全 文 ：\ 2015·24
赵晶丽
（吉林工业职业技术学院，吉林吉林132013）
摘要：葫芦素系葫芦科植物甜瓜（CucumismeloL.）瓜蒂的提取物。纯化工艺方面：通过比较，选择D101大孔吸附树脂对提取物进行
纯化，得到的总葫芦素中含葫芦素B（CUB）约30％，确保了葫芦素提取部位的质量。同时使用大孔树脂吸附树脂的方法，减少了有机溶
剂对药品的污染。
关键词：葫芦素；纯化工艺；研究
基金项目：吉林省教育厅课题项目（吉科教合字〔2014〕第452号）
中图分类号：R284.2 文献标识码：A DOI编号： 10.14025/j.cnki.jlny.2015.24.038
甜瓜蒂中总葫芦素的纯化工艺研究
实验研究SHIYANYANJIU实验研究 SHIYANYANJIU
甜瓜蒂始载于《本经》，为葫芦科植物甜瓜的干燥果柄[1]，
含杂醇，皂苷，氨基酸，葫芦苦素（cu-curbitacin）B、D、E，异葫
芦苦素（isocucurbitacin）B，葫芦苦素 B-2-O-β-D- 吡喃葡萄
糖甙（cucurbitacin B-2-O-β-D-glucopyranosi-de）等。甜瓜蒂
粗提取物中有效成分总葫芦素（CU）含量较低，杂质的存在会
大大降低提取物的药效，同时也不利于葫芦素 B 单一组分的
分离制备。
大孔吸附树脂是一种不含交换基团，具有大孔结构的高
分子吸附剂。大孔吸附树脂与凝胶和天然吸附树脂相比，有表
面积大、吸附量大、选择性好、吸附速度快、易于解吸附、物理
化学稳定性高、再生处理简便、使用周期长、易于构成闭路循
环和节省费用等诸多优点[2]。近年来，在药学领域（尤其天然
药物）中的应用普遍受到重视。
本课题是在确定最佳醇提工艺后，使用大孔吸附树脂对
葫芦素分离工艺进行了系统考察，通过研究大孔吸附树脂对
葫芦素的纯化工艺，确定了一条较为科学合理的纯化工艺路
线。
1 仪器与试药
1.1 仪器
AL204 电子天平：梅特勒—托利多仪器（上海）有限公司；
SY-8100 型高效液相色谱仪：北京普析通用有限公司；旋转蒸
发仪：上海申生科技有限公司；薄层色谱用硅胶（批号：
140427）：青岛海洋化工有限公司。
1.2 试药
葫芦素 B 对照品（98%）：成都普菲德生物技术有限公司；
各型号树脂：山东鲁抗立科药业有限公司。
2 上样样品制备
在预实验中，先后比较了活性炭吸附除杂、甲醇溶解后拌
样工艺，通过比较发现：前者虽然可以除去叶绿素等大量杂
质，但同时也吸附了许多有效成分，损失较大且操作繁琐；后
者经甲醇溶解后的液体与树脂拌样，很好的满足了试验的需
要，所以最后确定选择甲醇溶解后拌样的方式作为上样液的
预处理方式。
方法：称取瓜蒂提取物干膏适量，用甲醇溶解，与树脂拌
样，挥干甲醇，作为上样样品，备用。
3 大孔吸附树脂种类的筛选
3.1 不同大孔吸附树脂对总葫芦素静态饱和吸附量的考察
取已处理好的干树脂 (AB-8，DM130，D301，D101) 各约
1.0 克，精密称定，置于 100 毫升锥形瓶中，精密加入甲醇溶解
的醇提物 5.0 毫升（0.5 毫克 /5 毫升），摇匀。间隔 20 分钟振
摇一次，共进行 2 小时，然后静置 24 小时，使其充分吸附，平
行 3 份，进行含量测定，测出吸收度值并计算饱和吸附量，结
果见表 1。
表 1 不同大孔树脂对 CU 的静态吸附性能比较
表 2 不同大孔树脂对 CU 的静态解吸性能比较
从表 1 可以看出，D101 树脂对 CU 的吸附率和静态吸附
量均较高，从静态吸附角度来讲吸附效果较理想。
3.2 不同大孔树脂对葫芦素的静态解吸性能比较
将上述己吸附饱和的大孔吸附树脂滤出，用滤纸吸干上
样液，置于 100 毫升锥形瓶中，精密加入 70%乙醇 20 毫升，摇
匀，超声半小时，然后静置后，含量测定，平行 3 份，测出吸收
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实验研究SHIYANYANJIU实验研究 SHIYANYANJIU
度值并计算静态洗脱率，结果见表 2。
总 CU 的富集和精制是其纯化工艺和质量控制的关键，
CU 为非极性化合物，一般需要选用非极性大孔吸附树脂。本
实验通过比较几种型号的大孔吸附树脂的静态吸附性能和静
态洗脱性能，D101 型大孔吸附树脂无论在饱和吸附量以及洗
脱率都表现最佳，所以最后确定 D101 型大孔吸附树脂作为纯
化树脂。
4 洗脱溶剂的选择
称取已处理好的 D101 型大孔吸附树脂 10.0 克，水充分
溶涨后，装入层析柱中，精密吸取上样液 10.0 毫升（相当于原
药材 5.0 克），拌样上样，以 2BV/h 的流速过柱，上柱后，依次
用蒸馏水、30%乙醇、50%乙醇各 400 毫升梯度洗脱，70%乙醇
1000 毫升和 95%乙醇 400 毫升洗脱，每 200 毫升收集液浓缩
至干，分别以甲醇溶解后移入 10 毫升容量瓶中，以甲醇定容
后，采用高效液相色谱法测出吸收值，计算各部分洗脱率。确
定洗脱溶剂，选取洗脱较集中的洗脱溶剂继续下一步试验。以
洗脱液体积为横坐标，洗脱比例为纵坐标。结果见表 3。洗脱
曲线见图 1。
表 3 洗脱溶剂考察结果
图 1 大孔树脂洗脱曲线
实验结果表明：蒸馏水能够洗脱糖类等杂质，而不会洗脱
葫芦素类成分，因此，可以初步确定洗脱工艺条件为：先以水
30%、50%乙醇洗脱，除去杂质，而后以 70%乙醇作为洗脱剂，
并且确定洗脱剂用量，前三部分均为 4 倍柱体积，70%乙醇为
6 倍柱体积，收集 70%乙醇洗脱部分。
5 最佳洗脱工艺条件考察
表 4因素水平表
本研究选择主要的影响因素树脂——样品比例、洗脱流
速和径高比等，分别选择 3 个水平，采用正交实验 L9（34）表进
行设计，以 70%乙醇洗脱物的干膏量、总葫芦素含量以及薄层
层析结果作为考察指标。因素水平表见表 4，实验安排和结果
见表 5。按照上述实验安排，测定结果，选择最佳大孔树脂纯
化条件。
表 5 正交设计的试验安排和结果
由正交试验分析结果确定各因素水平不具显著性，直观
分析结果可知 B>>D C>>A，洗脱流速影响因素最大，结合前
面所做单因素试验，综合考虑，最终确定最佳工艺是：树脂与
样品 1∶1 比例拌样，径高比为 1∶10，洗脱流速控制在
2BV/h，接收 70%乙醇洗脱液浓缩、干燥，得有效部位，备用。
6 纯化工艺验证及纯度测定
称取已处理好的 D101型大孔吸附树脂 3份，每份约40.0
克，水充分溶涨后，装入层析柱中，精密吸取上样液 10.0 毫升
（相当于原药材 5.0 克），拌样上样，先用蒸馏水 200 毫升
（2BV）、30%乙醇 400 毫升（4BV）、50%乙醇 400 毫升（4BV）、
70%乙醇600毫升（6BV）依次洗脱，洗脱液流速控制在 2BV/h，
弃去蒸馏水和30%乙醇、50%乙醇洗脱部分，收集 70%乙醇洗脱
部分，浓缩干燥至恒重，得干浸膏。取干浸膏 10毫克用甲醇溶
解，定容至 10 毫升，精密吸取 10ul 注入高效液相色谱仪，平行
3份，根据峰面积，计算所含葫芦素B含量。结果见表6。
表 6 D101 大孔树脂纯化结果
从 HPLC 色谱图上可以看到上柱前后两图谱在峰的个数
上就有差异，且在信号强度上，上柱后的葫芦素 B 的信号远
远大于上柱前的物质信号，说明 D101 树脂对 CU 有富集作
用，起到了纯化的效果。
7 结论
结合四环三萜类的性质，以甜瓜蒂醇提物为原料，优选葫
芦素的吸附纯化工艺，同时使用大孔树脂吸附树脂的方法，减
少了有机溶剂对药品的污染，能够得到纯度在 30％左右的总
葫芦素，确保了葫芦素提取部位的质量。
参考文献
[1]南京中医药大学.中药大辞典 2 版[M].上海:上海科学
技术出版社,2006.
[2]北京医学院,北京中医学院主编.中草药成分化学.离子
交换层析[附]大孔吸附树脂.北京:人民卫生出版社,1980.34.
作者简介：赵晶丽，硕士，吉林工业职业技术学院，讲师，
研究方向：中药相关教学与研究。
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