全 文 ：浙江中西医结合杂志2014年第24卷第10期 ZhejiangJITCWM（Vol.24No.102014）
复方藤梨根制剂抑制小鼠结肠癌人工转移实验研究
郭青戈 1 郭 勇 2
1杭州市红十字会医院中医科 杭州 310003 2浙江省中医院肿瘤科
摘 要 目的 观察复方藤梨根制剂对小鼠结肠癌人工转移模型的病理生理、大体解剖、分子影
像及病理的影响。方法 BALB/c小鼠 50只，随机分成复方藤梨根高、中、低剂量组、模型组、空白对
照组 5组，每组 10只。除空白对照组外均尾静脉注射 C26结肠腺癌细胞单细胞悬液（密度：4×106/
mL）0.1mL，形成结肠癌人工血行转移模型。按照小鼠灌胃容积 0.2mL/10g分别予复方藤梨根制剂
2.24g/10g、1.12g/10g、0.56g/10g、生理盐水灌胃。连续灌胃 21天，第 1、7、14、21天观察各组小鼠一般
情况，异氟烷吸入式麻醉后，进行 PET扫描，通过 PET图像、靶区和非靶区比值（T/N）、标准化摄取
值比值（SUV）数据分析，观察各组小鼠肿瘤生长情况。第 21天处死小鼠，做肺组织病理活检。结果
①模型组和复方藤梨根低剂量组小鼠恶液质症状较高、中剂量组小鼠明显；②各荷瘤组 T/N值和
SUV值较空白对照组明显升高（P<0.01），复方藤梨根制剂各组和模型组比较，肿瘤和非肿瘤区域
T/N和 SUV比值较低（P<0.01），高剂量组低于中、低剂量组，差异有统计学意义（P<0.05，P<0.01）；
③病理显示，各荷瘤组两肺均有转移灶，脑、肝脏、肾脏均未见明显肿瘤转移灶和癌前病变。结论
经尾静脉接种 C26结肠腺癌细胞可在 Balb/c小鼠上形成稳定的肺转移模型，复方藤梨根制剂可以
减少小鼠结肠癌人工肺转移模型的肿瘤活性，并抑制转移，有一定剂量依赖性。
关键词 小鼠；结肠癌人工转移模型；复方藤梨根制剂；PET/CT
Inhibitory Effect of Fufang Tengligen Mixture on Metastatic Lung Cancer from Colon Cancer in Mice GUO
Qingge1，GUO Yong2. 1 Department of Chinese Medicine, Hangzhou Red Cross Hospital, Hangzhou(310003), China;
2 Department of Oncology, Zhejiang Provincial Hospital of TCM
ABSTRACT Objective To investigate the effect of Fufang Tengligen mixture on pathophysiology, gross anatomy,
molecular imaging, and pathology of the artificial blood metastasis from colon cancer in mice. Methods Fifty
BALB/c mice were randomly divided into 5 groups：Fufang Tengligen high-, middle-, and low-dose groups（2.24g/
10g, 1.12 g/10g, and 0.56g/10 g,respectively）, model group, and control group, 10 mice in each group. Except
control group, other groups were intravenously injected with murine colon adenocarcinoma cells of 0.1 mL（4×106/
mL） to make the artificial blood metastasis model.All mice in Fufang Tengligen mixture groups were given intra－
gastrically with 0.2 mL/10 g medicine for 21 consecutive days. PET scanning was performed on day 1, 7, 14, and
21 after modeling. The T/N ratio, average SUV value of computer generated PET-CT images of the tumor were cal－
culated for quantitive analysis. All mice were sacrificed on day 21 to perform lung biopsy. Results The symptom
of cachexia was more obvious in model and Fufang Tengligen low-dose group than that in Fufang Tengligen high-
and midddle-dose groups. The T/N ratio and SUV value were increased in tumor bearing groups than those in
control group（P<0.01）.Compared with model group, the T/N ratio and SUV value of the images of the tumor and
non-tumor area were lower in Fufang Tengligen groups（P<0.01）; the values were lower in Fufang Tengligen high-
dose group than those in the middle-and low-dose groups（P<0.05, P<0.01）. Pathological examination showed metas－
tasis in both lungs of tumor bearing groups, while no metastasis in brain, liver, and kidney was seen as well as
precancerous lesions. Conclusion Fufang Tengligen mixture may have anti-tumor effect on lung cancer from colon
cancer in mice in a dose-dependent manner.
KEY WORDS mice；artificial blood metastasis model from colon cancer；Fufang Tengligen mixture；PET/CT
基金项目：浙江省中医药科技计划项目（No.2010B501677）
通讯作者：郭勇，Tel：13588887292
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浙江中西医结合杂志2014年第24卷第10期 ZhejiangJITCWM（Vol.24No.102014）
恶性肿瘤已经成为当代威胁人类健康最严重的
疾病之一，其发病和死亡情况在世界范围内日趋严
重。预计在 2015年约有 900万人死于癌症，2030年
死于该病的人数将达 1140万[1]。转移是恶性肿瘤的
基本特征之一，约有 30%的患者在确诊时已有亚临
床转移，另有 30%左右在确诊时有明显的肿瘤转移
灶。复方藤梨根制剂[2]是由 20世纪 70年代浙江省中
医院肿瘤科研究成果“三根糖浆”发展而来，是长期
应用于治疗消化道恶性肿瘤的经验方。正电子发射
型计算机断层扫描仪（positron emission computed to-
mography，PET/CT），目前已广泛应用于临床药物疗
效研究，同时对中草药抗肿瘤疗效的活体评价中亦
有良好的前景[3-5]。本研究从病理生理及分子活体影
像角度评价复方藤梨根制剂对小鼠结肠癌人工转移
模型的作用。
1 材料与方法
1．1 实验动物 Balb/c小鼠 50只，雄性，8周龄，体
质量（20±2）g，中国医学科学院上海实验动物中心提
供，合格证号：SCXK（沪）2009-0010。SPF 条件下饲
养于浙江中医药大学动物实验中心 C区：温度（24±
2）℃，湿度（55±5）％，噪音<50db，每 12h 1次亮暗循
环，灭菌水及饲料供动物自由摄入[6]。
1.2 仪器与试剂 小鼠结肠腺癌细胞：Colon-26
购自上海细胞库；复方藤梨根制剂（药物组成：藤梨
根、水杨梅根、虎杖根、薏苡仁各 30g，党参 15g，白术
12g，茯苓 15g，炙甘草 6g），购自浙江省中医院中药
房，符合国家药典标准（2000 版）；RMPI-1640 培养
基、DMEM培养基（GIBCO公司）；小牛血清（Hyclone
公司）；0.25%胰酶-EDTA（吉诺生物医药技术有限公
司）；倒置显微成象摄像储存系统（ZEISS AXIOSKOP
40FL）；小动物 PET正电子扫描成像仪（美国西门子
330100990001）。
1.3 分组与造模[7] 根据完全随机实验设计，将 50
只 BALB/c小鼠随机编号，取数，排序，分成复方藤梨
根高、中、低剂量组，模型组和空白对照组共 5组，每
组 10只，分笼饲养。制备细胞悬液：连续体内培养传
代 4个周期 Colon-26细胞，应用组织块接种法将细
胞移植回培养瓶中，以含 10%小牛血清（Hyclone）的
DMEM（GIBCO）完全培养基进行体外培养，3天后移
去小瘤块更换培养液，继续培养以扩大细胞总量。将
瓶中处于对数生长期的细胞（密度约 70%~80%）用
0.25%胰酶-EDTA消化，生理盐水洗涤后予细胞计
数，制成密度等于 4×106/mL的单细胞悬液。除空白
对照组外所有小鼠予 75%酒精消毒尾部静脉，经尾
静脉注射 C26单细胞悬液 0.1mL（密度：4×106/mL），
建立结肠腺癌 C26细胞株 Balb/c小鼠人工血行转移
模型。
1.4 实验动物处理 空白对照组、模型组予生理盐
水，复方藤梨根高、中、低剂量组分别予复方藤梨根
制剂 2.24g/10g、1.12g/10g、0.56g/10g，按照小鼠灌胃
容积 0.2mL/10g进行灌胃。小鼠均在造模后第 2天开
始给药，连续灌胃 21天。复方藤梨根制剂药量根据
《中药药理实验方法学》[8]，根据成人每日每 60kg体
质量药量的 10 倍推算出等效剂量 0.28g/（10g·d），
小鼠的三种剂量分别为成人的 2倍、4倍、8倍。
1.5 观察指标及方法
1.5.1 Balb/c小鼠整体状态 从实验开始第 1天起
每天固定时间观察小鼠精神状态、活动行为及饮食
情况，称量不同分组小鼠每日进食量和饮水量，电子
秤称量各组小鼠体质量。
1.5.2 PET-CT观察各组小鼠肿瘤全身转移变化
灌胃第 1、7、14、21天异氟烷吸入麻醉后，通过 PET-
CT观察各组肿瘤生长情况，包括影像大小、瘤体平
均靶区和非靶区比值（T/N）、标准化摄取值比值（SUV），
SUV=病灶比活度（MBq/g）/〔静脉注入活度/体质量
（MBq/g）〕。
1.5.3 病理观察转移情况 实验第 21天引颈脱臼
处死所有小鼠，取出肺组织做病理活检。超净台中解
剖小鼠，行大体观察。取出肺脏、肝脏、肾脏、脑组织，
分别固定于 10％福尔马林中，石蜡包埋处理，常规切
片观察，行 HE染色。
1.6 统计学方法 应用 SPSS13.0统计软件。采用方
差分析，以 P<0.05为差异有统计学意义。
2 实验结果
2.1 Balb/c小鼠整体状态 造模初期，小鼠精神佳，
摄食、饮食如常，体形无改变。实验第 8~10天后模型
组和复方藤梨根各剂量组小鼠逐渐出现形体消瘦，
毛发脱落，体质量下降，饮食饮水量减少，行动迟缓、
小便色深，大便稀溏、爪甲色黯等表现。其中模型组
和复方藤梨根低剂量组症状更明显，活动度较复方
藤梨根高、中剂量组差。实验 17~21天小鼠出现呼吸
急促，食欲减退，大便溏薄，体质量明显下降，毛色稀
少，蜷缩不动等表现。
2.2 小鼠体质量变化 实验第 1天，各组小鼠体质
量差异无统计学意义（P>0.05），第 7 天开始复方藤
梨根各组和模型组体质量逐渐下降，与空白对照组
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同期比较，第 7、14、21天差异有统计学意义（P<0.05，
P<0.01）；复方藤梨根各组和模型组比较，体质量下
降差异无统计学意义（P>0.05）。见表 1。
2.3 各组靶区和非靶区比值（T/N）、标准化摄取值比
值（SUV）比较 实验第 7、14、21 天复方藤梨根高、
中、低剂量组、模型组 T/N 和 SUV 较空白对照组增
高（P<0.05，P<0.01）。实验第 7天复方藤梨根高、中、
低剂量组和模型组比较，T/N、SUV差异无统计学意
义（P>0.05）。第 14天复方藤梨根高剂量组 T/N与模
型组比较差异有统计学意义（P<0.01）；高剂量组 T/
N、SUV和中、低剂量组比较，差异有统计学意义（P<
0.05）；中剂量组和低剂量组 SUV 差异明显（P<
0.05）。第 21天复方藤梨根高、中剂量组 T/N和高、
中、低剂量组 SUV与模型组比较，差异有统计学意
义（P<0.05，P<0.01）；中、低剂量组之间 T/N差异明显
（P<0.05）；高剂量组与中、低剂量组 SUV比较，差异
明显（P<0.05，P<0.01），见表 2~3。
2.4 肺、肾、肝脏、脑组织及结肠 H-E染色 实验第
21天处死小鼠，解剖时发现，肉眼可观察到模型组、
复方藤梨根高、中、低剂量组小鼠两肺均有明显转移
灶，肿瘤瘤体数量不一，肿瘤结节大小不，形态欠规
则，包膜尚完整，直径 0.1~0.5cm，瘤体切面呈现灰白
色，质地鱼肉状，其他脏器均未见明显转移灶。取小
鼠脑组织、肺脏、肝脏、肾脏切片行 H-E染色，其中
肺脏组织病理切片显示肿瘤转移病灶，其余组织病
理切片上均未发现 C26细胞明显转移灶，亦未发现
其他癌前病变和肿瘤灶。病理结果提示经尾静脉接
种 C26结肠腺癌细胞形成的肺转移模型比较稳定。
见图 1~4（插页）。
3 讨 论
复方藤梨根制剂由藤梨根、虎杖根、水杨梅根、
党参、白术、茯苓等纯中药材组成，具有祛除毒邪和
扶助正气之功效，从而达到抗肿瘤的效果。藤梨根含
多糖类，水杨梅根含水杨梅甲素及生物碱等化合物，
均为有效的抗癌成分[9]。研究发现，复方藤梨根制剂
对多种恶性肿瘤有较好的疗效，具有控制原发肿瘤
的生长，控制肿瘤的远处转移及广泛的免疫调控作
用[10]；可逆转肿瘤细胞多药耐药性，保护 DNA，促进
DNA损伤修复[11]；对化疗药物有增效减毒作用[12]。研
究[13]发现，复方藤梨根制剂可以抑制原位胃癌移植瘤
裸鼠动物模型的肿瘤细胞转移，作用机制可能与下
调胃癌细胞 MMP-9和上调 TIMP-1的表达相关。复
组 别
复方藤梨根高剂量组
复方藤梨根中剂量组
复方藤梨根低剂量组
模型组
空白对照组
表 2 各组小鼠 PET靶/非靶区域比值（T/N）比较（x±s）
注：与空白组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，△P<0.01；与高剂量组比较，#P<0.05，##P<0.01；与中剂量组比较，▲P<0.05
小鼠数
10
10
10
10
10
第 1天
1.11±0.12
1.07±0.05
1.07±0.03
1.06±0.02
1.04±0.03
第 7天
1．60±0.32**
1.76±0.19**
1．62±0.39**
1．91±0.24**
1.19±0.10
第 14天
1.35±0.20*△△
1.63±0.29**#
1.61±0.04**#
1.74±0.79**
1.24±0.13
第 21天
1.99±0.40**△△
3.17±0.62**△##
3.46±0.71**##▲
4.20±1.10**
1.04±0.03
组 别
复方藤梨根高剂量组
复方藤梨根中剂量组
复方藤梨根低剂量组
模型组
空白对照组
表 3 各组小鼠 PET靶/非靶区域标准化摄取值比值（SUV）比较（x±s）
注：与空白组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，△P<0.01；与高剂量组比较，#P<0.05，##P<0.01；与中剂量组比较，▲P<0.05
小鼠数
10
10
10
10
10
第 1天
1.23±0.17
1.07±0.03
1.06±0.04
1.10±0.02
1.08±0.06
第 7天
1．54±0.30**
1.77±0.19**
1．65±0.42**
1．91±0.24**
1.18±0.17
第 14天
1.35±0.20**
2．08±0.53**#
1.55±0.25**#▲
1.65±0.29**
1.18±0.12
第 21天
1.99±0.39**△△
3.40±0.73**△#
2.65±1.23**△##
3.78±1.25**
1.11±0.08
组 别
复方藤梨根高剂量组
复方藤梨根中剂量组
复方藤梨根低剂量组
模型组
空白对照组
表 1 实验各组小鼠体质量比较（x±s）
注：与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01
小鼠数/只
10
10
10
10
10
第 1天
19.65±1.11
21.12±0.86
19.79±0.78
21.98±0.96
20.10±1.11
第 7天
19.26±0.99*
20.14±1.17*
18.89±0.60*
19.76±1.74*
21.11±1.52
第 14天
19.18±0.21*
19.66±1.71*
19．45±1.25*
19.04±1.06*
22.38±1.1
第 21天
15.34±1.05**
15.09±1.08**
14.87±0.83**
14.44±0.83**
22.64±1.19
g
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方藤梨根制剂还可通过上调肿瘤细胞 CX43基因的
表达，恢复肿瘤细胞细胞间隙连接通讯功能，从而调
控肿瘤细胞增殖分化和代谢等功能[14]。本实验从分子
影像水平上对复方藤梨根制剂抗肿瘤作用的活体病
生理变化进行相关研究，结果显示，小鼠经尾静脉注
射 C26单细胞悬液后形成肿瘤转移模型，荷瘤各组
小鼠在实验中后期出现形体消瘦，毛发脱落，体质量
下降，饮食饮水量减少，行动迟缓、小便色深，大便稀
溏、爪甲色黯等临床表现，与肿瘤血行播散后的常规
表现相吻合。其中模型组和复方藤梨根低剂量组症
状更为明显，活动度较高剂量组、中剂量组差。
PET/CT应用 18F-氟代脱氧葡萄糖作为正电子
核素标记的放射性药物，在生理条件下检测标记药
物及其代谢物在实验活体内的空间分布、数量及其
对应的时间变化，从而在分子水平上反映其病理生
理变化[5]。PET/CT显像用于药物研究的优势首先体
现在能够将动物实验研究类推到人体研究，提供了
从动物研究到人体研究的桥梁；其次可以获得动态
的数据资料；可以对实验动物进行活体动态实时扫
描，观察到动物体内疾病的发展状况以及药物对疾
病的治疗影响。本实验采用了 T/N和 SUV两种临床
常用计算方法，T/N值是靶区（Target）和非靶区（Non-
Target）比较，SUV（标准化摄取值）是病灶的比活度
和全身平均比活度之比，又称为差示摄取比（differ－
ential uptake ratio，DUR）或差示吸收比（differential
absorption ratio，DAR）。本组结果显示，荷瘤各组肿瘤
和非肿瘤区域 T/N 比值和 SUV 比值较空白对照组
明显增高（P<0.05，P<0.01)。复方藤梨根制剂组与和
模型组比较，肿瘤和非肿瘤区域 T/N比值和 SUV比
值相对较低（P<0.05，P<0.01），以高剂量组效果最优
（P<0.01），说明复方藤梨根制剂可以抑制肿瘤活性，
减少肿瘤的复发转移性。
实验第 21天处死小鼠解剖时发现，荷瘤各组小
鼠两肺均有转移灶，而其他脏器均未见明显肿瘤转
移灶和癌前病变。提示经尾静脉接种 C26结肠腺癌
细胞形成的肺转移模型稳定。
本实验从病生理角度及分子活体影像实验结果
可以得出复方藤梨根制剂能改善 Balb/c小鼠肿瘤转
移模型的生活质量，抑制肿瘤活性，延长肿瘤转移时
间，减少肿瘤复发转移，提高生存时间。
参 考 文 献
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收稿日期：2014-03-02
修回日期：2014-05-10
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复方藤梨根制剂抑制小鼠结肠癌人工转移实验研究
（正文见第858页）
图 1 肿瘤组小鼠肺脏 HE染色（×200）
见肿瘤转移灶
图 2 肿瘤组小鼠肝脏 HE染色（×200）
未见 C26细胞转移灶
图 3 肿瘤组小鼠肾脏 HE染色（×200）
未见 C26细胞转移灶
图 4 肿瘤组小鼠脑 HE染色（×200）
未见 C26细胞转移灶
数字化乳腺 X线三维立体导丝定位在
乳腺微钙化病灶切除中的应用价值 （正文见第907页）
图 1 簇状微钙化 图 2 穿刺针尖准确到达簇状微钙化靶点位置
图 3 释放导丝，倒钩打开，钩住病灶 图 4 切除后标本摄片，显示簇状微钙化完
全位于目标内