全 文 ：天然产物研究与开发 NatProdResDev2008, 20:863-865
文章编号:1001-6880(2008)05-0863-03
　
　
　收稿日期:2007-06-04　　　接受日期:2007-06-21
　基金项目:国家自然科学基金(30500646);河南省卫生厅艾滋病
科技攻关计划(2006038)
＊通讯作者 E-mail:kangweny@hotmail.com
RP-HPLC法测定垫状卷柏中穗花杉双黄酮的含量
许启泰 1, 2 ,郅妙利 1, 2 ,康文艺 1, 2＊
1河南大学天然药物研究所 , 开封 475004;2河南大学药学院 , 开封 475004
摘　要:本文用反相高效液相色谱法测定垫状卷柏药材中的穗花杉双黄酮。选用 PurospherstarRP-C18色谱柱
(250 mm ×4.6 mm, 5μm), 以甲醇-0.1%磷酸水溶液(65∶35)为流动相 ,流速为 0.8mL/min, 检测波长 337 nm,
柱温 25℃进行检测 。结果显示 ,穗花杉双黄酮的含量在 0.038 ～ 0.342 μg范围内时进样量与峰面积积分值呈
良好的线性关系 , r=0.9999, 平均回收率为 101.2%, RSD为 2.3% (n=6)。该方法测定垫状卷柏药材中的穗
花杉双黄酮含量灵敏 、准确 、重现性好。
关键词:垫状卷柏;穗花杉双黄酮;反相-高效液相色谱
中图分类号:R931.71;Q946 文献标识码:A
DeterminationofAmentoflavoneinSelaginelapulvinatebyRP-HPLC
XUQi-tai1, 2 , ZHIMiao-li1, 2 , KANGWen-yi1, 2＊
1InstituteofNaturalProducts, HenanUniversity, Kaifeng475004 , China;
2 PharmaceuticalColegeofHenanUniversity, Kaifeng475004 , China
Abstract:InthispaperweestablishedaRP-HPLCmethodfortheamentoflavoneinSelaginellapulvinateanddetermined
thequantityofamentoflavone.Themobilephaseofchromatographicconditions, includingPurospherstarRP-C18 column
(250 mm ×4.6 mm, 5 μm), isconsistedofmethanol-0.1% phosphoricacidsolution(65∶35).Thedetectionwave-
lengthwasat337 nmandthetemperatureofthecolumnwas25℃.Amentoflavoneshowedagoodlinearrelationshipat
therangeof0.038-0.342 μg, r=0.9999.Therecoveryratewas101.2% andRSDwas2.3%.Themethodscanbe
usedaccuratelyandquicklyforthequalitycontrolofamentoflavoneinSelaginellapulvinate.
Keywords:Selaginellapulvinate;amentoflavone;HPLC
　　卷柏为蕨类植物门卷柏科卷柏属植物 ,约有
700种 ,分布于世界各地 ,我国约有 50余种 ,已知药
用的有 25种 [ 1] 。 《中国药典 》2005年版收载为卷柏
科卷柏 Selaginelatamariscina(Beauv.)Spring和垫
状卷柏 Selaginelapulvinate(Hook.EtGrev.)Maxim
的干燥全草 。其味辛 ,平 ,归肝 、心经 。用于经闭痛
经 ,癥瘕痞块 ,跌打损伤。卷柏碳化淤止血 ,用于吐
血 、崩漏 、便血 、脱肛 [ 2] 。穗花杉双黄酮(amentofla-
vone)是卷柏属植物中的一种特征化学成分 ,有文献
报道穗花杉双黄酮及其衍生物可作为一类新的天然
的人组织蛋白酶抑制剂[ 3] 。 SamSikKang等报道
amentoflavone对由过氧化和 β淀粉状蛋白质引起的
神经细胞毒性有很强的保护作用 ,可对神经退化性
疾病如局部缺血性抽搐和阿尔滋海默症有很好的治
疗作用[ 4] 。穗花杉双黄酮有很好的抗炎作用 , E.R.
Woo等通过研究发现 amentoflavone的抗炎机制在
于其抑制了细胞核因子 NF-κB在巨噬细胞的活化 ,
从而抑制了氧化氮合酶的诱导生成[ 5] 。
高效液相色谱(HPLC)法已经广泛用于天然活
性成分的分离和分析 ,中国药典(2005年版)还未见
用 HPLC法测定卷柏中穗花杉双黄酮的含量 ,文献
中的报道也甚少 ,为更好地控制垫状卷柏药材及成
药的质量 ,本研究对垫状卷柏中的主要成分穗花杉
双黄酮进行了含量测定研究 ,为建立垫状卷柏药材
及其制剂的标准提供参考。
1　仪器 、试剂与样品
1.1　仪器 、试剂与样品
岛津 LC-2010A高效液相色谱仪 , CLASS-VP色
谱工作站 , UV-2010A检测器 ,自动进样器 ,柱温箱 ,
四元低压梯度泵。甲醇为色谱纯 ,水为高纯水 ,其余
所用试剂均为分析纯。
DOI :10.16333/j.1001-6880.2008.05.032
1.2　试药
穗花杉双黄酮标准品由本实验室自制 ,纯度为
98%。垫状卷柏药材采于西藏 ,由本研究所生药室
袁王俊博士鉴定 。
2　含量测定
2.1　色谱条件
PurospherstarRP-C18色谱柱(4.6mm ×250mm, 5
μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(65∶35),流速
0.8mL/min,柱温 25 ℃,检测波长 337 nm。理论塔
板数按穗花杉双黄酮峰计算大于 6000。
2.2　对照品溶液的制备
精密称取穗花杉双黄酮对照品 1.9 mg,加甲醇
定容至 10mL,配制成 0.19mg/mL的储备液 。取 1
mL储备液稀释至 5mL,配制成 0.038 mg/mL的工
作液 ,作为对照品溶液 。
2.3　线性关系考察
分别精密吸取对照品溶液 1、2、3、5、7、9 μL注
入高效液相色谱仪 ,保留时间值为 20.45 min。以穗
花杉双黄酮进样量(μg)为横坐标(x),以穗花杉双
黄酮峰面积为纵坐标(y),进行线性回归 ,得回归方
程为 y=4E+06x+86960, r=0.9999,表明穗花杉双
黄酮在 0.038 ～ 0.342 μg与峰面积呈良好的线性关
系 。
2.4　药材供试品溶液的制备
将干燥的垫状卷柏粉碎 ,过 60目筛 ,精密称取
0.030 g置于 10mL容量瓶中 ,加甲醇适量 ,冷浸过
夜 。超声 40 min,放冷 ,用甲醇定容至 10 mL,摇匀 ,
用微孔滤膜(0.45 μm)滤过 ,即得样品溶液 。
2.5　精密度试验
精密吸取同一对照品溶液 10 μL,重复进样 5
次 ,分别测定峰面积 ,峰面积 RSD为 0.31%,表明仪
器精密度良好。
2.6　重现性试验
精密称取同一样品 6份(每份 0.030 g),按样
品溶液制备方法制备 6份样品溶液。各进样 10
μL,测定峰面积 ,计算 ,平均质量分数为 3.57mg/g,
RSD为 0.021%。表明本方法重现性好。
2.7　稳定性试验
取同一样品溶液 ,每隔 2 h进样 1次 ,测定并记
录峰面积 ,计算。 RSD为 0.057%,表明样品溶液在
10 h内稳定性较好。
2.8　加样回收率试验
采用加样回收测定法。精密称取已知穗花杉双
黄酮含量的同一份样品 6份 ,每份加入 0.038 mg/
mL对照品溶液 1.0 mL,按样品处理方法制备样品
溶液 ,每次进样 10μL,测定并计算。穗花杉双黄酮
的平均回收率为 101.2%, RSD为 2.3%。
2.9　样品测定
按样品溶液制备方法制备各样品溶液 ,按上述
色谱条件进样 10 μL,记录并计算峰面积 ,得穗花杉
双黄酮的含量为 0.36%。测定色谱图见图 1。
3　讨论
3.1　检测波长的选择
取 0.020g标准品置 50mL容量瓶中 ,用甲醇溶解
并定容 ,得 0.4 mg/mL标准品溶液。用紫外检测器连
续在 200 ～ 400nm范围内测定吸光度 ,根据结果我们确
定了穗花杉双黄酮的检测波长为 337nm。
3.2　提取方法的选择
作者曾将样品分成两份 ,一份用甲醇冷浸 24 h
后超声 ,一份不冷浸直接用甲醇超声提取 ,结果显示
冷浸 24h后超声提取的样品穗花杉双黄酮含量较
高 ,为 3.57 mg/g,而直接用甲醇超声提取的样品穗
花杉双黄酮含量为 2.85 mg/g。另外 ,将甲醇冷浸
24h后的样品分别超声 25、40、60、90 min,结果显示
样品超声 40 min即已提取完全。故本实验用甲醇
冷浸 24h后超声 40 min的方法来提取。
3.3　流动相系统的选择
作者曾用甲醇 -水 、乙腈 -水 、甲醇-0.1%磷酸水
溶液 、乙腈 -2%乙酸水溶液等系统做流动相 ,发现甲
醇-0.1%磷酸水溶液系统的色谱峰型较好 。但穗花
杉双黄酮主峰前有一小峰 ,虽变换了甲醇和 0.1%
磷酸水溶液的比例仍不能使其分离度 >1.5,其分离
度只能达到 1.2 ～ 1.4,最后作者将系统流速改为
0.8 mL/min,发现分离度达到 1.64。故本实验流动
相流速最后确定为 0.8mL/min。
图 1　垫状卷柏药材 HPLC图
Fig.1　HPLCchromatogramofstandard(A)andsample(B)
amentoflavoneinSelaginellapulvinat
864 天然产物研究与开发　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　Vol.20
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