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第 1 3 卷 第 1 1 期
2011 年 11 月
辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 13 No. 11
Nov . ，2011
消肿，配伍活血化瘀药，使气旺则血行，加强活血之
功。 丹参、红花、赤芍活血化瘀通络。诸药合用，共
奏固肾升阳活血之功。
周 钰 娟 等 [6] 在 金 樱 子 对 大 鼠 糖 尿 病 肾 脏
的 实 验 研 究中发 现，金 樱 子 对 糖 尿 病 大鼠 肾
脏有保护作用，其机制与抑制糖尿病大鼠肾脏
TGF-β1，Ⅳ型胶原蛋白过度表达有关。现代药
理学研究表明，黄芪可提高抗病能力，有促进机
体代谢，调整血糖、控制血压、降血脂、抗缺氧、利
尿、消除蛋白尿、保护肾脏、调节免疫之功效 [7]。
陈远寿 [8] 通过实验证明，黄芪能提高DM大鼠的
肾皮质Na+、K+-ATPase 的活性，推测可能与内源
性洋地黄样因子释放减少有关，同时大鼠肾脏
肥大、肾小球高滤过状态及尿蛋白排除增加等情
况均有不同程度减轻，说明黄芪对大鼠肾功能可
以起到一定保护作用。丹参、红花、赤芍等活血
化瘀药具有良好的扩血管作用，能显著改善早期
DN的高凝状态及高灌注状态，减轻肾小球高滤
过，从而改善肾脏微循环，降低尿蛋白，延缓DN
的肾功能减退 [9]。
本研究结果提示，采用金螵汤结合西药治疗早
期糖尿病肾病，可明显降低糖尿病患者尿蛋白的排
出，疗效明显优于单纯西药治疗，值得临床进一步深
入研究和推广。◆
参考文献
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复方藤梨根制剂对人胃癌裸鼠腹腔移植瘤的作用机制研究
何好臣 1，秦建领 2，郭勇 3
（1.中国中医科学院西苑医院体检中心 北京 100091 ；2.郑州市第三人民医院肿瘤科，河南 郑州 450000 ；
3.浙江省中医院肿瘤科，浙江 杭州 310053）
摘 要 ：目的 ：研究复方藤梨根制剂（FFTLG）对人胃癌裸鼠腹腔移植瘤的抑制效应及其作用机制。方法 ：建
立人胃癌（SGC-7901）裸鼠腹腔移植模型。24只裸鼠随机分为4组 ：FFTLG高、中、低剂量组和生理盐水对照组，
分别观察荷瘤裸鼠腹腔移植瘤的生长情况，免疫组化检测肿瘤基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达情况。结果 ：
NS组、FFTLG低、中、高剂量组抑瘤率分别为0、7.8%、30.0%和33.3% ；实验组与模型对照组相比具有统计学意义
（P<0.05，P<0.01）；腹腔瘤组织中MMP-9阳性表达细胞百分比分别为（56.13±23.26）%、（45.83±13.40）%、（30.67
±11.50）%、（17.53±12.50）%。实验组与模型对照组相比具有统计学意义（P<0.05，P<0.01）。结论 ：FFTLG对裸鼠
腹腔移植瘤生长具有抑制作用，且随着剂量的增加其作用增强，其作用机制可能与下调MMP-9的表达有关。
关键词 ：复方藤梨根制剂 ；胃癌 ；裸鼠 ；基质金属蛋白酶-9 ；腹腔移植瘤
中图分类号 ：R735.2 文献标识码 ：A 文章编号 ：1673-842X (2011) 11- 0088- 03
收稿日期 ：2011-05-08
基金项目 ：浙江省中医药管理局资助项目（A2005Y012）
作者简介 ：何好臣（1973-），男，河北临漳人，主治医师，硕士，研究方向 ：中西医结合肿瘤防治研究。
通讯作者 ：郭勇（1961-），男，浙江杭州人，教授、主任医师，硕士，研究方向 ：中西医结合肿瘤防治研究。
E-mail ：guoyong1047@yahoo.com.cn。
Experimental Study on Mechanism of Fufang Tengligen Mixture Inhibiting
Human Gastric Cancer Implanted in Abdominal Cavity of Nude Mice
He Hao-chen1，Qin Jian-ling2，Guo Yong3
（1.Medical Examination Center of Xiyuan Hospital，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing
100091，China ；2.Tumor Department，The Third People Hospital of Zhengzhou，Zhengzhou 450000，Henan，
China ；3.Tumor Department，Zhejiang Hospital of Chinese Medicine，Hangzhou 310053，Zhejiang，China）
Abstract ：Objective ：To investigate the effects and mechanism of Fufang Tengligen Mixture inhibiting
human gastric cancer implanted in abdominal cavities of Nude Mice. Methods ：Established models of Nude
DOI：10.13194/j.jlunivtcm.2011.11.90.hehch.112
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1 3 卷 辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
复方藤梨根制剂（即三根祛瘤方）是浙江省中
医院肿瘤科长期应用于临床治疗消化道恶性肿瘤的
经验方，经细胞学、免疫学、分子生物学等实验研究
表明，对恶性肿瘤术后的抗复发和抗转移有一定作
用，但其降低消化道肿瘤患者根治术后复发和转移
的机理尚不清楚。本实验以裸鼠腹腔移植瘤动物模
型为基础，对“复方藤梨根制剂”抑制胃癌细胞腹腔
种植转移的作用机制进行研究，从而为临床治疗提
供依据。
1 材料与方法
1.1 材料
（1）实验动物 ：BALB/C-nu/nu 雄性裸鼠 24 只，
鼠龄 5~6 周，体重（23±2.5）g，由浙江中医药大学
实验动物中心提供。（2）细胞株 ：经裸鼠皮下传代
至第八代的人胃癌 SGC-7901 细胞株，由浙江中医
药大学实验动物中心提供。（3）实验用药 ：复方
藤梨根制剂（FFTLG）：由藤梨根、水杨梅根、虎杖
根、党参、茯苓、薏苡仁等组成，水煎并浓缩至 0.5、
1、2g/mL，分装，置 4℃冰箱备用。（3）主要试剂 ：
MMP-9 山羊抗人免疫组化染色试剂盒（三步法）、
DAB 显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有
限公司。
1.2 方法
1.2.1 建立人胃癌裸鼠腹腔种植模型
取第八代裸鼠皮下移植瘤，清除坏死组织，切
成小块，与 RMPI-1640 细胞培养液混合，在无菌条
件下研磨，制成细胞悬液，过 200 目尼龙丝网，镜下
调整浓度约 1×107/mL。用 20 号针头抽取细胞悬液
注入裸鼠腹腔。以右下腹部为进针点，75% 酒精消
毒，每只裸鼠注入 0.2mL 细胞悬液，随机分组。将裸
鼠笼于 SPF 条件下饲养。
1.2.2 实验分组及给药
将造模成功裸鼠随机分为 4 组，每组 6 只。接种
后 18 天开始给药，分高、中、低 3 个剂量组（按马氏定
理计算，以成人剂量 / 体重 30 倍、15 倍、7.5 倍）；同时
设空白对照组，给予相同体积生理盐水灌服，每日 1
次，每次 0.6mL/ 只，连续 21 天。末次给药后 50 天处
死。
1.2.3 观察指标
（1）裸鼠肠系膜种植瘤数量及瘤量。裸鼠处死
后立即解剖腹腔，计数肠系膜上种植瘤的个数，自
根部剪下称重。（2）抑瘤率的计算 ：抑瘤率 =（对
照组瘤重 - 用药组瘤重）/ 对照组瘤重 ×100%。（3）
免疫组化法测定 MMP-9 基因的表达 ：将取下的移
植瘤标本固定于 10％的中性福尔马林溶液，常规石
蜡包埋，组织连续切片厚 4μm，玻片经多聚赖氨酸
（Sigma 公司）预处理以防脱片 ；SP 法免疫组化染色，
依照试剂盒说明书进行，采用免疫组化三步法。（4）
镜下观察拍照，以细胞浆中出现棕黄色颗粒为阳性
反应。以 PBS 液代替一抗作为空白对照，以已证实
的 MMP-9 阳性组织切片作为阳性对照。结果判定
标准如下 ：每例切片选 5 个高倍视野，每个视野选
100 个细胞进行统计，记录阳性细胞数占同类细胞
的百分比。
1.2.4 统计分析
数据采用均数 ± 标准差（x—±s）或百分比表示。
计量资料采用方差分析，多组均数间两两比较的方
法，P<0.05 为差异有显著性标志，P<0.01 为差异有
非常显著性标志。计数资料用 χ2 检验。以P<α（即
校正后的 α）为有统计学差异。使用 SPSS11.5统计
软件包进行统计处理。
2 结 果
2.1 对肿瘤生长的抑制作用
所有裸鼠腹腔接种肿瘤细胞悬液后均有肿瘤
生长，接种 SGC- 7901 人胃癌细胞后 13 天可触摸
到裸鼠腹腔内出现大小不等的肿瘤结节，进行性
增大 ；19 天开始观察到腹围增大。裸鼠解剖后肉
眼可观察到裸鼠腹腔内有血性腹水生成（图 1），
横膈、肝周、肠系膜、网膜、腹膜、腹壁、盆腔等多
处见 0.1~3cm 大小不等、灰白色肿瘤结节，质地偏
硬，与周围组织粘连，部分有坏死（图 2）。说明移
植瘤的生长未被排斥，肿瘤移植成功，腹腔移植
成 功 率 为 100%。FFTLG 高、中 剂 量 组 与 生 理 盐
水组相比，移植瘤成瘤个数及重量较小，抑瘤率
结果也提示高、中剂量组对肿瘤有明显的抑制作
用（P<0.01）；FFTLG 高剂量组与低剂量组相比移
植瘤成瘤个数、重量及抑瘤率均有非常显著性差
异（P<0.01）；中剂量组与低剂量组与相比有显著
性差异（P<0.05）；FFTLG 高剂量组与中剂量组相
比、低剂量组与生理盐水组相比均无统计学意义
（P>0.05）。见表 1。
2.2 MMP-9表达
MMP-9 表达方面所有切片镜下均可见细胞浆
中多少不等的棕黄色颗粒，生理盐水组细胞浆中棕
黄色颗粒最多，表达百分率为（56.13±23.26）%（图
3），其它 3 组按 FFTLG 浓度由低到高的顺序表达率
Mice with human gastric cancer transplanted in their abdominal cavities. 24 Nude Mice were randomly
divided into 4 groups ：groups by high，moderate，low thickness FFTLG mixture and group by NS，Observed
the growth of tumour in their abdominal cavities，detected the expressions of MMP-9 in gastric cancer tissue
by immunohistochemistry. Results ：The tumour inhibition rates of NS，low，moderate，high thickness FFTLG
mixture group were 0，7.8%，30.0% and 33.3%.Compared to control group，experimental groups showed
significant differences（P<0.05，P<0.01）；Expression rates of MMP-9 were（56.13±23.26）%，（45.83±
13.40）%，（30.67±11.50）%，（17.53±12.50）%. Compared to control group，experimental groups showed
significant differences（P<0.05，P<0.01）.Conclusion ：FFTLG Mixture can inhibit the growth of tumours
transplanted in abdominal cavities of Nude Mice，the more dosage，the better effect，whose mechanism may
partly be to lower the expression of MMP-9.
Key words ：Fufang Tengligen Mixture ；gastric carcinoma ；nude mice ；MMP-9 ；peritoneal implanted
tumour
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辽 宁 中 医 药 大 学 学 报 1 3 卷
降低，高剂量组细胞浆中棕黄色颗粒最少（图 4），
FFTLG 高、中剂量组与生理盐水组相比有非常显著
性差异（P<0.01）；FFTLG 低剂量组与生理盐水组相
比有显著性差异（P<0.05）；FFTLG 高、中、低剂量组
之间相比均有非常显著性差异（P<0.01）。见表 1。
图 1 腹腔移植瘤及血性腹水
图 2 肠系膜移植瘤
图 3 免疫组化 NS 组 MMP-9 表达 （SABC 法）×400
图 4 免疫组化高剂量组 MMP-9 表达 （SABC 法）×400
表 1 各组裸鼠腹腔种植瘤的个数、重量（g）及 MMP-9 表达
组别 n 移植瘤个数 移植瘤重量（g） 抑瘤率 MMP-9（%）
生理盐水组 6 50.33±6.62 4.47±0.42 0 56.13±23.26
FFTLG 低剂量组 6 44.17±7.49 4.12±0.44 7.8 45.83±13.40■
FFTLG 中剂量组 6 34.00±5.51★▲ 3.13±0.85★▲ 30.0★▲ 30.67±11.50★●
FFTLG 高剂量组 6 32.50±6.69★● 2.98±0.84★● 33.3★● 17.53±12.50★●◆
注 ：与生理盐水组相比★P<0.01 ；与 FFTLG 低剂量组
相比●P<0.01 ；与低剂量组相比▲P<0.05 ；与生理盐水组相
比■P<0.05 ；与中剂量组相比◆P<0.01。
3 讨 论
肿瘤转移的机理颇为复杂，不但与肿瘤细胞的生
物学特性，而且与宿主的功能状态密切相关，恶性肿
瘤的转移与免疫功能的抑制程度呈正相关 [1]。因而，
提高机体免疫力，从不同方面，不同层次、多个靶点抑
制肿瘤转移十分必要，中药复方在这方面具有一定的
优势。本实验所用的复方藤梨根制剂由藤梨根、水杨
梅根、虎杖根、党参、白术、茯苓、薏苡仁等组成，其中
藤梨根、水杨梅根、虎杖根具有清热解毒作用，虎杖根
兼具活血化瘀作用，党参、白术、茯苓具有健脾益气作
用，诸药合用，共奏清热解毒、活血化瘀、益气健脾等
功效。可全面调节身体内环境的平衡，重建机体抗癌
能力。其中藤梨根含多糖类，水杨梅根含水杨梅甲素
及生物碱等化合物，均为有效的抗癌成分 [2]，益气健
脾药黄芪、白术、茯苓有增强宿主免疫功能的作用[3-5]。
本实验中测定移植瘤成瘤个数、重量及抑瘤率
结果显示，FFTLG 高剂量组成瘤个数、重量最小，抑
瘤率最高，FFTLG 中、低剂量组效果依次降低，生理
盐水组成瘤个数最多，瘤重最大，但 FFTLG 低剂量
组与生理盐水组相比无统计学意义（P>0.05），提示
FFTLG 制剂有抗胃癌腹腔转移作用，并可抑制胃癌
腹腔转移瘤生长，呈剂量相关性。
MMP-9 属于基质金属蛋白酶（MMPs）家族，主
要参与组织重建、修复、细胞迁移、血管生成、炎症反
应、伤口愈合、肿瘤侵袭和转移。其表达与癌组织
的浸润深度、淋巴结转移密切相关，可促进血管新
生并对肿瘤的浸润、转移具有正相关作用 [6-7]。本次
实验我们检测到，FFTLG 制剂对荷瘤裸鼠肿瘤组织
MMP-9 的表达有不同程度的降低作用，结果与腹腔
移植瘤各组间的比较结果基本一致，提示 FFTLG 制
剂可抑制荷瘤裸鼠肿瘤组织 MMP-9 的表达且呈剂
量依赖性，其抑制 SGC-7901 人胃癌细胞腹腔转移
的机理之一可能是通过下调 MMP-9 的表达。
本次实验成功建立了 SGC-7901 人胃癌细胞腹
腔移植瘤裸鼠模型并运用免疫组化方法对腹腔瘤组
织 MMP-9 进行检测，探讨了复方藤梨根制剂抑制胃
癌腹腔转移的部分机制，为其进一步研究及临床应
用打下了基础。◆
参考文献
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