全 文 ：云南松松塔多糖含量测定两种方法的比较
王莹1，2，张海珠1，2，*，刘熙1，2，李杨1
（1.大理学院药学与化学学院，云南大理 671000；2.云南省昆虫生物医药研发重点实验室，
云南大理 671000）
摘 要：通过对云南松松塔中多糖的含量的测定，比较硫酸-蒽酮和硫酸-苯酚两种常用多糖测量方法。通过精密度
试验、稳定性试验、回收率试验等方面，对硫酸-蒽酮和硫酸-苯酚两种常用多糖测量方法进行比对。结果表明：硫酸-
苯酚法在云南松松塔多糖含量测定中较硫酸-蒽酮法优越，硫酸-苯酚法测定云南松松塔多糖含量时，操作简便，精
密度、稳定性高，为云南松松塔等植物的多糖含量测定提供了参考。
关键词：云南松；松塔；硫酸-苯酚法；硫酸-蒽酮法；多糖含量
Comparison of Two Methods of Determination in the Pinecone of Pinus yunnanensis
WANG Ying1，2，ZHANG Hai-zhu1，2，*，LIU Xi1，2，LI Yang1
（1. College of Pharmacology，Dali University，Dali 671000，Yunnan，China；2. Yunnan Provincial Key
Laboratory of Entomological Biopharmaceutical R&D，Dali 671000，Yunnan，China）
Abstract： Determination of the content in the cloud Nansongsongta polysaccharides， more sulfuric acid -
anthrone and sulfuric acid - phenol two common polysaccharide measurement method. By aspects of precision
test， stability test， recovery test of sulfuric acid， sulfuric acid-anthrone and sulfuric acid - phenol two common
polysaccharide measurement methods were compared. Sulfuric acid-phenol method in the determination of the
polysaccharide content cloud Nansongsongta than sulfuric acid-excellent anthrone method. Sulfuric acid-the
determination of the polysaccharide content cloud Nansongsongta phenol method， simple operation， high
precision， stability， and other plants for the determination of the cloud Nansongsongta polysaccharide content to
provide a reference.
Key words： Pinus yunnanensis Faranch； pinecone； sulfuric acid -phenol method； sulfate acid -anthrone
method； polysaccharide content
食品研究与开发
Food Research And Development
2015 年 10 月
第 36 卷第 19 期检测分析
DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2015.19.038
基金项目：国家自然科学基金（81260632）；云南省教育厅重点项目
（云南松松塔多糖的分离纯化及免疫活性研究）；大理学院应用开发
科研基金（KYYY201304）
作者简介：王莹（1981—），女（汉），讲师，在读博士，研究方向：主要从
事中药活性研究。
*通信作者：张海珠，讲师,主要从事中药及天然药物活性及质量控制
研究。
松塔（Pinecone）系松科（Pinaceae）松属（Pinus）植
物的球果，别名松果、松球，其植物来源有华山松、云南
松、红松、油松及思茅松等[1]，松塔具有祛痰、止咳、平
喘等功效[2]，而分布在云南的云南松（Pinus yunnanensis
Faranch）资源十分广泛，但药用价值却未得到有效地
开发利用。本文对采集于云南省大理市的云南松松塔
进行研究，测量其多糖含量，为云南松松塔的药用价
值的开发利用奠定基础。
1 材料
1.1 研究对象
云南松松塔样品于 2013年 8月采集于云南省大
理市斜阳峰，标本由大理学院段宝忠副教授鉴定，粉
碎，过 60目筛，置于阴暗处备用。
1.2 主要仪器
RE-3000 旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂；
AL104电子分析天平：梅特勒一托利多仪器有限公司；
TU-1901双光束紫外可见分光光度计：北京浦西通用
仪器有限责任公司；恒温水浴锅：金坛市大地自动化
145
仪器厂。
1.3 主要试剂
葡萄糖：国药集团化学试剂有限公司，纯度≥99%，
批号 20130408；蒽酮：国药集团化学试剂有限公司，纯
度≥99 %，批号 20131011；苯酚、浓硫酸及其他试剂均
为分析纯。
2 方法
2.1 5 %苯酚溶液的配制
精密称取苯酚 10 g，加入 200 mL水溶解，完全溶
解后放置于棕色瓶保存，备用。
2.2 硫酸-蒽酮溶液的配制
精密称取蒽酮 4 mg，加入 80 % 200 mL 硫酸溶
解，完全溶解后放置于棕色瓶保存，备用。
2.3 标准溶液的配制
精密称取葡萄糖 50.00 mg，置于 50 mL容量瓶溶
解，定容，得 1.0 mg/mL标准溶液，备用。
2.4 样品溶液的配制
精密称取样品 10 mg，置于 50 mL容量瓶溶解，定
容，得样品溶液，备用。
2.5 测量波长的选择。
2.5.1 硫酸-蒽酮法
精密移取 1.0 mg/mL标准溶液/样品溶液各 1 mL，
分别置于两个 10 mL容量瓶中，各加入 7 mL硫酸-蒽
酮溶液，冷却至室温后定容，再次冷却至室温，100 ℃
沸水浴加热 10 min，冷却至室温，另取 1 mL蒸馏水以
同样方法做空白对照，进行光谱扫描，扫描波长 500 nm~
700 nm[3]。图 1显示得到，测量波长为 622 nm。
2.5.2 硫酸-苯酚法
精密移取 1.0 mg/mL标准溶液/样品溶液各 1 mL，
分别置于两个 10 mL容量瓶中，各加入 5 %苯酚溶液
1 mL，5 mL浓硫酸，冷却至室温后定容，再次冷却至室
温，100 ℃沸水浴加热 10 min，冷却至室温，另取 1 mL
蒸馏水以同样方法做空白对照，进行光谱扫描，扫
描波长 400 nm~550 nm[4]。图 2显示得到，测量波长为
490 nm。
3 结果与分析
3.1 标准曲线的制备
3.1.1 硫酸-蒽酮法标准曲线的制备
精密吸取葡萄糖标准溶液 0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、
1.1 mL置于 10 mL容量瓶中，加入 7mL硫酸-蒽酮溶
液，冷却至室温后定容，再次冷却至室温，100 ℃沸水
浴加热 10 min，冷却至室温，另取 1 mL蒸馏水以同样
方法做空白对照，进行光度测量，测量波长为 622 nm。
以吸光度 A为纵坐标 Y，以溶液浓度 C为横坐标 X，得
到标准曲线 Y=16.177X-0.075 3，相关系数 R2=0.999 6。
测定结果显示，葡萄糖在 10 μg/mL～110 μg/mL范围内
线性关系良好。
3.1.2 硫酸-苯酚法标准曲线的制备
精密吸取葡萄糖标准溶液 0.25、0.75、1.25、1.75、
2.25 mL置于 10 mL容量瓶中，1 mL 5 %苯酚溶液，5 mL
浓硫酸，冷却至室温后定容，再次冷却至室温，100 ℃
沸水浴加热 10 min，冷却至室温，另取 1 mL蒸馏水以
同样方法做空白对照，进行光度测量，测量波长为
490 nm。以吸光度 A为纵坐标 Y，以溶液浓度 C为横
坐标 X，得到标准曲线 Y=2.06X + 0.032 8，相关系数 R2 =
0.999 7。测定结果显示，葡萄糖在 10 μg/mL～90 μg/mL
范围内线性关系良好。
3.2 方法学考察
3.2.1 硫酸-蒽酮法方法学考察
精密度试验结果 RSD=0.64 %。
精密移取样品溶液 1 mL，按照 2.5.2方法进行操
作，得到重复性试验结果，得样品中多糖含量的平均
含量为 549 μg/g，结果 RSD=2.91 %。
稳定性试验，每隔 4 h 测定样品液，连续考察
24 h，RSD=1.67 %。
0.36
0.23
0.1
吸
光
度
500 550 700
波长/nm
600 650
1
2
1-葡萄糖
2-样品
图 1 样品溶液与葡萄糖溶液的紫外吸收光谱（硫酸-蒽酮法）
Fig.1 The UV absorption spectra of sample solution and glucose
solution（sulfuric acid - anthrone method）
0.4
0.3
0.2
0.1
吸
光
度
400 420 540
波长/nm
440 460
1
2
1-葡萄糖
2-样品
480 500 520
图 2 样品溶液与葡萄糖溶液的紫外吸收光谱（硫酸-苯酚法）
Fig.2 The UV absorption spectra of sample solution and glucose
solution（sulfuric acid - phenol method）
王莹，等：云南松松塔多糖含量测定两种方法的比较 检测分析
146
硫酸-蒽酮法加样回收率试验结果如表 1所示。
由表 1可知，回收率试验显示，所测样品回收率
平均值为 99.68 %，RSD=1.05 %。
3.2.2 硫酸-苯酚法方法学考察
精密度试验结果 RSD=0.28 %。
精密移取样品溶液 1 mL，按照 2.5.2方法进行操
作，得到重复性试验结果，得样品中多糖含量的平均
含量为 584 μg/g，结果 RSD=1.51 %。
稳定性试验，每隔 4 h 测定样品液，连续考察
24 h，RSD= 1.14 %。
硫酸-苯酚法加样回收率试验结果如表 2所示。
由表 2可知，回收率试验显示，所测样品回收率
平均值为 99.57 %，RSD=1.43 %。
综上所述，通过对精密度试验、重复性试验、稳定
性试验、回收率试验等的考察，对比了硫酸-蒽酮法和
硫酸-苯酚法两种常用多糖测定方法。试验结果表明，
硫酸-苯酚法所测云南松松塔多糖精密度、重复性、稳
定性较好，虽然回收率较硫酸-蒽酮法略有不足，但相
差不是很大，是目前测定云南松松塔多糖较为理想的
方法。
3.3 样品含量测定
用硫酸-苯酚法对松塔多糖样品进行测定，依照
2.5.2方法进行操作，测得云南松松塔多糖粗提物的含
量为 58.41 %。
4 讨论
1）硫酸-蒽酮法和硫酸-苯酚法在测定松塔多糖
的过程中，回收率试验方面，硫酸-苯酚法虽较硫酸-
蒽酮法略有不足，但精密度、重复性、稳定性较好，操作
简单，适合松塔及其制品的多糖含量常规测定。
2）硫酸-蒽酮法测量多糖含量的关键在于，蒽酮
在空气中易氧化变质，因此蒽酮溶液应现配现用[5]，而
硫酸-苯酚法在于苯酚的重结晶，去除其中被氧化的
的醌类杂质，以提高实验准确性[6]。
利用硫酸-苯酚法测定松塔多糖的方法，所需仪
器简单，药品价格低廉，操作简便，利于推广，对于云南
松松塔多糖的药用价值的开发利用奠定基础。
参考文献：
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酸的 HPLC法测定[J].中国医药工业杂志,2013,44(8):798-800
[2] 周明波,刘光明,吕永俊,等．药用植物松塔的化学成分研究[J].大
理学院学报,2008,10(7):1-4
[3] 谭敏,邱细敏．白术多糖含量两种测定方法的比较[J].现代中药研
究与实践,2012,26(2):73-75
[4] 周萍,罗延梦,马媛,等．核桃壳多糖的含量测定[J].安徽农业科学,
2012,40(25):12654-12655
[5] 谭敏,邱细敏,陆艳艳,等．植物多糖分析方法综述[J].食品科学,
2009(21):420-423
[6] 徐斌,董英,林琳,等．改良苯酚-硫酸法测定苦瓜多糖含量[J].食品
科技,2005(7):79-82
收稿日期：2014-06-03
表 1 硫酸-蒽酮法加样回收率试验结果
Table 1 The results of average recovery of sulfuric acid-anthrone
method
编号
样品含量/
μg
加入量/
μg
测得量/
μg
回收率/
%
平均回
收率/%
RSD/%
1
2
3
4
5
6
11.46
11.46
11.46
11.46
11.46
11.46
10
10
20
20
30
30
21.52
21.35
31.21
31.25
41.85
41.36
100.56
98.89
98.74
98.96
101.30
99.65
99.68 1.05
编号
样品含量/
μg
加入量/
μg
测得量/
μg
回收率/
%
平均回
收率/%
RSD/%
1
2
3
4
5
6
11.46
11.46
11.46
11.46
11.46
11.46
10
10
20
20
30
30
21.61
21.54
31.19
31.06
41.51
40.98
101.46
100.78
98.63
97.98
100.16
98.41
99.57 1.43
表 2 硫酸-苯酚法加样回收率试验结果
Table 2 The results of average recovery of sulfuric acid-phenol
method
王莹，等：云南松松塔多糖含量测定两种方法的比较检测分析
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