全 文 ：·86· Chinese Journal of Information on TCM Dec.2016 Vol.23 No.12
HPLC 与 HPCE 结合测定复方湿生扁蕾胶囊中
6 种化学成分含量
卢年华，赵慧巧，景明，刘娟娟，陈正君，陈晖
甘肃中医药大学，甘肃 兰州 730000
摘要：目的 建立 HPLC 与 HPCE 结合测定复方湿生扁蕾胶囊中木犀草素、当药黄素、当药醇苷及槐定
碱、苦参碱、氧化苦参碱含量的方法。方法 采用 HPLC 测定木犀草素、当药黄素、当药醇苷的含量，采用
HPCE 测定槐定碱、苦参碱、氧化苦参碱的含量。结果 在确定的色谱条件下，复方湿生扁蕾胶囊中木犀草素、
当药黄素、当药醇苷及槐定碱、苦参碱、氧化苦参碱均被很好地分离。结论 本试验建立的 HPLC 与 HPCE
联合测定法准确可靠，可用于复方湿生扁蕾胶囊中木犀草素、当药黄素、当药醇苷、槐定碱、苦参碱、氧化苦
参碱的含量测定。
关键词：湿生扁蕾；苦豆子；含量测定；高效液相色谱法；高效毛细管电泳法
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.12.021
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2016)12-0086-05
Content Determination of 6 Chemical Constituents in Compound Shisheng Bianlei Capsules
by HPLC and HPCE LU Nian-hua, ZHAO Hui-qiao, JING Ming, LIU Juan-juan, CHEN Zheng-jun, CHEN Hui
(Gansu University of Chinese Medicine, Lanzhou 730000, China)
Abstract: Objective To establish the method of HPLC and HPCE to determine the contents of luteolin,
swertisin, swertianolin, sophordine, matrine and oxymatrine in compound Shisheng Bianlei Capsules. Methods HPLC
was used to determine the contents of luteolin, swertisin, and swertianolin. HPCE was used to determine the contents
of sophordine, matrine and oxymatrine. Results Under a certain chromatographic conditions, luteolin, swertisin,
swertianolin, sophordinei, matrine and oxymatrine in the compound Shisheng Bianlei Capsules were well separated.
Conclusion The establishment of HPLC and HPCE combined determination method is accurate and reliable, and can
be used to content determination of luteolin, swertisin, swertianolin, sophordine, matrine and oxymatrine in compound
Shisheng Bianlei Capsules.
Key words: Gentianopsis paludosa; Sophora alopecuroides; content determination; HPLC; HPCE

复方湿生扁蕾胶囊是由甘肃省名中医张银川主
任医师的临床经验方研制而成的结肠靶向释药的口
服固体制剂，由湿生扁蕾和苦豆子 2味药组成，具有
清热解毒、利湿止泻功效，主治大肠湿热所致的痢疾、
肠炎等肠道疾病。在临床应用中，复方湿生扁蕾胶囊
对慢性溃疡性结肠炎具有确切的疗效[1]。湿生扁蕾
Gentianopsis paludosa（Munro）Ma.主要含有𠮿酮类、
黄酮类和三萜类化合物，𠮿酮类和黄酮类化合物具有
抗氧化、抗菌等作用[2-4]。当药黄素是黄酮苷类化合
物，对鼠伤寒杆菌具有中度抑制作用。当药醇苷为𠮿
酮苷类化合物，具有抑制结核菌的作用[5]。木犀草素

基金项目：国家自然科学基金（81360522、81560717）
通讯作者：景明，E-mail：1339512509@qq.com
是黄酮类化合物，对番泻叶诱导的小鼠腹泻模型具有
较好止泻作用[6]。苦豆子 Sophora alopecuroides L.中
富含生物碱、黄酮、有机酸、氨基酸、蛋白质、多糖、
脂肪酸及无机元素等多种成分[7]。药理研究表明，苦
豆子生物碱具有抗病毒、抗炎、抗变态反应、升高白
细胞、抗癌等作用，对各种细菌、真菌及病毒都有较
强的杀灭作用[8-11]。目前该制剂的质量标准中仅对湿
生扁蕾所含木犀草素的含量进行测定，而苦豆子所含
槐定碱等生物碱成分没有相应的含量测定方法，药品
的内在质量不能得到有效控制。本试验以方中湿生扁
蕾所含当药黄素、当药醇苷、木犀草素及苦豆子所含
槐定碱、苦参碱、氧化苦参碱为指标成分，分别建立
基于高效液相色谱法（HPLC）和高效毛细管电泳法
（HPCE）的定量测定方法，用以控制该制剂质量。
2016 年 12 月第 23 卷第 12 期 中国中医药信息杂志 ·87·
1 仪器与试药
Waters600高效液相色谱仪和Waters2487 PDA检
测器（Waters 公司），AE240 电子分析天平（梅特勒-
托利多仪器上海有限公司），Beckman PACE/MDQ高效
毛细管电泳仪和 DAD 检测器（Beckman 公司），
KQ-250B超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
复方湿生扁蕾胶囊（甘肃中医药大学科研实验中
心自制，规格 0.3 g/粒，批号 20140901、20141002、
20141103）；对照品木犀草素（批号 111520-200504，
中国食品药品检定研究院，供含量测定用）、当药黄
素（成都普菲德生物技术有限公司，批号 140525，
HPLC纯度＞98%）、当药醇苷（成都普菲德生物技术
有限公司，批号 140521，HPLC 纯度＞98%）、槐定
碱（国家标准物质研究中心，批号 110784，供含量测
定用）、苦参碱（国家标准物质研究中心，批号 110805，
供含量测定用）、氧化苦参碱（国家标准物质研究中
心，批号 110780，供含量测定用）；甲醇和乙腈均为
色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
HPLC条件：色谱柱 Agilent SB-C18（250 mm×
4.6 mm，5 µm）；流动相为甲醇（A）和 0.04%磷酸水
溶液（B），0～20 min为甲醇∶水＝40∶60～63∶37
线性梯度洗脱，20～50 min为甲醇∶水＝63∶37等度
洗脱；流速 0.8 mL/min；检测波长 254 nm；柱温 30 ℃；
进样量 20 µL。
HPCE条件：毛细管柱 68.5 cm×75 µm；缓冲液
50 mmol/L磷酸氢二钠，pH 5.5；电压 25 kV；温度
25 ℃；检测波长 215 nm；压力进样 0.5 psi，3 s；每
次运行前，毛细管用 0.1 mol/L NaOH溶液冲洗 2 min、
水冲洗 2 min、运行缓冲液冲洗 2 min；进样量 10 µL。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液制备 精密称取当药黄素、当药
醇苷、木犀草素对照品 21.28、23.54、46.44 mg，置
于 100 mL量瓶中，分别加甲醇溶解并稀释至刻度，
摇匀，作为贮备液。精密吸取当药黄素、当药醇苷、
木犀草素贮备液各 5 mL，置 250 mL量瓶中，加甲醇
至刻度，摇匀，即得当药黄素、当药醇苷、木犀草素
的混合对照品溶液（含当药黄素 4.256 µg/mL、当药
醇苷 4.708 µg/mL、木犀草素 9.288 µg/mL）。精密称
取槐定碱、苦参碱、氧化苦参碱对照品 33.72、19.54、
11.61 mg，置于 100 mL量瓶中，分别加甲醇溶解并
稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密吸取槐定碱、
苦参碱、氧化苦参碱贮备液各 5 mL，置 250 mL量瓶
中，加甲醇至刻度，摇匀，即得槐定碱、苦参碱、氧
化苦参碱的混合对照品溶液（含槐定碱 6.744 µg/mL、
苦参碱 3.908 µg/mL、氧化苦参碱 2.322 µg/mL）。
2.2.2 供试品溶液的制备 精密称取复方湿生扁蕾
胶囊内容物 0.5 g，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇
10 mL，摇匀，称定质量，超声提取（功率 500 W，
频率 40 kHz）30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补
足减失的质量，摇匀，0.45 µm滤膜过滤，取续滤液
作为 HPLC测定供试品溶液。精密称取复方湿生扁蕾
胶囊内容物 1.0 g，置于具塞锥形瓶中，加体积分数
65%乙醇 60 mL，加入盐酸使提取溶剂 pH＝0.5，超
声提取 30 min（功率 500 W，频率 40 kHz），将提取
液旋转蒸发至无醇浸膏，加 40 mL 水将浸膏完全溶
解，加 NaOH 溶液使浸膏水溶液 pH＝10.5。将溶液
置于 120 mL分液漏斗，加入 40 mL氯仿震荡，静置。
萃取 3次，合并氯仿溶液，减压浓缩至浸膏，用甲醇
溶液溶解，定容于 10 mL量瓶，摇匀，0.45 µm滤膜
过滤，取续滤液作为 HPCE测定供试品溶液。
2.2.3 内标贮备液制备 精密称取氨茶碱对照品
25.26 mg，置于 25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至
刻度，摇匀，即得内标贮备液（含氨茶碱 1.01 mg/mL）。
2.2.4 阴性对照溶液的制备 取缺湿生扁蕾阴性样
品 0.5 g，按照 HPLC测定供试品溶液的制备方法制备
缺湿生扁蕾的阴性对照溶液。取缺苦豆子阴性样品
1.0 g，按照 HPCE测定供试品溶液的制备方法制备缺
苦豆子的阴性对照溶液。
2.3 系统适用性试验
精密吸取“2.2”项下当药黄素、当药醇苷、木犀
草素混合对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各
20 µL，注入液相色谱仪，按色谱条件进行分析，结
果在与对照品峰保留时间一致的位置上，样品溶液的
当药黄素、当药醇苷、木犀草素峰形良好，理论板数
按木犀草素计算不低于 3000，当药黄素、当药醇苷、
木犀草素与相邻峰的分离度良好，阴性对照无干扰。
色谱图见图 1。
精密吸取“2.2”项下槐定碱、苦参碱、氧化苦参
碱的混合对照品溶液及内标贮备液各 2 mL，混匀，
作为对照品和内标的混合液；吸取供试品溶液及内标
贮备液各 2 mL，混匀，作为供试品和内标的混合液；
吸取阴性对照溶液及内标贮备液各 2 mL，混匀，作
为阴性对照和内标的混合液。分别精密吸取上述 3种
混合液各 10 µL，注入毛细管电泳仪，按色谱条件进
行分析，结果在与对照品峰保留时间一致的位置上，
供试品溶液的槐定碱、苦参碱、氧化苦参碱峰形良好，
·
理论
氧
扰
图
图 2
88·
板数按槐定
化苦参碱与
。色谱图见图
注：A
1.
1 复方湿生扁
注：A
1.槐定
复方湿生扁蕾胶



C
碱计算不低
相邻峰的分
2。
A
B
C
.混合对照品；B.
当药黄素；2.当药
蕾胶囊中当药黄
A
B
C
.混合对照品；B.
碱；2.苦参碱；3
囊中槐定碱、苦



hinese Jo
于 3000，槐
离度良好，



供试品；C.阴性对
醇苷；3.木犀草
素、当药醇苷、木



供试品；C.阴性对
.氧化苦参碱；4.
参碱、氧化苦参
urnal of
定碱、苦参碱
阴性对照无



照；
素
犀草素 HPLC图



照；
氨茶碱
碱、氨茶碱HPCE
t/min
t/min
Informatio
、
干

图
2.4
精
犀草素
加甲醇
20 µL
取“2
贮备液
至刻度
入高效
行线性
对照
当药黄
当药醇
木犀草
对照
槐定
苦参
氧化
2.5
按
醇苷、
次，测
面积
结果表
按
氧化苦
测得
RSD＝
表明精
2.6
取
物 6份
在高效
量分数
RSD＝
RSD＝
RSD＝
取
物 6份
在高效
数。结
1.42%
n on TCM
线性关系考
密吸取“2
对照品贮备
稀释至刻度
，注入高效
.2.1”项下槐
各 1 mL，
，摇匀，各
电泳仪测定
回归分析，
表 1 当药黄素
品 回
素 Y＝523
苷 Y＝102
素 Y＝348
表 2 槐定碱、
品
碱 Y＝1
碱 Y＝8
苦参碱 Y＝8
精密度试验
“2.2.1”项
木犀草素混
得当药黄素
RSD＝0.80%
明精密度良
“2.2.1”项
参碱混合对
槐定碱峰面
0.87%、氧化
密度良好。
重复性试验
同一批样品
，按“2.2.
液相色谱仪
。结果当药
1.33%；当
2.01%；木
1.67%。表
同一批样品
，按“2.2.
电泳仪进样
果槐定碱的
；苦参碱平
Dec
察
.2.1”项下当
液各 1 mL，
，摇匀，各
液相色谱仪
定碱、苦参
分别置 25 m
精密吸取 2
。分别以峰
结果见表 1
、当药醇苷和木犀
归方程
.29X＋98.36
.47X＋17.29
.25X＋75.26
苦参碱和氧化苦
回归方程
28.21X＋15.22
6.988X＋11.69
2.494X＋10.44

下操作，精
合对照品溶
峰面积 RS
、木犀草素
好。
下操作，精
照品溶液 1
积 RSD＝0
苦参碱峰面


（批号 201
2”项下方法
进样 20 µL
黄素的平均
药醇苷平均
犀草素平均
明重复性良
（批号 201
2”项下方法
10 µL，记
平均质量分
均质量分数
.2016 Vol
药黄素、当
分别置 25
精密吸取 2、
，记录色谱
碱、氧化苦
L量瓶中，
、4、6、8、
面积值对质
、表 2。
草素线性关系考
相关系数
0.999 6
0.999 7
0.999 9
参碱线性关系考
相关系数
0.999 4
0.999 5
0.999 3
密吸取当药
液 20 µL，
D＝0.82%、
峰面积 RSD
密吸取槐定碱
0 µL，重复
.93%、苦参
积 RSD＝0
40901），精
制备供试品
，记录峰面
质量分数为
质量分数为
质量分数为
好。
40901），精
制备供试品
录峰面积，
数为 92.8 µ
为 52.8 µg
.23 No.12
药醇苷、木
mL量瓶中，
6、10、15、
峰。精密吸
参碱对照品
加甲醇稀释
10 µL，注
量（ng）进
察结果
线性范围/ng
17.02～170.24
18.83～188.32
37.15～371.52
察结果
线性范围/ng
26.98～134.88
15.63～78.16
9.29～46.44
黄素、当药
重复进样 5
当药醇苷峰
＝0.73%。
、苦参碱、
进样 5次，
碱峰面积
.98%。结果
密称取内容
溶液，分别
积，计算质
35.2 µg/g，
18.3 µg/g，
65.1 µg/g，
密称取内容
溶液，分别
计算质量分
g/g，RSD＝
/g，RSD＝

2016 年 12 月第 23 卷第 12 期 中国中医药信息杂志 ·89·
1.97%；氧化苦参碱平均质量分数为 23.2 µg/g，RSD＝
1.83%。表明重复性良好。
2.7 稳定性试验
取供试品溶液，分别在 0、2、4、6、8、12 h在
高效液相色谱仪进样 20 µL，记录色谱图中当药黄素、
当药醇苷、木犀草素的峰面积，计算其 RSD 分别为
0.49%、0.51%、0.47%，表明供试品溶液在 24 h内稳
定，满足测定要求。
取供试品溶液，分别在 0、2、4、6、8、12 h在
高效电泳仪进样 10 µL，记录色谱图中槐定碱、苦参
碱、氧化苦参碱的峰面积，计算其 RSD分别为 0.53%、
0.66%、0.71%，表明供试品溶液在 24 h 内稳定，满
足测定要求。
2.8 加样回收率试验
精密称取已测定当药黄素、当药醇苷、木犀草素
量的样品（批号 20140901）约 0.25 g，共 5份，分别
加入当药黄素、当药醇苷、木犀草素对照品，按“2.2.2”
项下方法制备供试品溶液并注入高效液相色谱仪进
行测定分析，计算回收率，结果平均回收率分别为
97.81%、97.51%、98.22%，见表 3。
精密称取已测定苦参碱、槐定碱、氧化苦参碱量
的样品（批号 20140901）约 0.5 g，共 5份，分别加
入苦参碱、槐定碱、氧化苦参碱对照品，按“2.2.2”
项下方法制备供试品溶液并注入高效电泳仪进行测
定分析，计算回收率，结果平均回收率分别为 96.74%、
96.67%、95.87%，见表 4。
表 3 当药黄素、当药醇苷和木犀草素加样回收率试验
成分
取样量
/g
样品中
含量/µg
加入量
/µg
测得量
/µg
回收率
/%
平均回
收率/%
RSD
/%
当药黄素 0.254 1 8.94 9.41 17.93 97.71
0.251 6 8.86 9.33 17.92 98.52
0.253 5 8.92 9.39 17.93 97.92 97.81 0.64
0.254 4 8.95 9.38 17.98 98.09
0.249 7 8.79 9.48 17.69 96.82
当药醇苷 0.254 1 4.65 4.43 8.84 97.36
0.251 6 4.60 4.36 8.84 98.66
0.253 5 4.64 4.43 8.81 97.13 97.51 0.94
0.254 4 4.66 4.48 8.80 96.28
0.249 7 4.57 4.39 8.79 98.10
木犀草素 0.254 1 16.54 16.07 32.09 98.40
0.251 6 16.38 16.08 31.91 98.30
0.253 5 16.50 14.53 30.72 99.00 98.22 0.57
0.254 4 16.56 16.23 31.97 97.50
0.249 7 16.25 16.15 31.72 97.90
表 4 槐定碱、苦参碱和氧化苦参碱加样回收率试验
成分
取样量
/g
样品中
含量/µg
加入量
/µg
测得量
/µg
回收率
/%
平均回
收率/%
RSD
/%
槐定碱 0.517 7 48.04 47.99 92.96 96.80
0.501 9 46.58 47.64 91.77 97.40
0.511 6 47.48 48.37 92.02 96.00 96.74 0.86
0.503 3 46.71 48.45 91.16 95.80
0.500 8 46.47 47.49 91.8 97.70
苦参碱 0.517 7 27.33 26.13 51.70 96.71
0.501 9 26.50 25.99 50.97 97.10
0.511 6 27.01 26.41 51.18 95.81 96.67 0.61
0.503 3 26.57 25.94 51.09 97.30
0.500 8 26.44 26.18 50.73 96.41
氧化苦参碱 0.517 7 12.01 11.35 22.33 95.59
0.501 9 11.64 11.27 22.02 96.12
0.511 6 11.87 11.34 22.21 95.69 95.87 0.50
0.503 3 11.68 11.15 22.05 96.58
0.500 8 11.62 11.36 21.92 95.39
2.9 样品测定
取 3批次样品，按上述制备和测定方法进样测定，
每份平行测定 3次，按标准曲线法分别计算当药黄素、
当药醇苷、木犀草素、苦参碱、槐定碱、氧化苦参碱
的质量分数。结果见表 5、表 6。
表 5 样品中当药黄素、当药醇苷、木犀草素含量测定结果
批号
当药黄素 当药醇苷 木犀草素
含量/（µg/g）RSD/% 含量/（µg/g） RSD/% 含量/（µg/g）RSD/%
20140901 35.2 0.48 18.3 0.67 65.1 0.54
20141002 34.9 0.96 18.8 0.59 64.3 0.49
20141103 35.3 0.52 19.1 0.61 65.6 0.56
表 6 样品中苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱含量测定结果
批号
槐定碱 苦参碱 氧化苦参碱
含量/（µg/g）RSD/% 含量/（µg/g） RSD/% 含量/（µg/g）RSD/%
20140901 94.6 0.71 52.8 0.83 23.2 0.69
20141002 99.1 0.67 54.7 0.92 22.9 0.82
20141103 96.6 0.57 52.3 0.74 24.1 0.72
3 讨论
本研究采用HPLC测定复方湿生扁蕾胶囊中当药
黄素、当药醇苷、木犀草素的含量，同时采用 HPCE
测定复方湿生扁蕾胶囊中槐定碱、苦参碱和氧化苦参
碱的含量。赵氏等[12]采用 HPLC对湿生扁蕾与苦豆子
配伍提取物中当药黄素、当药醇苷、木犀草素的测定
方法进行了考察，对检测波长、流动相及洗脱方式进
行了优选，为复方湿生扁蕾胶囊质量控制提供了可行
的方法。有关苦豆子中生物碱的含量测定方法，已报
·90· Chinese Journal of Information on TCM Dec.2016 Vol.23 No.12
道的主要有紫外吸收法（UC）、薄层色谱法（TLC）、
HPLC、HPCE等方法。UC适宜测定总生物碱，且对
样品的纯度要求较高；TLC虽然简便，但重现性差，
影响因素多；采用 HPLC分析时，由于苦豆子中生物
碱成分的碱性强、极性大，色谱柱吸附太强，色谱峰
拖尾严重，另外 200 nm左右的近紫外吸收也造成杂
质成分太多而难以分离；而采用 HPCE分析，不但分
离效率高，还可有效消除溶剂及杂质的干扰，峰形对
称尖锐。
本研究结果表明，采用 HPLC测定复方湿生扁蕾
胶囊中当药黄素、当药醇苷、木犀草素，同时采用
HPCE测定复方湿生扁蕾胶囊中苦参碱、槐定碱、氧
化苦参碱的含量，方法简便、准确、重复性好，能够
为该制剂的质量控制提供方法学基础。
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（收稿日期：2015-12-10）
（修回日期：2015-12-22；编辑：陈静）