。
0正常 7呼吸急促 14步态不稳
1不安宁 8排尿 15跳跃
2竖毛 9排粪 16喘息
3发抖 10流泪 17痉挛
4搔鼻 11呼吸困难 18旋转
5喷嚏 12哮鸣音 19潮式呼吸
6咳嗽 13紫癜 20死亡
0 - 过敏反应阴性
1~4症状 + 过敏反应弱阳性
5~10症状 ++ 过敏反应阳性
11~19症状 +++ 过敏反应强阳性
20 ++++ 过敏反应及强阳性
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
10